Taylor R, Schaefer M, Barron M, McFarland R, Turnbull D. The diagnosis of mitochondrial muscle disease.

Neuromuscular
disorders. 2004; 14.
Los desórdenes de la cadena respiratoria mitocondrial son cada vez más reconocidos como causas importantes de
enfermedades musculares.
Las mitocondrias son organelos intracelulares predominantemente responsables de la fosforilación oxidativa, lo que resulta en
la condensación de ATP; esto depende de cinco subunidades de complejos polipéptidos localizados dentro de la membrana
interior mitocondrial. El complejo II es completamente codificado por el genoma nuclear, mientras que los otros son codificados
por genomas nucleares y mitocondriales. El genoma mitocondrial es pequeño y codifica sólo 13 proteínas de la cadena
respiratoria y 24 RNAs, requeridos para la síntesis intramitocondrial de proteínas, está presente entre las fibras musculares y
así cualquier defecto podría involucrar a todas las copias del genoma mitocondrial (Homoplasmia) o sólo a una proporción
(Heteroplasmia). El resto de las proteínas involucradas en la cadena respiratoria y las proteínas responsables para el
mantenimiento del genoma mitocondrial son codificadas nuclearmente e importadas a la mitocondria, así, el defecto genético
puede ocurrir tanto en el genoma mitocondrial o en el nuclear.
Las miopatías mitocondriales pueden presentarse a cualquier edad, y la afectación muscular puede ser aislada o ser parte de
una enfermedad multisistémica, con oftalmoplejía externa progresiva, miopatía proximal progresiva, dolor muscular, intolerancia
al ejercicio, fatiga y rabdomiólisis.
Evaluación histopatológica e histoquímica del funcionamiento mitocondrial.
Los análisis de biopsia muscular son algunos de los estudios más importantes para detectar anormalidades mitocondriales.
Para evaluar la afectación mitocondrial es mejor utilizar reacciones enzimáticas histoquímicas específicas para enzimas
mitocondriales succinato deshidrogenasa (SDH) y citocromo oxidasa (COX). La SDH muestra la acumulación
subsarcoldermica de la mitocondria mientras que la COX es particularmente útil, porque contiene subunidades codificadas
para el genoma mitocondrial y nuclear.
Evaluación bioquímica del funcionamiento mitocondrial
Los problemas asociados con el diagnóstico se exacerban por la gran variedad de protocolos usados, por lo que ha sido difícil
llegar a un consenso de criterios diagnósticos.
La cantidad de tejido muscular disponible define el método usado para preparar una fijación mitocondrial enriquecida.
Promedios de flujo, oxidación de sustrato y producción de ATP son medidas por polarografía.
Análisis genéticos moleculares: una aproximación sistemática.
Para conservar recursos valiosos y tejido, es importante el permitir que la información histoquímica y bioquímica guie cualquier
estudio molecular. Es poco común en los casos pediátricos que estos presenten alguno de los síndromes clásicos observables
con defectos del ADN de los que hay en adultos. Existe cierto factor hereditario el cual es generalmente recesivo, pero está
ausente en la mayoría de los casos. La deficiencia de complejo IV aislada, por ejemplo presenta hasta el momento mutaciones
en alguno de 5 genes que han sido identificados hasta ahora. De igual forma datos recientes reportan que mutaciones
patogénicas mtDNA son relevantes en la población pediátrica. Finalmente existe también un síndrome de “vaciado” del mtDNA
que se presenta en la infancia. Este grupo heterogéneo se distinguirá por una reducción significativa en los procesos de
copiado.
Estos elementos así como el entendimiento de la relación entre genotipo y fenotipo aportan pistas vitales para la investigación
en adultos, marcando un posible patrón hereditario. Sin embargo esto es complicado ya que muchos casos se presentan sin
que exista ningún antecedente familiar de este tipo. Pacientes en este grupo generalmente presentan CPEO y miopatía
proximal, pero estos pueden presentar complicaciones debido a ataxia cerebelar. Para esta multitud de casos es esencial
detectar y estudiar los resultados en tejido, esqueleto y musculo para confirmar el diagnostico. Finalmente, a los pacientes con
una amplia sospecha pero con análisis histoquímicos y bioquímicos sin resultados relevantes deben ser sujetos a un análisis
molecular.
Desórdenes de acomodación del ADN mitocondrial
Éstos deben ser estudiados por el análisis Southern blot en donde el ADNmit es alineado con una restricción de endonucleasa
e hibridizada a un sonda radiomarcada correspondiente a una región no controlada o al genoma entero. Ésta técnica es el
estándar de oro, aunque también puede usarse PCR.
 Buscando nuevas mutaciones patogénicas del ADNmit
El siguiente paso en la investigación para pacientes que son negativos para mutaciones comunes involucra el análisis del
genoma mitocondrial entero.
Asignando patogeneidad a una mutación de ADNmit.
DiMauro y Schon han propuesto cinco criterios canónicos que deberían cumplirse para respaldar el rol patogénico para una
mutación nueva de ADNmit: La mutación no debe haber sido previamente descrita como neutral en ninguna de las bases de
datos; debe afectar a un nucleótido que ha sido conservado a través de la evolución y por tanto es proclive a tener importancia
funcional; debe ser heteroplásmica; la carga de mutación en diferentes tejidos debe reflejar la extensión en la cual el tejido está
afectado y por último, si es posible deben hacerse análisis de fibras musculares simples para determinar si la cantidad de
ADNmit segrega con el fenotipo bioquímico observado en células individuales.

¿Síndrome clásico?
MELAS, MERF, NARP
Análisis RFLP de
NO
sangre y de orina
NEG Biopsia muscular
Histoquímica
Bioquímica

Histoquímica o bioquímica Sospecha clínica alta a

Biopsia normal + bioquímica
sugieren enfermedad pesar de biopsia normal con baja sospecha clínica
ADNmit

Estudios adicionales
raramente indicados

Estudios moleculares
(Guiados por el fenotipo)

Presentación pediátrica Diabetes sordera, Pérdida muscular, Miopatía, CPEO

(Músculo o CNS) convulsiones, miopatía mioclonías, ataxia, cardiomiopatía, +/- miopatía
neuropatía intolerancia al ejercicio

Deficiencia Biopsia normal o

global de de mosaico
MERF Southern Blot
COX
Défecto aislado A8344G
de Complejo
MELAS/NARP, aislado I o MELAS
SURF 1 y ATPASA 6 y 8 complejo aislado A3243G
II. PCR de largo
otros
alcance.
Secuencia de Screening de Secuencia de
ADNmit ADNmit y ADNmit
nuclear

Secuencia
Secuencia SURF 1 y otros