OBSERVACION DE CELULAS PROCARIOTAS “TINCION DE GRAM”

RESUMEN

La tinción de gran es un tipo de tinción diferencial empleado para la

visualización de bacterias, se utiliza para referirse a la morfología de la célula
bacteriana y así poder realizar una diferencia entre ellas, considerándose
bacteria gran positivas que son aquellas que se presentan teñidas de color
moradas y Bacterias gran negativas teñidas de color rosa. Esta técnica
consiste en la capacidad de las bacterias para retener el colorante utilizado,
el cual es el cristal violeta durante la decoloración en este caso con el alcohol
acetona. Es precisamente este método el utilizado en nuestra práctica de
laboratorio cuando se realizo el procedimiento con el yogurt donde se
observo bacterias identificadas de color morada (gran positivas) al cual
pertenecían a cocos, estreptococos, sin embargo también se observaron
bacterias identificadas de color rosa (gran negativas). De igual manera este
método fue el utilizado en la prueba del epitelio bucal donde se observaron
bacterias teñidas de color morada (gran positiva) a las que pertenecen
cocos, estreptococos, bacilos y estreptobacilos, también fueron observadas
células teñidas de rosa (gran negativa) pero en menor cantidad.

Palabras claves:

Gram, Safranina, Cristal violeta, Solución salina isotónica, Alcohol

etílico/acetona

INTRODUCCION

Procariota (Pros = Antes, Karion = Núcleo) es una célula sin núcleo celular
diferenciado, es decir, su ADN no está confinado en el interior de un núcleo,
sino libremente en el citoplasma. Las células con núcleo diferenciado se
llaman eucariotas. Procarionte es un organismo formado por células
procariotas.
La célula procariota, también procarionte, organismo vivo cuyo núcleo celular
no está envuelto por una membrana, en contraposición con los organismos
eucariotas, que presentan un núcleo verdadero o rodeado de membrana
nuclear. Además, el término procariota hace referencia a los organismos
conocidos como móneras que se incluyen en el reino Móneras o Procariotas.

Están metidos en los dominios Bacteria y Archea. Por su pequeño tamaño

las bacterias no resultan fáciles de distinguir al microscopio óptico sin la
ayuda de coloraciones específicas. Algunos métodos complejos de
coloración dan incluso la posibilidad de diferenciar unas bacterias de otras, y
estudiar particularidades de la estructura de las células bacterianas. Gram en
1884, pero que no ha perdido su valor práctico hoy día. En el caso de este
método las bacterias se subdividen en Gram positivas y Gram negativas, lo
que facilita la realización del diagnóstico diferencial de algunas
enfermedades infecciosas, así por ejemplo se sabe que todos los cocos
patógenos, excepto los gono y meningococos, son Gram positivos; los
vibriones, treponemas y representantes de la familia de las bacterias
intestinales son Gram negativos, y todos los bacilos y clostridios son Gram
positivos. La tinción de Gram es un tipo de tinción empleado en microbiología
para la visualización de las bacterias. Por más de una centuria las bacterias
han sido clasificadas a la reacción de Gram, la habilidad de retener un
complejo de iodo violeta cuando se trata con un solvente orgánico tal como el
alcohol o la acetona, las bacterias Gram positivas retienen la tintura ya
parecen de color violeta, mientras que las Gram negativas no lo pueden
retener y se tiñen de color rojo para ser vistas con el microscopio. En las
bacterias Gram (+) la pared celular es gruesa y monoestratificada. Está
compuesta fundamentalmente de mureína que supone entre el 70-80% de la
pared. Unido al péptidoglicano por enlaces covalentes existen los ácidos
teitoicos, que están embebidos en la misma capa. Dentro de estos ácidos
algunos están solo en la estructura de la pared mientras que otros pueden
aparecer unidos covalentemente a lípidos de la membrana plasmática dando
lugar a los ácidos lipoteitoicos. El espacio periplástico es prácticamente
inexistente. En el caso de las Gram (-), la pared celular es más fina, menos
 compacta y más compleja. Es pluriestratificada (2 capas). El contenido en
mureína es mucho más bajo (10%) y no tiene ácidos teitoicos sino que tiene
liposacáridos, proteínas, lipoproteínas, fosfolípidos.

MATERIALES Y METODO

- Cultivos bacterianos - papel limpia lentes

Gram negativos y Gram positivos - pinzas
- Palillos de dientes - guantes
- Mechero de alcohol - cristal violeta
- Puente de coloración - lugol
- Frasco lavador - alcohol etílico/acetona
- Asa bacteriana -safranina
- Microscopio compuesto - aceite de inmersión
- Portaobjetos - solución salina isotónica

OBSERVACION DE CELULA PROCARIOTA

(TINCIÓN DE GRAN)

Se tomo con unFue asacolocada laSe fijo la muestra, Se tiño la muestra

Se lavo con agua Se coloco el frotisCuidadosamente
en se
una pequeña placa en el puente flameándola destilada, luegoconsecristal violeta
la platina del decoloro la muestra
cantidad de un de coloración por ligeramente en la a que secara
espero por un minuto.microscopio y secon alcohol
cultivo de bacterias.
segunda vez y seflama del mechero Luego se lavo con
la muestra a una observo con el etílico/acetona,
hasta que estuviera
cubrió la superficie temperatura agua destiladaobjetivo
y por de 100Xesto para eliminar
Se mesclo con seca.
con safranina por un ambiente. último se cubrió por completamente
solución salina y se
minuto. con solución de el colorante violeta.
realizo un frotis. lugol.
ANALISIS Y RESULTADOS
 Muestra: yogurt

Aumento: 100X

Análisis: en esta muestra se logro observar

bacterias teñidas de morado (Gram positiva)
que corresponden a lactobacilos y
estreptococos, así como bacterias teñidas de
rosa (Gram negativa)

Muestras: sarro dental

Aumento: 100X

Análisis: aquí se logro observar cocos,

estreptococos, bacilos y estreptobacilos
aglomerados en un mismo punto y teñidos de
morado (Gram positiva), también se logro
observar células teñidas de rosa (Gram
negativa) pero en muy poca cantidad.

CUESTIONARIO

1. ¿Cuál es la función del lugol en la técnica de Gram?

R// La función del lugol, funciona como fijación de la preparación,

también actúa sobre la pared de las bacterias Gram positivas de tal
manera que al agregar el decolorante (alcohol-cetona) no se destiñan las
bacterias que ya se tiñeron

2. explique ¿a qué se debe la diferencia en los resultados de los

procedimientos realizados?
R// se debe a que en el yogurt solo hay bacterias encargadas de
descomponer la leche, mientras que en el sarro dental existen bacterias que
descomponen toda clase de compuestos, ya sea azucares, proteínas
haciéndolas más sencillas para el metabolismo

3. explique para que se fija la muestra en la técnica de Gram

R// Porque al fijar la muestra se realiza el proceso mediante el cual se puede

observar la posición de la estructura interna y externa de la célula, además
se matan los microorganismos y se fijan firmemente al portaobjetos.
La fijación por calor preserva la morfología general pero no las estructuras, la
fijación química protege la subestructura y la morfología de los
microorganismos delicados de mayor tamaño.

4. ¿en qué se diferencia una célula procariota de una célula eucariota? Haga
los esquemas correspondientes.

R//
 CONCLUSIONES

De la practica anterior podemos deducir que: Los fundamentos de la técnica

se basan en las diferencias entre las paredes celulares de las bacterias
Gram positivas y Gram negativas ambos tipos de bacterias se tiñen con
diferente color debido a la composición química de la pared celular de estas
bacterias. La clave es el peptidoglicano, ya que es el material que confiere su
rigidez a la pared celular bacteriana y las Gram positivas lo poseen en mucha
mayor proporción que las Gram negativas, estas bacterias al ser teñidas
toman un color morado debido al cristal violeta, mientras que las Gram
negativas se tornan rosa debido a la safranina.

La diferencia que se observa en el microscopio es el tipo de color que

obtienen estas bacterias las Gram positivas resisten mas a esta coloración
debido a la pared celular y la coloración de las Gram negativa se debe a que
la membrana externa de estas bacterias es soluble en solventes orgánicos,
por ejemplo la mezcla de alcohol/acetona.

BIBLIOGRAFIA

Bacteriología General: Principios Y Prácticas de Laboratorio Escrito por

Evelyn Rodríguez Cavallin 2006

Diagnóstico microbiológico Escrito por Betty A. Forbes Ed. Médica

Panamericana, 30/06/2009 - 1160 páginas

Introducción a la microbiología Gerard J. Tortora, Berdell R. Funke, Christine

L. Case Ed. Médica Panamericana, 30/06/2007 - 959 páginas

Biología y Geología 4o ESO Carmen Belart, Carmen Belart Rodríguez

Editex, 2008 - 208 páginas

BIOLOGIA CELULAR Marc Maillet Elsevier España, 1/02/2002 - 548 páginas