UNIVERSIDAD PRIVADA NORBET WIENER

Facultad de Ciencias de la Salud

Escuela Académico Profesional de Farmacia y Bioquímica

Determinación de metabolitos secundarios del extracto hidroalcohólico

de las hojas de Medicago sativa (alfalfa)

ASESORA:
 Q.F. Maribel Veronica Rodriguez Vila
INTEGRANTES:
 CULQUI GALVEZ, Estefania
 ESTRADA GUZMAN, Marianella
 ROMERO CCASANI, Danny

PROFESORA:
 Perez Milagritos Roxana

SECCION:
 FB6M1

LIMA-PERU
2019-1
 Índice
Introducción
Planteamiento de problema
Justificación
Objetivos generales
Objetivos específicos
I. Marco teórico
1.1 Aspecto botánico
 Clasificación taxonómica
 Descripción botánica
1.2 Aspecto químico
1.3 Parte experimental
1.4 Discusión de resultados
1.5 Conclusiones
1.6 Referencias Bibliográficas
INTRODUCCION:

La alfalfa (medicago sativa) es una hortaliza cuyo tallo se usa para cocinar, se
conoce que esta planta tiene propiedades Antipirética, Antiinflamatoria,
Cardiotónica, Antibacteriana y Inmunoestimulante. La alfalfa (medicago sativa)
pertenece a la familia de las fabaceae. Posee un alto contenido en vitaminas
(sobre todo k), minerales (sobre todo calcio) y oligoelementos (cobre,
fósforo,hierro, selenio, sílice y zinc). Las hojas contienen saponinas*. Los
estudios en animales indican que las hojas bloquean la absorción del colesterol
e impiden la formación de placas arterioscleróticas. Existen estudios que indican
efectos favorables en enfermedades como el cáncer de colon.

El aporte de estos nutrientes contribuye a fortalecer las uñas y sobre todo el

cabello sin brillo, deteriorado o con puntas florecidas. También contienen
cumestrol (fitoestrógeno presente en el Trébol y la alfalfa) cuya acción unida a la
acción remineralizarte de la sílice y del calcio puede ser recomendable durante
el climaterio.

Esta planta fue seleccionada para el trabajo de investigación por ser conocida y
fácil acceso de recolección. Por ser usada en comidas teniendo una aroma y
sabor agradable.

Este trabajo de investigación se inicia en primer lugar obteniendo información

acerca del (medicago sativa) alfalfa, buscando determinar e identificar que
metabolitos secundarios se puede encontrar en las hojas del (medicago sativa)
alfalfa, mediante pruebas realizadas en el laboratorio como son: determinación
de alcaloides y solubilidad.

Planteamiento del problema

¿El extracto hidroalcohólico de las hojas de Medicago sativa (alfalfa) presentara

metabolitos secundarios tales como: ¿carbohidratos, alcaloides, flavonoides,
lactonas y aminoácidos?
Justificación.

Las hojas de Medicago sativa (alfalfa) de acuerdo a lo estudiado por; EDUARDO

CLAVIJO VILLAMIZAR, PEDRO CAMILO CADENA CASTRO en su tesis
(PRODUCCIÓN Y CALIDAD NUTRICIONAL DE LA ALFALFA (Medicago sativa)
SEMBRADA EN DOS AMBIENTES DIFERENTES Y COSECHADA EN
DISTINTOS ESTADIOS FENOLÓGICOS). Es una de las legumbres con mayor
producción global y con un alto valor nutritivo, pues llega a superar rendimientos
hasta de 450 Kg. De proteína bruta/ha/año, estudios realizados como lo reporta
I. Delgado Enguita (1998).

La planta de alfalfa, posee una composición con un elevado valor de proteínas y

fibras, resultando desde el punto de vista nutricional un alimento muy completo
presenta dentro de su composición Isoflavonas, fitoesteroles.

Ya que las plantas medicinales son importantes porque ella nos brinda al ser
humano una posibilidad poder tener en ellas una curación a miles de
enfermedades que podrían ser mortíferas si no se curan, ni se a tienden a
tiempo.

Lo que buscamos al realizar este trabajo es el impulso, apoyo a la recolección

sostenible de plantas medicinales de buena calidad, mediante métodos que
respeten y propicien la conservación de las plantas medicinales y del medio
ambiente general. Y por ende impulsar a que se realice más investigaciones
sobre esta planta medicinal y que con un solo estudio no basta para determinar
las propiedades terapéuticas de lo beneficioso que esta planta medicinal puede
ser para la humanidad, al determinar sus propiedades curativas.

Objetivo general.

Determinar los metabolitos secundarios que tiene el extracto hidroalcohólico de

las hojas de Medicago sativa (alfalfa).

Objetivos específicos.

Identificación de carbohidratos, alcaloides, flavonoides, lactonas y aminoácidos

mediante pruebas de precipitación
Marco Teórico
La alfalfa es originaria de Irán y Asia Menor y es una de las plantas más utilizadas
como forraje en el mundo, con aproximadamente 32,000000 ha cultivadas;
Estados Unidos y Argentina, con 16 millones de ha, tienen la mayor superficie
sembrada. Esta especie fue introducida a América del Sur en el siglo XVI, por
los portugueses y españoles y en 1870 a Perú, México y Estados Unidos, por
misioneros españoles.
La alfalfa es una planta que crece todo el año, con una duración de entre 4 a 8
años de vida. Se le conoce por diferentes nombres tales como, Medicago sativa,
Erba Medica, hierba de búfalo, Trébol chileno y Luzerne.
Se trata de una plata muy útil, de la que se aprovechan todas sus partes, ya sean
las hojas, tallos y brotes. Para que crezca fuerte y grande, necesita los minerales
que se encuentran debajo de la tierra, por ello sus raíces crecen hasta muy al
fondo de la tierra. La alfalfa es una planta muy resistente, que vuelve a crecer
después de la cosecha, y por lo general crece mejor cuando se cultiva con otras
plantas.
En el artículo (EFECTO ESTROGÉNICO DEL EXTRACTO
HIDROALCOHÓLICO DE Medicago sativa (alfalfa) EN RATAS ALBINAS
OVARIECTOMIZADAS) presentado por Sandra G. Bezada1, Jorge L. Arroyo2,
Martín Condorhuamán3, nos indica la presencia de alcaloides, flavonoides,
taninos, lactonas, núcleo esteroidal y saponinas. Que estamos buscando obtener
en nuestra determinación de metabolitos secundarios mediante procedimientos
cualitativos.
ASPECTO BOTANICO

CLASIFICACIÓN TAXONÓMICA

División: Magnoliophyta

Clase: Magnoliopsida

Subclase: Magnoliidae

Orden: Fabales

Familia: Fabaceae

Género: Medicago

Especie: Medicago sativa L.

DESCRIPCIÓN BOTANICA

La alfalfa (Medicago sativa L.), es una planta herbácea de porte erecto y

semierecto, de hasta 1 metro de altura.

Las hojas son trifoliadas, alternas y pecioladas, con folíolos de color verde oscuro
y dentados en el tercio superior.
Los tallos son erguidos y herbáceos. En la base de éstos se encuentra formación
perenne y semileñosa, la corona, en la que se originan los brotes de renuevo y,
se ubica a nivel o ligeramente por debajo de la superficie.

Posee un sistema radicular conformado por una raíz principal (pivotante), capaz
de alcanzar varios metros de profundidad.

Las flores (inflorescencias) son en racimos axilares simples, pedunculados.

Flores azul violáceas, excepcionalmente blanquecinas de 1 cm. de longitud.

El fruto es una vaina en espiral, castaño negruzco. Dentro de éste se

encuentran semillas pequeñas y arriñonadas de color amarillo castaño.
 COMPONENTES QUIMICOS

Según el artículo: Potencial fitoquímico y farmacológico de Medicago sativa:

una revisión Kundan Singh Bora y Anupam Sharma

Para citar este artículo: Kundan Singh Bora & Anupam Sharma (2011)
Phytochemical andpotencial farmacológico de Medicago sativa: una revisión,
Pharmaceutical Biology, 49: 2, 211-220, DOI: 10.3109 / 13880209.2010.504732

Alcaloides (semillas): estaquidrina, homoestaquidrina y trigonelina.

Aminoácidos: medicanina, lisina, arginina, histidina, tirosina, fenilalanina,

metionina, aspártico ácido, ácido glutámico, asparagina, serina, alanina,
treonina.
Cumarinas: myrsellinol, scopoletin, esculetina, ácido 4- cumárico

Enzimas Digestivas: Enzimas: isoflavona reductasa, vestitone reductasa,

iminopeptidasa y dos aminopeptidasas.

Flavonoides: quercetina, miricetina, luteolina, apigenina, crisoeriol, tricina.

Ácidos orgánicos: citrato, malato, malonato, succinato, fumarato, lactato,

benzoato.

Compuestos fenólicos: ácido p-hidroxibenzoico, ácido vanílico, ácido p-

cumárico, ácidos ferúlicos, ácido salicílico, ácidos sinapicos, ácido cafeico,
hesperetina, naringenina, ácido clorogénico, ácido tánico, heterósidos.
Fitoestrógenos: coumestrol, genisteína, formometin, diadzein, biocanine A.

Fitoesteroles: β-sitosterol, estigmasterol.

Saponinas: soyasapogenols, hederagenin, medicagenic ácido.

Carbohidratos:

Los azúcares más comunes que posee son glucosa, fructosa (monosacáridos)
y sacarosa (disacárido). Hay trazas de otros azúcares menos comunes, que se
creen que son resto de la degradación de la hemicelulosa.

Los valores más altos de estos azúcares se encuentran en el periodo de

prefloración, disminuyendo considerablemente en la madurez de la planta.

Posee también almidón (glúcido de reserva en las plantas), que es un

polisacárido de absorción más lenta que los azúcares simples.

Los hidratos de carbono desempeñan en el organismo importantes funciones:

suministran energía para las reacciones corporales, evitan la producción de
acidosis, economizan proteínas, son necesarios para el desarrollo de la flora
microbiana, etc.
 PARTE EXPERIMENTAL

METODOLOGÍA
Este trabajo es realizado mediante una metodología descriptiva y experimental,
realizada en los laboratorios de la Universidad Norbert Wiener, por alumnos de
la escuela Académica Profesional de Farmacia y Bioquímica con ayuda de la Dr.
(a). Magister Maribel Rodríguez, con la finalidad Investigar los principios activos,
metabolitos secundarios que tiene el Medicago sativa (alfalfa).

. Recolectamos 3 kilos de alfalfa Medicago sativa en el mercado.

. Después se comienza a limpiar solo las hojas de la alfalfa para el triturado.

-Se usó 3 litros de alcohol de 96° que se convirtió a 80°

Formula:

- C1 x V1=C2 x V2

96 x V1=80x 1000ml

V1= 833.4 alcohol 96°

166.6 ml de H2O

 Procedemos a licuar las hojas de alfalfa junto con el alcohol de 80° (Fig.
Nº1)
 Fig. Nº1 licuado de las hojas

 Una vez licuado la alfalfa junto con el alcohol procedemos a envasarlo

en un recipiente de vidrio. (Fig. Nº2)

Fig. Nº 2 Envasado del extracto

 Una vez envasados en los recipientes de vidrio dejamos macerar por

una semana. (Fig. Nº3)
 Fig. Nº 3 extracto listo para macerar.

Proseguimos a filtrar:

 Colocamos gasa en un embudo hecho de botella, luego precedemos a la

filtración.
 Finalmente obtuvimos el filtrado.

 Se colocó la muestra en un recipiente de pirex para llevarlo a la estufa

para que inicie el proceso de concentración.

MUESTRA
ESTUFA
PROCESOS EXPERIMENTALES
Determinación de la solubilidad:

Muestra: Medicago sativa(alfalfa)

REACTIVOS

 N-Butanol  Etanol 70%

 Éter de petróleo  Agua
 Metanol

1 ml de a cada uno de los reactivos más una pequeña porción del extracto del
Medicago sativa(alfalfa)

DETERMINACIÓN DE SOLUBILIDAD:

Fig. Nº 1 Foto de los resultados de solubilidad hecho a nuestra muestra

estándar

Muestra Reactivo Resultados

Soluble
Metanol ++++
Color amarillo
Extracto hidroalcohólico Éter de petróleo Insoluble
de Medicago sativa N- butanol Insoluble
(alfalfa) Soluble
Etanol 70º ++++
Soluble
Agua ++++
Color amarillo
 Identificación de carbohidratos
Para poder identificar carbohidratos usamos 4 reactivos diferentes tales como,
Molish, Fehling, Tollens, Herail.
Separamos 12 tubos de ensayo con nuestro macerado, para identificar
sacarosa, xilosa y glucosa.
Para sacarosa:
1º 0.5 mL de extracto con 0.5 mL de reactivo de molish, observamos un anillo
violeta que indico reacción positiva.
2º 0.5 mL de extracto con 0.5 mL de reactivo de fehling A y B y lo llevamos a
baño maria, no se observó el precipitado rojo, indico negativo.
3º 0.5 mL de extracto con 1 mL de reactivo de tollens y lo llevamos a baño
maria, se formó el espejo de plata, la reacción fue positiva.
4º 0.5 mL de extraco con 1 ml de reactivo de herail, precipitado celeste,
reacción positiva.
Para xilosa:
1º 0.5 mL de extracto con 0.5 mL de reactivo de molish, no observamos un
anillo violeta que indico, reacción negativa.
2º 0.5 mL de extracto con 0.5 mL de reactivo de fehling A y B y lo llevamos a
baño maria, no se observó el precipitado rojo, indico negativo.
3º 0.5 mL de extracto con 1 mL de reactivo de tollens y lo llevamos a baño
maria, no se formó el espejo de plata, la reacción fue negativa.
4º 0.5 mL de extraco con 1 ml de reactivo de herail, no hubo precipitado
celeste, reacción negativa.
Para glucosa:
1º 0.5 mL de extracto con 0.5 mL de reactivo de molish, observamos un anillo
violeta que indico reacción positiva.
2º 0.5 mL de extracto con 0.5 mL de reactivo de fehling A y B y lo llevamos a
baño maria, se observó el precipitado rojo, indico positivo.
3º 0.5 mL de extracto con 1 mL de reactivo de tollens y lo llevamos a baño
maria, se formó el espejo de plata, la reacción fue positiva.
4º 0.5 mL de extraco con 1 ml de reactivo de herail, no hubo precipitado
celeste, reacción negativa.
 Resultados de carbohidratos

Muestra Rc. Molish Rc. Fehling Rc. Tollens Rc. Herail

Sacarosa ++++ - ++++ +++
Xilosa +++ - - -
Glucosa ++++ +++ +++ -

Fig. Nº 1Fructosa y Sacarosa

 Identificación de alcaloides

Procedimiento:

A.- Preparación de nuestro macerado.

1. Se colocó una porción de nuestro macerado en 6 tubos diferentes.

B. Reconocimiento de alcaloides

1. Reacción de Mayer: En un tubo de ensayo añadimos 0.5mL de la solución

ácida y se agregó 2 gotas del Rvo. de Mayer. Si se observa precipitado blanco
amarillento la muestra contiene alcaloides.

2. Reacción de Dragendorff: En un tubo de ensayo añadimos 0.5mL de la

solución ácida y se agregó 2 gotas del Rvo. de dragendorff. Si se observa
precipitado anaranjado la muestra contiene alcaloides.

3. Reacción de Bertrand: En un tubo de ensayo añadimos 0.5mL de la solución

ácida y se agregó 2 gotas del Rvo. de Bertrand. Si se observa precipitado
blanco la muestra contiene alcaloides.

4. Reacción de Popoff: En un tubo de ensayo añadimos 0.5mL de la solución

ácida y se agregó 2 gotas del Rvo. de Popoff. Si se observa precipitado
amarillo la muestra contiene alcaloides.

5. Reacción de Sonnenschein: En un tubo de ensayo añadimos 0.5mL de la

solución ácida y se agregó 2 gotas del Rvo. de Sonnenschein. Si se observa
precipitado amarillo la muestra contiene alcaloides.

6. Reacción de Bouchardt: En un tubo de ensayo añadimos 0.5mL de la

solución ácida y se agregó 2 gotas del Rvo. de Bouchardt. Si se observa
precipitado pardo oscuro la muestra contiene alcaloides.
Fig. Nº1: resultados de nuestro extracto hidroalcohólico.

Resultado de alcaloides

Identificación de alcaloides

REACTIVO REACCION RESULTADO

POSITIVA

Mayer pp. blanco ++++

amarillento

Draguendorff pp. anaranjado ++++

Alcaloides Bertrand pp. blanco ++++

Popoff pp. amarillo +

Sonnenschein pp. amarillo +

Bouchardt pp. pardo oscuro ++

 Identificación de Flavonoides:

1) Tomar una pequeña cantidad de la muestra problema (extracto) y diluirlo

en 5 ml de metanol.

2) La misma que dividimos en 5 tubos (1ml por c/u).

3) Luego añadiremos los reactivos en cada una de las muestras.

a. Muestra + 5 ml de ácido bórico
b. Muestra + 5 ml de H2SO
c. Muestra + 5 ml de FECL3 (hasta que haya cambio de coloración).

4) En los tubos D y E. y prepararemos el reactivo de Shinoda para unirlos a

ellos.
Tubo D: Una granadilla de Zinc + 5 ML de HCL (TUBO 1).
Tubo E: Virutas de magnesio + 5ML de HCL. (TUBO 2).

Resultados:

REACTIVO COLOR RESULTADO

muestra + Ac. bórico Amarillo claro +

muestra + H2SO4 Amarillo ++

muestra + FECL3 Café claro +++

muestra + SHINODA 1 Amarillo ++

muestra + SHINODA 2 Amarillo ++

FLAVONOIDES
Las muestras tuvieron cambios en sus coloraciones dependiendo del reactivo
con el cual se hacían reaccionar dando positiva en todas.
 Identificación de Aminoácidos:

Para la identificación de proteínas usamos 0.5 mL de nuestro macerado y le

añadimos 1 mL de metanol y posteriormente se le añadió 3 mL de la solución
de ninhidrina, la coloración violeta muestra la presencia de proteínas.

Resultados:

REACTIVO COLOR RESULTADO

Muestra +R. Ninhidrina Violeta +++

Discusión de resultados:
Mediante muchos trabajos de investigación se pudo determinar los siguientes
resultados.
Conclusiones:
Las hojas de Medicago sativa (alfalfa) presenta una gran cantidad de nutrientes
y propiedades farmacológicas que ayudan a la cura de algunas enfermedades
que pueden llegar hacer mortíferas si no son tratadas a tiempo, y como se
pudo observar por muchas investigaciones, la alfalfa es muy fácil de encontrar
en todo el mundo ya que es muy fácil de cultivar y no presenta dificultades para
crecer.

Referencias bibliográficas:

1. Kundan Singh Bora y Anupam Sharma, Potencial fitoquímico y

farmacológico de Medicago sativa, Taylor & francis group, Pages 211-
220 | Received 11 Jun 2010, Accepted 24 Jun 2010, Published online:
25 Oct 2010; Disponible en:
https://doi.org/10.3109/13880209.2010.504732
2. G. Sheela Joy and Philomena George, American Journal of Advanced
Drug Delivery, Phytochemical Analysis of Alfalfa (Medicago sativa) Seed
Extract by Soxhlet Extraction Using Different Solvents, Date of
Acceptance- 14/02/2014, Disponible en: www.ajadd.co.uk
3. Rosario Martinez Martinez, 5 de mayo 2015, Medicago sativa: mejora de
la productividad y nuevos aspectos de su valor nutritivo y funcional,
Universidad de granada, España, Granada.
4. Sandra G. Bezada1, Jorge L. Arroyo2, Martín Condorhuamán3, 2014,
EFECTO ESTROGÉNICO DEL EXTRACTO HIDROALCOHÓLICO DE
Medicago sativa L (ALFALFA) EN RATAS ALBINAS
OVARIECTOMIZADAS, Universidad Mayor De San Marcos, Lima Perú.
5. Cruz A, Sebastián C, Porras J. Efecto de la Suplementación con
Medicago sativa(Alfalfa)sobre Algunos Parámetros de la Leche
Bovina.Colombia:2017, Disponible en:
http://www.scielo.org.pe/pdf/rivep/v28n4/a09v28n4.pdf
6. Lock de Ugaz, O. “Investigación Fitoquímica - Métodos en el estudio de
productos naturales”. Pontificia Universidad Católica del Perú. Fondo
Editorial, 1994