Facultad de Ciencias Químicas

Laboratorio de Bacteriología I
-López Hernández, Juan

Aplicación de los criterios de Cowan y Steel para la identificación de

bacterias.
Objetivo

- Aplicar y comprender los criterios de Cowan y Steel para la identificación de una cepa
bacteriana.

Introducción

Los criterios de Cowan y Steel son un conjunto de pruebas que, de forma general, agrupan a las
bacterias dentro de un genero especifico, lo que ayuda al profesional en una orientación de las
pruebas siguientes a realizar para llegar a la especie bacteriana y así poder dar un correcto
diagnóstico y por consiguiente un tratamiento (aplica en casos clínicos).

La identificación de un aislamiento bacteriano puede realizarse utilizando diferentes combinaciones

de características y diferentes criterios en la evaluación de similitudes. Las pruebas que incluyen los
criterios de Cowan y Steel son las siguientes:

 Tinción de Gram: evalúa las propiedades y afinidad tintorial de la pared celular de las bacterias.
 Tinción de Shaeffer – Fulton: tinción específica para la observación de esporas en bacilos gram
positivos.
 Tinción de Ziehl – Neelsen: evalúa la presencia de bacterias ácido alcohol resistentes (BAAR) y
solo se realiza para bacilos gram positivos.
 Tipo de matabolismo: en medio O/F, para determinar si es oxidativo, fermentativo o inerte.
 Producción de catalasa: capacidad de la bacteria para producir la enzima catalasa.
 Producción de oxidasa: capacidad de la bacteria para producir la enzima oxidasa.
 Movilidad: en medio MIO, solo se lee si la bacteria es móvil o no, es decir, si presenta flagelos o
no.
 Crecimiento en aerobiosis: si es capaz de desarrollar en ambiente rico en oxígeno.
 Crecimiento en anaerobiosis: si es capaz de desarrollar en un ambiente sin oxígeno.
 Producción de acido a base de glucosa: en medio TSI, si la bacteria produce acido a partir de
metabolizar la glucosa. (Fernández & et al, 2010)

Material

 Equipo de tinción de Gram (cristal  2 placas de soya tripticasa

violeta, lugol, alcohol cetona, safranina)  Cepas
 Tira reactiva de oxidasa  Portaobjetos
 Reactivo de catalasa (agua oxigenada)  Algodón
 Tubos con medio O/F  Mechero de bunsen
 Tubo con medio TSI  Frasco de anaerobiosis
 Tubo con medio MIO  Benz

Resultado
 Prueba Resultado
Tinción de Gram Gram (+)
Catalasa Positivo (+)
Oxidasa Negativo (-)
Metabolismo Fermentativo
Producción de ácido Positivo (+)
Movilidad Negativo (-)
Crecimiento aerobio Positivo (+)
Crecimiento anaerobio Positivo (+)
Genero identificado: Staphylococcus

Cuestionario

1) ¿Cuál es la importancia de los criterios de Cowan y Steel?

Ayuda a clasificar a las bacterias en un género especifico, o en algún caso familia, para brindar una
orientación de las pruebas secundarias a realizar y hacer una identificación de la especie.

2) ¿Para qué sirve la tinción de Ziehl – Neelsen y cuál es su fundamento?

Se basa en las propiedades de la pared celular de los bacilos gram positivos, al poseer ácidos
micólicos en ella, estos presentan capacidad de retener ciertos colorantes. Se utiliza el compuesto
fenólico carbol fucsina, un colorante básico, éste tiene la capacidad de interactuar con los ácidos
grasos de la pared celular y cuando se somete a calor, la cera se derrite permitiendo que el colorante
penetre a la pared celular. El ácido que se usa posteriormente sirve para decolorar las células que
no fueron teñidas porque su pared no era lo suficientemente afín al colorante; por lo tanto, la fuerza
del decolorante ácido es capaz de eliminar el colorante ácido. Las células que resisten esta
decoloración se llaman ácido-resistentes. Posteriormente se utiliza un colorante secundario para
teñir el resto de las bacterias, usualmente es azul de metileno, además funge como contraste al
teñir también el fondo. De esta forma las BAAR (+) son color rojo y las (-) azules. (Morello & et al,
2006)

3) ¿Cuál es el fundamento de la prueba oxidasa y de catalasa, y como se realiza en el

laboratorio?

Catalasa: La catalasa es un enzima presente en la mayoría de los microorganismos que poseen

citocromos. Las bacterias que sintetizan catalasa hidrolizan el peróxido de hidrógeno en agua y
oxigeno gaseoso que se libera en forma de burbujas. Se realiza colocando una gota de proxido de
hidrogeno en un portaobjetos y se añade un poco de colonia con el asa y se observa la presencia de
burbujeo o no.

Oxidasa: Esta prueba sirve para determinar la presencia de enzimas oxidasas. La reacción de la
oxidasa se debe a la presencia de un sistema citocromooxidasa que activa la oxidación del citocromo
el cual es reducido por el oxígeno molecular produciéndose agua o peróxido de hidrógeno según la
especie bacteriana. El citocromo C oxida al NNN'N',tetrametil,1-4,fenilendiamina, lo que genera el
color azul. Se realiza tomando una porción de la colonia con el asa y colocándola sobre un sensidisco
o una tira reactiva y se observa si hay cambio de color o no, en caso de haberlo, es oxidasa (+).
(Fernández & et al, 2010)

4) ¿En que medios se puede realizar la prueba de movilidad y como se interpreta?

Medio sulfuro indol movilidad (SIM): es un medio semsolido que se inocula por picadura, si el
crecimiento se extiende más allá de la picadura es movilidad positiva.

Medio movilidad indol ornitina (MIO): de igual forma al ser un medio semisólido que se inocula
por picadura, si el crecimiento se extiende más allá de la picadura es movilidad positiva.

5) De cada uno de los criterios de Cowan y Steel efectuados a la sepa de estudio durante la
práctica, coloca imágenes y menciona tus resultados.

Tinción de Gram
Oxidasa (-)
Cocos Gram (+)

Metabolismo inerte
(por mala
Catalasa (+) inoculación, se
esperaba que fuera
fermentativo)

Producción de acido
a partir de la Movilidad (-)
glucosa (+)

Crecimiento en Crecimiento en
anaerobiosis (+) aerobiosis (+)

Conclusión
EL conocer los criterios de Cowan y Steel es base fundamental para una identificación fenotípica
de una cepa bacteriana, brinda una orientación del género o familia a la que pertenece y de esta
forma poder sesgar las pruebas posteriores para su identificación completa. Para que esto se lleve
a cabo correctamente, es importante conocer el fundamento de cada prueba a realizar ya que de
ello depende la compresión de las técnicas empleadas.

Bibliografía

Morello, J., Granato, P. Wilson, M. & Morton, V. (2006). Laboratory Manual and Workbook in
Microbiology: Applications to Patient Care (11th ed.). McGraw-Hill Education.

Fernández, A., García, C., Sáez, J., & Valdezate, S. (2010). Métodos de identificación bacteriana en
el laboratorio de microbiología. España: Recomendaciones de la Sociedad Española de
Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica.