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LABORATORIO PRINCIPIOS DE QUÌMICA ORGÀNICA

PRÁCTICA #5
INFORME 5 - GRUPO 8
MAYO 24 DEL 2019

JOHAN SEBASTIAN CHOREN BATERO - CÓDIGO: 25492666


KAREN LUCIA PATIÑO PANTOJA - CÓDIGO: 25492913

CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA APLICADA A UNA MEZCLA DE COLORANTES

RESUMEN

Se hizo una cromatografía de capa fina (CCF) en sílica gel a una mezcla de colorantes que contiene M-nitroanilina, O-
nitrofenol, P-nitrofenol y rojo de metilo en proporciones desconocidas, se utilizaron 3 eluyentes de diferentes polaridad acorde
a la serie eluotrópica (éter de petróleo, tolueno y metanol) y uno más como propuesta luego del primer análisis cromatográfico
(tolueno y 5 gotas de metanol). Finalmente se registraron las distancias recorridas por cada sustancia, midiendo el factor de
retención y otros parámetros se logró identificar de que estaba compuesta la muestra y su supuesta fracción másica.

PALABRAS CLAVE: Cromatografía, capa fina, colorantes, disolvente, eluyente, fase móvil, fase estacionaria,
polaridad, factor de retención.
ABSTRACT

Thin-layer chromatography (TLC) in silica gel was made to a mixture of dyes containing M-nitroaniline, O-nitrophenol, P-
nitrophenol and methyl red in unknown proportions, using 3 eluents of different polarity according to the series eluotrópica
(petroleum ether, toluene and methanol) and one more as a proposal after the first chromatographic analysis (toluene and 5
drops of methanol). Finally, the distances traveled by each substance were recorded, by measuring the retention factor and
other parameters it was possible to identify what the sample was composed of and its supposed mass fraction.

I. INTRODUCCIÒN velocidades llevada a cabo por la acción de la fase móvil,


el cual será un proceso de absorción-desorción.
La cromatografía de capa fina creada a principios del siglo La cromatografía de capa fina nos permite determinar el
XX, usada para separar los pigmentos de vegetales, es una grado de pureza de un compuesto, identificar la similitud
técnica ánalítica de facil implementación, derivando así su de dos muestras, seguimiento de una reacción para
nombre del griego chróma que significa color. Existen determinar la cantidad de reactivo remanente. Para el
varias definiciones pero la más aceptada en el ámbito análisis de la muestra se posiciona en un extremo de la
químico es ”la cromatografía como un método físico de lámina recubierta de la capa de absorbente, con los dos
separación en el cual las componentes a separar se sustancias patrón.
distribuyen entre dos fases: una fase estacionaria inmóvil
y una fase móvil” definido por IUPAC.
Es fundamental su implementación en para separar
mezclas moleculares, basado en las diferencias de
II. DIAGRAMAS DE FLUJO

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Figura 1. Diagrama de flujo que se utilizó para la cromatografía de capa fina

III. MONTAJE

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Figura 2. Montaje utilizado en la práctica CCF (fotografía propia)
IV. DATOS RECOLECTADOS

❏ DATOS DE ENTRADA
-Temperatura ambiente: 20 °C
-Presión: 560 mmHg
-Humedad absoluta: 56 %
-Muestra problema es una mezcla de de M-nitroanilina, O-
nitrofenol, P-nitrofenol, rojo de metilo (tabla 1); color rojo
y olor característico.
-Fase estacionaria: sílica gel soportada en láminas de
vidrio (figura 3)
- Eluyentes: Éter de petróleo, tolueno y metanol (en orden
de polaridad respectivamente)

Figura 3. Estructura química de la sílica gel

Tabla 1. Propiedades físicas y químicas de las sustancias involucradas en la muestra problema. P1, P2, P3 Y P4 en orden de
izquierda a derecha

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Tabla 2. Propiedades fisicas y quimicas del solventes eluyentes o fase móvil

Figura 4. Valores de la fuerza eluotrópica sobre sílica gel y fuerza eluotrópica relativa de solventes no convencionales polares

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Figura 5. Placas cromatográficas obtenidas con 3 eluyentes de distinta polaridad. M: muestra problema, P1: M-nitroanilina,O-
nitrofenol, P-nitrofenol, P4: rojo de metilo

Figura 6. Cromatografía propuesta con una mezcla de tolueno con cinco gotas de metanol

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Figura 7. Orden de polaridad y elución para diferentes grupos de familias orgánicas

Tabla 3. Distancias recorridas por cada sustancia en la placa

hay 5 cm, W es el espesor de la mancha y Z es el recorrido


V. MEMORIA DE CÁLCULOS Y de la muestra medida desde “start” hasta el centro de la
mancha
RESULTADOS
● Factor de retardo o retención (RF )
El método tradicional (y hasta ahora el único) de
determinación de los valores numéricos de los coeficientes
Es la relación que existe entre la distancia recorrida por el
Rf del analito asume casi automáticamente las siguientes
centro de la mancha y la distancia que, simultáneamente,
condiciones previas:
ha recorrido la fase móvil. Si utilizamos los símbolos de la
(a) Forma de banda cromatográfica circular (o elipsoidal);
Fig 8.
y
(b) Distribución gaussiana de la masa del analito en esta
banda.

Ec 1

Por definición los valores de Rf son siempre menores que


la unidad. Normalmente se dan con dos cifras decimales.
Para simplificar, se pueden utilizar los valores hRF que
corresponden a los Rf multiplicado por 100.

Para la placa 1 de la muestra P2 con éter de petróleo, el


factor de retención (Rf) es
Figura 8. Descripción de las distancias medidas en la
placa. De “start” a “front” (L, recorrido de la fase móvil)
Y por lo tanto el hRf seria 26. Los resultados de todas las
placas se encuentran consignados en la tabla 5

6
Los valores de Rs mayores que 1 (Rs > 1) significan una
● Factor de capacidad (k’) mejor separación, y menores que 1 (Rs < 1) separación
peor. La superposición de puntos se vuelve más
perturbadora cuando la concentración de soluto en un
punto es mucho mayor que en el otro (Guiochon et al.,
Ec 2 1979).
Para el mismo ejemplo P2 con éter de petróleo se tiene
De acuerdo con la figura 6 se tienen 3 zonas
características, la superior con tono amarillo (A), la medio
con tono morado oscuro (B) y la baja con tono morado
claro (C). Por tanto hay dos resoluciones una entre AB y
Resultados en la tabla 6
otra entre BC.

● Separación y resolución

El objetivo principal de la cromatografía es la separación


de una mezcla de solutos dada. Sin embargo, puede
suceder que las manchas cromatográficas de dos solutos
adyacentes se superpongan en mayor o menor grado. Por
lo tanto, surge una demanda por una medida de su
separación. Esta demanda se cumple con la introducción
de la cantidad R1, denominada resolución. La resolución
Rs de dos puntos cromatográficos adyacentes 1 y 2 se ● Eficiencia
define como igual a la distancia entre los dos centros de
puntos, dividida por el ancho medio del punto (Fig. &$): La eficiencia se mide mediante el cálculo del número de
placa teórico N o la altura de placa H a partir de las
ecuaciones

Ec 4 y 5

Donde Z es la distancia (cm) desde el origen hasta el


centro de una zona determinada y W es el ancho de la zona
(el ancho base del escaneo denistométrico). El factor 16 en
esta ecuación es un remanente de la teoría de la destilación
temprana, cuyo uso relaciona las placas en la capa con el
número de equilibraciones discretas del soluto entre las
Figura 9. resolución en cromatografía de capa fina: (a) fases móvil y estacionaria (Giddings, 1964). Debido a que
cromatograma; (b) correspondientes perfiles de todas las sustancias en una mezcla tienen el mismo tiempo
concentración de manchas cromatográficas. de difusión pero diferentes distancias de migración en
Se determinará la resolución para la muestra problema en TLC, los números de placa se correlacionan con las
las placas 7 y 8 con el eluyente propuesto por medio de la distancias de migración de las sustancias (sus valores de
siguiente ecuación RF específicos). El efecto de la difusión es el mismo para
todos los solutos, y la ampliación de la zona es una función
de la distancia de migración. Se ha demostrado que la
Ec 3 altura de la placa disminuye linealmente con el recíproco
del valor de Rf (Poole y Poole, 1991).
La cantidad Rs sirve para definir la separación. Cuando Rs
= 1, los dos puntos están razonablemente bien separados.

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Aplicando la ecuación del número de platos teóricos para
la muestra problema en la placa 7, para las
correspondientes zonas A. B y C (figura 6) se tiene:
Solo se hace el cálculo para la muestra (M) de interes

Tabla 4. Resumen de resultados separación y resolución

Y la ecuación de altura de placa

Tabla 5. Factor de retención x 100 (hRf) calculado para cada placa cromatográfica

Tabla 6. Capacidad (k’) calculada para cada placa cromatográfica

Comparación con la literatura [4][5]. Ver tabla 5 para hacer el comparativo


● Rf tolueno (eluyente) y m-nitroanilina (muestra) sobre sílica gel: 0,35 → %Error Abs = 37,14%
● Rf metanol (eluyente) con m-nitroanilina (muestra) sobre sílica gel: 0,7825 → %Error Abs = 4,6%
● Rf metanol (eluyente) con O-nitrofenol (muestra) sobre sílica gel: 0,8990 → %Error Abs = 8,7%

La cromatografía de capa fina se realizó usando la serie


VI. ANÁLISIS DE RESULTADOS eluotrópica de éter de petróleo, tolueno, metanol y tolueno
y 5 gotas de metanol.

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El factor de retardo Rf nos relaciona la distancia del centro i. ¿Qué ocurre si al introducir la placa en la cámara
cromatográfico al punto de inicio con la distancia del cromatográfica, el nivel del eluyente alcanza el sitio de
solvente con el inicio por lo que se destaca la placa 6 en aplicación de la mancha?
metanol con P-nitrofenol (P3), la cual presenta mayor
desplazamiento de la fase móvil en metanol, se evidencia Al introducir la placa en el sistema de la cámara
similitud con la muestra problema, por lo cual se espera la cromatográfica, si el nivel del eluyente alcanza el sitio de
presencia de este en la muestra problema, lo que no se aplicación de la mancha, lo que ocurriría sería que el
presenta en la placa 3 con la muestra problema con la fase eluyente disolvería la muestra problema y los patrones,
móvil en tolueno lo cual se puede apreciar en la figura 5. incrementando las manchas en la placa lo cual con llevaría
En la paca 2 se presenta desplazamiento nulo en presencia a generar desplazamientos erróneos y, por tanto, la lectura
de la fase móvil de éter de petróleo, no es capaz de no sería la indicada. De igual forma, si el nivel de eluyente
arrastrar los componentes, por lo que es descartable este es más alto que el punto de aplicación, la muestra puede
arreglo en la dicha fase móvil. ser análoga al disolvente y puede disolver, evitando que
sea separada en sus componentes principales por
Es de importancia resaltar la volatilidad del metanol, adsorción de la fase estacionaria y la móvil. El equilibrio
siendo muy polar, es capaz de lograr arrastrar los igualmente no ocurriría por adsorción molecular entre las
compuestos presentes en la capa de sílica gel, presentando sustancias a separar por descomposición de las muestras y
manchas más grandes y gruesas destacando las manchas la acción del eluyente.
presentes en otra fase móvil.
Se realizó una modificación a la fase móvil de tolueno al ii. ¿Cuál es el efecto de la polaridad en la cromatografía?
agregar 5 gotas de metanol, donde se puede apreciar el El efecto de la polaridad en la cromatografía influye
movimiento de las especies de manera controlada por lo altamente en la afinidad del disolvente y el soluto, ya que
que Rf no presenta el valor más alto. implica la velocidad y la distancia recorrida por las
Se calculan otros factores basados en Rf como el factor de muestras en las diferentes placas. Es decir, que una mayor
capacidad, el número de platos teóricos y la altura del plato polaridad, la relación es directamente proporcional
para las muestras presentando mejores características la respecto a la velocidad y al desplazamiento desde el punto
zona de muestra C, ver tabla 4. de aplicación de la muestra en la placa cromatográfica.
La polaridad depende exclusivamente de la estructura
molecular de cada molécula, así como de los grupos
VII. CONCLUSIONES funcionales que esta posea. Las moléculas con mayor
polaridad se retienen con mayor facilidad en la fase
estacionaria, es decir, no se desplazan de manera
Se intuye que la muestra problema M está conformada
considerable. Mientras que las de menor polaridad son
principalmente por rojo de metilo (P4) en un 70 % o más,
arrastradas con facilidad por el eluyente y su velocidad es
P-nitrofenol (P3) entre un 20 y 15 %, M-nitroanilina (P1)
por tanto aún mayor. El efecto de la polaridad es la clave
en un 10% y menos del 2% del O-nitrofenol (P2). La
para alcanzar una buena separación. La polaridad relativa
naturaleza de esta mezcla es parcialmente polar ya que se
de los disolventes más comunes se encuentra en la tabla de
requirió tolueno con gotas de metanol.
la serie eluotrópica.
Para mejor apreciación del desplazamiento de la fase
móvil es recomendable trabajar con muestras con
pigmentos apreciables al ojo humano y asi evitar errores.
Para la muestra problema no presenta interacción con la
fase móvil con éter de petróleo, ya que no se presentó
desplazamiento.

VIII. CUESTIONARIO

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Cromatografía

Criterio Líquida Gases

Fase Móvil Líquida Gas

Separación Se basa en la Se basa en la


afinidad que diferencia de los
existe entre el puntos de ebullición.
soluto y
solvente.

Método Se realiza en una Se realiza en una


hoja o columna. columna.

Uso Para cualquier Separación de pastas


pasta soluble. volátiles y mezclas.

Tabla 7. Serie eluotrópica.


Tiempo Lenta Rápida
iii. ¿Cuáles son las consecuencias de una columna mal
empacada?
Disolvente Polares con Cualquier disolvente
afinidad por el que se vaporice.
Una columna mal empacada impide que el área de
agua o metanol.
contacto entre la fase estacionaria y el solvente sea
adecuada y óptima lo que afecta de manera directa la
separación, ya que el sólido se seca y por ende se cristaliza
impidiendo el paso del solvente a lo largo de la columna.
Igualmente es conveniente utilizar una cantidad v. Profundización sobre fluorescencia para sustancias
considerable del material de relleno con una distribución incoloras.
de tamaño de partícula uniforme que permita llenar
cualquier espacio ya que, si no se garantiza esta condición, En muchas ocasiones una vez realizada la cromatografía
se pueden obtener lecturas incorrectas en la aplicación del de capa fina, algunas sustancias o todas en su defecto, no
método debido a la capacidad de retención y el volumen presentan coloraciones que se puedan observar con
de elución. De igual manera, es indispensable mantener un facilidad. Es decir, que son incoloros o no son muy
volumen de la fase móvil por encima de la fase notables. Es por ello por lo que deben utilizarse sustancias
estacionaria de lo contrario se seca el lecho empacado. fluorescentes, las cuales realizan la separación en una
columna impregnada con el material fluorescente como es
iv. ¿Cuáles son las diferencias entre la cromatografía el caso de la eosina o la fluoresceína y se evalúa con rayos
líquida y de gases? ultravioleta (UV). En el caso de la práctica, resulta muy
conveniente utilizar una lámpara de rayos UV, para poder
En la Tabla 8. se presentan las principales características medir las distancias recorridas por la mancha incolora.
de los principales métodos de cromatografía Algunos de los indicadores que se emplean en columnas
. (impregnados) son absorbentes que ayudan y facilitan la
Tabla 8. Principales diferencias entre la cromatografía identificación de las muestras como por ejemplo el F254
líquida y de gases. o el F366, el número que aparece como subíndice, indica
la longitud de onda de excitación del indicador utilizado.

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También, se pueden revelar las manchas introduciendo las vii. En qué orden (de arriba hacia abajo) se puede esperar
placas en vapores de yodo y rocío con una solución de encontrar los siguientes compuestos: naftaleno, ácido
agua y ácido sulfúrico 1:1 en una campana de extracción butírico y acetato de fenilo en un gel de placa de TLC de
de gases, donde después se calienta. sílice desarrollada con diclorometano.

vi. Parámetros de la cromatografía líquida de alta Para un gel de placa TLC (Thin Layer Chromatography)
eficiencia. de sílice desarrollada en CHCl2 (haloalcano), es
importante mencionar en primer lugar que el
Tabla 9. Parámetros de la HPLC. diclorometano es un disolvente con baja polaridad.
(HPLC) Cromatografía líquida de alta Teniendo en cuenta el efecto de la polaridad para los
compuestos listados, ya que entre más polar sea la
eficiencia.
sustancia, más afín será al eluyente y se desplazará una
Parámetros Características distancia más corta. Por tanto, se esperan encontrar (de
arriba hacia abajo):
Naftaleno – C10H8 (aromático hidrocarburo no polar,
Diámetro Determina la cantidad de muestra que con el mayor Rf)
Interno debe cargarse a la columna. Las Acetato de fenilo – C8H8O2 (éster polaridad
columnas de menos de 10 mm se intermedia)
utilizan en la purificación de Ácido butírico – C4H8O2 (ácido alta polaridad, será
compuestos. Entre 4-5 mm se utilizan fuertemente atraído al adsorbente, con el menor Rf)
para análisis químico cuantitativo
(menor consumo de solvente y viii. Organice los siguientes compuestos en orden
sensibilidad). Finalmente, las de 0.3 creciente de Rf empleando sílica como fase
mm se utilizan para espectrometría de estacionaria en cromatografía en capa delgada:
masas. ácido acético, acetaldehído, 2-octanona, decano
y 1-butanol.
Tamaño de Las partículas más pequeñas ofrecen
Partícula una mayor superficie y una mejor
El valor más pequeño de Rf estará dado por la sustancia
separación, pero incrementan las
que con mayor facilidad se adhiere al adsorbente de sílica.
pérdidas por caída de presión. La fase
● Ácido acético – CH3COOH (ácido alta
estacionaria se encuentra unida al
polaridad, con el menor Rf)
exterior de las partículas de sílice gel
● 1-butanol – C4H10O (alcohol)
con un diámetro aproximado de 5 mm.
● Acetaldehído – C2H4O (aldehído)
Tamaño de Las fases estacionarias son más ● 2-octanona – C8H16O (acetona)
Poro porosas. Un poro de diámetro pequeño ● Decano – C10H22 (alcano hidrocarburo no polar,
permite una mayor superficie, pero a con el mayor Rf)
medida que aumentan ayudan a
producir una mayor cinética. ix. ¿Qué efecto se presenta si se siembra mucha
muestra en la cromatoplaca?
Presión del El rendimiento se mide en su habilidad
Sistema para generar un flujo constante. Entre Si se siembra mucha muestra en la cromatoplaca puede
mayor sea la presión, será más que la fase estacionaria no alcance a mover toda la muestra
eficiente la operación y por ende y no se alcance el grado de separación esperado, de tal
reproducible. Cuando las partículas modo que no sea absorbida por la fase estacionaria, por lo
son de diámetro muy pequeño se que puede acumularse como una mancha (estela) durante
utilizan presiones entre 40-100 MPa. su desplazamiento dificultando la lectura. Igualmente, las
manchas de varios componentes se superpondrán en el
punto donde diferentes compuestos no pueden ser
verificados o determinados.

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[3] C.J. Welch, W. Leonard, J.O. DaSilva, M. Biba,
x. Se observa una mancha con un Rf de 0,62 después de J. Albaneze-Walker, D.W. Henderson, B. Laing, D.J.
desarrollar la cromatoplaca para una mezcla de Mathre, LC–GC N. Am. 23 (2005) 16.
reacción. ¿Prueba esto que usted tiene solamente [4] L. Miller, J. Chromatogr. A 1250 (2012) 250.
un producto presente? Explique.
[5] C.J. Welch, J. Fairchild, P. Sajonz, Chirality 19
(2007) 607.
No, debido a que existen solventes que pueden arrastrar
toda la sustancia debido a su polaridad sin que sea posible [6] E. Francotte, D. Huynh, J. Pharm. Biomed. Anal.
observar las dos fases. Igualmente, esto no prueba que se 27 (2002) 421.
tenga solamente un producto. Puede haber otros [7] J. Thunberg, J. Hashemi, S. Andersson, J.
compuestos que inclusive tengan el mismo valor de Rf. Chromatogr. B 875 (2008) 72.
Otros compuestos también pueden estar presentes con un [8] David R. Lide, “Handbook of chemistry and
valor diferente de Rf que no sea visualizado por cualquiera physics”, páginas 1024 a 1030, Chief 84 ed, 2004.
de los métodos empleados para detectar el compuesto con
un Rf =0,62. Finalmente, otros compuestos también
pueden estar presentes en concentraciones lo
suficientemente bajas de modo que no sea fácilmente
detectada. Sin embargo, en mezclas puede ser posible que
se tenga una sola mancha si es el caso donde no se usa el
solvente apropiado para separar los componentes de la
mezcla de reacción.

xi. ¿De qué manera influye la saturación de la


cámara en el proceso de separación?

La saturación de la cámara influye en el proceso ya que, si


esta no se encuentra saturada, se requeriría un mayor
tiempo para que los componentes se separen en las
cromatoplacas y se alcance un frente, además se pueden
obtener variaciones de los Rf, siendo estos mayores. Si no
está saturada la cámara con los vapores del eluyente, este
último se evaporara de la placa durante el proceso de
separación. Cuando se utilizan eluyentes con más de un
componente, se esperaría que los componentes más
volátiles de evaporen primero variando la composición del
eluyente.

REFERENCIAS

[1] M.C. Núnez, ˜ M.E. Garcia-Rubino, ˜ A. Conejo-


García, O. Cruz-López, M. Kimatrai, M.A. Gallo, A.
Espinosa, J.M. Campos, Curr. Med. Chem. 16 (2009)
2064.
[2] J.O. Da Silva, H.S. Yip, V. Hegde, Am. Pharm.
Rev. 12 (2009) 98.

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