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PRÁCTICA #5
INFORME 5 - GRUPO 8
MAYO 24 DEL 2019
RESUMEN
Se hizo una cromatografía de capa fina (CCF) en sílica gel a una mezcla de colorantes que contiene M-nitroanilina, O-
nitrofenol, P-nitrofenol y rojo de metilo en proporciones desconocidas, se utilizaron 3 eluyentes de diferentes polaridad acorde
a la serie eluotrópica (éter de petróleo, tolueno y metanol) y uno más como propuesta luego del primer análisis cromatográfico
(tolueno y 5 gotas de metanol). Finalmente se registraron las distancias recorridas por cada sustancia, midiendo el factor de
retención y otros parámetros se logró identificar de que estaba compuesta la muestra y su supuesta fracción másica.
PALABRAS CLAVE: Cromatografía, capa fina, colorantes, disolvente, eluyente, fase móvil, fase estacionaria,
polaridad, factor de retención.
ABSTRACT
Thin-layer chromatography (TLC) in silica gel was made to a mixture of dyes containing M-nitroaniline, O-nitrophenol, P-
nitrophenol and methyl red in unknown proportions, using 3 eluents of different polarity according to the series eluotrópica
(petroleum ether, toluene and methanol) and one more as a proposal after the first chromatographic analysis (toluene and 5
drops of methanol). Finally, the distances traveled by each substance were recorded, by measuring the retention factor and
other parameters it was possible to identify what the sample was composed of and its supposed mass fraction.
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Figura 1. Diagrama de flujo que se utilizó para la cromatografía de capa fina
III. MONTAJE
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Figura 2. Montaje utilizado en la práctica CCF (fotografía propia)
IV. DATOS RECOLECTADOS
❏ DATOS DE ENTRADA
-Temperatura ambiente: 20 °C
-Presión: 560 mmHg
-Humedad absoluta: 56 %
-Muestra problema es una mezcla de de M-nitroanilina, O-
nitrofenol, P-nitrofenol, rojo de metilo (tabla 1); color rojo
y olor característico.
-Fase estacionaria: sílica gel soportada en láminas de
vidrio (figura 3)
- Eluyentes: Éter de petróleo, tolueno y metanol (en orden
de polaridad respectivamente)
Tabla 1. Propiedades físicas y químicas de las sustancias involucradas en la muestra problema. P1, P2, P3 Y P4 en orden de
izquierda a derecha
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Tabla 2. Propiedades fisicas y quimicas del solventes eluyentes o fase móvil
Figura 4. Valores de la fuerza eluotrópica sobre sílica gel y fuerza eluotrópica relativa de solventes no convencionales polares
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Figura 5. Placas cromatográficas obtenidas con 3 eluyentes de distinta polaridad. M: muestra problema, P1: M-nitroanilina,O-
nitrofenol, P-nitrofenol, P4: rojo de metilo
Figura 6. Cromatografía propuesta con una mezcla de tolueno con cinco gotas de metanol
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Figura 7. Orden de polaridad y elución para diferentes grupos de familias orgánicas
Ec 1
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Los valores de Rs mayores que 1 (Rs > 1) significan una
● Factor de capacidad (k’) mejor separación, y menores que 1 (Rs < 1) separación
peor. La superposición de puntos se vuelve más
perturbadora cuando la concentración de soluto en un
punto es mucho mayor que en el otro (Guiochon et al.,
Ec 2 1979).
Para el mismo ejemplo P2 con éter de petróleo se tiene
De acuerdo con la figura 6 se tienen 3 zonas
características, la superior con tono amarillo (A), la medio
con tono morado oscuro (B) y la baja con tono morado
claro (C). Por tanto hay dos resoluciones una entre AB y
Resultados en la tabla 6
otra entre BC.
● Separación y resolución
Ec 4 y 5
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Aplicando la ecuación del número de platos teóricos para
la muestra problema en la placa 7, para las
correspondientes zonas A. B y C (figura 6) se tiene:
Solo se hace el cálculo para la muestra (M) de interes
Tabla 5. Factor de retención x 100 (hRf) calculado para cada placa cromatográfica
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El factor de retardo Rf nos relaciona la distancia del centro i. ¿Qué ocurre si al introducir la placa en la cámara
cromatográfico al punto de inicio con la distancia del cromatográfica, el nivel del eluyente alcanza el sitio de
solvente con el inicio por lo que se destaca la placa 6 en aplicación de la mancha?
metanol con P-nitrofenol (P3), la cual presenta mayor
desplazamiento de la fase móvil en metanol, se evidencia Al introducir la placa en el sistema de la cámara
similitud con la muestra problema, por lo cual se espera la cromatográfica, si el nivel del eluyente alcanza el sitio de
presencia de este en la muestra problema, lo que no se aplicación de la mancha, lo que ocurriría sería que el
presenta en la placa 3 con la muestra problema con la fase eluyente disolvería la muestra problema y los patrones,
móvil en tolueno lo cual se puede apreciar en la figura 5. incrementando las manchas en la placa lo cual con llevaría
En la paca 2 se presenta desplazamiento nulo en presencia a generar desplazamientos erróneos y, por tanto, la lectura
de la fase móvil de éter de petróleo, no es capaz de no sería la indicada. De igual forma, si el nivel de eluyente
arrastrar los componentes, por lo que es descartable este es más alto que el punto de aplicación, la muestra puede
arreglo en la dicha fase móvil. ser análoga al disolvente y puede disolver, evitando que
sea separada en sus componentes principales por
Es de importancia resaltar la volatilidad del metanol, adsorción de la fase estacionaria y la móvil. El equilibrio
siendo muy polar, es capaz de lograr arrastrar los igualmente no ocurriría por adsorción molecular entre las
compuestos presentes en la capa de sílica gel, presentando sustancias a separar por descomposición de las muestras y
manchas más grandes y gruesas destacando las manchas la acción del eluyente.
presentes en otra fase móvil.
Se realizó una modificación a la fase móvil de tolueno al ii. ¿Cuál es el efecto de la polaridad en la cromatografía?
agregar 5 gotas de metanol, donde se puede apreciar el El efecto de la polaridad en la cromatografía influye
movimiento de las especies de manera controlada por lo altamente en la afinidad del disolvente y el soluto, ya que
que Rf no presenta el valor más alto. implica la velocidad y la distancia recorrida por las
Se calculan otros factores basados en Rf como el factor de muestras en las diferentes placas. Es decir, que una mayor
capacidad, el número de platos teóricos y la altura del plato polaridad, la relación es directamente proporcional
para las muestras presentando mejores características la respecto a la velocidad y al desplazamiento desde el punto
zona de muestra C, ver tabla 4. de aplicación de la muestra en la placa cromatográfica.
La polaridad depende exclusivamente de la estructura
molecular de cada molécula, así como de los grupos
VII. CONCLUSIONES funcionales que esta posea. Las moléculas con mayor
polaridad se retienen con mayor facilidad en la fase
estacionaria, es decir, no se desplazan de manera
Se intuye que la muestra problema M está conformada
considerable. Mientras que las de menor polaridad son
principalmente por rojo de metilo (P4) en un 70 % o más,
arrastradas con facilidad por el eluyente y su velocidad es
P-nitrofenol (P3) entre un 20 y 15 %, M-nitroanilina (P1)
por tanto aún mayor. El efecto de la polaridad es la clave
en un 10% y menos del 2% del O-nitrofenol (P2). La
para alcanzar una buena separación. La polaridad relativa
naturaleza de esta mezcla es parcialmente polar ya que se
de los disolventes más comunes se encuentra en la tabla de
requirió tolueno con gotas de metanol.
la serie eluotrópica.
Para mejor apreciación del desplazamiento de la fase
móvil es recomendable trabajar con muestras con
pigmentos apreciables al ojo humano y asi evitar errores.
Para la muestra problema no presenta interacción con la
fase móvil con éter de petróleo, ya que no se presentó
desplazamiento.
VIII. CUESTIONARIO
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Cromatografía
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También, se pueden revelar las manchas introduciendo las vii. En qué orden (de arriba hacia abajo) se puede esperar
placas en vapores de yodo y rocío con una solución de encontrar los siguientes compuestos: naftaleno, ácido
agua y ácido sulfúrico 1:1 en una campana de extracción butírico y acetato de fenilo en un gel de placa de TLC de
de gases, donde después se calienta. sílice desarrollada con diclorometano.
vi. Parámetros de la cromatografía líquida de alta Para un gel de placa TLC (Thin Layer Chromatography)
eficiencia. de sílice desarrollada en CHCl2 (haloalcano), es
importante mencionar en primer lugar que el
Tabla 9. Parámetros de la HPLC. diclorometano es un disolvente con baja polaridad.
(HPLC) Cromatografía líquida de alta Teniendo en cuenta el efecto de la polaridad para los
compuestos listados, ya que entre más polar sea la
eficiencia.
sustancia, más afín será al eluyente y se desplazará una
Parámetros Características distancia más corta. Por tanto, se esperan encontrar (de
arriba hacia abajo):
Naftaleno – C10H8 (aromático hidrocarburo no polar,
Diámetro Determina la cantidad de muestra que con el mayor Rf)
Interno debe cargarse a la columna. Las Acetato de fenilo – C8H8O2 (éster polaridad
columnas de menos de 10 mm se intermedia)
utilizan en la purificación de Ácido butírico – C4H8O2 (ácido alta polaridad, será
compuestos. Entre 4-5 mm se utilizan fuertemente atraído al adsorbente, con el menor Rf)
para análisis químico cuantitativo
(menor consumo de solvente y viii. Organice los siguientes compuestos en orden
sensibilidad). Finalmente, las de 0.3 creciente de Rf empleando sílica como fase
mm se utilizan para espectrometría de estacionaria en cromatografía en capa delgada:
masas. ácido acético, acetaldehído, 2-octanona, decano
y 1-butanol.
Tamaño de Las partículas más pequeñas ofrecen
Partícula una mayor superficie y una mejor
El valor más pequeño de Rf estará dado por la sustancia
separación, pero incrementan las
que con mayor facilidad se adhiere al adsorbente de sílica.
pérdidas por caída de presión. La fase
● Ácido acético – CH3COOH (ácido alta
estacionaria se encuentra unida al
polaridad, con el menor Rf)
exterior de las partículas de sílice gel
● 1-butanol – C4H10O (alcohol)
con un diámetro aproximado de 5 mm.
● Acetaldehído – C2H4O (aldehído)
Tamaño de Las fases estacionarias son más ● 2-octanona – C8H16O (acetona)
Poro porosas. Un poro de diámetro pequeño ● Decano – C10H22 (alcano hidrocarburo no polar,
permite una mayor superficie, pero a con el mayor Rf)
medida que aumentan ayudan a
producir una mayor cinética. ix. ¿Qué efecto se presenta si se siembra mucha
muestra en la cromatoplaca?
Presión del El rendimiento se mide en su habilidad
Sistema para generar un flujo constante. Entre Si se siembra mucha muestra en la cromatoplaca puede
mayor sea la presión, será más que la fase estacionaria no alcance a mover toda la muestra
eficiente la operación y por ende y no se alcance el grado de separación esperado, de tal
reproducible. Cuando las partículas modo que no sea absorbida por la fase estacionaria, por lo
son de diámetro muy pequeño se que puede acumularse como una mancha (estela) durante
utilizan presiones entre 40-100 MPa. su desplazamiento dificultando la lectura. Igualmente, las
manchas de varios componentes se superpondrán en el
punto donde diferentes compuestos no pueden ser
verificados o determinados.
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[3] C.J. Welch, W. Leonard, J.O. DaSilva, M. Biba,
x. Se observa una mancha con un Rf de 0,62 después de J. Albaneze-Walker, D.W. Henderson, B. Laing, D.J.
desarrollar la cromatoplaca para una mezcla de Mathre, LC–GC N. Am. 23 (2005) 16.
reacción. ¿Prueba esto que usted tiene solamente [4] L. Miller, J. Chromatogr. A 1250 (2012) 250.
un producto presente? Explique.
[5] C.J. Welch, J. Fairchild, P. Sajonz, Chirality 19
(2007) 607.
No, debido a que existen solventes que pueden arrastrar
toda la sustancia debido a su polaridad sin que sea posible [6] E. Francotte, D. Huynh, J. Pharm. Biomed. Anal.
observar las dos fases. Igualmente, esto no prueba que se 27 (2002) 421.
tenga solamente un producto. Puede haber otros [7] J. Thunberg, J. Hashemi, S. Andersson, J.
compuestos que inclusive tengan el mismo valor de Rf. Chromatogr. B 875 (2008) 72.
Otros compuestos también pueden estar presentes con un [8] David R. Lide, “Handbook of chemistry and
valor diferente de Rf que no sea visualizado por cualquiera physics”, páginas 1024 a 1030, Chief 84 ed, 2004.
de los métodos empleados para detectar el compuesto con
un Rf =0,62. Finalmente, otros compuestos también
pueden estar presentes en concentraciones lo
suficientemente bajas de modo que no sea fácilmente
detectada. Sin embargo, en mezclas puede ser posible que
se tenga una sola mancha si es el caso donde no se usa el
solvente apropiado para separar los componentes de la
mezcla de reacción.
REFERENCIAS
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