Instituto Politécnico Nacional Objetivos

Escuela Nacional de Ciencias

Biológicas -Analizar el efecto de la concentración del
Ingeniería Bioquímica sustrato sobre la velocidad de reacción
enzimática
Efecto de la concentración del sustrato e -Determinar la constante de Michaelis-Mendel
inhibidores sobre la velocidad de reacción (Km) de forma gráfica por los métodos de M-M
enzimática de la invertasa. y Lineweaver-Burk.
Sección: 01; 3IM2 -Determinar el tipo de inhibición producido
Integrantes: por una sustancia (anilina) sobre la actividad de
Cazares Ordoñez Samuel la invertasa.
Rios Rojas Rogelio
Resultados
Introducción
Tabla 1 Azúcar reductor-UI
A partir del complejo enzima-sustrato resultan
los productos (P) de la reacción, y la enzima Azúcar Reductor Unidades
queda en su condición original, lista para (µmol/2ml) de Invertasa
0.8 0.08
aceptar otra molécula de sustrato
0.9 0.09
1 3
E+S ES E+P 1.05 0.105
2 4
1.15 0.115
De acuerdo con la ley de acción de masas, la 1.10 0.11
velocidad dela reacción 3 será proporcional a la 1.55 0.155
concentración [ES], la cual a su vez depende de Tabla 2 inverso de la concentración de azúcar
[E] y [S]. Como E vuelve a queda disponible al reductor y UI
final de la reacción podemos concluir que la
velocidad de reacción es directamente 1/ 1/U
proporcional a [S]. ( µmol/2ml) I
1.25 12.5
Sin embargo, esta relación es válida cunado [S] 1.11 11.1
es baja, y deja de serlo cuando aumenta. 0.95 9.5
0.87 8.7
Con valores muy altos de [S] la velocidad ya no
0.91 9.1
cambia aunque [S] siga aumentando o sea se
0.65 6.5
alcanza una velocidad máxima.
Tabla 3 Azúcar reductor-UI en presencia de
Así mismo debido a que la “maquinaria” inhibidor
enzimática de la célula es compleja surgen
Azúcar Reductor Unidades
otras preguntas en cuanto al control de las (µmol/2ml) de Invertasa
reacciones en ella, ¿existen inhibidores 0.0085 0.00085
enzimáticos y cómo actúan? 0.008 0.00098
De lo anterior se obtienen 4 tipos principales 0.0083 0.00083
de inhibición enzimática 0.0081 0.00081
0.010 0.0010
1.- Inhibición inespecífica. 0.009 0.0009
2.- I. No competitiva Ecuación de Michaelis-Mendel
3.- I. Competitiva
Vmax [S ]
4.- I. yactivación alostérica. V=
Km+[S ]
Calculo de Km Referencias.
Si Vo=1/2Vmax 1. Antonio Peña. (1998). Bioquímica: Área
Vmax [S ] química. México: Editorial Limusa.196-
1
Vmax= 195,203-205PP.
2 Km+[S]
2Vmax [ S ]
Km+ [ S ] =
Vmax
Km+ [ S ] =2[ S]
Km=[S ]
Si Vmax=0.155

Km=0.775 µmol/2ml=3.875x10^-4 M

Discusión

Como se puede observar en los datos y en las

gráficas los datos presentados son incorrectos
esto fue debido a que en la experiencia no
hubo un desarrollo de color atribuido al
reactivo de la invertasa que estaba muy diluida

Se puede observar que los valores de

absorbancia son muy pequeños debido a esto.
Al realizar la gráfica de la velocidad vs
concentración se esperaba una hipérbola
rectangular y se obtuvo una recta.

Al continuar con el procesamiento de datos

tomamos como Vmax el valor más alto
obtenido y calculamos Km

Al igual que en la experiencia de concentración

de sustrato en presencia de inhibidor no hubo
un desarrollo de color y por lo cual los valores
de absorbancia fueron aún más pequeños
imposibilitando el tratamiento de datos y por lo
tanto no se pudo concluir si se trataba de un
inhibidor competitivo o no competitivo ni el
cálculo de Km para esta.

Conclusión.
Se determinó que la velocidad de reacción es
directamente proporcional a la concentración
del sustrato.

Se calculó Km de acuerdo a los datos obtenidos

en el experimento.