RESULTADOS

 PRUEBA DEL MILLÓN

El reactivo de Millón contiene una mezcla de nitritos y nitratos mercúricos en ácido

nítrico concentrado. Debido a la presencia del grupo fenólico se produce un
compuesto de color rojo. Metodología.

a) Adicionar a 1 ml de las soluciones problema de 2 a 5 gotas del reactivo de

Millón y calentar en baño maría. La aparición de un color rojo será una
prueba positiva.

b) Anotar en la tabla correspondiente los resultados y observaciones

 REACCIÓN DE LA NINHIDRINA

Para los aminoácidos esta es la única reacción de color, verdaderamente

importante. La Ninhidrina es una agente oxidante 1 de los grupos alfa-amino,
liberando amoniaco, CO2 y el correspondiente aldehído, así como la forma
reducida de la Ninhidrina.

a) Adicionar a 1 ml de las soluciones problema, 5 gotas de la solución de

b) Ninhidrina en butanol. Observar a temperatura ambiente la aparición de un

color azul o violeta que se debe a la presencia de los grupos amino libres; si
es necesario, calentar en baño maría 1 ó 2 minutos los tubos en los que no
aparece el color.

c) Anotar los resultados y observaciones en la tabla correspondiente.

Una coloración violeta determina positiva la prueba y para este caso también un
color Vino tinto la determinara como positiva. En esta prueba se obtienen los
resultados esperados para casi todas las muestras en excepción para la Urea, la
gelatina y el agua ya que a diferencia de las demás muestras estas no es un alfa-
aminoácido Ej. Glicina, Asparagina, Triptófano, Fenilalanina, Albúmina, Histidina y
Alanina (contienen alfa-amino), ni tampoco contiene alfa- aminoácidos (Ej.
Gelatina). El resultado para la muestra de Agua confirma que esta no contiene
alfa- aminoácido
  REACCIÓN XANTOPROTEICA

Los compuestos que presentan bencenos sustituidos (con grupos unidos al anillo
bencénico), al reaccionar con el ácido nítrico concentrado forman compuestos
nitrados de color amarillo, el cual se intensifica en medio alcalino.

a) Adicionar a 1 ml de las soluciones problema, 1 ml de ácido nítrico

concentrado, calentar la mezcla y enfriar. Estratificar cuidadosamente con 1
ml de hidróxido de amonio concentrado. La aparición de un color amarillo o
naranja en la interfase será prueba positiva.

b) Anotar en la tabla correspondiente los resultados obtenidos.

El aminoácido fenilalanina también tiene en su estructura un anillo aromático, pero

no está activado, por lo tanto, el proceso de nitración no se da fácilmente y no se
puede percibir entonces la coloración amarilla. Las muestras de Triptófano,
Histidina y Albumina al reaccionar con HNO3 y las gotas de solución al 40% de
NaOH reaccionaron de forma correcta.

 REACCIÓN DEL BIURET

Es un método general para la determinación de proteínas o péptidos. Se basa en la

reacción del sulfato de cobre con compuestos que tengan dos o más enlaces
peptídicos, en un medio alcalino.

a) Adicionar 1 ml de la solución problema 2 ml de NaOH al 10% y de 3 a 5

gotas del reactivo de biuret (solución de CuSO4 al 0.5%) mezclar bien. La
formación de un color violáceo o la precipitación de hidróxido cúprico será
una prueba positiva.
 b) Si el color de la reacción de biuret no se presenta inmediatamente, deja
reposar de 10 a 15 minutos
c) Anotar en la tabla correspondiente los resultados y observaciones

Los resultados obtenidos, indican que la Albumina, la Gelatina. histidina y la Urea

presentan enlaces peptídicos por lo que se observó un color violeta, esto confirma
lo establecido en la teoría.

PRUEBA BIURET XANTOPROTEICA MILLON NINHIDRINA

Albúmina

Peptona -

Fenilalanina - -

Tirosina - - -
Arginina - - -
Leucina - -

Grenetina - -
-
La albúmina con ácido nítrico en presencia de calor coagula de color rojo, al enfriar se le agrega
NaOH precipitando de color naranja. La caseína más el ácido nítrico en presencia de calor no
reacciona observándose una solución incolora, la que se enfría, y con la adición del NaOH, nos da
un precipitado rojo, concluyendo que la caseína solo reacciona en medio alcalino.
La desnaturalización de la proteína ocurre cuando las atracciones intermoleculares débiles
conservan con delicadeza la estructura terciaria de una proteína globular. Con frecuencia
un ligero cambio en la temperatura o en el pH altera su estructura terciaria la que es
causante de que la proteína se desnaturalice. El producto es un complejo color violeta, la
intensidad de color depende de la cantidad de enlaces peptídicos presentes.
El reactivo xantoprotéico solo reacciona con las proteínas. Por lo tanto, este reactivo es
selectivo y se emplea para la identificación de proteínas
Se le añadió el reactivo de ninhidrina y se calentó a ebullición. Todas estas soluciones
reaccionan con el nitrato de sodio dando soluciones en tonalidades violetas, con
excepción de la albúmina que da una un color rojo, no reacciona.