Extracción de ADN

Valenzuela Ortiz Juliana Marcela; Cando Alpala Esteban Javier

1,2,
Estudiantes del programa de Licenciatura en Biología y Educación Ambiental, Facultad
*1
de Educación, Universidad del Quindío - Colombia. jmvalenzuelao@uqvirtual.edu.co
*2estebanj.candoa@uqvirtual.edu.co.

Introducción

El ADN es el código genético universal, presenta una estructura general de doble hélice en
donde se encuentran las bases nitrogenadas las cuales brindan características genéticas a cada
individuo, estas bases se unen a través de enlaces químicos generando tripletes formando
cerca de 20 aminoácidos esenciales para la vida. Dichos tripletes se hayan dispuestos de una
manera literal y continua, de manera que ellos no existan algún espacio para alguna otra
estructura diferente a la que conforma este ácido nucleico, la función principal de ADN
consiste en trasmitir los genes, es decir, los caracteres biológicos de un individuo
determinado, en dichos genes está grabada la instrucción necesaria para la construcción de
cada individuo completo, siguiendo dichas instrucciones, cada célula es capaz de sintetizar
sus proteínas y de adoptar la forma y función que le corresponde a cada organismo (Moreno,
2015)

La extracción consiste en el aislamiento y purificación de moléculas de ADN y se basa en

las características fisicoquímicas de la molécula. El ADN está constituido por dos cadenas
de nucleótidos unidas entre sí formando una doble hélice. Los nucleótidos están integrados
por un azúcar (desoxirribosa), un grupo fosfato y una base nitrogenada (adenina, guanina,
timina o citosina). La unión de los nucleótidos ocurre entre el grupo fosfato y el azúcar,
mediante enlaces fosfodiéster, dando lugar al esqueleto de la molécula. Las bases de cadenas
opuestas se unen mediante puentes de hidrógeno y mantienen estable la estructura helicoidal;
Los grupos fosfato están cargados negativamente y son polares, lo que le confiere al ADN
una carga neta negativa y lo hace altamente polar, características que son aprovechadas para
su extracción. Los grupos fosfato tienen una fuerte tendencia a repelerse, debido a su carga
negativa, lo que permite disolver al ADN en soluciones acuosas y formar una capa hidratante
alrededor de la molécula. Pero, en presencia de etanol, se rompe la capa hidratante y quedan
expuestos los grupos fosfato. Bajo estas condiciones se favorece la unión con cationes como
Na+ que reducen las fuerzas repulsivas entre las cadenas de nucleótidos y permiten que el
ADN precipite. Por otro lado, la carga neta negativa del ADN le permite unirse a moléculas
y matrices inorgánicas cargadas positivamente (Alejos, S.F)

Objetivos

Para esta práctica de laboratorio el objetivo principal fue extraer el material genético es decir
ADN de muestras de tejido vegetal y animal por medio de métodos caseros, seguros y fáciles
de elaborar.

Materiales

Inicialmente se utilizaron dos tubos de ensayos en el cual se les agregó alcohol y se los
deposito en un recipiente con hielo, enseguida se utilizo un mortero para homogenizar las
muestras biológicas, se utilizó también agua destilada, detergente casero, gasa para filtrar las
muestras, pipetas, micropipetas, beakers para depositar el filtrado.
 METODOLOGIA

EXTRACCION DE ADN

Extracción de ADN Extracción de ADN animal

vegetal (tradicional) (tradicional)

Se
En un tubo de
En un tubo de Esto se colocó en un homogenizo
ensayo se
ensayo se recipiente adecuado Luego un trozo de
agregó 10ml de
agregó 10ml de con hielo durante un hígado de
etanol al 70%.
etanol al 70%. determinado tiempo pollo
Se agregó al Se filtró la
tejido En seguida mezcla varias
Usando Se homogenizo
homogenizado veces a través de
50g de material En seguida 25 ml de agua la gasa en un
vegetal
destilada Se agregó beacker.
100ml de
agua al filtrado
una Estos materiales
destilada
cucharada de se mezclaron cloruro de sodio 10% para lograr la El filtrado se
detergente cuidadosamente exposición de los núcleos y de las fibras midió con una
Luego se con un 1g de evitando la de cromatina probeta
procedió a NaCL 20ml formación de
espuma. Una cucharada de detergente para la
colocar en de agua
Se agregó. formación de un complejo con proteínas
un Becker destilada.
asociadas al ADN dejándolo libre.
Después de haber
Se Se agregó suavemente el etanol
formado una buena Finalmente
agrego helado por las paredes del
mezcla con los
materiales beacker para después de un
momento observar lo que
3 cucharadas sucede.
de la muestra Se filtró a
En
homogenizad través de la
seguida
a de material gasa. Se sacó
vegetal 5ml de filtrado
para analizarlo.
se dejó Se agregó el
reposar hasta filtrado al etanol
finalmente
observar el helado
resultado. cuidadosamente
 Resultados
Extracción de ADN vegetal:
Para el la extracción del ADN de tejido vegetal (fig.1), no se observaron los resultados que
se esperaban, ya que al tener solo una muestra en un tubo de ensayo , pudimos observar que
no se formaron las tres capas : la capa de alcohol, la capa de filtrado, únicamente se observó
que solo se estaba formando la capa interfase con el ADN, pero no se la evidenciaba con
exactitud, esto fue debido a que no se depositó la muestra vegetativa correctamente en el
alcohol, es decir derramándola suavemente por las paredes del tubo de ensayo.

Figura 1: muestra de extracción de ADN de

tejido vegetal, donde no se evidencias las 3
capas. A) Únicamente se observa que se está
formando la fase intermedia del ADN.
Extracción de ADN animal:

Al realizar la extracción de ADN de tejido animal si se obtuvieron los resultados esperados.

El ADN se encuentra al interior del núcleo celular junto con proteínas para formar la
cromatina, se homogenizo el tejido con el fin de romper las células para separar el núcleo y
la envoltura nuclear haciendo que este libere su contenido. Después de realizar esto se esperó
un momento detalladamente y se pudo ver que comenzó a aparecer el ADN en forma de
arrugas blancas. Y poco a poco se obtuvieron hebras blancas las cuales corresponden a miles
de fibras agrupadas de ADN, así como se observa en (fig. 2)

Fig. 2: muestra de extracción de tejido animal

donde se evidencia:
(A) hebras blancas correspondientes a fibras
agrupadas de ADN
Discusión de resultados

El DNA se encuentra en el interior del núcleo de las células eucariotas rodeado de proteínas
(histonas) que lo mantienen unido y compactado. Para poder aislarlo y observarlo se deben
deshacer la membrana plasmática y la envoltura nuclear y también se precisa la
desnaturalización de las proteínas. Las membranas de las células están formadas por dos
capas de lípidos con proteínas transmembrana a través de estas; por otra parte, la trituración
Incrementar el área superficial de la muestra, ayuda a hacer la superficie de la membrana más
fácil de disolver y también permite una absorción más efectiva del calor y de las soluciones
que se añadirán. El detergente ayuda a romper la bicapa de fosfolípidos de las membranas
plasmáticas y la envoltura nuclear. Los lípidos de la membrana se descomponen debido al
detergente que deshace las uniones que mantienen la membrana junta. Cuando el detergente
se pone en contacto con los lípidos éstos se separan de la membrana rompiéndola. La
estructura de los lípidos es similar a la del detergente y eso hace que se combinen, formando
una burbuja de detergente y lípidos (Martín, S.F)

El Alcohol congelado, el DNA es una molécula polar, pero la reacción con el etanol a muy
baja temperatura hace que se vuelva apolar e insoluble en el etanol formándose un precipitado
justo entre la capa con etanol líquido y la capa con el extracto. El DNA es el único
componente de la solución que no es soluble en el etanol, y se hace visible porque las
diferentes cadenas se van aglutinando entre sí al precipitar debido a la acción de fuerzas
físicas. El alcohol es menos denso que el agua del extracto y por eso flota sobre la capa del
extracto; Sal en la solución de extracción, La molécula de DNA es soluble en agua y por
tanto invisible, pero si se pone en contacto DNA que haya estado en un medio salado y
alcohol frío el DNA se vuelve insoluble y precipita. Por lo tanto, el agua salada ayuda a la
precipitación en el alcohol. La sal también ayuda a separar el DNA de las histonas; la
Filtración permite separar los restos de los tejidos del material vegetativo y de las células que
han roto en los pasos anteriores. Ese material quedará retenido en el colador (los restos más
grandes) o en el filtro (restos más pequeños). El líquido filtrado que conseguimos es el que
contiene el DNA libre de la membrana nuclear (Martín, S.F)
Anexos
CUESTIONARIO

1) ¿En qué se diferencia el ácido nucleico ADN del ARN?

RTA: se diferencian por el azúcar (Pentosa) que llevan: desoxirribosa y ribosa,

respectivamente. Además, se diferencian por las bases nitrogenadas que contienen, Adenina,
Guanina, Citosina y Timina, en el ADN; y Adenina, Guanina, Citosina y Uracilo en el ARN.
Una última diferencia está en la estructura de las cadenas, en el ADN será una cadena doble
y en el ARN es una cadena sencilla (Burriel)

2) Argumente con que finalidad se puede realizar la extracción de ADN en un

laboratorio.

RTA: La extracción de ADN se puede realizar para tener éxito en la obtención de datos
genéticos, es el primer paso en la lista de técnicas moleculares que nos llevarán a comprender
mejor y conservar la diversidad biológica a partir del conocimiento de genes y genomas que
anteriormente era inaccesible para la ecología y la evolución (Velazquez, et.al).

3) Establezca que función cumplen cada uno de los elementos utilizados para
realizar la extracción de ADN.

RTA:

. Sal: La molécula de DNA es soluble en agua y por tanto invisible, pero si se pone en
contacto DNA que haya estado en un medio salado y alcohol frío el DNA se vuelve insoluble
y precipita. Por lo tanto, el agua salada ayuda a la precipitación en el alcohol. La sal también
ayuda a separar el DNA de las histonas (Martinez).

. Etanol: El DNA es una molécula polar, pero la reacción con el etanol a muy baja
temperatura hace que se vuelva apolar e insoluble en el etanol formándose un precipitado
justo entre la capa con etanol líquido y la capa con el extracto. El DNA es el único
componente de la solución que no es soluble en el etanol, y se hace visible porque las
diferentes cadenas se van aglutinando entre sí al precipitar debido a la acción de fuerzas
físicas. El alcohol es menos denso que el agua del extracto y por eso flota sobre la capa del
extracto (Martinez).
. Detergente: Las membranas de las células están formadas por dos capas de lípidos con
proteínas transmembrana a través de estas. El detergente ayuda a romper la bicapa de
fosfolípidos de las membranas plasmáticas y la envoltura nuclear (Imagen 1). Los lípidos de
la membrana se descomponen debido al detergente que deshace las uniones que mantienen
la membrana junta. Cuando el detergente se pone en contacto con los lípidos éstos se separan
de la membrana rompiéndola. La estructura de los lípidos es similar a la del detergente y eso
hace que se combinen, formando una burbuja de detergente y lípidos (Martinez).

. Gasa: se la usa para filtrar, es decir permite separar los restos de los tejidos de los agentes
desnaturantes y de las células que hemos roto en los pasos anteriores. Ese material no nos
interesa y quedará retenido en la gasa (los restos más grandes) o en el filtro (restos más
pequeños). El líquido filtrado que conseguimos es el que contiene el DNA libre de la
membrana nuclear (Martinez).

. Hígado de pollo y espinaca: agentes desnaturantes para extraer ADN de diferentes tipos
celulares y tejidos (Puerta, et.al).

Bibliografía
Alejos, L. P. (S.F). Extracción y purificacion de ADN.

Burriel, V. (s.f.). Estructura y propiedades de los acidos nucleicos. Quimica Aplicada a la Ingenieria
Biomedica.

Concepcion Puerta, c. U. (s.f.). Practica de biologia molecular. Pontificia Universidad Javeriana.

Martín, L. M. (S.F). extraccion de DNA. Extraccion y Purificacion de ADN., 1-26.

Martinez, M. L. (s.f.). Extraccion de DNA. 8, 10.

Mogrovejo, Y. (S.F). Informe numero 10: Extraccion de ADN. informe numero 10: Extraccion de
ADN, 7.

Moreno, D. C. (2015). Extraccion de ADN. Universidad Francisco Jose de Caldas. Facultad de

Ciencias y Educacion, Licenciatura en Biologia. Obtenido de Extraccion de ADN.