GUIA DE PRÁCTICAS DE

TOXICOLOGÍA Y QUÍMICA LEGAL

MANUAL DE LABORATORIO

LIMA - PERÚ

2019

Q.F. Mag. Enrique MONTANCHEZ

Mercado

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 INDICE

INTRODUCCIÓN

1. Recepción de la muestra para el examen toxicológico

2. Extracción de venenos fijos
3. Determinación de sustancias volátiles y gaseosas
4. Análisis toxicológico de Cannabinoides en orina
5. Determinación de Fenotiacinas en orina
6. Determinación de Barbitúricos en orina
7. Análisis toxicológico de la Metilbenzoílecgonina
8. Análisis toxicológico de Benzodiazepinas en orina
9. Análisis toxicológico en Opiáceos
10. Análisis toxicológico en insecticidas órgano fosforado y

carbámicos
11. Dosaje etílico – Método cuantitativo en el aliento
12. Dosaje etílico – Método de microdifusión de la cámara de

Conway
13. Determinación de compuestos nitrados
14. Determinación de sustancias corrosivas
15. Análisis toxicológico en compuestos halogenados en muestras

biológicas
16. Determinación de venenos metálicos
17. Manchas sanguíneas – Reacción de Adler
18. Manchas sanguíneas – Reacción de Teichmann
19. Determinación del oxígeno disuelto – Demanda bioquímica de

oxígeno.
20. Bibliografía

INTRODUCCION

Hoy en día el mundo contemporáneo utiliza diversas sustancias químicas para

la satisfacción de sus necesidades. Por ejemplo, en la preparación de sus
alimentos utiliza los aditivos alimentarios.

Para la eliminación de los insectos nocivos de los cultivos, se hace uso de los
insecticidas.

Todas estas sustancias si bien es cierto de una parte cumplen un papel

benéfico, de otra ocasionan perjuicios. Tenemos el caso del DDT que siendo
utilizado como medio para combatir la Malaria, ocasiona a su vez efectos
nocivos en el medio ambiente de una magnitud mucho mayor; por lo que es

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importante el conocimiento de las intoxicaciones a fin de utilizar el antídoto
necesario para conseguir la salud.

En el presente MANUAL DE TOXICOLOGÍA Y QUÍMICA LEGAL, el objetivo

ha surgido como una necesidad de que los estudiantes y toda aquella persona
interesada, posea una herramienta para la realización de las experiencias de
laboratorio y sean aplicadas al área clínica, al área forense a fin de contribuir al
tratamiento de una enfermedad, o al esclarecimiento de un hecho delictuoso
ante un cuadro de intoxicación.

Se detalla experiencias de Laboratorio tanto en la investigación de sustancias

volátiles, drogas, venenos metálicos, dosaje etílico y otras más para una mejor
comprensión.

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RECEPCIÓN DE LA MUESTRA PARA EL EXAMEN TOXICOLÓGICO

GENERALIDADES

El toxicológico al recepcionar una muestra para el examen toxicológico tendrá

especial cuidado en el análisis químico del contenido y del envase que lo
contiene.
Del resultado correcto del análisis químico efectuado en la muestra así como
de las características del envase permitirá obtener el resultado exacto en la
emisión del Dictamen pericial o del protocolo de análisis.

REQUISITOS QUE SE DEBEN TOMAR EN CUENTA AL RECEPCIONAR LA

MUESTRA:

I. ENVASE:

1) Comprobar su integridad, indicando las características necesarias.

2) Comprobar los cierres o seguridad del envase (papel, tela, hilos, etc.),
peso, rotulado.
3) Comprobar la correspondencia con el contenido.
4) Anota en un registro el número, cantidad y estado de las muestras.

II. CONTENIDOS

El contenido se dividirá en dos grandes partes, la primera se utilizará como

contra-muestra y la segunda para el análisis químico.

La segunda parte se subdividirá a su vez en seis (06) porciones:

1) Compuestos gaseosos y volátiles

2) Compuestos metálicos
3) Venenos fijos
4) Compuestos inorgánicos
5) Contraprueba del perito
6) Órganos separados para la determinación cuantitativa

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 PRACTICA Nº 1

EXTRACCION DE VENENOS FIJOS

1.1 MARCO TEORICO

En los análisis toxicológicos son muchas las sustancias que pueden ser
identificadas por lo que se hace necesario la participación de métodos que
permitan determinar la presencia de sustancias no volátiles como
alcaloides, barbitúricos, pirazolonas, etc., no sólo para su identificación sino
también para su cuantificación.
La presente experiencia se basa en la solubilidad del principio activo así
como de su pH, por se utiliza una marcha analítica para separar los
xenobióticos acidicos y también los de carácter básico.

1.2 COMPETENCIAS

Esta experiencia permitirá a los estudiantes conocer el tratamiento químico

para extraer el tóxico que podría encontrase en una muestra biológica
como la sangre, orina etc. Un vez extraído se procederá a su identificación,
a fin de determinar si se trata de una sustancia toxica.

1.3 MATERIALES Y REACTIVOS

1) Vaso de 250 ml. 7) Aro

2) Trípode 8) Soporte Universal
3) Rejilla de asbesto. 9) Pera de bromo
4) Mechero de Bunsen. 10) Viales rotulados.
5) Baño María. 11) Bagueta.
6) Embudo.

REACTIVOS
1) Papel de pH. 6) Sulfato de amonio.
2) Papel de filtro. 7) H2SO4 (20 %).
3) Éter etílico. 8) Amoniaco conc.
4) Cloruro de metileno. 9) Agua destilada.
5) Sol. Saturada de 10) NaOH (1.8%)
Bicarbonato de sodio

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1.4 PROCEDIMIENTO

1) Tomar el pH de la muestra.
2) Fraccionar la muestra biológica y colocarla en el vaso.
3) Adicionar agua destilada y calentar hasta cerca del punto de ebullición.
4) Agregar sulfato de amonio, seguir calentando y agregar gota a gota
ácido sulfúrico.
5) Filtrar.
6) Llevar a pH de 3 a 4 si fuera necesario con el H 2SO4, y trasvasar a una
pera de bromo.
7) Extraer con éter etílico (10 ml).
8) A la fracción acuosa adicionar gota a gota amoniaco hasta pH 8 a 9.
9) Extraer con cloroformo (05 ml), y a su fase acuosa, desechar
10) Concentrar el extracto clorofórmico al baño maría, a este extracto se le
denomina: "fracción básica"
11) A la fase etérea, adicionar gota a gota solución de bicarbonato de
sodio, obteniéndose dos nuevas fases, una acuosa constituyendo la
fracción ácida fuerte (A), y una nueva fase etérea.
12) A esta última fase extraer con solución de NaOH (1.8%), obteniéndose
una fase acuosa, que constituye la fracción ácida débil (a) y una fase
etérea, que constituye la fracción neutra (N).
En todas las fracciones indicadas, están presentes los diversos tóxicos
orgánicos.

1.5 RESULTADOS

1) Indique las sustancias extraídas a pH ácido.

2) Indique las sustancias extraídas a pH alcalino.
3) Indique las sustancias extraídas a pH neutro

1.6 CUESTIONARIO

1) Fundamente el proceso de extracción realizado.

2) Escriba el procedimiento de cada método de extracción, para tóxicos

gaseoso, volátil, inorgánico, orgánico.

3) Escriba una marcha analítica que involucre los xenobióticos pH acido,

otra marcha analítica neutro y otra a pH básico.

PRACTICA Nº 2

DETERMINACIDN DE SUSTANCIAS VOLATILES Y GASEOSAS.

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II.1 MARCO TEORICO

En una intoxicación as posible que la causa sea por haber consumido o en

estar en contacto con sustancias volátiles y de naturaleza gaseosa para lo
cual existen diversas técnicas analíticas que permiten determinar su
presencia en el organismo humano.
La técnica que se utiliza en esta práctica se basa en el método de Reinsch
es decir que xenobioticos reaccionara con el compuesto volátil de acuerdo
a su estructura química.

II.2 COMPETENCIAS

Esta técnica analítica se utiliza para identificar la presencia de sustancias

gaseosas y volátiles, de mayor incidencia a fin de demostrar un cuadro de
intoxicación.

II.3 MATERIALES

1) Frasco de vidrio de color ámbar de 100 ml de capacidad con tapa

esmerilada
2) Trípode y rejilla de asbesto.
3) Placa Petri
4) Mechero bunsen.
5) Lámina de vidrio de 5 x 20 cm.
6) Frasco lavador (pisceta).
7) Muestra (fragmento de vísceras).
8) Pinza metálica.

REACTIVOS.
1) Papel de AgNO3 (10%)
2) Papel de Acetato de Pb (10%)
3) Papel de PdCl2 (5%)
4) Papel de Nessler.
5) Papel Picrosódico.
6) Papel de pH.
7) Papel de filtro (tiras).
8) Solución de Ácido Tartárico.
II.4 PROCEDIMIENTO

1) Tomar el pH de la muestra.
2) Preparar los papeles reactivos, humedeciendo el papel reactivo con
agua destilada, y colocados sobre lamina de vidrio.
3) Colocar la muestra en el frasco de vidrio y agregar solución de ácido
tartárico hasta obtener reacción ácida.

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 4) Colocar en la boca del fiasco, los papeles reactivos y tapar de tal forma
que los papeles queden suspendidos.
5) Colocar el frasco al baño maría, calentando a 40°C por
aproximadamente 5 minutos.
6) Anotar la variación del color de los papeles, luego de algunos minutos.

II.5 RESULTADOS

1) Indicar el pH de la muestra.
2) Escriba las reacciones químicas de la experiencia anterior.

II.6 CUESTIONARIO

1) Escriba el procedimiento de preparaci6n de cada reactive, utilizado en la

práctica.

2) Escriba otro procedimiento de identificación para las sustancias volátiles

y gaseosas.

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 PRACTICA Nº 3

ANALISIS TOXICOLOGICO DE CANNABINOIDES EN ORINA

3.1 MARCO TEORICO

Los Cannabinoides son los principios activos de la especie vegetal cannabis

sativa cuya estructura química es de naturaleza terpenica.

3.2 COMPETENCIAS.

En el examen toxicológico de una persona dependiendo del consumo y del

análisis toxicológico permitirá determinar la presencia de estas sustancias
en las muestras biológicas sea sangre orina u otros tejidos.
Para ello se deberá separar el principio activo de los otros componentes
biológicos para recién identificar estos Cannabinoides.

3.3 MATERIALES

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1) Vaso de 250 ml. 8) Capilares
2) Pera de bromo 9) Láminas de Silicagel
3) Cámara de solventes 10) Pulverizador
4) Probeta de 25 ml 11) Viales
5) Gradilla 12) Baño María
6) Tubos de ensayo 13) Lámina de vidrio
7) Pipeta de 5 ml 14) Cocinilla.

REACTIVOS
1) HCI al 10% 7) Sol. de MgNO2 (10%)
2) Sulfanilato Na 8) HCI concentrado
3) Benceno-Hexano (1:1) 9) Muestra: orina.
4) Éter etílico 10) Papel de pH.
5) KOH [10N] 11) Bencidina
6) St. Cannabinoide 12) Fast-blue

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3.4 PROCEDIMIENTO

1) Extracción previa hidrólisis:

En un vaso colocar 15 ml de orina y agregar 3 ml KOH [10N] y calentar por

20 minutos a 50°C con agitación ocasional. Acidificar con solución de HCI
(10%) y extraer con 05 ml de éter etílico.

2) Identificación por cromatografía de capa fina :

a) Fase estacionaria: papel de filtro.

b) Fase móvil: Benceno-hexano (1:1)
c) Revelador: colorante azoico.

Preparación del revelador:

Disolver 50 mg de sulfanilato de sodio, agregar 20 ml de solución NaNO 2
(10%) en bario de hielo, y 1 ml de HCI concentrado.

Procedimiento:
En la lámina, sembrar el standard de Cannabinoide, y el extracto etéreo.
Colocar la lámina en la cámara, y retirarla al llegar al frente de solvente.
Evaporar y secar. Pulverizar con el revelador y secar la lámina.
Medir el Rf del standard y la sustancia correspondiente del extracto.

3.5 RESULTADOS

1. Indique el Rf del Cannabinoide st. Y de la muestra

2. Identifique el Cannabinoide.

3.6 CUESTIONARIO

1. Escriba las reacciones químicas en la preparación del revelador azoico.

2. Escriba la reacción química en el proceso del revelado.
3. Escriba otras técnicas de revelado.
4. Escriba las fórmulas químicas de los otros constituyentes de la especie
de Cannabis (diferentes al THC, CBD, CBN).

PRACTICA Nº 4

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 ANALISIS TOXICOLOGICO.-
DETERMINACIDN DE LAS FENOTIACINAS EN ORINA.

4.1. MARCO TEORICO

Los fármacos fenotiazínicos fundamentalmente como tranquilizantes

mayores y que son indicados en el tratamiento de enfermedades
nerviosas.
Se analizará la muestra biológica, orina o sangre para lo cual se procede
a la extracción líquido y luego de separar se concentra y estar apto para
su identificación por cromatografía de capa fina.

4.2. COMPETENCIAS

Al realizar el examen toxicológico se deberá separar y luego identificar

estas sustancias en las muestras de orina y en sangre con la finalidad de
conocer el estado de toxicidad de una persona cuando ha consumido
estos fármacos.

4.3. MATERIALES

1) Vaso de 250 ml 7) Papal de filtro

2) Bagueta (Fase estacionaria)
3) Pera de bromo 8) Pulverizador.
4) Frasco de vidrio con tapa 9) Baño María.
5) Probeta de 25 ml 10) Mechero.
6) Capilares. 11) Lámpara U.V.

REACTIVOS
1) HCI (10%) 7) Estándares
2) Papel pH cromático. - Clorpromacina.-
3) Éter etílico. Largactil en amp.
4) Silicagel (TLC) - Levopromacina.-
5) CHCI3: EtOH Sinogan en amp.
(70:30) - Tioproperacina.-
6) Reactivo FPN Magepfil en amp.

(FeCI3, HCIO4, HNO3) 8) Amoniaco.

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4.4. PROCEDIMIENTO

EXTRACCION:

En un vaso agregar 20 ml de orina y ajustar a pH alcalino con amoniaco

a pH de 8 a 9.
Colocar en la pera de bromo y extraer con 05 ml de éter etílico,
separando la fase etérea.
Concentrar el extracto al vacío o en atmósfera de nitrógeno.

IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA DE CAPA FINA.-

a) Fase estacionaria : Silicagel "G".
b) Fase móvil CHCI3 Etanol (7:3) o
CHCl3 Metanol (7:3).
c) Revelador de color : Reactivo FPN

d) Procedimiento.-

En la lámina sembrar el Standard respectivo y el extracto etéreo. Colocar

la lámina en la cámara.
Retirar la lámina al llegar al frente de solvente y evaporar dicho solvente
(fase móvil).
Pulverizar con el revelador FPN y secar la lámina.
Medir el Rf del Standard y del compuesto correspondiente.

4.5. RESULTADOS

1) Indique el color observado en el proceso de revelado.

2) Indique el Rf del Standard y del metabolito.

4.6. CUESTIONARIO

1) Escriba la reacción química de este proceso.

2) Escriba otras técnicas de revelado, así como la técnica por HPLC.
3) Escriba la reacción química con una pirazolona.
4) Dar 04 ejemplos de Especialidades farmacéuticas con un sólo
principio activo y 04 con Especialidades asociadas.

PRACTICA Nº 5

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 ANALISIS TOXICOLOGICO DETERMINACIÓN DE
BARBITÚRICOS EN ORINA.

5.1 MARCO TEORICO

Los barbitúricos fármacos que actúan como sedantes del S.N.C.

Sus efectos en el organismo pueden ir desde la sedación hasta la
anestesia dependiendo de la dosis y del tipo de barbitúrico.

5.2. COMPETENCIAS

Se identificará el barbitúrico en una muestra biológica, orina o sangre

iniciando desde la extracción liquido - líquido para luego separar el principio
activo y concentrar. Seguidamente se procede a la identificación por
cromatografía de capa fina.

5.3. MATERIALES

1) Vaso de 250 ml 9) Mortero

2) Bagueta 10) Viales
3) Pera de bromo 11) Pulverizador
4) Frasco de vidrio con tapa 12) Baño María
5) Probeta de 25 ml 13) Mechero
6) Tubos de ensayo 14) Pinzar, aro.
7) Gradilla 15) Soporte universal
8) Capilares

REACTIVOS
1) HCl (10%) 6) Estándares:
2) Acetona-Benceno (1:1) - Fenobarbital
3) Benzina de petróleo - Pentobarbital
4) Silicagel G - Tiopental
5) Reactivo de Zwicker 7) Amoniaco

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5.4 PROCEDIMIENTO

EXTRACCION:

En un vaso adicionar 40 ml de orina y acidificar con una solución de HCI

(10%) a pH 3. Trasvasar a una pera de bromo y extraer con 05 ml de éter
etílico. Separar la capa etérea. Y concentrar casi a sequedad.

IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA DE CAPA FINA

a) Fase estacionaria : Silicagel G

b) Fase móvil : Acetona - Benceno (1:1) o
CHCI3 - acetona (9:1)
c) Revelador : Reactivo de Zwicker

METODO OPERATORIO.-

Sembrar en la lámina el standard respectivo y la muestra (extracto etéreo).

Colocar la lámina en la cámara. Retirar lamina al llegar al frente de solvente
y evaporar dicho solvente. Pulverizar con el reactivo de Zwicker y secar la
lámina. Se puede someter a vapores de amoniaco para visualizar mejor las
manchas.
Medir el Rf del standard y del compuesto correspondiente (muestra).

5.5. RESULTADOS

1) Que significa el color observado al revelarse la lámina ?

2) Indique el Rf del standard y del metabolito y/o sustancia inalterada.

5.6. CUESTIONARIO

1) Indique que otros reveladores se pueden utilizar en este proceso

cromatográfico.
2) Escriba el procedimiento y la reacción de Parri.

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 PRACTICA Nº 6

ANALISIS TOXICOLOGICO DE LA METILBENZOILECGONINA

6.1. MARCO TEORICO

La cocaína o metilbenzoílecgonina es uno de los alcaloides de la hoja de

la coca que se detecta al consumir las hojas de la coca o cuando se
consume por otras vías como por la vía inhalatoria, al fumar o por vía
endovenosa.

Se detecta principalmente como metabolito a metilecgonina éster, la

benzoilecgonina y en menor cantidad la ecgonina, la norcocaína entre
otros.

Para identificar la cocaína inalterada o sus metabolitos se deberá aislar

estas sustancias en relación a los otros componentes biológicos (orina,
sangre) entre otros.

6.2. COMPETENCIAS

Al realizar el examen toxicológico se deberá separar y luego identificar

estas sustancias en las muestras de orina y en sangre con la finalidad de
conocer el estado de toxicidad de una persona cuando ha consumido la
cocaína.

6.3. MATERIALES

1) Vaso de 250 ml 8) Pulverizador

2) Bagueta 9) Baño María
3) Pera de bromo 10) Soporte Universal
4) Cámara cromatográfica. 11) Pinza, aro.
5) Probeta de 25 ml 12) Mechero
6) Capilares 13) Viales.
7) Láminas para TLC

REACTIVOS
1) Amoniaco. 5) Papel pH cromático
2) Cloroformo 6) R. de Draggendorff
3) Silicagel G 7) Estándares:
4) Metanol: NH3 (100:1.5) - Cocaina

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 - Benzoilecgonina
6.4. PROCEDIMIENTO
6.4.1. Extracción líquida-líquida

En un vaso adicionar 20 ml de orina y ajustar a pH 8 a 9 con amoníaco.

Colocar en una pera de bromo y extraer 2 veces en igual cantidad de
cloroformo (5 ml c/vez). Juntar los extractos y evaporar el solvente al
vacío o en atmósfera de nitrógeno.

6.4.2. Identificación por Cromatografía de Capa fina

a) Fase estacionaria: Silicagel G

b) Fase móvil : Metanol NH3 (100:15)
c) Revelador : Reactivo de Draggendorff

d) Método Operatorio.-

Sembrar en la lámina cromatográfica los standards y el extracto

redisuelto en metanol. Retirar la lámina al llegar al frente de solvente.
Las placas deben ser secadas antes del revelado a la temperatura del
medio ambiente o al aire caliente o en una estufa a 120°C por 10
minutos.
Luego del revelado con el R. de Draggendorff, enfriar y pulverizar con
una solución de H2SO4 aI 10%.

6.5. RESULTADOS

1) Indique el color de las manchas de la lámina cromatográfica en el

revelado.
2) Indique el Rf de las manchas de la lámina.

6.6. CUESTIONARIO

1) Escriba la reacción química de la cocaína entera y de sus metabolitos

con el reactivo de Draggendorff.
2) Escriba la reacción química con el reactivo de lodoplatinato.
3) Indique los constituyentes del reactivo de Draggendorf modificado por
Vágujfalvi y la modificación por Munier.
4) Indique las variedades de hoja de coca, sus constituyentes químicos
y las fórmulas químicas correspondiente.
PRACTICA Nº 7

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 ANALISIS TOXICOLOGICO DE BENZODIAZEPINAS EN ORINA

7.1 MARCO TEORICO

Las benzodiacepinas, fármacos tranquilizantes menores del sistema

nervioso central y que son indicados en los casos de ansiedad, Calman la
tensión y alivian el insomnio. A dosis algo elevadas provoca somnolencia y
aún ataxia. Por vía I.M. produce sueño sin llegar a la anestesia.
Es anticonvulsivante en especial el Diazepam.

Para investigar la presencia de las benzodiacepinas en esta sesión es con

la finalidad de conocer la posibilidad de intoxicación par abuso de estas
sustancias y cuyo resultado contribuye a determinar una situación de
índole Criminalístico, es decir especialmente en el caso de los
denominados "pepazos".

7.2 COMPETENCIAS

Al realizar el examen toxicológico se deberá separar y luego identificar

estas sustancias en las muestras de orina y en sangre con la finalidad de
conocer el estado de toxicidad de una persona cuando se ha consumido
un compuesto benzodiazepínico.

7.3 MATERIALES

1) Vaso de 250 ml 9) Viales

2) Bagueta 10) Capilares
3) Pera de bromo 11) Láminas de vidrio
4) Cámara fotográfica 12) Baño maría.
5) Pipeta de 5 ml 13) Mechero
6) Tubos de ensayo 14) Balon
7) Varilla de vidrio 15) Tapón de jebe
8) Gradilla 16) Probeta de 25 ml

REACTIVOS
1) HCl concentrado 5) Sulfanilato Na al 0.1%
2) HCI (6N) 6) Fuente de luz U.V.
3) NaNO2 (0.1%) 7) H2SO4 (2N)
4) Sulfato de amonio (0.5%) 8) Éter etílico
7.4 PROCEDIMIENTO

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 En un balón adicionar 20 ml de orina, luego 4 ml de HCl concentrado y
calentar par 30 minutos. Enfriar y alcalinizar. Luego extraer con 5 ml de
éter etílico. Concentrar.

Identificación por cromatografía de capa fina.-

a) Fase estacionaria : Silicagel G
b) Fase móvil : Metanol: NH3 (100: 1.5)
c) Reveladores : lodoplatinato
Luz U.V. a 254 nm.
Formación de un colorante azoico.

Sembrar el standard y la muestra problema, colocar en la cámara de

solventes, hasta llegar al frente de solvente y retirar de la cámara.
Pulverizar con la solución de HCI (6N) y secar. Luego pulverizar con
NaNO2 y secar. Pulverizar con la solución de sulfato de amonio y secar,
luego pulverizar con la solución de sulfanilato de sodio, observándose la
coloración correspondiente según el tipo de benzodiazepina.

7.5. RESULTADOS

1) Indique el color observado en su placa cromatográfica.

2) Indique el Rf de la sustancia inalterada y del metabolito
3) Indique el Rf de la sustancia patrón utilizado

7.6. CUESTIONARIO

1) Escriba la reacción química de acuerdo al método.

2) Indicar otros métodos operatorios de examen toxicológico de una
benzodiazepina.
3) Escriba una técnica por Cromatografía de gas para compuestos
benzodiacepinicos.
4) Reacción química de las benzodiacepinas con el lodoplatinato
acidificado.
5) Escriba el nombre de diversas especialidades farmacéuticas que
presentan un solo principio activo, y de otras cuando estén asociadas.

PRACTICA Nº 8

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 ANALISIS TOXICOLOGICO EN OPIACEOS

8.1. MARCO TEORICO

Aislar la sustancia inalterada y los metabolitos de la muestra de orina a

fin de identificar las sustancias tóxicas que pudiera haber sido
administrados a una persona.

8.2. COMPETENCIAS

Al realizar el examen toxicológico se deberá separar y luego identificar

estas sustancias en las muestras de orina y en sangre con la finalidad de
conocer el estado de toxicidad de una persona cuando se ha consumido
un compuesto opiáceo.

8.3. MATERIALES

1) Vaso de 250 ml 7) Gradilla

2) Bagueta 8) Capilares
3) Pera de bromo 9) Láminas de vidrio
4) Cámara cromatográfica 10) Baño María
5) Probeta de 25 ml 11) Mechero
6) Tubos de ensayo

REACTIVOS.-
1) HCI concentrado 6) Silicagel G
2) Papel pH cromático 7) St. Morfina
3) Amoníaco 8) St. Codeína
8. 4) CHCl3-isopropanol 9) Codipront (cápsulas)
9. (9:1)
10. 5) Acetona, etanol, NH 3
(22: 22:3)

8.4. PROCEDIMIENTO

Extracción:

En un vaso agregar 20 ml de arma y adicionar 1 ml de HCI concentrado

y calentar al Baño María por aproximadamente una hora.
Ajustar a pH 8 a 9 con amoniaco y extraer con 05 ml del sistema de
extracción (CHCI3-isopropanol).

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 Separar la capa orgánica y concentrar casi a sequedad en ambiente de
nitrógeno o al vacío.
Redisolver el residuo en metanol (0.1 ml).

Identificación por Cromatografía de capa fina

a) Fase estacionaria : Silicagel G

b) Fase móvil : Tolueno: Acetona: Etanol: NH3
22ml 22ml 03 ml 01ml
c) Revelador : Reactivo de Draggendorf

d) Método Operatorio:

Sembrar en la lámina el St. respectivo y el extracto de la muestra.

Colocar la lámina en la cámara cromatográfica. Retirarla al llegar al
frente de solvente y evaporar. Pulverizar con el revelador y secar a
lámina.
Medir el Rf del St. y de la mancha correspondiente del extracto.

8.5. RESULTADOS

1) Indicar el color observado.

2) Indique el Rf del standard y de sus metabolitos.

8.6. CUESTIONARIO

1) Escriba la reacción química en el revelado.

2) Indicar que otros reveladores se utilizan.
3) Reacción química de la morfina con el reactivo de Marquis.
4) Escriba 04 ejemplos de Especialidades farmacéuticas conteniendo
alcaloides opiáceos sintéticos, y sus fórmulas químicas
correspondientes.

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 PRACTICA Nº 9

ANALISIS TOXICOLOGICO EN INSECTICIDAS ORGANO

FOSFORADOS Y CARBAMICOS.

9.1. MARCO TEORICO

Aislar la sustancia inalterada y/o metabolitos para identificarlos a fin de

conocer el tipo de insecticida fosforado, y carbámico que haya
ocasionado la intoxicación.

9.2. COMPETENCIAS

Al realizar el examen toxicológico se deberá separar y luego identificar

estas sustancias en las muestras de orina y en sangre con la finalidad de
conocer el estado de toxicidad de una persona cuando ha consumido un
plaguicida sea órgano fosforado como por ejemplo: el paration, tamaron,
DDVP etc o un plaguicida Carbámicos como el carbaryl, baygon, etc.

9.3. MATERIALES

1) Vaso de 250 ml 7) Gradilla

2) Bagueta. 8) Capilares
3) Pera de bromo 9) Cámara de vidrio
4) Cámara cromatográfica. 10) Baño María.
5) Probeta de 25 ml 11) Mechero.
6) Tubos de ensayo 12) Embudo.

REACTIVOS
1) H2SO4 (10%) 9) Sol. NaNO2 (10%)
2) Ac. Acético 10%/ MeOH, 10) St. Fosforado,
3) Papel pH cromático. 11) Black Flag
4) PdCl2 0.5% en HCL (10%) 12) St. Carbárnico Propoxur
5) N-Hexano 13) Sol. azoico.
6) Silicagel G 14) Ac. Sulfanilico
7) Éter etílico. 15) Na2CO3
8) NaOH (15%)

-1-
9.4 PROCEDIMIENTO

Extracción. -

En un vaso de 250 ml agregar tejido orgánico, 100 ml de agua y calentar

cerca del punto de ebullición. Adicionar sulfato de amonio, luego
adicionar solución de ácido sulfúrico gota a gota.

Una vez precipitada la proteína, filtrar. El filtrado pasar a una pera de

bromo y extraer con 05 ml de éter etílico. Concentrar la fase etérea hasta
casi a sequedad.

Identificación de Cromatografía de capa fina. -

a) Fase estacionaria : Silicagel G

b) Fase móvil : n-hexano.
c) Revelador : a) PdCl2 (0.5%) en HCI (10%).-
(Insecticida organofosforado)
b) Azoico a base de Sulfanilato
(Insecticida carbámico).

Método Operatorio.-

Sembrar en la lámina el St. fosforado y el extracto de la muestra.

Colocar la lámina en la cámara cromatográfica. Retirar la lámina al llegar
al frente de solvente y evaporar.
Realizar el mismo procedimiento para el insecticida carbámico.
Pulverizar con el revelador correspondiente y secar la lámina. En el caso
de los insecticida Propoxur y similares, se pulveriza con solución de
NaOH 15% y calentar. Luego pulverizar con solución de ácido acético en
metanol y secar. Luego pulverizar con solución del azoico del sulfanilato.
También se puede usar como revelador el Fast blue.

9.5. RESULTADOS

1) Indicar el color observado en las láminas.

2) Indicar el Rf del Plaguicida standard y del metabolito

-1-
9.6. CUESTIONARIO

1) Escriba la reacción química en el revelado de los insecticidas

fosforado y carbámico.

2) Indicar que otros reveladores y fase móvil se utilizan.

3) Indique los constituyentes del producto comercial Campeón.

4) Dar ejemplos de productos comerciales de insecticidas fosforados,

de insecticidas carbámicos y sus fórmulas químicas
correspondientes.

-1-
 PRACTICA Nº 10

DOSAJE ETILICO.
METODO CUALITATIVO EN EL ALIENTO.

10.1. MARCO TEORICO

Determinar la presencia de alcohol etílico y en base al resultado

obtenido, se realizará el método cuantitativo para establecer el estado de
ecuanimidad de una persona.

10.2. COMPETENCIAS

Al realizar el examen toxicológico se deberá separar y luego identificar

estas sustancias en las muestras de orina y en sangre con la finalidad de
conocer el estado de toxicidad de una persona cuando ha consumido
una bebida alcohólica como por ejemplo una cerveza, un vino, whisky
etc.

10.3. MATERIALES

1) Pipeta de 2 ml 5) Varilla hueca de vidrio

2) Vaso de 250 ml 6) Frasco gotero
3) Tubo de ensayo 7) Pisceta
4) Gradilla

REACTIVOS

1) Solución de KMnO4 (0.316%)

2) Solución de H2SO4 (50 % en vol.)
3) Agua destilada.

10.4. PROCEDIMIENTO

En un tubo de ensayo agregar 2 ml de la solución de H 2SO4. Luego

añadir III gotas de la solución de KMnO4

Luego con la varilla de vidrio soplar (burbujeo) por uno a dos minutos.

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10.5. RESULTADOS

1) A qué se debe el cambio de coloración en la prueba del aliento.

2) Indique la evidencia experimental de esta reacción química

10.6. CUESTIONARIO

1) Escriba a reacción química

2) Escriba otro procedimiento de un método cualitativo.

DOSAJE ETILICO

-1-
 ANALISIS CUANTITATIVO

METODO DE MICRODIFUSION DE CONWAY

1.1 MARCO TEORICO

Determinar la alcoholúrea a fin de establecer el estado de ecuanimidad de

una persona especialmente cuando está relacionada con algún incidente
que implica una situación legal.

1.2 COMPETENCIAS

Al realizar el examen toxicológico se deberá separar y luego identificar

estas sustancias en las muestras de orina y en sangre con la finalidad de
conocer el estado de toxicidad de una persona cuando ha consumido una
bebida alcohólica como por ejemplo una cerveza, un vino, whisky etc.

1.3 MATERIALES

1) Pipeta de 2 ml. 6) Fiola de 100 ml

2) Pipeta de 0.1 ml. 7) Pisceta
3) Banco María. 8) Papel tisú
4) Cámara de Conway 9) Espectrofotómetro
5) Vaso de 250 ml 10) Celdas de vidrio

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1.4 PROCEDIMIENTO

En la cavidad externa de la cámara de Conway agregar 1 ml de orina, y al

lado adicionar 1 ml de la solución saturada de K 2CO3. Luego en la cavidad
central agregar 2 ml de solución sulfocrómica.
Calentar al baño maría por 15 minutos y enfriar.
Extraer de la cavidad central en forma cuantitativa la mezcla sulfocrómica y
diluir con agua destilada para enrasar una fiola de 100 ml con agua
destilada.
Realizar una prueba en blanco utilizando el mismo procedimiento (sin
muestra).

Al espectrofotómetro colocar las condiciones a fin de realizar las lecturas en

la muestra y en el blanco a la longitud de onda de 450 nm.
En el gráfico: Las lecturas (Transmitancia o Absorbancia), correspondiente
a las diferentes concentraciones en la curva de calibración. Luego con la
lectura de la muestra, plotear para determinar su concentración.

METODO DE SHEFFTEL MODIFICADO

1.1. PROCEDIMIENTO

En un frasco de vidrio con tapa a rosca, agregar 02 ml de mezcla

sulfocrómica, y en el papel de filtro (adosado a la parte interna de la tapa
mediante un alfiler) agregar 0.1 ml de muestra biológica (sangre u orina).
Tapar herméticamente y calentar al baño maría par 10 minutos. Enfriar y
agregar 08 ml de agua destilada.

Realizar una prueba en blanco, utilizando el mismo procedimiento.

Para los cálculos realizar el método similar al anterior.

1.2. RESULTADOS

1) Indique a que grado de alcoholemia le corresponde cantidad de

alcohol analizado (alcoholúrea), para ambos métodos.

2) Con los datos obtenidos en su práctica (para cada método), elabore

su grafica correspondiente.

-1-
1.3. CUESTIONARIO

1) Con los mismos datos del resultado, deduzca la ecuación de la recta.

2) Escriba la reacción química de la experiencia

3) Escriba el procedimiento de otro método de dosaje etílico.

-1-
 PRACTICA Nº 11

DETERMINACION DE COMPUESTOS NITRADOS EN LA PALMA

Y DORSO DE LAS MANOS

11.1. MARCO TEORICO

Investigar la presencia de compuestos nitrados como los nitratos y

nitritos de la pólvora con la finalidad de demostrar la posibilidad de haber
realizado disparos con arma de fuego.

11.2. COMPETENCIAS

Al realizar el examen balístico el Perito es capaz de identificar en una

persona si disparó un arma de fuego, que inclusive se podría determinar
si el disparo fue ejecutado con la mano derecha, izquierda o en todo
caso ambos manos.

11.3. MATERIALES

1) Hisopo 6) Cocinilla
2) Placa de toque 7) Papel bond
3) Vaso de 300 ml 8) Tubos de ensayo
4) Frasco gotero 9) Rejilla
5) Trípode 10) Pinza.

REACTIVOS
1) HCI10% 6) R. de MaNO2 (1%)
2) R. de KNO3 (1%) 7) R. Sulfanilato de sodio
3) R. de α - naftol (1%) 8) R. de FeCI3
4) Parafina 9) R. de Sulfato de fenilhidrazina
5) NaOH 5%.

11.4. PROCEDIMIENTO

Para demostrar la presencia de nitritos, (posibilidad de haber disparado),

en un papel agregar la parafina y calentar suavemente.
Colocar el papel parafinado a la temperatura que pueda soportar el
cuerpo, en el dorso de la mano, luego adicionar en la zona que ha sido

-1-
 expuesta a la parafina, II gotas de reactivo de sulfanilato, luego II gotas
del reactivo HCI y finalmente III gotas del reactivo α-naftol,
observándose la coloración anaranjada.
Para demostrar si no hubiera disparado (ausencia de nitritos), en otro
papel parafinado, adicionar II gotas de sulfato de fenilhidrazina, luego Ill
gotas del reactivo FeCI3, observándose la coloración anaranjada.

Para confirmar la presencia de nitratos (positividad de la prueba)

mediante la adición de NaOH 5%, observándose un cambio de
coloración.

11.5. RESULTADOS

1) Indique el color obtenido en su experiencia y a quien corresponde

cada coloración.
2) Con los resultados obtenidos es posible determinar si hubo disparos
con arma de fuego? Fundamente.

11.6. CUESTIONARIO

1) Escriba la reacción química observada en la experiencia al utilizar el

reactivo que indica haber realizado un disparo.

2) Mediante una reacción química, interprete lo sucedido en ausencia

de nitritos.

3) Indique otro procedimiento para identificar nitratos y nitritos por

Espectrofotometría visible.

4) Escriba el método para identificar los elementos metálicos que

demuestran haber realizado un disparo mediante el método de
espectrofotometría de absorción atómica.

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 PRACTICA Nº 12

ANALISIS TOXICOLOGICO
DETERMINACION DE SUSTANCIAS CORROSIVAS

12.1. MARCO TEORICO

Identificar el tipo de sustancias corrosivas en muestras de tejidos

orgánicos ya sea procedente de sustancias acidas o alcanas.

12.2. COMPETENCIAS

Al realizar el examen toxicológico el Perito es capaz de demostrar si una

persona consumió algún tipo de corrosivo al analizar la muestra
biológica.

12.3. MATERIALES

1) Placa petri. 4) Pizeta.

2) Bagueta 5) Mortero.
3) Bisturí 6) Pinza metálica.

REACTIVOS
1) HNO3 5) Papel de pH.
2) HCl 6) Muestra: carne
3) NaOH 50% 7) Ac. fénico.
4) Agua destilada

12.4. PROCEDIMIENTO

En una placa petri colocar un pequeño fragmento de carne y adicionar II

a III gotas de NCI concentrado y observar el aspecto que adquiere el
tejido.
Realizar similar procedimiento con el HNO3 concentrado, con la solución
de NaOH (50%) y con el ácido fénico.

-1-
12.5 RESULTADOS

1) Indique a que se debe el cambio de aspecto o coloración en la

muestra de carne.
2) Indique el aspecto que tendría la carne si se utilizara otros corrosivos
como: Acido pícrico, amoniaco etc.

12.6. CUESTIONARIO

1) En el caso del color observado con el ácido nítrico, a qué se debe

dicho color? Fundamente.

2) En el caso del color observado con el ácido fénico, a qué se debe

dicho color? Fundamente.

3) Indicar la DL50 de los corrosivos utilizados en su práctica.

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 PRACTICA Nº 13

DETERMINACION DE COMPUESTOS HALOGENADOS EN

MUESTRAS BIOLOGICAS

13.1 MARCO TEORICO

Investigar la presencia de compuestos halogenados clorados como:

tricloroetano, tricloroetileno, cloroformo, tetracloruro de carbono, para
determinar una intoxicación.

13.2 COMPETENCIAS

Al realizar el examen toxicológico se deberá separar y luego identificar

estas sustancias en las muestras de orina y en sangre con la finalidad de
conocer el estado de toxicidad de una persona cuando ha consumido un
toxico de halogenado.

13.3 MATERIALES

1) Vaso de 250 ml 5) Gotero

2) Bagueta 6) Equipo de destilación.
3) Pera de bromo 7) Gradilla
4) Tubos de ensayo

REACTIVOS.-
1) NaOH [10%] 4) Tricloroetano
2) Piridina 5) CCI4
3) CHCI3 6) Hidrato de cloral

13.4 PROCEDIMIENTO

En el caso de contenido gástrico, sangre, se procede a separar los

compuestos mediante la destilación.
A 1 ml de orina o de destilado ajustar a pH alcalino con la solución de
NaOH. Adicionar 1 ml de piridina y calentar al baño maría por 2 minutos.
Un color rosado en la capa de la piridina indica la presencia de estas
sustancias.
Realizar una prueba en blanco.

-1-
 El blanco a pH 9, puede dar un falso positivo (rojizo).
13.5 RESULTADOS

1) Indique el color observado en la muestra.

2) Indique si la coloración es inmediata o se observa en un tiempo
mayor.

13.6 CUESTIONARIO

1) Escriba la reacción química indicada en el punto anterior

(cuestionario).

2) Indique otros métodos procedimentales en los análisis para

compuestos volátiles.

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 PRACTICA Nº 14

DETERMINACION DE VENENOS METALICOS

PRUEBA DE REINSCH.

14.1 MARCO TEORICO

Investigar la presencia de compuestos metálicos como el mercurio,

arsénico, antimonio, en una muestra biológica con la finalidad de
conocer la toxicidad de estas sustancias.

14.2 COMPETENCIAS

Al realizar el examen toxicológico se deberá separar y luego identificar

estas sustancias en las muestras biológicas con la finalidad de conocer
el estado de toxicidad de una persona cuando ha consumido de un
compuesto metálico como por ejemplo, cobre, arsénico, plomo etc.

14.3 MATERIALES

1) Placa petri 4) Pizeta

2) Pinza metálica 5) Vaso de 250 ml
3) Bisturí 6) Baño maría.

REACTIVOS
1) Alambre de cobre 5) Agua destilada
2) HNO3 (1:4) 6) Sal de Hg, As, Sb.
3) HCL (1:4) 7) Éter anhidro.
4) Alcohol etílico

14.4 PROCEDIMIENTO

Lavar la lámina de cobre con solución de HNO 3, luego con agua

destilada. Agregar la muestra en el vaso de vidrio y colocar la lámina de
cobre limpio. Adicionar 10 ml de HCI (1:4) y calentar al baño maría por
15 minutos.

-1-
 Retirar la lámina de cobre y lavar con agua destilada, luego con alcohol
etílico anhidro y secar.
Si hubiera Hg, el cobre toma un aspecto plateado, pero si hubiera As o
Sb, el alambre toma un color parduzco e incluso negruzco.

14.5 RESULTADOS

1) Indique el coloro aspecto observado en la experiencia.

2) Escriba la reacción química señalada en el punto anterior.

3) Indique otros métodos analíticos para la determinación de

compuestos metálicos.

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 PRACTICA Nº 15

HEMATOLOGIA FORENSE

15.1 MARCO TEORICO

Al analizar una mancha sanguínea se toma en cuenta el aspecto que

presentan éstas es decir si las manchas son recientes, antiguas así
como también considerar el soporte donde se encuentran tales
manchas.

Cuando la macha es reciente, presenta un color rojo vivo pero después

se van tornando oscuras debido a la acción del oxígeno del aire sobre la
hemoglobina transformándose en metahemoglobina y luego en
hematina.

Por consiguiente en el análisis de una macha sanguínea se realizan las

pruebas de orientación y de certeza.

15.2 COMPETENCIAS

Al realizar el examen hematológico el Perito es capaz de identificar si

una mancha rojiza es de sangre o de otra naturaleza para confirmar un
caso incriminado de sangre.

15.2.1 PRUEBA DE ORIENTACION

Reacción de Adler.-

Demostrar a presencia de una mancha sanguínea mediante un reactivo

a base de bencidina en media acético.

MATERIALES.

a) Placa de toque. d) Frasco gotero.

b) Bagueta e) Pizeta.
c) Lanceta

REACTIVOS

a) Bencidina solución saturada en medio acético (preparación reciente).

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 b) Agua oxigenada.
PROCEDIMIENTO

Macerar la mancha sanguínea en agua destilada.

En una placa de toque adicionar I gota del macerado, luego una gota del
reactivo de Adler y una gota de agua oxigenada, produciéndose una
coloración verdosa que se toma azulina si es positivo.

RESULTADOS

a. Escriba la reacción química de la experiencia.

b. Indique el procedimiento de otras dos técnicas analíticas de
identificación.

15.2.2 PRUEBAS DE CERTEZA

Reacción de Teichmann.-

Demostrar a presencia de una mancha sanguínea mediante un reactivo

a base de ácido acético.

MATERIALES

a) Lámina porta objeto

b) Lámina cubre objeto
c) Microscopio
d) Mechero de alcohol
e) Pizeta

REACTIVOS

a) Ácido acético concentrado.

b) Agua destilada

PROCEDIMIENTO

Macerar la mancha sanguínea con agua destilada. Colocar sobre la

lámina porta objeto y calentar suavemente, evitando la ebullición.
Repetir el procedimiento varias veces. Cubrir con la laminilla cubre
objeto y adicionar por capilaridad una gota de ácido acético entre el

-1-
 cubre y el porta objetos y calentar suavemente, evitando la ebullición.
Repetir este procedimiento varias veces hasta obtener un residuo.
Luego observar al microscopio los cristales en forma de prismas
alargado rómbico de color pardusco oscuro y translúcido.

RESULTADOS

a) Indique los colores observados en la prueba de Adler.

b) Interprete los cristales observados en la prueba cristalográfica de
Teischmann.

15.3 CUESTIONARIO

a) Escriba la reacción química de Adler.

b) Escriba el procedimiento de otras técnicas cristalográficas de

identificación de una mancha sanguínea.

c) Escriba la reacción química de Teischmann.

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BIBLIOGRAFIA

I. OBRAS DETEXTO

1) Buzzo A.
Toxicología. Editorial López y Etchegoyen. Bs. Aires.
1952.

2) Calabrese y Astolfi.
Toxicología. Editorial Kapeluz. Bs. Airess.1969

3) Dreisbach R.
Manual de Envenenamientos. Editorial El Manual Moderno. México.
1978.

4) Guatelli.
Manual de Prácticas de Química Toxicológica.
Editorial Universitaria M.A. Bs. Aires. 1974

5) Simonin.
Medicina Legal Judicial. Bs. Aires, 1962.

6) Gisbert Calabuig Juan

Medicina Legal y Toxicología
Editorial Masson S.A.

II. OBRAS DE CONSULTA

1) Clarke E.G.C.
Isolation and identification of drugs in Pharmaceuticals, body fluids
and post mortem material. The Pharm. Press. London. 1988.

2) Curry A. S.
Advance in Forensic and Clinical Toxicology.
C.R.C. Press U.S.A. 1974.

3) Levinson A.S.
Diagnóstico Clínico de Laboratorio. Ed. Librería El Ateneo Bs. Aires.
1972

-1-
 4) LOPEZ GOMEZ Leopoldo.
Técnica Médico Legal
Editorial Saber. Valencia. España.

III. REVISTAS

1) Analytical Chemistry.
2) Clinical Chemistry.
3) Forensic Sciences International.
4) Journal of Analytical Toxicology.
5) Journal of Chromatography.
6) Journal of Forensic Sciences

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