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Práctica N° 1 & 2
PREPARACION DE MEDIOS DE
CULTIVO & ANALISIS MICROBIANO
DEL AIRE
Beltrán J. Sebastián 117003905, Bermeo R. Yeison 117003906, Bernal G. Laura 117003907 &
Cuan M. Gabriela 117003913
RESUMEN
En la práctica se conocieron los principios generales de la preparación, técnicas de esterilización
de los materiales y los medios de cultivo, y se aplicaron las técnicas para realizar un análisis
microbiológico de aire en un área determinada. Los medios de cultivos sintéticos (agar nutritivo y
agar PDA) utilizados permiten que la especie que se quiera cultivar crezca dependiendo de su
grupo microbiano, su estado físico, su complejidad química y su aplicación. Estos medios de
cultivo deben tener unas características específicas básicas para satisfacer el crecimiento del
microorganismo a cultivar. Mediante la técnica del análisis microbiológico de aire se pudo verificar
los microorganismos presentes en diferentes ambientes como lo son: la sala de esterilización y
dentro y fuera del laboratorio.
Palabras clave: análisis microbiológico de aire, medios de cultivo, agar nutritivo, agar PDA.
ABSTRACT
In the practice there were known the general beginning of the preparation, technologies of
sterilization of the materials and the means of culture, and the technologies were applied to realize
a microbiological analysis of air in a certain area. The means of synthetic cultures (agar nourishing
and agar PDA) used allow that the species that wants to be cultivated should grow depending on
his microbial group, his physical condition, his chemical complexity and his application. These
means of culture must have a few specific basic characteristics to satisfy the growth of the
microorganism to cultivating. By means of the technology of the microbiological analysis of air it
was possible to check the present microorganisms in different environments like it they are: the
room of sterilization and inside and out of the laboratory.
Key words: microbiological analysis of air, means of culture, agar nourishing, agar PDA.
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TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO PEPTONAS. Son mezclas complejas de
compuestos orgánicos, nitrogenados y sales
Son aquellos que permiten el crecimiento de
minerales, que se obtienen por digestión
una gran variedad de microorganismos.
enzimática o química de proteínas animales o
MEDIOS DE ENRIQUECIMIENTO. Son vegetales (soja caseína carne, etc.). Las
aquellos que favorecen el crecimiento de u peptonas son muy ricas en pépticos y
determinado tipo de microorganismo sin aminoácidos, pero pueden ser deficientes en
llegar a inhibir totalmente el crecimiento de determinadas vitaminas y sales minerales.
los demás.
FLUIDOS CORPORALES. Con frecuencia
MEDIOS SELECTIVOS. Son aquellos que es necesario añadir a los medios de cultivo de
permiten el crecimiento de un tipo de algunos patógenos sustancias como sangre
microorganismos determinado, inhibiendo el completa, sangre desfibrilada, plasma o suero
desarrollo de los demás. sanguíneo, sobre todo para conseguir el
primer aislamiento a partir del hospedador.
MEDIOS DIFERENCIALES. Son aquellos presente en las células sanguíneas destruye el
en los que se pone de manifiesto propiedades peróxido de hidrógeno que algunas bacterias
que un determinado tipo de microorganismos que no poseen este enzima acumulan como
posee. producto del metabolismo del oxígeno.
CONSTITUYENES HABITUALES DE SISTEMAS AMORTIGUADORES. Para
LOS MEDIOS DE CULTIVO mantener el pH dentro del rango optimo del
A continuación, se da una idea general sobre crecimiento bacteriano a veces, es necesario
algunos de los constituyentes habituales de añadir algunos componentes al medio de
los medios de cultivo. cultivo. Debido a que la mayoría de las
bacterias son neutrófilas, se suelen emplear
AGAR. Se utiliza como agente gelificante sales del tipo de los fosfatos bisodicos ò
para dar solidez a los medios de cultivo. En el bipotásicos u otras sustancias como las
agar bacteriológico el componente dominante peptonas para prevenir la desviación del pH.
es un polisacárido que se obtiene de ciertas
algas marinas y que presenta la indudable INDICADORES DE PH. Con el objeto de
ventaja de que, a excepción de algunos poder detectar variaciones en el pH debido a
microorganismos marinos, no es utilizado fermentaciones u otros procesos, se hace
como nutriente. necesario a veces añadir indicadores acido-
base que nos lo indiquen.
EXTRACTOS. Su preparación consiste en
que ciertos órganos o tejidos animales o AGENTES REDUCTORES. Con el objetivo
vegetales (p.e. carne, hígado, cerebro, de crear en los medios de cultivo condiciones
semillas, etc.) son extraídos con agua y calor que permitan el desarrollo de los gérmenes
y posteriormente concentrados hasta la forma microaerofilos ò anaerobios se añaden estos
final de pasta o polvo. Estos preparados agentes reductores siendo, los más empleados
deshidratados son a menudo empleados en la la cisteina y el tioglicolato entre otros.
elaboración de los medios de cultivo. Los más AGENTES SELECTIVOS. La adición de
utilizados son el extracto de carne, de determinadas sustancias a un medio de
levadura y el de malta. cultivo puede convertirlo en selectivo. Así,
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Grupo laboratorio de Microbiología, Programa de Ingeniería Agroindustrial, Escuela de
ingeniería en ciencias agrícolas, Facultad de ciencias agropecuarias y recursos naturales,
Universidad de los Llanos. Vereda Barcelona. Villavicencio, Colombia.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
https://www.probiotek.com/productos/reacti
vos/medios-de-cultivo-reactivos/agar-de-
dextrosa-y-papa/
https://www.probiotek.com/productos/reacti
vos/medios-de-cultivo-reactivos/agar-
nutritivo/ http://www.nirco.com/web/pa--45-
95-351-/HigiPlate
https://www.ugr.es/~cjl/medios%20de%20c
ultivo.pdf
http://foodsafety.neogen.com/pdf/acumedia_
pi/7149_sp_pi.pdf
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Grupo laboratorio de Microbiología, Programa de Ingeniería Agroindustrial, Escuela de
ingeniería en ciencias agrícolas, Facultad de ciencias agropecuarias y recursos naturales,
Universidad de los Llanos. Vereda Barcelona. Villavicencio, Colombia.
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Apesadumbrado por el problema y sin saber medio de cultivo una vez esterilizado y
cómo solucionarlo, un día decidió compartir enfriado aproximadamente a 45ºC, 14 ml de
su pesar con su mujer, Angelina Fanny una solución estéril de ácido tartárico al 10%
Eilshemius, que rápidamente extrapoló la para obtener un pH aproximado de 3.5.
situación a los postres que ella elaboraba en Sembrar el medio de cultivo por estría en la
su cocina, ya que podía cocinar pasteles y superficie o adicionar la muestra para la
gelatinas sin que el resultado se derritiera técnica de vaciado en placa. Incubar hasta 7
con el calor. días a temperatura ambiente.
PREPARACION AGAR DE DEXTROSA Y
Para ello, la joven utilizaba agar, un material
PAPA: Rehidratar 39 g del medio en un litro
basado en algas que había sido utilizado por
de agua destilada. Reposar 10 a 15 minutos.
su familia desde muchos años atrás. Utilizarlo
Calentar agitando frecuentemente hasta el
no parecía nada descabellado, por lo que
punto de ebullición durante 1 minuto para
Walther decidió tomar una muestra del
disolverlo por completo. Esterilizar en
preciado ingrediente, para probar a sembrar
autoclave a 121ºC (15 lbs de presión) durante
sobre él las muestras que había recogido para
15 minutos. Enfriar aproximadamente a 45ºC.
sus investigaciones.
Vaciar de acuerdo con la técnica a seguir en
Y cuál fue su sorpresa al comprobar que, cajas de Petri estériles. Cuando se requiera el
efectivamente, el agar era un medio de medio inclinado en tubo, distribuirlo antes de
siembra magnífico, pues aportaba los esterilizar. Si se acidifica el medio, no
nutrientes necesarios, a la vez que se sobrecalentar y fundir solo una vez, para
mantenía estable, sin deteriorarse a causa de evitar la hidrólisis del agar.
las altas temperaturas o las enzimas
Agar nutritivo: El medio contiene extracto de
secretadas por las propias bacterias. Además,
carne, peptona y agar, siendo una
como resultado, podía esterilizarse sin
formulación suficiente para el desarrollo de
problemas, a la vez que ofrecía múltiples
los microorganismos. El extracto de carne
posibilidades para los cultivos de todo tipo de
proporciona al medio fuente de
bacterias, incluidas las de crecimiento lento.
carbohidratos, de nitrógeno y vitaminas. El
Hoy en día existen un sinfín de opciones empleo de este medio es de acuerdo con el
dentro del agar, pues se les añaden otros tipo de estudio por realizar.
recursos, como ciertos antibióticos PREPARACION: Rehidratar 23 g del medio
o colorantes selectivos, que permiten en un litro de agua destilada. Reposar 10 a 15
discernir si en el medio está creciendo un tipo minutos. Calentar agitando frecuentemente
concreto de bacterias. hasta el punto de ebullición durante 1 minuto
para disolverlo por completo. Esterilizar en
¿Cuál es la composición de los medios de autoclave a 121ºC (15 lbs de presión) durante
cultivo Agar PDA y Agar nutritivo? 15 minutos. Enfriar aproximadamente a 45ºC.
Agar PDA: Tiene la infusión de papa como Vaciar en cajas de Petri estériles. Conservar
fuente de almidones y la dextrosa son la base en refrigeración de 2 a 8ºC.
para el crecimiento de hongos y levaduras. El Identifique la función de cada componente
bajo pH (3.5) evita el crecimiento de las
bacterias. Cuando se va a usar para el Agar PDA: utilizado para el cultivo de
recuento de hongos y levaduras, agregar al hongos. Este producto está conforme a los
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Grupo laboratorio de Microbiología, Programa de Ingeniería Agroindustrial, Escuela de
ingeniería en ciencias agrícolas, Facultad de ciencias agropecuarias y recursos naturales,
Universidad de los Llanos. Vereda Barcelona. Villavicencio, Colombia.
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colonias Incubar a
visibles. Se usa 37°C
para análisis durante
cualitativo de 24-48 h y
microorganism realizar
os aéreos. recuento
expresad
o en UFC.