PAS - GLUCÓGENO

Está presente en la piel, el hígado, las glándulas paratiroides y músculo esquelético y cardíaco. La
tinción PAS se usa para demostrar membranas basales, y mucosustancias secretadas de los
epitelios de varios órganos. Una mancha de rutina para el hígado y los riñones.

PRINCIPIO: reacción histoquímica en la que el el ​ácido periódico oxida el enlace carbono a

carbono formando aldehídos que reaccionan al ácido fucsina-sulfuroso que forma el color
magenta.

REACTIVOS:

0.5% de ácido peryódico:

● Ácido peryódico 0.5 gm
● Agua destilada 100.0 ml

Reactivo de Lillie Cold Schiff:

● Fucsina básica 10.0 gm
● Metabisulfito de sodio 18.0 gm
● Agua destilada 1000 0 ml
● Ácido clorhídrico 10.0 ml.
Agitar la solución durante 2 horas, poner en un lugar oscuro y fresco durante la noche. La solución es
ahora un marrón claro claro a color amarillo. Añadir:
● Carbón activado 500.0 gm (o dos cucharas colmadas)
Remover. Filtrar a través de un filtro de papel 1000 ml en un cilindro graduado. Cambiar el filtro de
papel a menudo. Restaurar volumen a 1000 ml con agua destilada. Almacenar en el refrigerador, la
solución es estable por 6 meses.

Hematoxilina

PROCEDIMIENTO:

1. Desparafinar e hidratar en agua destilada.

2. Ácido periódico al 0,5% 5 minutos.
3. Enjuague con agua destilada.
4. Reactivo de Schiff 30 minutos //Reactivo de Schiff, microondas ALTA potencia, durante 45 - 60
segundos, hasta magenta profundo
5. Agua corriente durante 5 minutos.
6. Hematoxilina 3 minutos.
7. Lavar en agua corriente
8. Deshidrate

RESULTADOS:

Glucógeno, hongo:​ magenta

Núcleos: ​azules

NOTAS
1. Para verificar, 10 ml de formaldehído agregue gotas de Schiff's, debe volverse rojo púrpura
inmediatamente.
2. Deseche si se vuelve rosado mientras está en el refrigerador.
ROJO CONGO - AMILOIDES

Demostrar depósitos amiloides en tejido.

PRINCIPIO: el amiloide es homogéneo y eosinófilo, cuando se tiñe con la Rojo Congo, con la ayuda
de lentes polarizantes, infringe un verde manzana

FIJACIÓN: se recomienda el alcohol absoluto y Carnoy, 10% de NBF o Bouin

REACTIVOS
Hematoxilina de Mayer:

● Hematoxilina 1.0 gm ● sulfato de aluminio 50.0 gm

● Agua destilada 1000.0 ml ● Ácido cítrico 1.0 gm
● Yodato de sodio 0.2 gm ● Hidrato de cloral 50.0 g
● Amonio o Potasio
Disuelva la hematoxilina en agua, calentar a ebullición, hervir durante 5 minutos. Retirar del fuego,
agregar yodato de sodio, espere 10 minutos para madurar. Agregue el resto de los químicos en el
orden dado, disolviendo cada uno antes de agregar el siguiente.

Hidróxido de sodio al 1%

● Hidróxido de sodio 1.0 gm

● Agua destilada 100.0 ml
Almacenar en el refrigerador, estable para 3 meses. Desechar si hay un precipitado

Cloruro de sodio

● Stock cloruro de sodio 50.0 ml

● 1% de hidróxido de sodio 0.5 ml
Hacer inmediatamente antes de usar, descarte

Rojo Congo

● Congo solución roja 50.0 ml

● 1% de hidróxido de sodio 0.5 ml
Filtrar a través de lana de vidrio, solución debe ser claro, no nublado naranja/rojo. Usar
inmediatamente, desechar después de usar.

PROCEDIMIENTO:
1. Desparafinar e hidratar en agua.
2. Hematoxilina de Mayer 10 minutos.
3. Lave en agua corriente
4. Solución de cloruro de sodio 20 minutos// microondas, 20 de potencia, 45 segundos. Que los porta
se asienten durante 2-5 minutos.
5. Solución Rojo Congo durante 1 hora // microondas, 20 potencia, por 45 segundos. Que los porta
se asienten durante 2-5 minutos.
6. Deshidratar en alcohol absoluto, 10 inmersiones
7. Aclare en xileno

RESULTADO:
Amiloide ​rojo a rosa
Núcleos ​azules

NOTAS
1. Las secciones deben cortarse de 8 a 10 micras para la birrefringencia.
2. La solución debe filtrarse a través de lana de vidrio, no filtros de papel para birrefringencia

AZUL ALCIAN pH2.5 - MUCOPOLISACÁRIDOS ÁCIDOS

Mucosustancias ácidas y las mucinas acéticas. Se observan cantidades excesivas en mesoteliomas.

Ciertas cantidades normalmente en las paredes de los vasos sanguíneos, aumento de lesiones
tempranas de aterosclerosis.

PRINCIPIO: ​colorantes básicos polivalentes hidrosolubles. El color azul se debe a cobre en la

molécula. ​Se cree que forma enlaces de sal con grupos ácidos de mucopolisacáridos ácidos​.

FIJACIÓN: 10% de NBF, de Bouin o de Hollande.

.
REACTIVOS

Solución de azul alciano:

● Ácido acético glacial al 3% 100.0 ml
● Azul Alcian 8GX 1.0 gm
Mezcle, ajuste el pH a 2.5, usando ácido acético. Filtrar, agregar un cristal de
timol

Nuclear Fast Red (Kernechtrot):

● Sulfato de aluminio 25.0 gm
● Agua destilada 500.0 ml
● Nuclear fast red 0.5 gm
Disolver el sulfato de aluminio en el agua. Agregue el rojo nuclear rápido, disolver con ayuda de
calor. Filtrar, Añadir un cristal de timol.

PROCEDIMIENTO:
1. Hidratar en agua destilada.
2. 3% de ácido acético, 3 minutos.
3. Azul alcian 30 minutos // microondas, alta potencia, 30 segundos.
4. Lave en agua corriente 2 minutos,
5. Rojo nuclear rápido, 5 minutos,
6.lavar en agua corriente.
7. Deshidratar, limpiar y cubrir.

RESULTADOS
Mucinas / mucosustancias ácidas: ​azul
Núcleos (usando Nuclear fast red) ​rosa rojizo
AZUL ALCIAN + PAS

PROPÓSITO: diferenciar entre las mucosustancias neutras y acéticas.

FIJADOR: 10% de formalina o fijador de Hollande.

REACTIVOS

Azul Alciano, pH 2.5

0.5% de ácido peryódico
Reactivo de Schiff:
Hematoxilina

PROCEDIMIENTO:
1. Desparafinar e hidratar en agua destilada.
2. azul alcian, 30 minutos // microondas, alto poder 45 segundos. Dejar reposar durante 2-5 minutos.
3. Lave con agua corriente 5 minutos, enjuague con agua destilada.
4. 0.5% de ácido peryódico, 5 minutos.
5. Enjuague con agua destilada.
6. Reactivo de Schiff, 30 minutos // microondas, alto power, 45 segundos, dejar reposar 2-5 minutos
7. Lave en agua corriente 5 minutos, enjuague con agua destilada.
8. Hematoxilina, 1-3 minutos, lavar en agua.
9. Enjuague ácido, 10 inmersiones, lavado, solución azulada, 10 inmersiones.
10. Lave en agua corriente 5 minutos.
11. Deshidratar, limpiar y cubreobjetos.

RESULTADOS
Mucosustancias ácidas​ azules
Polisacáridos neutros​ magenta

AZUL ALCIAN + DIGESTIVO HIALURONIDASA

PROPÓSITO: la digestión se utiliza para aumentar la especificidad para diversas mucosustancias

FIJACIÓN: 10% de NBF, Bouin o Hollande's.

REACTIVOS

Fosfato de potasio 0.1M, Monobásico:

Fosfato de sodio 0.1M, Dibásico:
Solución tampón:
● Fosfato de potasio mono, 0.1M 94.0 ml
● Fosfato de sodio di, 0.1M 6.0 ml
Solución de digestión con hialuronidasa:
● Hialuronidasa testicular (Sigma) 0.025gm
● Solución tampón 50,0 ml
Mezcle justo antes de usar, deseche
Azul Alcian
PROCEDIMIENTO:
1. Corte dos juegos del mismo bloque, etiquete uno con hialuronidasa y uno sin.
2. Desparafinar e hidratar en agua.
3. Coloque un juego en Solución tampón, el otro en Solución de hialuronidasa a 37 ° C durante 1
hora.
4. Lave ambos juegos en agua corriente 5 minutos.
5. Teñir ambos juegos de portaobjetos simultáneamente con azul Alcian, pH 2.5
siguiendo el protocolo

RESULTADOS
Áreas extraídas (ácido hialurónico, sulfato de chodroitina A y C)​ sin teñir
Áreas no extraídas ​azules
Núcleos ​rosa rojizo

MUCICARMIN - MUCINA

PROPÓSITO: teñir la mucina. El exceso de mucina es secretado en ciertas inflamaciones y

carcinomas La técnica también es útil para determinar el sitio de un tumor primario

PRINCIPIO: se cree que ​el aluminio forma un complejo de quelación con el carmín​,
cambiando la molécula a una carga positiva​ que le permite ​unirse con los sustratos
ácidos​ de baja densidad ​como las mucinas​.

FIJADOR: 10% de formalina tamponada.

REACTIVOS

Mucicarmina de Southgate Solución:

● Carmín, alumbre lago 1.0 gm
● Hidróxido de aluminio 1.0 gm
● 50% de alcohol 100.0 ml
Mezcle bien, agregue:
● Cloruro de aluminio, anhidro 0.5 gm (lentamente, es reactivo al agua)
Hervir suavemente durante 2 minutos. Filtrar, refrigerar.

Hematoxilina de Mayer:

Solución amarilla de metanil:

● Metanil amarillo 0.25 gm
● Agua destilada 100.0 ml
● Ácido acético glacial 0.25 ml
Mezclar bien

PROCEDIMIENTO:
1. Desparafinar e hidratar en agua destilada.
2. Hematoxilina de Mayer 10 minutos.
3. Lavar con agua corriente, 5 minutos.
4. Solución de mucicarmina 1 hora. // microondas, alta potencia, 45 segundos.
5. Enjuague rápidamente en agua destilada.
6. Metanil amarillo, 30 segundos a 1 minuto.
7. Deshidrate rápidamente en tres cambios de alcohol absoluto, limpie y cubra

RESULTADOS
Mucina ​Rosa oscuro
Núcleos ​negros
Otros elementos tisulares ​amarillos

PAS + DIGESTIVO GLUCÓGENO - DIASTASA / a-AMILASA

Determinar el glucógeno mediante digestión y tinción con PAS

PRINCIPIO:​ la diastasa actúa sobre el glucógeno​ para despolimerizarlo ​en unidades de

azúcar más pequeñas​ (maltosa y glucosa) ​que se eliminan de la sección.