VERIFICACIÓN DE UNA ETAPA DE LA GLICOLISIS ANAEROBIA

Presentado a:

Cristina Lenis Ramos

Ligia Marlene Forero

Presentado por:

Natalia de Jesús Curico

Brillyd Rodríguez Chaparro
Natalia Arias Fajardo
Andrés Ariza

Grupo
2EA
BIOQUIMICA

Universidad de Ciencias Aplicadas y Ambientales – UDCA

Facultad de Ciencias de la Salud
Programa de Enfermería
24 de septiembre 2019

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Contenido
1. Introducción
2. Objetivos
3. Resultados
4. Análisis de resultados
5. Cuestionario
6. Conclusiones
7. Bibliografía

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 1. INTRODUCCION

La glicólisis es la principal forma en que los glicidos se degradan para generar

energía en forma de ATP, este proceso puede ser aerobio o anaerobia. La
mayoría de las reacciones en los dos procesos son comunes, sin embargo, se
diferencian en el destino que sufre el Ácido Pirúvico o Piruvato, las enzimas que
participan y las condiciones en que ocurren, ya que en la degradación anaeróbica
el Piruvato puede ser convertido en Ácido Láctico (lactato) o en etanol. En el
organismo animal la enzima que convierte el Piruvato en Lactato es la Láctico
Deshidrogenasa (LDH), la cual está ampliamente distribuida en todo el organismo,
pero especialmente se encuentra en el músculo, siendo su función catatalizar la
reacción reversible del Lactato

2. OBJETIVOS

• Verificar mediante una reacción secundaria la acción de la Enzima

Láctico Deshidrogenasa.
• Comprobar el papel fundamental que desempeñan las coenzimas.

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3. RESULTADOS
EXTRACCION DE COENZIMA EXTRACCION DE ENZIMA

 Extracción y preparación de la Coenzima

1- Tome aproximadamente 2 gramo de músculo y colóquelo en un tubo de ensayo
con unos 15 ml de agua hirviendo, durante 10 minutos, para inactivar la enzima.
Deje enfriar o enfríe al chorro de agua. 2- Vierta el contenido del tubo en un
mortero, adicione una pequeña cantidad de arena lavada y triture hasta formar una
pasta homogénea y fina. 3- Traslade el homogenizado a un tubo de centrifuga de
plástico y centrifugue a 1500r.p.m. por 3 minutos. 4- Decante el sobrenadante en
otro tubo y consérvelo ya que este contiene la coenzima, rotúlelo y manténgalo en
la nevera hasta cuando vaya a usarlo.
 B- Extracción y preparación de la Enzima:
Tome aproximadamente 2 gramo de músculo y colóquelo en un mortero. 2-
Adiciónele 15 ml de solución de NaCl al 0.9% y una pequeña cantidad de arena
lavada, triture hasta formar una pasta homogénea y fina, centrifugue. 3- Decante
el sobrenadante en otro tubo y agregue una pequeña cantidad de carbón activado,
para remover la coenzima, mezcle por inversión tapando el tubo con el dedo
pulgar. Deje el tubo en reposo durante 30 minutos, agitando por inversión
ocasionalmente. 4- Centrifugue a 1500r.p.m. por 3 minutos, separe el
sobrenadante en otro tubo ya que este contiene la enzima y consérvelo, rotúlelo y
manténgalo en la nevera hasta cuando vaya a usarlo.

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 Sln con COENZIMA

Sln con ENZIMA Sln con ACEITE

Sln COMPLETA

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4. ANALISIS DE RESULTADOS.

 Extracción y preparación de la Coenzima

1- Tome aproximadamente 2 gramo de músculo y colóquelo en un tubo de ensayo
con unos 15 ml de agua hirviendo, durante 10 minutos, para inactivar la enzima.
Deje enfriar o enfríe al chorro de agua. 2- Vierta el contenido del tubo en un
mortero, adicione una pequeña cantidad de arena lavada y triture hasta formar una
pasta homogénea y fina. 3- Traslade el homogenizado a un tubo de centrifuga de
plástico y centrifugue a 1500r.p.m. por 3 minutos. 4- Decante el sobrenadante en
otro tubo y consérvelo ya que este contiene la coenzima, rotúlelo y manténgalo en
la nevera hasta cuando vaya a usarlo.
 B- Extracción y preparación de la Enzima:
1- Tome aproximadamente 2 gramo de músculo y colóquelo en un mortero. 2-
Adiciónele 15 ml de solución de NaCl al 0.9% y una pequeña cantidad de
arena lavada, triture hasta formar una pasta homogénea y fina, centrifugue. 3-
Decante el sobrenadante en otro tubo y agregue una pequeña cantidad de
carbón activado, para remover la coenzima, mezcle por inversión tapando el
tubo con el dedo pulgar. Deje el tubo en reposo durante 30 minutos, agitando
por inversión ocasionalmente. 4- Centrifugue a 1500r.p.m. por 3 minutos,
separe el sobrenadante en otro tubo ya que este contiene la enzima y
consérvelo, rotúlelo y manténgalo en la nevera hasta cuando vaya a usarlo.

Tuno #1
En el primer tubo se ensayó agregamos la enzima + 1 cc de SLN De KNC + 1cc
de SLN de Lactato + 1cc de SLN de Azul de metileno + 2cc de agua destilada lo
cual no se genera un cambio de coloración o está muy tardío, continua en su
misma coloración desde el inicio.
Tubo #2
Se elaboró con la enzima sin dializar del tejido hepático, coenzima, lactato de
sodio, azul de metileno, agua y aceite. La actividad de la Lactato deshidrogenasa
en este caso fue un poco mayor en relación al tubo Nº 1, debido a que en esta
ocasión se agregó la coenzima (NAD+), que trabaja junto con la holoenzima en la
oxidación del lactato, así que hay mayor cantidad de equivalente reducidos,
aunque sigue siendo un poco más baja de la que correspondería presentar
Tubo #3

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Se realizó con la enzima sin dializar del tejido hepático, coenzima, azul de
metileno, agua y aceite. La reacción se colocó en un baño de María a 37ºC y
comenzó a presentar cambio de color a los 15 minutos por ahí del 5%, y a los 45
minutos de calentarse tuvo un cambio de color final de un aproximado de 78% con
relación al tubo control. En este tubo no se adicionó lactato de sodio como
sustrato, pero la enzima opera utilizando como sustrato el lactato presente en el
tejido hepático, por lo que hubo decoloración. Sin embargo, dado a que la cantidad
de sustrato es menor en este caso, el cambio de coloración debería ser menor que
en el tubo anterior.
Tubo #4
Se preparó con la enzima, Lactato de sodio, azul de metileno, agua y aceite. La
reacción se colocó en una temperatura al medio ambiente y comenzó a presentar
cambio de color a los 10 minutos aproximadamente de 5%, y finalmente tuvo un
cambio de color final de un aproximado de 60% con respecto al tubo control. Dado
a que en este tubo solo se agregó apoenzima y no se agregó el cofactor, se
supone que no debe haber actividad enzimática porque la apoenzima es inactiva.
Sin embargo, hubo decoloración del azul de metileno.
Tubo #5
Se realizó con la enzima, coenzima, azul de metileno, agua y aceite. La reacción
se colocó una temperatura de medio ambiente. En este tubo solo se adicionó
lactato de sodio como sustrato 0.5cc, pero la enzima opera utilizando como
sustrato el lactato presente en el tejido hepático, por lo que hubo decoloración. Sin
embargo, dado a que la cantidad de sustrato es menor en este caso.

CUESTIONARIO
1- ¿En qué tipo de organismo se encuentra esta enzima y que papel cumple en
dicho organismo?
El lactato deshidrogenasa (o también llamada "deshidrogenasa del ácido láctico"
(LDH)) es una enzima que se encuentra en prácticamente todos los tejidos del
cuerpo humano. Desempeña un papel importante en la respiración celular (el
proceso en el cual la glucosa (azúcar) proveniente de los alimentos se convierte
en energía que puede ser utilizada por las células).
2- ¿Qué ocurriría si un organismo carece de la enzima?
Sin enzimas, la mayor parte de los miles de reacciones bioquímicas que sustentan
los procesos vitales ocurrirían a velocidades imperceptibles. Determinaciones
recientes de las velocidades de las reacciones no catalizadas (no mejoradas) en
agua van desde 5 s para la hidratación del CO2 hasta 1 100 millones de años para

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la descarboxilación de la glicina. En contraste, las reacciones catalizadas por
enzimas suelen ocurrir en lapsos que van de los microsegundos a los
milisegundos. De hecho, las enzimas son el medio por el cual los organismos
canalizan el flujo de energía y materia. En la actualidad, como resultado de la
acumulación de datos procedentes de la dinámica de proteínas (estudios de
movimiento conformacional) y del análisis del hacinamiento macromolecular, la
investigación de enzimas está experimentando cambios revolucionarios.
3- ¿Porque cree usted que el protocolo determino usar este tipo de tejido y no
otro?
Esta enzima comprende 5 isoenzimas, que aparecen en una amplia variedad de
tejidos, en particular en el músculo esquelético, músculo cardíaco, hígado y
eritrocitos y también en páncreas, hueso y pulmón por lo que se considera de baja
especificidad muscular. Más inestable que las anteriores. Su medición debe
realizarse en las primeras 12 horas después de la toma de la muestra
Aumenta a valores considerables 12 horas después del daño y regresa a sus
valores normales de 7 a 14 días después del daño
Valores mayores de 3.200U/L se han observado en rabdomiólisis en caballos-
Posee una vida más larga que la CK. El aumento está asociado a trastornos
músculo esquelético, cardiaco e hígado.
4- De acuerdo a los resultados obtenidos, ¿considera usted que tiene la
concentración del sustrato influencia sobre la velocidad enzimática?
Principalmente, la velocidad de la reacción o catálisis varía de acuerdo a la
concentración del sustrato.
Al aumentar la concentración de sustrato, la actividad enzimática aumenta, hasta
alcanzar la velocidad máxima, punto donde la enzima se satura, debido a que las
enzimas tienen todos sus sitios activos ocupados
5- ¿Cuál es el papel de la coenzima en esta reacción?.

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Bibliografia:

https://es.slideshare.net/carlosdurant7/infome-4-de-bioquimik-nuestro-mejor-
higado-46972443.
http://www.medicentro.com.co/lab-clinico/analisis/ f_z /
LACTICODESHIDROGENASA.html
https://es.slideshare.net/Vayog/enzimas-oxidativas-48900388