UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA.

FACULTAD DE ZOOTECNIA.

ESCUELA PROFESIONAL DE ZOOTECNIA

ENFERMEDADES INFECCIOSAS

Método de diagnóstico en laboratorio de Brucelosis

ALUMNO : LUNA ROSALES, Jeanpier Yojairo

DOCENTE : Vet. TURPO CALCINA, jorge

SEMESTRE : 2019 - I

TINGO MARIA- PERU

 I. INTRODUCCIÓN

La brucelosis es una enfermedad infecto contagiosa, aguda o crónica, que

afecta tanto a los animales como al hombre, causada por bacterias del género
Brucella. Se reconocen actualmente seis especies: B. melitensis, B. abortus, B.
suis y B. neotomae del grupo S y B. ovis y B. canis del grupo R. Las cepas de
Brucella de una misma especie difieren en algunas características, lo que ha
permitido clasificarlas en biotipos para estudios epidemiológicos. Las pérdidas
económicas, expresadas en la disminución de la productividad en el rebaño
bovino, se resumen en una menor producción de terneros por abortos, infertilidad
en vaquillas, aumento del lapso inter parto, menor producción de leche, alta tasa
de reemplazos y pérdidas de peso en canales de carne.

Objetivos
Determinar la presencia de Brucella sp. en el ganado bovino Huánuco,
mediante el test rosa bengala.
 II. REVISION DE LITERATURA

2.1. Brucelosis

Actualmente para el diagnóstico de la brucelosis bovina existen diversos

métodos de diagnóstico, que varían en sensibilidad y especificidad. De éstos, los
más utilizados en suero sanguíneo son

2.2. Seroaglutinación lenta en tubos (SLT)

Precursora de las pruebas serológicas actuales, todavía se sigue

empleando y constituye la prueba de base en doce países. Como prueba
complementaria se usa en otros diecisiete. Su eficacia es corroborada por el
hecho de que la mayoría de los países actualmente declarados indemnes la han
utilizado, asociada, desde luego, a la fijación de complemento o al ring test (RT).
La SLT pone en evidencia los anticuerpos de los tipos IgG2 y IgM . Se le reprocha
una detección a veces tardía de los animales infectados recientemente, la
imposibilidad de diferenciar los anticuerpos vacúnales de los de infección y el no
detectar eficazmente la infección crónica o solamente a titulaciones bajas y
difíciles de interpretar. Este último defecto parece particularmente grave, habida
cuenta de la cronicidad habitual de la enfermedad.

2.3. Fijación del Complemento (FC)

Se utiliza como reacción de base en dos países (Malaysia y Nueva Zelanda,

habiéndose automatizado en este último) y como reacción complementaria
prácticamente en todos los demás. Detecta los anticuerpos de los tipos IgG1 y IgM
 por lo que se le considera la prueba más sensible y precisa, permitiendo
una relativa diferenciación entre anticuerpos vacunales e infecciosos. La FC
presenta el inconveniente de ser delicada y larga de efectuar y precisa ser
efectuada por personal técnico competente, lo que desgraciadamente impide su
utilización regular como prueba de base.

2.4. Test Rosa Bengala (RB)

Consiste en una aglutinación rápida en placa con suero puro y un antígeno

coloreado y a pH 3,6. Esta constituye la prueba de base en 23 de los 30 países
que dicen utilizarla. Así pues se observa un consenso acerca de la utilización de
dicha prueba, que se explica por el hecho de que el TRB es económico, sencillo y
rápido, y ocasiona pocas respuestas dudosas tanto positivas como negativas que
obliguen a una FC de control. Las inmunoglobulinas responsables de la reacción
son las IgG1, como en el caso de la FC, e incluso las IgM, según la forma de
preparación del antígeno (D. Levieux, comunicación personal). Esta prueba
detecta la enfermedad en estadios más precoces que la ALT e incluso que la FC
o al mismo tiempo que la FC.

2.5. La prueba del anillo o ring test (RT).

También es utilizada con frecuencia. Detecta las inmunoglobulinas

existentes en la leche, ya sea procedentes de la sangre por filtración (IgM) o bien
producidas localmente en la mama (IgA), que es uno de los órganos que se
infectan con mayor frecuencia. Se trata de una prueba muy eficaz, sencilla de
realizar y económica. El RT puede efectuarse en forma frecuente (cada mes) tanto
para el control de rebaños lecheros infectados (concretamente el RT ha
constituido el método de diagnóstico de base en Suiza) como para el seguimiento
continuo de los rebaños saneados. El éxito que se atribuye a esta prueba parece
más ligado a la frecuencia de su realización que a su sensibilidad (Gran Bretaña)
ya que ésta disminuye con el tamaño del rebaño. Es un test de alerta precoz ya
que no se puede recurrir con tanta frecuencia a controles serológicos. La adición
de formol a la leche permite conservarla durante 14 días y parece aumentar la
sensibilidad de la prueba RT más que redurcirla (Gran Bretaña). Finalmente, el RT
puede utilizarse a nivel individual.

Últimamente se han incorporado métodos inmunoenzimáticos o ELISA, tanto en

suero sanguíneo como en leche (Nielsen y col., 1988, 1989; Nielsen, 1990).

El RT es un método satisfactorio y poco costoso para inspección de

rebaños lecheros en la detección de brucelosis; sin embargo, la principal limitación
es el factor de dilución que ocurre en los grandes rebaños lecheros con grandes
cantidades de leche que se almacenan en los estanques de recolección y las
reacciones falsas positivas como resultado de vacunaciones con cepa 19, período
de lactancia, condiciones ambientales e infecciones no específicas (Nicoletti,
1994).

Todos los isotipos de anticuerpos en la leche (IgA, IgM, IgG1 e IgG2)

pueden tomar parte en el RT positivo, pero la presencia de IgA en aquellas
reacciones positivas, con o sin otro isotipo, indica que éste es el principal isótopo
involucrado en la reacción junto a IgM (Sutra y col., 1986; Díaz y Blasco, 1994).

En 1992, Durand y col. compararon los resultados del RT con los obtenidos
por métodos serológicos, concluyendo en la necesidad de incorporar una prueba
más sensible que pueda ser utilizada en volúmenes mayores de leche, ya que un
gran número de muestras negativas al RT fueron serológicamente positivas a
Fijación de Complemento. Heck y col. (1980) compararon los resultados de ELISA
en leche y suero sanguíneo de un mismo animal. Ellos indicaron que sólo una
muestra resultó negativa en leche y positiva en suero, indicando una alta
correlación entre el test de ELISA en leche con los diagnósticos serológicos. Por
otro lado, Thoen y col. (1983) concluyen que ELISA en leche es más específica e
igualmente sensible que el RT. Boraker y col. (1981) demostraron una alta
correlación entre el ELISA en leche con los cultivos bacteriológicos. Sin embargo,
Bercovich y Taaijke (1990) señalan que aunque el ELISA es una prueba altamente
específica, puede fallar algunas veces en detectar Anticuerpos contra Brucella en
estanques que contengan leche de una única vaca infectada (con baja
concentración de IgG1). Por otro lado, Kerkhofs y col. (1989) obtuvieron una
especificidad para ELISA en leche y RT de 99.9% y 99%, respectivamente, y una
sensibilidad de 98.6% para ELISA y 56% para el RT.
 III. MATERIALES Y METODOS

3.1. Lugar y fecha

La práctica de método diagnostico en laboratorio de brucelosis se realizó en

el laboratorio de sanidad animal de la facultad de zootecnia Universidad nacional
agraria de la selva el día 09 de julio de 8:00 am a 10:00 am, del presente año.

3.2. Materiales
 Tubos de ensayo
 Pipetas
 guantes
 Suero sanguíneo
 Jeringas
 Goteros
 Test rosa de bengala

3.3. Metodología

3.3.1. Colección de muestras

La colección de las muestras se obtuvo por punción en la vena yugular.

3.3.2. Prueba de rosa de bengala

Procedimiento

1. Se colocó 40 ul del suero, con una micropipeta, sobre uno de los

cuadrantes de la placa de aglutinación
 2. Luego se colocó 1 gota de Rosa de Bengala-antígeno de Brucella
abortus– cepa 1119-3.
3. Se procedió a mezclar el suero y el antígeno con los
homogenizadores hasta homogenizarlos durante el tiempo de 4 minutos formando
una gota.
4. La lectura se realizó a los 4 minutos, una reacción positiva
presentaría grumos producto de la aglutinación (arenilla). En las reacciones
negativas no se observará ninguna aglutinación.
 IV. RESULTADOS

Del total de 5 muestras procesadas no se encontraron anticuerpos contra Brucella

en ninguna de las muestras colectadas de bovinos, mediante la prueba de rosa de
Bengala.

Interpretación de los resultados del test roza de bengala

Propietario: facultad de zootecnia

Provincia: Leoncio prado

N° de animales: 5 Especie: vacunos lecheros

Fecha: 09/07/2019

Integrante: LUNA ROSALES. Jeanpier

Raza Interpretación Observaciones

Holstein Negativo Vacía

Holstein Negativo Vacía

Holstein Negativo Vacía

Holstein Negativo Vacía

Holstein Negativo Vacía

 V. CONCLUSION

Se llevó con éxito la determinación de Brucella sp. En vacuno lechero con el test
rosa de bengala, en la cual se logró aprender los pasos para llevarse a cabo estos
métodos de diagnóstico de brucelosis.

VI. BIBLIOGRAFIA

 BERCOVICH, Z., R. TAAIJKE. 1990. Inmunoensayo enzimático utilizando

anticuerpos monoclonales anti-bovinos de ratón para la detección de
anticuerpos contra Brucella abortus en leche de vaca, J. Vet. Medicina. 37: 753-
759.
 BORAKER, D. K., W. R. STINEBRING, J. R. KUNKEL. 1981. Inmunoensayo de
anticuerpos enzimáticos para la detección de anticuerpos contra Brucella
abortus en la leche. Correlación con la prueba del anillo de Brucella y con el
desprendimiento de organismos viables, J. Clin. Microbiol. 14 (4): 396-403.
 DIAZ, R., J. M. BLASCO. 1994. Diagnóstico inmuno-lógico de la brucelosis
bovina, Bovis 57: 59-77.
 KERKHOFS, P., Y. BOTTON, P. THIANGE, J. N. LIMET. 1989. Le déspistage
de la brucellose bovine par ELISA sur le lait, Ann. Medicina. Veterinario. 133 (8):
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 HECK, F. C., J. D. WILLIAMS, J. PRUETT, R. SANDERS, D. L. ZINK. 1980.
Ensayo inmunoenzimático vinculado para detectar anticuerpos contra Brucella
abortus en leche bovina y suero, Am. J. Vet. Res. 41 (12): 2082-2084.
 NICOLETTI, P. 1994. Epidemiología, patogenia y cuadro clínico. Bovis 57: 17-
25.
 NIELSEN, K.H., J.W. CHERWONOGRODZKY, J. R. DUNCAN, D. R. BUNDLE.
1989. Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas de la diferenciación del
anticuerpo de ganado infectado naturalmente con Brucella abortus o vacunado
con la cepa 19, Am. J. Vet. Res. 50 (1): 5-9.
 NIELSEN, K. 1990. La respuesta serológica de bovinos inmunizados con
Yersinia Enterolitica 0: 9 o ante antígenos de Yersinia y Brucella abortus en
inmunoensayo enzimático, Vet. Immunol. Immnopathol. 24 (4): 373-382.
 SUTRA, L., J. P. CAFFIN, G. DUBRAY. 1986. Papel de las inmunoglobulinas de
la leche en la prueba de anillo de la leche de Brucella, Vet. Microbiol. 12: 359-
366.
 THOEN, CH. O., J. A. BRUNER, D. W. LUCHSIN-GER, D. E. PIETZ. 1983.
Detección de anticuerpos contra la brucella de diferentes clases de
inmunoglobulinas en la leche de vaca mediante un ensayo inmunoenzimático,
Am. J. Vet. Res. 44 (2): 306-308.