Universidad Rafaél Landivar José Fernando Moreno Camey

Facultad de Ingeniería Carné: 1198814

Microbiología Fecha: 13/10/2018
Licda. Sandra Patricia Lima sábado de 07:30am-09:00am

Práctica No.4 Medios físicos y Químicos

Índice
Abstract .............................................................................................................................................. 2
Objetivo .............................................................................................................................................. 3
Metodología ....................................................................................................................................... 3
Diagrama de flujo ......................................................................................................................... 4
......................................................................................................................................................... 4
......................................................................................................................................................... 4
Resultados ......................................................................................................................................... 6
Discusión de Resultados ................................................................................................................. 6
Conclusiones ..................................................................................................................................... 8
Bibliografía ......................................................................................................................................... 9

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 Abstract

El sábado 22 de septiembre se llevó a cabo la práctica número cuatro del laboratorio

de microbiología titulada “Medios físicos y Químicos” el cual tuvo como objetivos
específicos el determinar la eficiencia del cloro, clorhexidina, Peróxido de hidrogeno
y del amonio como medio esterilizante utilizando una muestra de solución con
presencia de E. colli; Determinar la presencia de Escherichia Coli en muestras de
caldo flurocult al ser tratado con luz UV; Determinar la presencia o ausencia de
bacterias de manos sucias y limpias por medio de la utilización de agar recuento
total

Por lo cual primero se sembró por estrías donde se siembra de una solución con
presencia de E.coli en un medio de cultivo de agar Recuento total, y se introduce 4
papeles con peróxido de hidrogeno, cloro, amonio y clorhexadrina para determinar
la efectividad como esterilizantes ante esta bacteria. Luego se realizó un sembrado
por vertido donde diluyo en agua peptonada una solución con presencia E. Coli y
luego este fue colocado en caldo flurocult luego este fuer expuesto a emisiones de
luz UV. Y por último se realizó un sembrado directo para determinar la cantidad de
bacterias presentes en manos limpias y manos sucias utilizando agar recuento total.

Se obtuvo como resultados que el Peróxido de hidrogeno, el amonio, la

clorohexadrina y el cloro son agentes eficaces para la esterilización de E. Coli. Que
la luz ultravioleta no fue efectiva para la esterilización de E. Coli, dando como
resultado la presencia de esta bacteria en el caldo fluorocult. Y que el jabón
antibacterial desinfectante es altamente efectivo en la destrucción de la mayoría de
bacterias por su mecanismo de acción de desnaturalización proteica. Lo que
disminuye a un tercio de las bacterias totales al lavarse las manos.

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 Objetivo
1) Determinar la eficiencia del cloro, la clorhexadrina, del peróxido de hidrogeno,
del amonio como medio esterilizante utilizando una muestra de solución con
presencia de E. Coli.

2) Determinar la presencia de Escherichia Coli en una muestra de caldo flurocult.

3) Determinar la presencia o ausencia de bacterias de manos sucias y limpias por

medio de la utilización de agar recuento total

Metodología
Reactivos

 Reactivo de kovacs
 Caldo Fluorocult
 Agar recuento total
 Solución con E. Coli

Aparatos e instrumentos utilizados en la práctica

 Haza bacteriológica
 Cajas de Petri
 Tubos de ensayo
 Campana para cultivo

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 Diagrama de flujo
Procedimiento A: Sembrado por estrías. Donde se siembra de una solución con
presencia de E.Coli en un medio de cultivo de agar Recuento total. Y se introduce
4 papeles con clorhexadrina, cloro, amonio y peróxido de hidrogeno para determinar
la efectividad como esterilizantes ante esta bacteria.

Inicio

Esterización de aza bacteriológico a la flama con mechero. Tomando la muestra de E.Coli y

esta se introdujo en un medio de agar Recuento total

Dividir la caja en 4 espacios donde se introdujeron 4 papeles con clorhexadrina, cloro, amonio
y peróxido de hidrogeno. Con el fin de determinar la efectividad como esterilizantes químicos
de la E.Coli.

Fin

Procedimiento B: Sembrado por vertido donde diluyo en agua peptonada una

solución con presencia escherichia Coli y luego este fue colocado caldo flurocult y
expuesto a emisiones de luz UV.

Inicio

Colocar muestra de Escherichia Coli en un tubo de ensayo con agua peptonada.

La muestra de solución de escherichia Coli en el agua peptonada fue introducida en un tubo

de ensayo con Caldo Flurocult.

Se cultivará por una semana y se añadirá el reactivo de Kovacs. Si se genera un anillo rojo se
determina la presencia de E. Coli, lo que determina la presencia de coliformes fecales.

Fin

4
 Procedimiento C: Sembrado directo para determinar la cantidad de bacterias
presentes en manos limpias y manos sucias utilizando agar recuento total.

Inicio

Dividir una caja de Petri con agar recuento total en dos donde se coloque una parte las manos
sucias y posteriormente lavarse la misma mano y en la otra parte colocar las manos limpias.

Cultivar y observar el crecimiento de bacterias.

Fin

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 Resultados
Tabla No.1: Resultados obtenidos al plantar una muestra bacteria E. Coli en el
medio de cultivo con los 4 papeles.

Medio de
No Muestra Observación Fotografía
cultivo

Inhibición del crecimiento

microbiano de E. Coli en
Agar Solución con
los papeles con
1 recuento presencia de
clorhexadrina, cloro,
total E.Coli
amonio y peróxido de
hidrogeno.

El caldo flurocult dio como

Solución con
resultado positivo en la
Caldo presencia de
2 presencia de E Coli,
Flurocult Escherichia
formándose un anillo rojo
Coli
por el reactivo de kovac

Determinació
n bacteriana Se determino que en las
Recuento en manos manos sucias aumentaba
3
total sucias y la cantidad de bacterias
manos que en manos limpias
límpias

Discusión de Resultados

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Para alcanzar el primer objetivo primero se esterilizo una aza bacteriológica a la
flama. Este método de esterilización es considerado como utilización de calor seco,
y al ser el calor como el método más efectivo, eficiente y barato de esterilizar es un
método muy utilizado ya que tiene como mecanismo de acción la desnaturalización
de las proteínas y la coagulación del citoplasma de la bacteria. Esta aza
bacteriológica fue utilizada para cultivar una solución con presencia de E. Coli en un
medio de cultivo con agar Recuento total. Luego fue colocado 4 papelitos con
agentes químicos esterilizantes los cuales fueron clorhexadrina, cloro, amonio y
peróxido de hidrogeno. El cloro y el peróxido de hidrogeno fue eficaz debido a su
fuerte capacidad oxidativa de las enzimas de la bacteria y mediante la oxidación de
fosfolípidos de la membrana celular. El amonio fue muy efectivo también debido a
que este posee un mecanismo de acción de desnaturalización de proteínas y
además de que penetran en las membranas de los microorganismos gracias a las
cadenas carbonadas (hidrófobas). A través del nitrógeno catiónico (hidrófilo)
interaccionan con los fosfatos de los fosfolípidos, causando la salida al exterior del
material vital citoplasmático.

Con base en (Mibius, 2011) el caldo florocult es utilizado para aislar bacterias
coliformes y E. Coli. Y esta dara positivo cuando al agregarle reactivo de kovacs se
forme un anillo de color rojo sobre el resto del caldo formado de color celeste. Por
lo que según el apartado 1 de la tabla de resultados el estudio dio positivo por lo
que se puede determinar la presencia de Escherichia Coli. Con base en (Prescott,
Harley, & Klein, 2004) esta reacción del flurocult con el reactivo de kovacs se da
debido a que el triptófano presente en el caldo flurocult reacciona con la E. Coli
transformándose en indol el cual reacciona con el reactivo de kovacs para
evidenciar el indol, lo cual indica que la presencia de E. Coli. Con base en este
mismo autor, menciona que cuando un producto se encuentra la presencia de E.
Coli, esta evidencia la contaminación con heces fecales. Por lo que la prueba donde
se diluyo la solución con presencia de E. Coli para proliferar su crecimiento . Y esta
solución fue colocada colocada en una cámara de luz ultra violeta. De esta forma
se determinará la efectividad de la luz UV. Luego al agregarle el reactivo de kovacs,
el resultado para la presencia de E. Coli fue positiva, lo que determina que la luz UV
no tuvo el efecto esperado en la muestra, a pesar de la alta efectividad de este
medio físico de esterilización. La E. La principal razón por la cual se piensa que la
luz UV no tuvo el efecto esperado en la muestra es debido a la densidad que esta
presentaba ya que el efecto de la luz UV es solamente superficial, de manera que
para poder esterilizar de manera eficiente una muestra de agua se requerirá que el
agua fluya por un “chorro delgado”.

Con base en (Mast Group , 2009) el agar recuento total se utiliza únicamente para
darle un recuento de las UFC para determinar las de bacterias presentes. Estas

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darán positivo si se da una formación de colonias que pueden presentar diferentes
coloraciones. Lo que identifica la cantidad de UFC que existen dentro del producto
identificado. En la caja de Petri donde fue realizado el procedimiento C, donde se
colocó la mitad con manos sucias y la otra mitad con manos limpias en el agar
recuento total tuvo como resultado, el apartado 3 de la tabla de resultados. Se
determino que se redujo las bacterias totales presentes en las manos. Esto
evidencia la acción del jabón desinfectante al lavarse las manos. El mecanismo de
acción del jabon desinfectante es la desnaturalización de proteínas, debido a la
presencia de alcohol etílico, propílico e isopropílico. Teniendo buena acción contra
las formas vegetativas de las bacterias Gram + y - , bacilo tuberculoso, hongos y
virus, hepatitis B y VIH. Siendo su aplicación segura para la piel y no presenta
efectos adversos, solo sequedad de la piel en algunos casos de uso de
formulaciones no cosméticas. Es de rápida acción, incluso desde los 15 segundos.
Aunque no tiene efecto químico de persistencia su efecto biológico de daño
microbiano permanece por varias horas. Esta prueba realizada es común en la
industria, debido a que así cuidan la higiene del producto por medio de saber la
cantidad bacteriana en las manos de los trabajadores, y el control de lavado de
manos. Este deberá tener un estándar diferente según sea el área industrial que
sea analizada.

Conclusiones

1. El clorhexadrina, el amonio, el peróxido de hisrogeno y el cloro son agentes

eficaces para la esterilización de salmonella.

2. La luz ultravioleta es altamente afectiva para la esterilización superficial de

muestras ante la de Echerichia Coli , dando como resultado la destrucción
total de esta bacteria.

3. El jabón antibacterial desinfectante es altamente efectivo en la destrucción

de la mayoría de bacterias por su mecanismo de acción de desnaturalización
proteíca. Lo que disminuye a un tercio de las bacterias totales al lavarse las
manos.

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 Bibliografía

1. britanialab. (2016 ). Obtenido de

http://www.britanialab.com/productos/B02112%20REV%2001-
RECUENTO%20EN%20PLACAS%20AGAR.pdf

2. Mast Group . (2009). Obtenido de S.S Agar :

http://www.mastgrp.com/IFUS/IFU345_SPA.pdf

3.Merck Milipore . (2014). Obtenido de Chromocult Agar para coliformes:

https://www.merckmillipore.com/PE/es/product/Chromocult-Coliform-Agar,MM_NF-
C164546

4. Mibius. (2011). Obtenido de Fluorocult:

http://www.mibius.de/out/oxbaseshop/html/0/images/wysiwigpro/Fluorocult_LMX_B
roth_modif_110620_engl.pdf

5. Prescott, L., Harley, J., & Klein, D. (2004). Microbiología. España: McGrawHill.

6. Probiotek . (2011). Obtenido de http://www.probiotek.com/productos/reactivos/medios-

de-cultivo-reactivos/agar-mrs-de-man-rogosa-y-sharpe/