Práctica 7 “Cromatograf ía en columna”

Ixtlalli Barragan Guerrero

Introducción:

La base de la técnica es que cuando un determinado soluto interactúa con dos fases, una de ellas, habitualmente
sólida, llamada fase estacionaria, experimenta una serie de procesos (adsorción en fase sólida, solubilización en cada
fase, arrastre por la fase móvil, etc.) que, en último extremo, llevan a que el soluto se reparta entre ambas fases. En el
equilibrio, la relación entre las concentraciones del soluto entre ambas fases es constante, y se denomina coeficiente
de reparto.

En su lugar, y relacionado con él, se emplea el denominado Rf, característico de cada sustancia, definido como la
relación entre la distancia que recorre dicha sustancia y la que recorre la fase móvil. Las más insolubles tendrán, en el
disolvente empleado, un Rf próximo a cero, mientras las más solubles se acercarán a uno.
Cromatografía en columna:

Se emplea para la separación de mezclas o purificación de sustancias a escala preparativa. Como fase estacionaria se
usa, generalmente, gel de sílice o alúmina dentro de una columna. La elección del disolvente es crucial para una
buena separación. La columna se prepara mezclando el soporte con disolvente y se rellena la columna poniendo en el
fondo de ésta un poco de algodón o lana de vidrio, para evitar que la sílica o la alúmina queden retenidas en la
columna y que el disolvente se engrasada hasta el nivel del soporte. Este relleno es lo que se conoce en cromatografía
como la fase estacionaria. A través de la columna se hará pasar una corriente de un disolvente o mezcla de
disolventes denominada eluyente y/o fase móvil.

Sin embargo, no todos los compuestos avanzan a la misma velocidad, y esta es precisamente la clave de la
cromatografía. Algunos compuestos se ven más fuertemente retenidos por el adsorbente (fase estacionaria) y por lo
tanto avanzarán más despacio. Por el contrario, otros apenas son retenidos y avanzarán a mayor velocidad. En general
se dice que la separación en la cromatografía se basa en la afinidad diferencial de los distintos compuestos por la fase
móvil o la fase estacionaria.

Cromatografía en Capa fina

La separación de mezclas de moléculas mediante la cromatografía de capa fina se basa en el principio del reparto
entre dos fases. En general, una cromatografía se realiza permitiendo que la mezcla de moléculas que se desea
separar (muestra) interaccione con un medio o matriz de soporte que se denomina fase estacionaria. Un segundo
medio (la fase móvil) que es inmiscible con la fase estacionaria se hace fluir a través de ésta para "lavar" (eluír) a las
moléculas en la muestra.

En la cromatografía de capa fina, la fase estacionaria es una delgada capa de un soporte sólido granulado, tal como
gel de sílica, alumina, ácido silícico u otros, que se depositan sobre una placa de vidrio, aluminio u otro soporte
inerte. Para que adquiera firmeza y no se desmorone, la capa de fase estacionaria se aglutina con una pequeña
cantidad de sulfato de calcio u otro agente cementante.

Resumen

La cromatografía es un
método de separación de
sustancias, en esta práctica
se analizó la cromatografía
1
en columna, ésta es muy
útil como método de
separación de sustancias
ya que nos sirve para
poder
separar diferentes
componentes de una
muestra en cantidades
considerables, el principio de
separación
de ésta técnica es similar
al de la cromatografía en
capa fina, ya que se usa
una fase móvil y una
estacionaria y la separación
se da de acuerdo a la
polaridad de los
componentes de la muestra,
en este
2
caso la fase estacionaria fue
sílica, como sabemos esta es
muy polar por lo que de
acuerdo al principio
destacado anteriormente
esperamos que en la fase
móvil separemos primero
las sustancias menos
polares, en el caso de ésta
práctica fue el ácido
acetilsalicílico el cuál fue
separado de cafeín
Las técnicas cromatografías se emplean para separar los componentes individuales de una mezcla y, en ciertos casos,
para identificar un compuesto comparando su comportamiento cromatográfico con el de sustancias conocidas
empleadas como patrón. Se usa la cromatografía en capa fina ya que puede verse una fase estacionaria y una fase
móvil, como sabemos la estacionaria fue la sílice y es muy polar por lo cual se espera que en la fase móvil separemos
primero las sustancias menos polares, en este caso será el ácido acetilsalicílico separado por la cafeína.

Resultados:

Experimento 1: Acetato de etilo (1D)

Experimento 2: Hexano(2D,3D), Acetato de etilo(2D,3D), metanol(2D,3D)
Experimento 3: Acetato de etilo(4D,5D)
Experimento 4: ASPIRINA, cafeina
Experimento Experimento 2 Experimento Experimento
1 3 4
Fase móvil 3.3 Hexano 0 4D 3.4 5D1.3 2.5
Fase 4.6 Hexano 3.5 4.5 4.3
estacionaria
Fase móvil Metanol 2D 2.2 3D
2.8
Fase Metanol 4.2

3
estacionaria
Fase móvil Ac.Etilo 2D 1.3 3D
3.5
Fase Ac. Etilo 4.5
estacionaria

Discusión de resultados:

 Se utilizó la técnica de cromatografía en columna para separar individualmente al ácido benzóico de el

azul de metileno con el que se encontraba mezclado, identificándolo comparando su comportamiento
cromatográfico con el de la sustancia patrón de ácido benzóico puro eluido en AcOet.
 Se realizaron 6 muestras de cada uno se colocaron en 3 cromatoplacas para realizar cromatografía en
capa fina, 2 por cada una y en medio se colocó el testigo de ácido benzóico para determinar dependiendo
de las muestras que subieran en cuáles de ellas existía aún ácido benzoico.
 Se observó que en la última placa se separó la cafeína de la aspirina
 En el experimento tres logre observar que el 5D alcanzó un nivel más alto en fase móvil que el 4D

Cuestionario:

1. Indique alguna de las aplicaciones de la cromatografía de adsorción en columna y capa fina

Capa fina : separación de aminoácidos
Columna : separación de colorantes, proteínas
2. Cuál es la diferencia entre cromatografía en capa fina y la cromatografía en papel.
Igual que la realizada en papel, la cromatografía en capa fina se basa en la distribución en dos fases, la
estacionaria, compuesta por una capa de hidratación y la móvil, que se trata de un solvente orgánico. La única
novedad radica en el soporte, ya que no es una hoja de papel, sino una capa de 0,1 a 1 mm de óxido de silícico
o celulosa, apoyada en un subsoporte de cristal.
La capa se aplica manualmente mediante un aparato que deja una ranura regable por la que sale la pasta
denominada Silicagen, este aparato la vamos deslizando por la placa a velocidad constante para conseguir la
textura deseada, no hay que decir que a mayor velocidad menor grosor de la capa. Siempre se realiza de forma
ascendente, principalmente por que el soporte es rígido. La cromatografía en capa fina aguanta tratamientos
de visualización mucho más potentes debido al subsoporte y que es más rápida, pudiendo terminar la corrida
en una media hora.
3. ¿Qué debe hacerse para encontrar el eluyente adecuado para un compuesto que se purificara por
cromatografía en columna?
Si la sustancia es polar, el eluyente debe de ser un eluyente polar, pero si no es polar, como fue el caso del ácido
benzoico, se debe de utilizar un eluyente no polar, con el fin de que se alcance la máxima solubilidad y que las
fuerzas intermoleculares ayuden a que el soluto pase a través de la columna.
4. ¿Porque es necesario realizar una cromatografía en capa fina a los eluatos obtenidos de la columna
cromatografía?
Esto es debido a la polaridad de la sustancia, ya que el eluyente es un eluyente no polar, y el ácido benzoico
también es una sustancia no polar, por su solubilidad esta eluye primero, y en el caso del colorante, este debe
de ser más polar que el ácido benzoico, por lo que eluye a una velocidad menor y por esta razón se absorbe en
la fase estacionaria
5.Escriba una lista de eluyente utilizados en la cromatografía en comuna de orden de polaridad creciente

4
Conclusiones:

Al finalizar la práctica se realizó la cromatografía por columna se emplea para la separación de mezclas o
purificación de sustancias, reteniendo en su fase estacionaria (en este caso la alúmina) a algunos compuestos por
su propiedad de adsorción, por la que a través de ella se hará pasar una corriente de disolventes o mezcla de
disolventes (fase móvil : eluyente) que arrastrará a los compuestos constituyentes de la mezcla, haciéndoles
avanzar a través de la columna. Este tipo de cromatografía se utiliza para saber en que recipientes se encuentra
un componente buscado y para determinar la cantidad de este cuantitativamente, contrario a la cromatografía
por capa fina donde solo se puede hacer un análisis cuantitativo. Logramos purificar la última muestra y
conocimos las fases de cada uno.

Bibliograf ía:
 http://depa.pquim.unam.mx(9/oct/2006)
 http://www.fq.uh.cu/dpto/qi/Aimee/sintesis_inor_web/conf_3.htm (28/ago/2006)