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Universidad Nacional Mayor de San Marcos

Facultad de Química e Ingeniería Química

I. FUNDAMENTOS DEL METODO DE ANALISIS


Las mediciones espectrometrías con radiación ultravioleta son útiles para detectar
grupos de cromóforos. Puesto que grandes partes hasta de las moléculas orgánicas
más complejas son transparentes a la radiación por encima de 180 nm, la aparición de
uno o más picos en la región de 200 a 400 nm es un indicio claro de la presencia de
grupos insaturados o de átomos como el azufre o los halógenos. A menudo, la identidad
de los grupos absorbentes se puede determinar al comparar el espectro de un analito
con los de moléculas simples compuestas por varios grupos de cromoforos. Por lo
regular, los espectros en la región ultravioleta carecen de la suficiente estructura fina
para permitir que un analito sea identificado en forma definitiva. Por consiguiente, los
datos cualitativos ultravioleta se tienen que complementar con otra evidencia física o
química, como los espectros infrarrojos, de resonancia magnética nuclear y de masas,
así como información sobre las temperaturas de solubilidad y los puntos de fusión y de
ebullición.

Los espectros en la región ultravioleta para el análisis cualitativo se miden usando casi
siempre soluciones de un analito diluido. En el caso de compuestos volátiles los
espectros de fase gaseosa son más útiles a menudo que el espectro de fase liquida o
de soluciones. Al elegir un solvente no solo se tiene que tener en cuenta su
transparencia, sino también sus posibles efectos sobre el sistema absorbente.

Nitratos en aguas:

El contenido de nitratos es un indicador importante de la calidad del agua y ha


demostrado tener un alto peso estadístico a la hora de clasificarla (Calvo-Brenes y Mora-
Molina, 2010). El ion nitrato tiene un origen natural, pero por el uso de fertilizantes
inorgánicos, principalmente, o por residuos humanos o animales se puede introducir en
exceso, llegar por filtración o escorrentía hasta las aguas superficiales y subterráneas y
ser acumulado en concentraciones muy altas para la salud humana (Galloway et al.,
2003). Ya sea por los procesos agroindustriales, residuos domésticos o residuos
industriales, los nitratos en altas concentraciones multiplican el crecimiento de
organismos vegetales, elevan el nivel de fotosíntesis y agotan el oxígeno de las aguas
superficiales frescas, dañando la vida y los ecosistemas.

La Organización Mundial de la Salud (OMS) norma el máximo permitido en 50 mg/L


para proteger a los lactantes alimentados con biberón contra la metahemoglobina y
recomienda concentraciones menores a 10mg/L (OMS, 2013). A nivel nacional, el
máximo permitido de nitratos es también de 50 mg/L, según lo indica el Reglamento
para la Calidad de Aguas Potables (Decreto N° 32324-H).

Por otra parte, el ion nitrato presenta un máximo de absorción de entre 200nm y 230nm,
lo que permite cuantificarlo por espectrofotometría directa en el ámbito de la radiación
ultravioleta. Este método es sensible a interferencias por cloruros y bromuros que se
encuentran en altas concentraciones en las aguas de estuarios y en materia orgánica
disuelta en aguas dulces.

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Método Espectrofotométrico Ultravioleta selectivo(𝑵𝑶−


𝟑 ):

La técnica de monitoreo espectrofotométrico ultravioleta (UV) mide la absorbancia del


nitrato (𝑁𝑂3− )a 220 nm y es adecuada para la determinación rápida de (𝑁𝑂3− )y el
monitoreo de aguas con bajo contenido de materia orgánica, como aguas naturales sin
contaminar y fuentes de agua potable. Debido a que la materia orgánica disuelta
también puede absorber a 220 nm y a que el (𝑁𝑂3− )no absorbe a 275 nm, se usa una
segunda medición a 275 nm para corregir el valor de (𝑁𝑂3− ). La aplicación de esta
corrección empírica está relacionada con la naturaleza y concentración de materia
orgánica y puede variar de una muestra a otra. Consecuentemente, este método no es
recomendado si se requiere una corrección significativa para absorbancia de materia
orgánica, aunque puede usarse en el monitoreo de niveles de (𝑁𝑂3− ) en un cuerpo de
agua con un tipo constante de materia orgánica. Los factores de corrección para la
absorbancia de la materia orgánica se pueden establecer por el método de adiciones en
combinación con el análisis del contenido original de (𝑁𝑂3− ). por otro método. La
filtración de muestra tiene la intención de remover la posible interferencia de partículas
suspendidas. La acidificación con HCl 1N está designada para prevenir la interferencia
de concentraciones de hidróxido o carbonato hasta de 1000 mg 𝐶𝑎𝐶𝑂3 /𝐿. El cloruro no
tiene efecto en la determinación. La técnica de monitoreo espectrofotométrico
ultravioleta de (𝑁𝑂3− ) obedece la ley de Beer entre 0.03 y 5 mg (𝑁𝑂3− ) − 𝑁 /𝐿 .

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II. DESCRIPCION DE LA TECNICA EMPLEADA


La técnica empleada podemos medir la absorbancia del analito directamente o después
de que ha reaccionado con un reactivo y se forma un producto capaz de absorber la
radiación. La primera técnica tiene más restricciones, en particular con muestras
complejas porque pocas veces se puede encontrar una longitud de onda en la que solo
se absorba el analito. En ocasiones, las separaciones previas ayudan a eliminar las
especies que puedan absorber e interferir con la determinación espectrofotométrica del
analito. En otros casos, las interferencias se pueden corregir con una segunda medición
de absorbancia. Un ejemplo de este segundo enfoque es la determinación de nitrato en
muestras de aguas naturales (lo realizado). El ion nitrato absorbe a 220 nm, y la materia
orgánica disuelta también puede absorber a esta longitud de onda. Para corregir las
interferencias debidas a la materia orgánica, se toma una segunda lectura de
absorbancia a 270 nm, donde no absorbe el nitrato. Aunque tome más tiempo a veces
es preferible hacer una separación previa para eliminar las especies que interfieren.

También es frecuente tratar la muestra con un reactivo selectivo, de modo que en la


reacción se forme una especie que absorba una región donde no haya interferencias.

En la experiencia dada realizamos los siguientes pasos:

 Solución patrón primario de nitrato (100ppm(𝑵𝑶− 𝟑 ) − 𝑵): se disolvió 0.1805


gKNO3, previamente secado a 105 °C durante 24 horas, en agua, agregar 2 mL
de cloroformo y enrazar en fiola de 250mL. Esta solución contiene 100
ppm(𝑁𝑂3− ) − 𝑁 (es estable por 6 meses).
 solución patrón intermedia de nitrato (5ppm(𝑵𝑶− 𝟑 ) − 𝑵): diluir 5 mL de
solución patrón primario de nitrato con agua destilada, llevar a fiola de 100 mL,
enrazar y homogenizar.
 Soluciones para la curva de calibración: se preparan soluciones de 0.1, 0.2,
0.3, 0.4, 0.5 ppm por dilución de la solución intermedia, agregar 1 mL de HCl 1N,
llevar a fiola de 50 mL, enrazar y homogenizar.
 Solución de 𝑯𝑪𝒍, 𝟏𝑵: diluir 8,3 mL de 𝐻𝐶𝑙 concentrado en agua destilada y
enrazar en fiola de 100 mL, homogenizar la solución por inversión.
 blanco: en una fiola de 50 ml colóquese aproximadamente 45 ml de agua ultra
pura, añádase 1 ml de solución de HCl 1N y luego complétese el volumen hasta
el enrase.
 Tratamiento de la muestra: en una fiola de 50mL, añadir 1,2,5,10 o 25 mL,
según sea el contenido de nitrato de la muestra transparente, filtrada si fuera
preciso y antes de enrazar añádase antes de enrazar 1 ml se solución de HCl
1N y mezcle vigorosamente. El HCl tiene por objeto impedir interferencias por
concentraciones de hidróxido o carbonatos que pueden estar en las muestras.
Interferencias

Interfieren la materia orgánica disuelta, los surfactantes, (𝑵𝑶− 𝟔+


𝟐 ) y (𝑪𝒓 ). Pueden
interferir varios iones inorgánicos, que no se encuentran normalmente en el agua
natural, como clorito y clorato. Las sustancias inorgánicas se pueden compensar con un
análisis independiente de concentraciones y la preparación de curvas de corrección
individuales.

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III. INSTRUMENTOS O APARATOS UTILIZADOS

Espectrofotómetro de doble haz


En un espectrofotómetro de doble haz, la luz pasa alternadamente por la cubeta de
la muestra y de la referencia, dirigida por un motor que gira un espejo, que de esta
manera entra y sale del paso de la luz. Cuando el cortador no desvía el haz, la luz
pasa a través de la muestra, y el detector mide la potencia radiante que llamamos P.
Cuando el cortador desvía el haz a través de la cubeta de referencia, el detector mide
P0. El haz se corta varias veces por segundo, y el circuito compara automáticamente
P y P0, dando así la transmitan cía y la absorbancia.
Este procedimiento permite hacer una corrección automática de las variaciones de
intensidad de la fuente, y de la respuesta del detector con el tiempo y la longitud de
onda, porque se comparan con mucha frecuencia la potencia que sale de las dos
muestras.
Los espectrofotómetros de mayor calidad destinados a investigación también
permiten un barrido automático de longitudes de onda y un registro continuo de
absorbancia.Cuando se registra un espectro de absorbancia, es de rutina registrar
primero el espectro de la línea base con las disoluciones de referencia (disolvente
puro o blanco) en las dos cubetas. Después se resta el espectro base de la
absorbancia medida de la muestra, para obtener así la verdadera absorbancia de la
muestra a las distintas longitudes de onda.
En la figura 1 se muestra un espectrofotómetro visible de doble haz. La luz blanca
procede de una lámpara de halógeno de cuarzo (como la de luz larga de un
automóvil), y la fuente ultravioleta es una lámpara de arco de deuterio, que emite en
el intervalo de 200-400 nm. En un momento dado sólo se utiliza una de ellas. La red
de difracción 1 selecciona una banda estrecha de longitudes de onda, que entra en
el monocromador, y éste selecciona una banda aún más estrecha, que es la que
pasa a través de la muestra. Después de cortado el haz, y una vez que pasa por las
cubetas de la muestra y referencia, la señal es detectada por un tubo
fotomultiplicador, que produce una corriente eléctrica proporcional a la potencia
radiante que llega al detector.

Fig. 1 Diagrama esquemático de un espectrofotómetro de doble haz

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Espectrofotómetro de ultravioleta visible


El instrumento con el que se trabajó en la experiencia fue un Espectrofotómetro UV
- Visible, Shimadzu 1700.SHIMADZU que es un espectrofotómetro de doble haz que
nos evita estar en cada medida de absorbancia poner el blanco de referencia
porque tiene un comportamiento para este, las celdas paralelopipedas con las que
trabajamos fueron de cuarzo con un lado transparente a al radiación y el otro difuso
por el no pasa la radiación y por donde se puede manipular, se pude trabajar con el
espectrofotómetro usando la pantalla liquida que tiene o desde una computadora
usando el software UV PROVE.

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ESPECIFICACIONES
Spectra l ancho Luz dispersa Nivel de ruido
de banda 1 nm (190 a 900 0.04% máx. (220.0 nm NaI, 0.002 Abs (PP) 0.0002 A
nm) 340.0 nm NaNO2) (RMS) (700 nm)

Dimensiones SISTEMA Fuente


550W x 470D x 200 H (mm) FOTOMÉTRICO de luz Lámpara halógena de
(altura máxima 380 mm) Óptica de doble haz 20 W, lámpara de deuterio
Lámparas de Deuterio y Ajuste de posición
Peso Tungsteno automático de fuente de luz
17 kg incorporada
Rango fotométrico
Rango de longitud de Absorbancia: -0.5 a +3.0 Monocromador
onda Transmisión de Abs : 0.0 a corregido por aberración
190.0 a 1100.0 nm 300% rejilla holográfica encendida

Pantalla de longitud de Rango de grabación Detector


onda Absorbancia: -3.99 a +3.99 Fotodiodo de silicona
Incrementos de 0.1 nm Transmisión de Abs : -399 a
+ 399% Compartimento de
Precisión de longitud de muestra
onda ± 0.3 nm Fotométrico precisión Dimensiones internas:
± 0.004 Abs (a 1.0 Abs), 110.0W x 230.0D x 105.0H
Repetibilidad de longitud usando el filtro NIST930D (mm)
de onda ± 0.1 nm. ± 0.002 Abs (a 0.5 Abs)
Distancia entre haces de
Velocidad de escaneo de Repetibilidad fotométrica luz:
longitud de onda Velocidad ± 0.002 Abs (a 1.0 Abs) 100.00 mm
de rotación de longitud de ± 0.001 Abs (a 0.5 Abs)
onda: Aprox. 6000 nm / min Instalación:
Estabilidad de la línea de Fija con dos tornillos
Velocidad de exploración base
de longitud de onda: 0.001 Abs / h max (700 nm, Tamaño del haz:
aprox. 3000 nm / min a 10 Después de 1 hora desde el 9 x 0.5 mm
nm / min Longitud de encendido)
Requisitos de energía
onda de intercambio de la Llanura de referencia 100, 120, 220, 240 VCA
lámpara ± 0.001 Abs (1100 mm a 200 50/60 Hz, 130 VA
295.0 nm a 364.0 nm (340.8 mm) Después de 1 hora
nm) desde el encendido REQUISITOS
AMBIENTALES
Temperatura: 15 a 35 ° C,
humedad: 35 a 80%

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Instrucciones para el manejo del Espectrofotómetro UV-Visible SHIMATZY 1700

1) Retirar la bolsa de silice, del compartimiento de portaceldas del


espectrofotometro UV. visible.
2) Encender el supresor de picos, el estabilizador, el espectrofotometro
(boton lado izquierdo), levantar la pantalla del espectrofotometro UV.
Visible, se completa la verificacion del instrumento (Inicio y Mode).
3) Encender la PC, el monitor. Presionar en el espectrofotometro PC
CONTROL (F4) y cerrar la pantalla.
4) Ingresar al software UV PROBE, luego al modo SPECTRUM y presionar
CONNECT.
5) Ir a EDIT e introducir datos solicitados:
Wavelengh rang: Start: 350, End: 190. Scan: fast. Single: simple.
Parametros instruments: Absorbancia.
No modificar: Path lenght: 10 nm. Slit wicht:1.0 mm fixed.
Light source: 340,8
S/R Exchange.
Click en ACEPTAR.

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IV. CALCULOS
Cálculo de la concentración de la solución estándar madre en PPM

1) Preparación del patrón primario:


Partiendo de la solución madre de KNO3 =0.1805 g/250 ml, se calcula el
número de mg NO3–-N / 1L solución:

Entonces:
0.1820g 𝐾𝑁𝑂3 14 g 𝑁𝑂 −3 − N 103 𝑚𝑙 𝐾𝑁𝑂3 1000 𝑚𝑙
× × × = 100 𝑝𝑝𝑚
250 ml 101.11g 𝐾𝑁𝑂3 𝑔 𝐾𝑁𝑂3 𝐿

2) Preparación de la solución patrón intermedia de 5ppm a partir de la


solución patrón primario.

100𝑝𝑝𝑚patrón primario × 𝑣1 = 100𝑚𝑙 × 5 𝑝𝑝𝑚solución patrón intermedia


𝑣1 = 5𝑚𝑙

3) Preparación de patrones a partir de la solución 5ppm:

- P1: Obtener 0.1ppm a partir de 5ppm en 50 ml


5ppm x 𝑣1 = 0.1ppm x 50ml
𝑣1 = 1𝑚𝑙

- P2 : Obtener 0.2ppm a partir de 5ppm en 50 ml


5ppm x 𝑣1 = 0.2ppm x 50ml
𝑣1 = 2𝑚𝑙

- P3 : Obtener 0.3ppm a partir de 5ppm en 50 ml


5ppm x 𝑣1 = 0.3ppm x 50ml
𝑣1 = 3𝑚𝑙
- P4 : Obtener 0.4ppm a partir de 5ppm en 50 ml
5ppm x 𝑣1 = 0.4ppm x 50ml
𝑣1 = 4𝑚𝑙

- P5 : Obtener 0.5 ppm a partir de 5ppm en 50 ml


5ppm x 𝑣1 = 0.5ppm x 50ml
𝑣1 = 5𝑚𝑙

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Cálculo de la concentración de la muestra de aguas

De todos los valores registrados en la tabla para λ máxima =198 nm, se graficó
en UVProbe Absorbancia Vs. Concentración (imagen Nº1).

Mediante esta grafica se obtienen:

Cielo CM1 = 1.005 ppm

Vida CM2 = 0.272 ppm

San Luis CM3 = 0.165 ppm

San Mateo CM4 = 0.181 ppm

Alameda CM5 = 0.246 ppm

Estos datos son concentraciones de nitrógeno, pero nosotros deseamos


nitratos en las muestras de aguas consumibles.

A) Hallamos la concentración de nitratos en agua Cielo (M1)

Con los datos de C muestra según grafico

M1 x 10ml = C M1 *50ml

M1= 1.005 x 50ml / 10ml

M1= 5.03 mg NO-3 – N x 62 g/ mol NO-3

L 14 g/ mol N

C1 = 22.25 mg NO-3 – N = 22.25 ppm NO-3

B) Hallamos la concentración de nitratos en Agua Vida (M2)

M2 x 2ml = C M2 *50ml

M2= 0.272 x 50ml / 2ml

M2 = 6.8 mg NO-3 – N x 62 g/mol NO-3

L 14 g/ mol N

M2 = 30.11 mg NO-3 – N = 30,11 ppm NO-3

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C) Hallamos la concentración de nitratos en agua San Luis (M3)

M3 x 25 ml = C M3*50ml

M3= 0.165 x 50ml / 25ml

M3= 0.33mg NO-3 – N x 62 g/mol NO-3

L 14 g/ mol N

M3 = 1.46 mg NO-3 – N =1.46 ppm NO-3

D ) Hallamos la concentración de nitratos en agua San Mateo (M4)

M3 x 25 ml = C M3*50ml

M3=0.181 x 50ml / 25ml

M3= 0.36 mg NO-3 – N x 62 g/mol NO-3

L 14 g/ mol N

M3 = 1.6 mg NO-3 – N =1.6 ppm NO-3

E ) Hallamos la concentración de nitratos en agua Alameda (M 5)

M3 x 1 ml = C M3*50ml

M3=0.246 x 50ml / 25ml

M3= 12.3 mg NO-3 – N x 62 g/mol NO-3

L 14 g/ mol N

M3 = 54.47 mg NO-3 – N = 54.47 ppm NO-3

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TABLA DE DATOS Y RESULTADOS

TABLA Nº 1: Solución estándar madre (100 ppm)

Solución de KNO3 0.1820 g /250ml

TABLA Nº 2: Preparación de patrones a partir de la solución intermedia (5ppm)


para la curva de patrón:

Solución Concentración
Estándar
intermedia (ml) (ppm)
Std1 1 0.1
Std 2 2 0.2
Std 3 3 0.3
Std 4 4 0.4
Std 5 5 0.5
Bk 0 0

TABLA Nº 3: Muestra de Aguas Cielo (M1) Y Vida(M2)

Muestra Volumen (ml)


M1 10
M2 2
M3 25
M4 25
M5 1

TABLA Nº 5: Calculo de la concentración de la muestras de aguas bebibles

Por el método gráfico


Muestra
(ppm NO-3)
M1 22.25
M2 30.11
M3 1.46
M4 1.6
M5 54.47

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V. GRAFICAS

Imagen 1:

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VI. DISCUSION DEL METODO EMPLEADO


La determinación de nitratos en aguas es difícil dado los procedimientos complejos
con los que se cuentan, la gran posibilidad de encontrar sustancias interferentes y
los rangos de concentración limitados que presentan las diferentes técnicas.

Entre los métodos que aparecen para la cuantificación de nitratos en aguas, se


pueden citar: Cromatografía iónica, método espectrofotométrico ultravioleta selectivo,
método del electrodo de nitrato, método de reducción de cadmio, método del cloruro
titanoso, método automatizado de reducción de hidracina, método automático de
reducción de cadmio.

El método espectrofotométrico ultravioleta, no es un método específico para la


determinación de ion nitrato en agua y debe ser utilizado con los recaudos
necesarios. El rango de aplicación de este método es de 0.01 a 10 mg N(NO3-) /L..
Este método presenta la dificultad de no ser adecuado para el estudio de aguas
contaminadas, es decir sólo es válida su aplicación para muestras de agua con bajo
contenido en materia orgánica.

Para la determinación de ion nitrato en aguas subterráneas, el método


espectrofotométrico ultravioleta selectivo presenta como características principales
la baja demanda de tiempo y reactivos necesarios y su fácil ejecución.
Comparativamente, esta es una ventaja frente al método de la reducción con
hidracina.

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VII. DISCUSION DE RESULTADOS

 El λmax en nitratos es igual a 198 nm.

 Luego de la obtención de la curva de calibración, al calcular la concentración de


los nitratos de las diferentes marcas de agua, el contenido de nitratos en el agua
de alameda supera los 50 ppm, pasando el limite permisible según la OMS.

 Aun teniendo muestras muy diluidas se pueden analizar ya que de trabajar con
soluciones más concentradas se obtendría mayor error.(Alta sensibilidad del
equipo)

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VIII. CONCLUSIONES

 Los instrumentos de doble haz hacen medidas de forma prácticamente continua


de la luz que atraviesa las celdas de la muestra y de la referencia.

 Los datos obtenidos de esta experiencia resultaron beneficiosos para las aguas
san Mateo y san Luis debido a su baja concentración de nitratos presentes en
estas que son mucho menores al límite máximo permisible de nitratos en aguas
consumibles (Anexo 1).

 Mientras que para el agua Vida y Cielo no fueron muy beneficiosas debido a su
gran cantidad de nitratos pero aun así están por debajo del límite máximo
permisible de nitratos en aguas consumibles.

 Finalmente, el agua de la alameda sobrepasa los límites de máximo permisibles


de nitrato en aguas consumibles.

IX. RECOMENDACIONES

 Homogenizar por inversión adecuadamente los patrones y muestras antes de


cada lectura ya que si no se efectúa este procedimiento y el equipo no leerá
correctamente las absorbancias.

 No tocar con los dedos las paredes de las celdas de cuarzo por donde debe
pasar la luz, las huellas dactilares dispersan y absorben la luz es por eso que se
coge de las partes opacas.

 No dejar mucho tiempo abierta la tapa del espectrofotómetro UV ya que podría


interferir en los resultados.

 Los resultados obtenidos de la concentración de NO 3-, N- son por debajo de lo


permitido de 50 ppm según la OMS excepto el del agua de la alameda de la
facultas de FQIQ. Por tanto de esto se concluyó que el agua de la alameda no
es recomendable para el consumo.

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X. BIBLIOGRAFIA

 http://www.triadscientific.com/en/products/uv-vis-nir-systems/1122/shimadzu-uv-
1700-uv-pharmaspec-spectrophotometer/258843

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XI. ANEXOS

Anexo 1 :

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