INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA SUPERIOR DE INGENIERÍA QUÍMICA

E INDUSTRIAS EXTRACTIVAS
DEPARTAMENTO DE FORMACIÓN BÁSICA
PERIODO 20/1

PRACTICA 3:
CROMATOGRAFIA EN COLUMNA

Alumno: Lopez Ruiz Leonardo

Grupo: 2IM33
Profesora: Murillo Villagrana Apolonia

PRACTICA 1: MODELOS MOLECULARES

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1.OBJETIVOS, ALCANCES Y METAS

Objetivos:
1.- Describir las técnicas cromatograficas de: elución, análisis frontal y
desplazamiento, tomando como ejemplo la cromatografía en columna.
2.- Desarrollar la cromatografía en columna empleando un solo eluyente o mezcla
de varios
3.- Purificar por columna el naranja II y controlar su separación por placa fina.
4.- Distinguir los distintos tipos de cromatografia
5.- Representar lo ocurrido en la experimental mediante fotografías.
6.- Diferenciar los distintos tipos de purificación.
7.- Establecer la importancia de la cromatografía en la industria.
8.- Analizar muestras de resultados
9.- Interpretar los resultados
10.- Relacionar los conceptos vistos en teoría en la experimentación

Alcances:
1.- Lograr los objetivos de la práctica.
2.- Aplicar la metodología correcta al realizar la experimentación.
3.- Establecer las representaciones de distintos tipos de cromatografía.
4.- Relacionar los distintos tipos de cromatografía.
5.- Conocer el material con el que trabajaremos a lo largo del laboratorio.
6.- Hacer las implementaciones de lo visto en teoría.
7.- Establecer los usos de la cromatografía.

Metas:
1.- Lograr la purificación de naranja II
2.- Realizar un claro análisis del procedimiento para realizar una cromatografía
3.- Resolver correctamente los ejercicios propuestos para la práctica.
4.- Establecer los pasos a realizar para la resolución de problemas.

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2.INVESTIGACIÓN BIBLIOGRAFICA

Cromatografia

La cromatografía es un método físico de separación para la caracterización de

mezclas complejas cuyo objetivo es separar los distintos componentes, la cual tiene
aplicación en todas las ramas de la ciencia; en el principio de retención selectiva,
cuyo objetivo es separar los distintos componentes de una mezcla, permitiendo
identificar y determinar las cantidades de dichos componentes. Diferencias sutiles
en el coeficiente de partición de los compuestos dan como resultado una retención
diferencial sobre la fase estacionaria y, por tanto, una separación efectiva en función
de los tiempos de retención de cada componente de la mezcla.
La cromatografía puede cumplir dos funciones básicas que se excluyen
mutuamente:
 Separar los componentes de la mezcla, para obtenerlos más puros y que
puedan ser usados posteriormente (etapa final de muchas síntesis).
 Medir la proporción de los componentes de la mezcla (finalidad analítica). En
este caso, las cantidades de material empleadas suelen ser muy pequeñas.

La cromatografía, (proviene del griego χρῶμα chrōma y γράφω gráphō, que

significan respectivamente "color" y "escribir, registrar", literalmente "escritura de
color", o "registro de color") , fue empleada originalmente con sustancias coloreadas.
Ya en 1850, Runge describió la formación de zonas coloreadas cuando se
depositaban gotas de sustancias colorantes sobre papel secante, pero el desarrollo
más importante vino con los experimentos de Mijaíl Tsvet (1872-1919), que empleó
por primera vez en 1906 el término "cromatografía". A comienzos del año 1903, Mijaíl
Tsvet, botánico ruso, logró separar una mezcla de pigmentos de plantas (clorofilas)
en una columna de carbonato de calcio. Más tarde, en 1910, cromatografió un
extracto de yema de huevo en una columna de inulina. Sus investigaciones, sin
embargo, no fueron utilizadas por otros investigadores hasta 1931. Esta demora
quizá se debió al hecho de que los trabajos de Tsvet fueron publicados en ruso y en
una revista que no tenía amplia circulación.
El rápido desarrollo de la cromatografía como herramienta analítica sensible no
ocurrió hasta 1931, cuando Kuhn, con Lederer y con Winterstein, empleó la técnica
para el análisis de pigmentos de plantas, confirmando los primeros trabajos de Tsvet
y su predicción de que el caroteno no era una sola sustancia, sino una mezcla de
varios homólogos estrechamente relacionados. Al mismo tiempo, el tamaño de las

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columnas empleadas fue aumentando para poder recuperar los componentes

separados. La técnica, por lo tanto, no era solo analítica sino preparatoria.
La cromatografía en columna por estos tiempo tenía aplicaciones limitadas, dado
que los componentes que se podían separar eran invariablemente lípidos. Pasaron
10 años antes de que Martin y Synge desarrollaran una técnica mediante la cual se
pudieran separar compuestos acuosos o hidrofílicos. Esto marcó un nuevo interés
en la técnica y en 1944 Consden, Gordon y Martin lograron separar mezclas
complejas de aminoácidos en papel y fueron premiados con el Premio Nobel por sus
trabajos. Al poco tiempo, en 1947, en Estados Unidos de Norteamérica, la Comisión
de Energía Atómica dio a conocer información sobre el uso de la cromatografía de
intercambio iónico para la separación de productos de fisión nuclear.
El desarrollo más reciente en el campo de la cromatografía se deriva de los trabajos
de Stahl, quien en 1956 presentó una técnica práctica mediante la cual una capa
delgada sílice gel, celulosa o alúmina era diseminada sobre una placa de vidrio. Esta
técnica, llamada cromatografía de capa fina, resultó en un análisis más rápido y más
sensible para el examen de mezclas complejas y, en muchos casos, ha sustituido a
otros métodos similares más antiguos de cromatografía en papel toche.
En 1959, Porath y Flodin introdujeron una nueva técnica llamada cromatografía de
filtración de gel. Esta se ha convertido en una poderosa y nueva herramienta para la
separación de sustancias de alto peso molecular, particularmente las proteínas, y ha
encontrado muchas aplicaciones en los campos de la bioquímica, la medicina, la
fisiología y la biología. La mayoría de las técnicas de filtración en gel utilizan
columnas y recientemente se han hecho trabajos con una combinación de filtración
en gel y materiales de intercambio iónico, logrando que las separaciones complejas
sean extremadamente rápidas y eficientes.
Los primeros equipos de cromatografía de gases aparecieron en el mercado a
mediados del siglo XX. A su vez, la cromatografía líquida de alta
resolución (HPLC High Performance Liquid Chromatography, en inglés) comenzó a
desarrollarse en los años 1960, aumentando su importancia en las décadas
siguientes, hasta convertirse en la técnica cromatográfica más empleada. Sin
embargo esto se irá modificando con el paso de los años.

Términos empleados en cromatografía

 Analito es la sustancia que se va a separar durante la cromatografía.

 Fase móvil es la fase que se mueve en una dirección definida. Puede ser un
líquido (cromatografía de líquidos o CEC). un gas (cromatografía de gases) o un
fluido supercrítico (cromatografía de fluidos supercríticos). La muestra que se
está separando/analizando (formada de analito/s y el disolvente) se inyecta en la
fase móvil que se mueve a través de la columna. En el caso de la cromatografía

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líquida de alta resolución, HPLC, la fase móvil es un disolvente no polar como

el hexano (fase normal) o bien algún disolvente polar (cromatografía de fase
reversa).
 Fase estacionaria es la sustancia que está fija en una posición durante la
cromatografía. Un ejemplo es la capa de gel de sílice en la cromatografía en capa
fina.
 Cromatografía analítica se emplea para determinar la existencia y
posiblemente también la concentración de un analito en una muestra.
 Fase enlazada es una fase estacionaria que se une de forma covalente a las
partículas de soporte o a las paredes internas de la columa.
 Cromatograma es el resultado gráfico de la cromatografía. En el caso de
separación óptima, los diferentes picos o manchas del cromatograma se
corresponden a los componentes de la mezcla separada.
 Cromatógrafo es el equipo que permite una separación sofisticada. Por
ejemplo, un cromatógrafo de gases o un cromatógrafo de líquidos.
 Cromatografía es el método físico de separación en el cual los componentes
que se van a separar se distribuyen entre dos fases, una de las cuales es
estacionaria (fase estacionaria) mientras la otra (la fase móvil) se mueve en una
dirección definida.
 Eluyente es la fase móvil que atraviesa la columna.
 Serie eluotrópica es una lista de disolventes clasificados según su poder de
dilución.
 Fase inmovilizada es una fase estacionaria que está inmovilizada sobre
partículas de soporte, o en la pared interior del tubo contenedor o columna
 Cromatografía preparativa se usa para purificar suficiente cantidad de
sustancia para un uso posterior, más que para análisis.
 Tiempo de retención es el tiempo característico que tarda un analito particular
en pasar a través del sistema (desde la columna de entrada hasta el detector)
bajo las condiciones fijadas. Véase también: Índice de retención de Kovats
 Muestra es la materia que va a ser analizada en la cromatografía. Puede
consistir en un simple componente o una mezcla de varios. Cuando la mezcla es
tratada en el curso del análisis, la fase o fases que contienen los analitos de
interés es llamada igualmente muestra mientras el resto de sustancias cuya
separación no resulta de interés es llamada residuo.
 Soluto es cada uno de los componentes de la muestra que va a ser separado.
 Disolvente es toda sustancia capaz de solubilizar a otra,y especialmente la fase
móvil líquida en cromatografía de líquidos.
 Capacidad de carga Es la cantidad máxima de muestra que puede ser separada
en una sola carga.
 Capacidad de fraccionamiento Es el número máximo de componentes que
pueden ser separados en una sola operación.
 Selectividad Es la capacidad de poder discriminar y distinguir entre dos
componentes.

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Cromatografía en columna

La cromatografía en columna es quizás el método más general, utilizado para la

separación, a la vez que para la purificación, de diferentes compuestos orgánicos
que se encuentren en estado sólido o líquido.
En este tipo de cromatografía, la fase estacionaria utilizada, es decir, el absorbente,
se coloca en el interior de una columna de vidrio, la cual finaliza con una llave para
controlar el paso de sustancias al exterior de la columna. La fase estacionaria se
impregna con el eluyente o fase móvil. Seguidamente la mezcla orgánica que nos
interesa separar la depositamos por la parte superior de la fase estacionaria, y así la
fase móvil podrá ir atravesando el sistema.
Los compuestos que se encuentran disueltos en la fase móvil, poco a poco saldrán
de la columna cromatográfica, y se recogen en fracciones. Las fracciones menos
polares, que son por lo general las que se retienen poco o nada en el absorbente,
serán las primeras en salir de la columna. En cambio, las sustancias más polares,
quedan retenidas por más tiempo en el absorbente, y a menudo es necesario el uso
de diferentes disolventes con la finalidad de incrementar su polaridad para que sean
arrastradas por estos.
El tiempo que se necesita para hacer fluir un compuesto por la columna, se conoce
con el nombre de tiempo de retención. Este tiempo varía, siendo característico de
cada compuesto en una condiciones cromatográficas determinadas, que varían
según el absorbente usado, el disolvente, la presión, el diámetro que tenga la
columna utilizada, etc.
El absorbente mayormente utilizado para las cromatografías en columna, es el gel
de sílice. A veces, en sustitución del gel de sílice, cuando éste es incompatible con
la mezcla a cromatografiar, se utilizan la alúmina o el florisil (silicato magnésico). La
cromatografía en columna puede realizarse por gravedad o a media presión. Cuando
se realiza a media presión, se conecta la cabeza de la columna a un compresor o a
una línea de aire comprimido.
La medida de las partículas de gel de sílice para realizar las cromatografías a media
presión debe ser más pequeñas que en el caso de la cromatografía por gravedad.
Si en la cromatografía por gravedad utilizásemos un gel de sílice con un tamaño de
partículas más pequeñas, no se produciría elución, pues se impediría el flujo del
disolvente. Pero en cambio, si aplicamos presión, entonces debido a la fuerza si se
produciría la elución por el disolvente.
A causa de la disminución del tamaño de las partículas del absorbente, se produce
una separación más eficaz. Generalmente la cromatografía a media presión,
produce mejores resultados que la cromatografía por gravedad, y además, al ser
más rápida, es la más utilizada.

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Cuando vamos a realizar una cromatografía en columna, lo primero que debemos

hacer es elegir un disolvente adaptado para nuestro caso, para así optimizar la
separación de los componentes de la mezcla. Dicha operación se produce a través
de cromatografía analítica en capa fina. La variante más influyente en la eficacia de
la separación de la cromatografía a media presión usando gel de sílice es el diámetro
de la columna, así como la cantidad de gel utilizado.
Para elegir el disolvente, primero se lleva a cabo una cromatografía en capa fina de
la muestra a analizar. El disolvente debe producir una buena separación de los
componentes de la mezcla en la placa, colocando el componente menos polar a un
Rf cercano a 0.3. En el caso de columnas pequeñas, lo ideal es usar un eluyente
menos polar que el conseguido en el resultado de la cromatografía en placa.
A veces se utilizan mezclas de disolventes y se hace una elución en gradiente. Para
esto, la cromatografía se inicia con una mezcla de disolventes de polaridad adecuada
para poder separar el componente que posea mayor Rf, y así, una vez recogido, se
aumentará poco a poco la polaridad para poder ir separando los componentes más
polares. Si cuando se empieza la cromatografía se usa un disolvente excesivamente
polar, los componentes de la mezcla eluirán conjuntamente, lo que llevaría a que la
separación no tenga lugar. Una de las mezclas de disolventes más utilizadas
es hexano/acetato de etilo.

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5.Desarrollo de la práctica

Práctica No. 3
“Cromatografía en
columna”

Colocación de algodón
en el estrechamiento de
embudo

Depositar sin derramar

por la salida del embudo
la sílica gel.

Verter dentro de la sílica,

hexano puro.

Aplicar muestra sobre la

sílica con hexano puro

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Preparación de cámara
cromatográfica

Vertir cetona en la
cámara

Colocar gis blanco en la

solución de la cámara

10.-Costo Beneficio
Para la realización de esta práctica no se tomó ningún tipo de riesgo, ya que se
contaba con equipo de protección personal para laboratorio, ya que estábamos
expuestos a diferentes sustancias químicas como lo fue con la sílica gel, hexano
puro y cetona, aunque ninguna de estas sustancias esta tóxica, son algo corrosivas
principalmente el hexano; pero en fines de uso no hubo ningún peligro que presentar
durante el desarrollo. A cambio de observación de cromatografía por columna y
llegar a conclusiones concretas y reforzados por la experimentación.

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11.-Usos y aplicaciones
La cromatografía describe un procedimiento químico en el que se separa una mezcla
en sus componentes individuales mediante una fase móvil y una fase estacionaria.
La fase estacionaria consta, según el procedimiento, de materia sólida o un líquido,
y la fase móvil de un líquido o gas.
Cromatografía en columna es una de las técnicas más útiles para purificar
compuestos. Esta técnica utiliza una fase estacionaria, que se embala en una
columna, y una fase móvil que pasa a través de la columna. Esta técnica aprovecha
las diferencias de polaridad entre compuestos, permitiendo que las moléculas suelen
estar separado. 1 las dos fases estacionarias más comunes para cromatografía en
columna son gel de sílice (SiO2) y alúmina (Al2O3), con más común utiliza fases
móviles siendo solventes orgánicos. 2 el solvente(s) para la fase móvil dependen de
la polaridad de las moléculas de ser purificada. Más compuestos polares requieren
típicamente más disolventes polares con el fin de facilitar el paso de las moléculas a
través de la fase estacionaria. Una vez finalizado el proceso de purificación del
solvente puede eliminarse de las fracciones recogidas utilizando un evaporador
rotatorio para producir el material aislado.
La cromatografía usa diferentes procedimientos, que según el campo de aplicación
tiene sus ventajas y desventajas
La cromatografía juega un papel importante en muchos sectores, como la química
orgánica, la bioquímica, la química inorgánica, la química ambiental y la química
alimenticia.
12.-Cuestionario
1.- ¿Cuáles son los disolventes más utilizados en este método?
Hexano y acetato
2.- ¿Qué se tiene que hacer para elegir un disolvente?
Para elegir el disolvente, primero se lleva a cabo una cromatografía en capa fina de
la muestra a analizar. El disolvente debe producir una buena separación de los
componentes de la mezcla en la placa, colocando el componente menos polar a un
Rf cercano a 0.3. En el caso de columnas pequeñas, lo ideal es usar un eluyente
menos polar que el conseguido en el resultado de la cromatografía en placa.
3.- ¿Para que se utiliza la cromatografía?
Es utilizado para la separación, a la vez que para la purificación, de diferentes
compuestos orgánicos que se encuentren en estado sólido o líquido.
4.- ¿Cuál es la fase móvil?
Es la fase que se mueve en una dirección definida. Puede ser un líquido
(cromatografía de líquidos o CEC). un gas (cromatografía de gases) o un fluido
supercrítico (cromatografía de fluidos supercríticos). La muestra que se está

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separando/analizando (formada de analito/s y el disolvente) se inyecta en la fase

móvil que se mueve a través de la columna. En el caso de la cromatografía líquida
de alta resolución, HPLC, la fase móvil es un disolvente no polar como
el hexano (fase normal) o bien algún disolvente polar (cromatografía de fase
reversa).
5.- ¿Cuál es la fase estacionaria?
Es la sustancia que está fija en una posición durante la cromatografía. Un ejemplo
es la capa de gel de sílice en la cromatografía en capa fina.
6.- ¿Qué es la cromatografía analítica?
Se emplea para determinar la existencia y posiblemente también la concentración
de un analito en una muestra.
7.- ¿Qué es el analito?
Es la sustancia que se va a separar durante la cromatografía.
8.- ¿Qué es la fase enlazada?
Es una fase estacionaria que se une de forma covalente a las partículas de soporte
o a las paredes internas de la columa.
13.Interpretacion de los espectros
Como se puede observar en la imagen el compuesto que
se encuentran disueltos en la fase móvil (hexano), poco a
poco saldrán de la columna cromatográfica, y se recogen
en fracciones. Las fracciones menos polares, que son por
lo general las que se retienen poco o nada en el
absorbente, serán las primeras en salir de la columna. En
cambio, más polares, quedan retenidas por más tiempo
en el absorbente, y a menudo es necesario el uso de
diferentes disolventes con la finalidad de incrementar su
polaridad para que sean arrastradas por estos.

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14.Conclusión
El desarrollo me permitio definir el concepto de cromatografia y poder aplicar este
concepto para la elaboracion de la practica numero dos esto al poder purificar un
compuesto ademas de adquirir el conocmientos de las diversos tipos de
cromatografias esto simplemente visto desde el punto teorico en tanto que el
desarrollo esxperimental me permitio observar efectivamente la exixstencia de la
cromatografia prestente en diversas disolventes mediante la polaridad de este mismo
disolvente como se puedo apreciar en las palcas al ser introducidas en diferentes
sustancias todo lo anterior antes argumentado una consecuencia directa de el
desarrollo teorico experimental de la practica ademas de adquirir estos
concocimientos la practica tuvo repercursiones secundarios como el desarolllo del
trabajo en equipo que es fundamental para nuestra area y no solo en una manera
particular si no tambien ya en manera genar el trabajo en equipo es fundamental
para desempenar a cabo cualquier pael.
Por todo lo antes argumentado se puede concluir que la practica fue realiza
satisafactoriamente y se cumplieros los objetvos espesificos planteados.
15.Observaciones
 La práctica se elaboró de una manera adecuada esto se reflejó en el
resultado final de la práctica.

 Todo el equipo contaba con su material de seguridad personal.

 El material usado fue lavado y secado después de su uso.

 Se tomaron en cuenta las normas de seguridad del laboratorio.

 Se tenía que tener en cuenta el tiempo para que la silica no se secara.

16.Bibliografía
http://www.gtm.net/images/industrial/a/ALCANFOR.pdf9 Recuperado 9/18/2019
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https://es.wikipedia.org/wiki/Metanol R Recuperado el 9/18/2019
https://www.carlroth.com/downloads/sdb/es/C/SDB_CN70_MX_ES.pdf Recuperado
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Manual de prácticas de química orgánica experimental a escala sami-micro y
fundamentos de la espectroscopia Recuperado el 9/18/2019
https://es.wikipedia.org/wiki/Cromatograf%C3%ADa Recuperado el 8/18/19
https://conceptodefinicion.de/cromatografia/ Recuperado el 8/18/19

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