Biosíntesis de ácido indol-3-acético y promoción del crecimiento

de plantas por la bacteria Burkholderia xenovorans LB400

Paulina Vega-Celedón1, Hayron Canchignia Martínez1,2, Myriam González1 y Michael Seeger1
1Laboratoriode Microbiología Molecular y Biotecnología Ambiental, Departamento de Química & Center for Nanotechnology and Systems Biology & Centro de Biotecnología,
Universidad Técnica Federico Santa María, Valparaíso, Chile. 2Unidad de Investigación Científica y Tecnológica, Universidad Técnica Estatal de Quevedo, Quevedo, Ecuador
pvegaceledon@gmail.com, michael.seeger@usm.cl
INTRODUCCIÓN

Las bacterias promotoras del crecimiento (PGPB) estimulan el crecimiento de las plantas mediante diversos mecanismos, que incluyen la producción de fitohormonas. La fitohormona ácido
indol-3-acético (AIA) es la principal auxina en plantas. AIA controla diversos procesos fisiológicos como la elongación y división celular, la diferenciación de tejidos y las respuestas a la luz
y la gravedad. La concentración de AIA es regulada en las plantas. Se ha descrito que las bacterias pueden modular los niveles de AIA. Las rutas biosintéticas de AIA más importantes y
ampliamente distribuidas en bacterias son las vías anabólicas de indol-3-piruvato (IPyA) y de indol-3-acetamida (IAM). La vía IPyA ha sido descrita en PGPB, mientras que la vía IAM ha
sido reportada principalmente en bacterias fitopatógenas. B. xenovorans LB400 es una bacteria no patógena reconocida por su capacidad para degradar diversos compuestos aromáticos.

OBJETIVOS Condiciones de crecimiento. La cepa LB400 se cultivó en medio mínimo (M9) con glucosa y medio rico (LB) suplementados con el
MATERIALES Y

precursor triptófano.
MÉTODOS

Cuantificación de AIA. AIA se cuantificó por HPLC con una fase móvil de ácido acético (1,1%)/acetonitrilo (70/30).
Analizar la síntesis de AIA por B. xenovorans
Análisis de expresión. La expresión de los genes (ipdC y iaaH) se analizó mediante RT-PCR utilizando RNA aislado de la cepa LB400.
LB400 y su efecto sobre el crecimiento de las
Promoción del crecimiento de plantas. Se aplicaron células de la cepa LB400 (107 UFC mL-1) sobre plántulas de Nicotiana tabacum
plantas modelo Nicotiana tabacum y Vitis
en agar MS a 25ºC por 2 semanas. Se inoculó B. xenovorans LB400 (109 UFC mL-1) sobre esquejes de Vitis vinifera en agar a 25ºC
vinifera cvs. Thompson Seedless.
durante 30 días.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Medio M9 + glucosa + triptofano MM 1 2 3 4 5 OH Triptófano AIA

Figura 1. Síntesis de 1,2
Medio LB + triptofano HO
872 O
AIA por la cepa 1,0 711 bp NH2 O
LB400 en presencia 603
N
H
N
H
de triptófano. 0,8
[AIA] (mM)

Figura 2. Expresión del gen ipdC en presencia de triptófano. MM, Amino

transferasa
IAAld
deshidrogenasa
0,6
estándares de masa molecular; 1, control negativo; 2, M9 + glucosa; 3, M9 + OH
La cepa LB400
0,4 glucosa + triptófano, 4, M9 + triptófano; 5, LB + triptófano. IPDC
sintetizó AIA en O
O O
presencia del precursor 0,2
N N
B. xenovorans LB400 expresó el gen ipdC que codifica para la enzima indol- H H
triptófano y una fuente Indol-3-piruvato Indol-3-acetaldehído
0,0 3-piruvato descarboxilasa, sugiriendo la utilización de la vía IPA para la
de carbono adicional. 0 1 2 3
(IPA)
síntesis de AIA. El gen iaaH de la vía IAM no fue expresado en ninguna de
Tiempo (d)
las condiciones evaluadas. Figura 3. Biosíntesis de AIA por la
cepa LB400 mediante la vía IPA.
Figura 4. Organización de los genes involucrados en la vía IPA en la cepa LB400.
La vía IPA es la mejor caracterizada
Los genes ipdC e iad1 se encuentran agrupados en el C2. No existen reportes de dicha organización. en PGPB.

30 A
Tabla 1. Porcentaje de

Numero de raices
18
B germinación de esquejes de Vitis 25
Numero de raices

16
vinifera. B
20
14
La adición de la cepa LB400
12
provoca una mejora en la 15
10
A germinación de los esquejes de
8
Vitis vinifera. 10
6
A
Tratamiento Germinación (%) 5
Control Cepa LB400 4

2 Cepa LB400 74 Cepa Control 0

Figura 5. Efecto de la cepa 0 AIA (1 mg mL-1) 68 LB400 Control LB400
Agua Cepa LB400 AIA
LB400 sobre esquejes de Vitis Control (agua) 63 Tratamiento
Tratamiento
vinifera. A Control
Figura 7. Efecto de la cepa 4,5
Actividad PGPB de la cepa Figura 6. Efecto promotor del crecimiento de la cepa LB400 sobre el número LB400
LB400 sobre plántulas de
Longitud (cm)

4,0
LB400 incrementó el número de raíces de esquejes de Vitis vinifera cvs. Thompson Seedless.
Nicotiana tabacum. B
de raíces de V. vinifera. *Medias con letra en común (A) no presentan diferencias significativas (p> 0,05). 3,5
A
Actividad PGPB de la cepa 3,0
A
La presencia de células de la cepa LB400 incrementó significativamente el
LB400 incrementó el número 2,5
CONCLUSIONES número de raíces luego de una incubación de 30 días a 25 ºC (p<0,05).
y longitud de raíces de tabaco. 2,0

1,5
 B. xenovorans LB400 sintetiza la hormona vegetal AIA. Figura 8. Efecto promotor del crecimiento de la cepa LB400 sobre plántulas de 1,0
 La expresión del gen ipdC sugiere que la cepa LB400 Nicotiana tabacum. 0,5
síntetiza AIA mediante la vía IPA. *Medias con letra en común (A) no presentan diferencias significativas (p> 0,05).
 La cepa LB400 posee actividad promotora del 0,0
Raiz Brote
crecimiento de plantas sobre Nicotiana tabacum y Vitis La presencia de células de la cepa LB400 incrementó significativamente el número
Parametro
vinifera, lo que sugiere que es una PGPB. y longitud de las raíces luego de una incubación de 14 días a 25 ºC (p<0,05).

Agradecimientos: Becas doctorales Conicyt (PVC, HCM), Red RIABIN, DGIP-UTFSM (MS), Proyectos FONDECYT 1110992 & 1151174 (MS, MG), Mecesup FDI (MS) y USM 131562, 131342 & 131109 (MS,MG).