Universidad Nacional Autónoma de

México

Facultad de Estudios Superiores

Zaragoza

Carrera: Biología

Laboratorio de Investigación Formativa II

Autores:
González Palomino Roberto
Palomares Palma Rodrigo Arzu
Sánchez Regalado Andrea Jackeline

Título:
Experimento 1:​ Aislamiento de sustancias orgánicas a
partir de fuentes naturales, mediante extracción
sólido-líquido y líquido-líquido
Experimento 2:​ Separación de los componentes de una
mezcla mediante cromatografía en capa fina y columna
analítica.

Asesor: ​Estela Jimenez

Grupo: ​2201

Fecha: ​28/02/2018.
Resumen.
Incluye lo que se hizo y los resultados obtenidos comparados con los
informados en la literatura.

4.3 INTRODUCCIÓN
Comentarios breves sobre el tema
Fundamento teórico
Objetivo (finalidad del experimento)

Hipótesis

4.4 PARTE EXPERIMENTAL

Técnica lógicamente redactada Listado de material y reactivos
Se monto el equipo

Diagrama de flujo

4.5 RESULTADOS
Cálculos, rendimiento teórico y práctico, gráficas, esquemas, fotografías, todo
lo obtenido

4.6 ANÁLISIS Y DISCUSIÓN DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS:

Con base en el análisis de los resultados se contrasta la hipótesis señalando
aciertos errores y sugerencias que sirvan para mejorar el experimento.
Además, se incluye en su caso las reacciones y mecanismos

4.7 BIBLIOGRAFÍA
Reportada en formato APA
Resumen:

En el experimento 1 se realizó una extracción con el chile guajillo, al tener el

extracto, se prepararon capas finas, se puntearon y se colocaron en cámaras de
elución con distintos compuestos organicos.

En el experimento 2 se observó la separación y se eligieron dos disolventes que

separaban mejor el extracto. al ser comparados se muestra que hay diferentes
compuestos que pueden servir según la literatura. con base en la primera
cromatografía, se logró identificar y utilizar compuestos que se mencionan en el
texto consultado.Con con la mezcla de disolventes elegidos se probó en varias
concentraciones, se eligió la concentración más adecuada para así finalmente al
realizar la cromatografía en columna.Se obtuvieron 20 eluatos de la columna para
evaluar la separación de compuestos en una capa fina.

Introducción​.
Para el primer experimento se realizará una extracción para obtener extracto de
chile guajillo. El estudio de los compuestos orgánicos ha sido motivo de estudio de
profesionales de diferentes áreas y para ello se aplican métodos y técnicas diversas
entre las que se encuentran la extracción sólido-líquido y líquido-líquido, en nuestro
caso será una extracción sólido-líquido entre chile guajillo y acetona.

La extracción sólido-líquido es el proceso en el cual, mediante la acción de un

disolvente o agente extractor se separará un principio activo contenido en un
material sólido. Para ello se usará un disolvente que sea lo más selectivo posible y
permita la separación. (Seamus, 2008).

Para comenzar a realizar el experimento de cromatografía primero se necesita

conocer ciertas definiciones, como por ejemplo: ¿que es cromatografia? ¿cuantos
tipos de cromatografía existen?¿qué métodos son los más convenientes para
realizar la cromatografía? y ¿para qué nos sirve?.

La cromatografía es la distribución de dos fases, la fase líquida y la estacionaria. lo

que permite la separación de los colores a partir de un extracto previamente
realizado. Miriam Quiroz (1954)

La cromatografía en capa fina es un método analítico que utiliza cantidades en

miligramos, requiere poco tiempo y es confiable para la separación e identificación
de compuestos, los resultados obtenidos de la cromatografía en capa fina son
valiosos, pues ayudan a seleccionar el adsorbente y eluyentes adecuados que se
pueden emplear en la separación cromatográfica en columna.
En este caso la separación de la mezcla será visible según se arrastren los colores
de los componentes en el chile guajillo

Necesitamos conocer algunos conceptos:

Adsorbentes y eluyentes: El adsorbente (fase estacionaria) más ampliamente

utilizado es el gel de sílice (SiO2), se utiliza para separar sustancias más polares
(alcoholes, aminas, ácidos carboxílicos). El proceso de adsorción se debe a
interacciones intermoleculares de tipo dipolo-dipolo o enlaces de hidrógeno entre el
soluto y el adsorbente. El adsorbente debe ser inerte con las sustancias a analizar y
no actuar como catalizador en reacciones de descomposición. El orden de elución
de un compuesto se incrementa al aumentar la polaridad de la fase móvil o eluyente.
Este puede ser un disolvente único o dos miscibles de distinta polaridad.

El eluyente es aquel disolvente que se agregara a la capa fina con el adsorbente y el

extracto, sube por capilaridad disolviendo y arrastrando el extracto por el
adsorbente.

Objetivo:
Extraer los compuestos encontrados en el chile guajillo mediante técnicas y
métodos convencionales, para separar e identificar mediante cromatografía en capa
fina y columna los compuestos aislados del producto natural.

Hipótesis:
Debido a la obtención de extractos naturales concentrados y la determinación del
eluyente más apto para la cromatografía en columna, se observará una mayor
separación en los compuestos del extracto en una mayor ascendencia.

Parte experimental:

Material.
(p/extracción) (p/cromatografías) probeta 100ml
Frasco gerber 9 frascos de boca soporte universal
embudo de tallo corto ancha 250ml pinzas dobles
navaja papel filtro alambre
frasco ambar 250 ml tijeras pinzas de punta
papel aluminio capilares vaso de precipitado 50
balanza analitica portaobjetos ml
espátula pipetas graduadas 5, 3 algodón
y 1 ml matraz de bola 100ml
bureta 25 ml 20 tubos de ensayo
gradilla
Reactivos cloruro de metileno
benzeno
Metanol tolueno
Etanol hexano
Acetona eter de petroleo
Acetato de etilo silica gel
cloroformo 20 g de chile guajillo

Método:

Extracción:
● Se desvenó y corto el chile guajillo en trocitos para posteriormente pesar 20 g
en la balanza analitica.
● Vertimos el chile en un frasco ámbar de 250 ml y agregamos 100 ml de
Acetona
● Dejamos que el se disuelva el chile uno o dos días
● Filtramos la solución de chile guajillo con acetona en un frasco gerber
utilizando un embudo y algodón como filtro, dejando únicamente la parte
líquida en el frasco, cubriendo con papel aluminio agujereado de la parte
superior del papel, para que se volatilizara una parte de la acetona y el
extracto se concentrara más.
(se utilizó acetona por error, originalmente sería acetato de etilo, aunque funcionó de
la misma manera)

.
Imagen 1: Se pesaron 20g de chile Imagen 2: Se filtró el chile disuelto Imagen 3: Extracto de chile
Cromatografía en capa fina:
● Preparación de lechada: en un frasco pequeño se agregó sílica gel y acetato de etilo
para crear una disolución al tanteo ligeramente espesa.
● Preparación de capa fina: se limpio con un algodón con acetona 9 portaobjetos y
cada uno se sumergio en la lechada previamente agitada obteniendo una capa fina
homogénea sin grumos, se dejó secar y posteriormente se metieron 10 min al horno
los portaobjetos para activar la capa fina.

Imagen 4: preparación de lechada Imagen 5: se prepara capa fina. Imagen 6: secado de capas finas.

● Preparación de las cámaras de elución: se recortó papel filtro de tal modo que dentro
del los 9 frascos frasco quedarán de 1 a 2 cm de visualización, se agregó a cada
frasco 5ml de cada disolvente, metanol, etanol, acetona etc.
● Preparamos capilares para puntear el extracto en la capa fina ya activada. se
pusieron un par de puntos a 1 cm de altura del portaobjetos agregando de 7 a 10
gotas del extracto concentrado.
● Posteriormente se metieron los portaobjetos a las cámaras de elución, el eluyente(
cada disolvente) subió por capilaridad por la fase estacionaria (el portaobjetos con
capa fina) y se sacaron del frasco cuando el eluyente estaba a unos milímetros en
donde terminaba la capa fina.
 Imagen 7: punteo de capas finas activadas Imagen 8: Arrastre de compuestos en la cámara de elución

● Al sacar los portaobjetos y observar el arrastre de los componentes del extracto, se

determinó mezclar acetato de etilo y éter de petróleo en distintas proporciones para
un mejor resultado.
● Se probó utilizando 6 ml en total de la mezcla en distintas proporciones de acetato y
éter
● Se determinó que la disolución de acetato de etilo y éter de petróleo en una
proporción de 1:10 daba mejores resultados en la separación de los compuestos.

Imagen 9: arrastre con acetato y éter Imagen10 : arrastre de compuestos en proporción 1:10

Cromatografía en columna

● Se preparó 100 ml de una disolución 1:10 de acetato de etilo y éter de petróleo en la

probeta
● En el soporte universal con las pinzas dobles se colocó la bureta se agrego un poco
de éter de petróleo y con el alambre metimos un poco de algodón hasta llegar antes
de la llave y se agregó más éter de petróleo hasta la mitad de la bureta
 ● con ayuda del embudo se agregaron 7 g de sílica gel disuelto dentro del matraz bola
en éter de petróleo, mientra se seguía agitando el matraz se agregó la sílica a la
bureta..
● Se vaceo el éter de petróleo sobrante de la bureta en un vaso dejando 1 mm, se
agregó 1 ml del extracto de chile, Se agrego un poco de sal de mesa a la bureta para
proteger la columna de sílica gel al agregar el eluyente. se agregó el eluyente
(disolución de acetato con éter) y se fue vaciando la bureta hasta que el eluyente
quedará transparente, se llenó la bureta con el eluyente.

Imagen 11, 12, 13: preparación de la columna

● Se esperó hasta que el extracto bajará por la columna para después abriendo la
llave se tomaron 20 muestras de 1 ml en los tubos de ensayo (eluatos).
● Cada eluato se punteo en otras capas finas (20 en total) con extracto original de un
lado y extracto del tubo en el otro lado de la capa fina, se metieron en nuevas
cámaras de elución y se observó si hubo arrastre individual de cada muestra
comparada con el extracto original.

Imagen 14: Separación en la columna Imagen 15: Eluatos obtenidos de la columna

Resultados
Cromatografía en capa fina

​ Img 16: Elucion con metanol Img 17: Elución con etanol acetona y acetato de etilo

​ Img18: Elución con cloroformo Img 19: Elución con cloruro de metileno

Img 20: Elución con benceno Img 21: Elución con tolueno

Img 22: Elución con hexano Img 23: Elución con éter de petróleo
 Img 24: cromatografía a distintas concentraciones de la mezcla de acetato de etilo y éter de petróleo

​Cromatografía en columna

Img 25 Img 26
 ​Img 27 Img 28

Img 29 Img 30

Img 31 Img 32

Img 25- 31: cromatografía. lado derecho punteo de extracto original, lado izquierdo, punteo de eluato obtenido
de la columna
Discusión de resultados:
- En la primera parte del experimento (cromatografía en capa fina) el extracto sube por
capilaridad, se mostró al extracto siendo punteado en diez capas, cada una de las
capas fueron colocadas en una cámara de elución distinta, en cada cámara fue
agregada una sustancia, por lo tanto había diez cámaras y diez sustancias, la cuales
fueron ordenados del menos al más polar, se observó que los compuestos que
mejores arrastres tenían eran los intermedios, los menos polares y los más polares
no separaban tanto, así que que con las pruebas realizadas nos pudimos dar cuenta
los compuestos que se utilizarían para la columna: acetato de etilo y éter de petróleo
en una proporción de 1:10.
- Para la cromatografía en columna el extracto baja por gravedad, al tener ya la
separación del extracto, se dividió en veinte eluatos, estos fueron analizados en cada
solución de éter y acetato, no se pudo observar cada una de las separaciones del
extracto, lo que concluimos es que los compuestos en el chile guajillo no se
separaron de manera individual, sino, que simplemente se diluye más el extracto
completo, puede ser debido a varios factores, quizá la obtención de los eluatos no se
hizo de manera correcta. Observamos que al momento puntear y eluir en la capa fina
en los últimos eluatos no era visible ningún resultado pues se piensa que ya el
extracto estaba muy diluido.

Bibliografía:

-Seamus P. (2004). Analytical Chemistry. New York, USA: Oxford University Press.
-Miriam Quiros 1954 “Mecanismos y aplicaciones de la cromatografía líquida” ed.
universidad de Costa Rica, Costa Rica