ACCION DE INHIBIDORES ENZIMATICOS EN LA CADENA RESPIRATORIA

OBJETIVOS

 Observar el funcionamiento de la cadena transportadora de electrones.

 Identificar la acción de los inhibidores de la cadena transportadora de electrones.

INTRODUCCION

La cadena de transporte de electrones es un proceso que se produce en la membrana interna

mitocondrial, que mediante reacciones bioquímicas producen adenosin trifosfato (ATP), que es el
compuesto energético que utilizan los seres vivos. La fuente de energía es utilizada por los organismos
vivos mediante las reacciones de óxido-reducción (redox). Las fuentes de energía como la glucosa son
inicialmente metabolizados en el citoplasma y los productos obtenidos son llevados al interior de la
mitocondria donde se continua el catabolismo usando rutas metabólicas que incluyen el ciclo de los
ácidos tricarboxílicos. Los electrones se transportan desde moléculas poco oxidantes hasta el oxígeno,
estas moléculas que inician este transporte de electrones son NADH Y FADH 2, es decir son las
moléculas menos oxidantes de la cadena. Una vez que los electrones son entregados al oxígeno, se
forma agua. Debido a que la cadena sólo transporta electrones, los protones son bombeados hacia el
espacio entre las membranas, lo que crea un gradiente de protones con una carga muy positiva afuera
de la matriz y una carga muy negativa adentro. Este gradiente obliga a los protones a volver a entrar a
la mitocondria por una enzima que forma un túnel de protones llamada ATP sintasa que con la fuerza
de entrada de los protones, forma ATP y agua metabólica.

Los inhibidores de la respiración son sustancias que inhiben la respiración celular. Este tipo de
inhibidores reciben este nombre porque su principal función es el inhibir el transporte de electrones en
la cadena de la respiración. Los inhibidores del transporte de electrones más comúnmente usados
pueden reunirse en cuatro grupos principales según el sitio de la cadena respiratoria donde actúan:
aquellos que bloquean el paso de electrones a nivel del complejo I (NADH-deshidrogenasa) como los
barbitúricos, piericidina A (antibiótico), rotenona (insecticida); los que bloquean el complejo II
(Succinato-deshidrogenasa), el malonato; los bloqueadores del complejo III (citocromo b y c1) como la
Antimicina y los que impiden el paso de electrones del complejo IV (Citocromo-oxidasa) con el oxígeno,
como el cianuro, monóxido de oxígeno.

Existen otros compuestos denominados desacopladores de la fosforilación oxidativa. Estos agentes

debilitan o destruyen completamente el firme acoplamiento normal entre oxidación y fosforilación. Con
el desacoplamiento aumentan las velocidades de oxidación mientras que la fosforilación disminuye,
quiere decir que bloquean a la ATP sintasa, lo cual da como resultado la producción de calor extra que
puede manifestarse en forma de fiebre. La menor formación de ATP resultante del desacoplamiento
puede afectar de forma indirecta a muchos procesos celulares como el transporte de iones y la
permeabilidad de la membrana. Los agentes desacopladores aumentan anormalmente la
permeabilidad de las membranas mitocondriales internas frente a los protones. Entre los
desacopladores comunes se cuentan el 2,4-dinitrofenol, la termogenina, entre otros.

MATERIALES Y METODOS

PROCEDIMIENTO

1. Sacrifique un cobayo y separe el hígado colocándolo en un vaso de precipitación con solución

salina a 0ºC y córtelo en trozos pequeños.
2. Coloque los trozos de hígado en un mortero conteniendo aproximadamente 1 gramo de arena
y 5 mL de buffer fosfato pH 7,0. Homogenícelo hasta obtener una pasta fina y vuelva a agregar
5 mL del mismo buffer.
3. Centrifugue el homogenizado a 4000 rpm por 5 minutos, luego separe el sobrenadante y
consérvelo en un tubo de ensayo sumergido en hielo. Rotúlelo como HH (homogenizado de
hígado).
 Arme el siguiente esquema de trabajo:

Tubo I II III IV V
Homogenizado de Hígado (HH) mL 1 1 1 1 1
Succinato de sodio (mL) 1 - 1 1 1
Malonato de sodio (mL) - - 1 - -
Cianuro de potasio (mL) - - - 1 -
Bicloruro de mercurio (mL) - - - - 1
Azul de metileno (mL) 1 1 1 1 1
Agua destilada (mL) 1 2 - - -

4. Agitar los tubos y añadir 0,5 mL de aceite mineral suavemente por las paredes de cada tubo.
5. Incubar a 37°C durante 30 minutos.
6. Observar e interpretar los resultados obtenidos.

RESULTADOS

DISCUSION

CONCLUSIONES

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS