A. Desnaturalización por efecto de solventes orgánicos
B. Desnaturalización por pH extremo
C. Desnaturalización térmica
5. Resultados y discusión de resultados
A. Desnaturalización por efecto de solventes orgánicos
Muestra Observaciones Resultado
Clara de huevo + Etanol Se formó una anillo de Desnaturalización por color blanco. presencia de solventes orgánicos, positiva.
B. Desnaturalización por pH extremo
Muestra Observaciones Resultado
Clara de huevo + HCl cc Se formó una solución Desnaturalización por pH lechosa. extremo positivo. Clara de huevo + NaOH No se formó ningún Desnaturalización por pH 20% precipitado. extremo negativo. C. Desnaturalización térmica
Muestra Observaciones Resultado
Clara de huevo Se formó una Desnaturalización térmica, precipitación, coloide positiva. blanquecino.
5.1 Explicaciones
A. Desnaturalización por efecto de solventes orgánicos
La muestra se precipitó en presencia de etanol, debido a que el reactivo es
un solvente orgánico polar produce agregados de moléculas proteicas que causan la desestabilización de los enlaces de hidrogeno presentes en la estructura de las proteínas dela clara. La adición de un solvente orgánico como el etanol produce agregados de moléculas proteicas que tienden a precipitar, esto se debe a que el solvente presenta una constante dieléctrica menor que la del agua, lo cual produce un incremento en las fuerzas de atracción entre cargas opuestas y una disminución en el grado de ionización de los radicales de las proteínas, y en consecuencia una disminución en la solubilidad de esta. B. Desnaturalización por pH extremo
La muestra de clara de huevo se precipitó al momento de adicionar ácido
clorhídrico. A partir de esto, por el carácter ácido del reactivo se presentó un cambio abrupto en las cargas formales de los grupos esenciales de las proteínas presentes, esto afectó las interacciones de la estructura terciaria, produciendo la desactivación y posterior degradación de las proteínas. Esto se puede explicar de otra forma: Las proteínas en un pH Isoeléctrico se precipitan, debido a que en este punto la carga neta es cero y se eliminan las interacciones electrostáticas, lo que permiten la separación selectiva de estas. De la misma forma debería ser para el caso de NaOH (20%), pero solución no estaba muy concentrado por tanto no se formó el precipitado. C. Desnaturalización térmica
Cuando la muestra de clara de huevo se sometió a una temperatura
aproximada de 63°C, las proteínas presentes se desestabilizaron por el efecto del calor sobre los enlaces de la estructura terciaria (en gran parte enlaces de hidrógeno), causando así un desdoblamiento de la proteína y una disminución progresiva de su solubilidad. “El calentamiento de una solución proteica causa un incremento en la energía de vibración y rotación que pueden rebasar el equilibrio de las interacciones débiles que estabilizan la conformación plegada y funcional”. 6. Conclusiones
Todos los niveles estructurales de las
proteínas dependen de un conjunto de interacciones químicas que le brindan equilibrio. La conformación de la proteína nativa puede llegar a verse afectada por cambios en el medio inducidos por el pH, calor o solventes orgánicos los cuales inducen a una pérdida de la estructura tridimensional suficiente para ocasionar el fenómeno de la desnaturalización que se observa en este laboratorio. La desnaturalización observada se ocasionó por la desorganización de las estructuras superiores (terciarias, cuaternarias), que dejaron la cadena polipéptida reducida, fenómeno que en términos generales genera precipitación. El desdoblamiento de la proteína no solo desnaturaliza su estructura, sino que inactiva considerablemente la función biológica que tiene la misma, por ejemplo, el impacto de las temperaturas altas que estén por encima de los 40°C o los 50°C hacen que la proteína sometida se vuelva instable e inactiva.