UNIDADES TECNOLÓGICAS DE SANTANDER

TECNOLOGÍA EN GESTIÓN AGROINDUSTRIAL

INFORME DE MICROBIOLÓGIA EN LA AGROINDUSTRIA

NOMBRE DE LA PRÁCTICA: ESTERILIZACION,CULTIVOS,

FECHA: 15 DE ABRIL 2019
TENSION DE GRAM
INTEGRANTES
NOMBRE: PAOLA REYES GUTIERREZ CÓDIGO: 1096948728
NOMBRE: SAMYR ANDRES BLANCO RODRIGUEZ CÓDIGO: 1098755999
GRUPO:
PROGRAMA: DOCENTE:
E-091
Tecnología en Gestión Agroindustrial MARIA VICTORIA
RESUMEN

 Esterilización: eliminación o muerte de todos los microorganismos que contiene un

objeto o sustancia, y que se encuentran acondicionados de tal forma que no pueden
contaminarse nuevamente.
http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/Seminarioesterilizacion.htm
 Medio de cultivo: Un medio de cultivo es un sustrato o una solución de nutrientes que
permite el desarrollo de microorganismos. En las condiciones de laboratorio para
realizar un cultivo, se debe sembrar sobre el medio de cultivo elegido las muestras en
las que los microorganismos van a crecer y multiplicarse para dar colonias
http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/tp4.pdf
 Tinción de Gram: La tinción de Gram es una técnica de laboratorio que permite
identificar distintos tipos de bacterias según se coloree su superficie, aportando
información muy útil para orientar el tratamiento
antibiótico.https://www.webconsultas.com/pruebas-medicas/tincion-de-gram-13399
 De acuerdo a todos estos procesos comenzamos realizando el proceso de
esterilización lavando los mesones y los materiales, llevamos las cajas de Petri al
horno a 180 grados durante 2 horas para dejarlo libre de agentes contaminantes, la
siguiente clase sacamos las cajas de Petri del horno y nos preparamos para realizar
los medios de cultivo que nos correspondió un medio de cultivo a base de levadura
luego dejamos 2 muestras contaminadas una con cabello y la otra con un suspiro y la
última se dejó estéril. Llevamos a la incubadora donde la dejamos un poco más de
una semana y al retirarla pudimos observar que hubo un crecimiento notable de
microrganismos en la muestra que tenía cabello y un crecimiento casi nulo en la que
tenía el suspiro mientras que la que se dejó estéril permaneció igual. Luego sacamos
una muestra y la llevamos a un proceso de tinción con distintos compuestos para
observar que tipos de bacterias eran si Gram+ o Gram - después llevamos la muestra
al microscopio y las observamos a diferentes aumentos. Pudimos concluir que los
métodos de esterilización son efectivos y que los medios de cultivo son importante
para el crecimiento las colonias que se quieren observar y la tinción es efectiva a la
hora de buscas que tipos de bacterias son. (BLANCO SAMYR,13/04/2019)
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MARCO TEÓRICO

1. Se entiende por asepsia, la ausencia total de microorganismos vivos, siendo esto

posible gracias a los procedimientos que los destruyen, impidiendo su desarrollo y
evitando su proliferación. Dichos procedimientos (físicos o químicos) se encierran
dentro de lo que conocemos como esterilización, desinfección y métodos
antisépticos, aunque la mayor parte del objetivo es logrado solo con la
esterilización. En cuanto a la esterilidad, la rigurosidad del término asepsia no
permite que existan grados o niveles de esterilización, por lo que no es posible que
se usen términos como “está bien o mal esterilizado” o “casi esterilizado”; se limita
a decir si está o no estéril (Catalano, 2006).
Es importante que tengan en cuenta que el término antisepsia (uso de agentes o
productos antisépticos) se refiere a procedimientos que se aplican sobre tejidos
vivos, debido a que en estos casos se usan productos químicos que eliminan los
microorganismos pero no son lo suficientemente tóxicos para afectar a los tejidos.
Por el contrario, la desinfección (uso de productos o agentes desinfectantes) se
refiere al uso de agentes químicos que matan a los microorganismos y se utilizan
sobre objetos inanimados (Catalano, 2006; Madiganet al.2004).
Aunque parte de los objetivos de los estudios microbiológicos es el estudiar como
los microorganismos viven formando comunidades en las que los individuos
interaccionan entre sí, estableciendo multitud de relaciones, no se puede negar
que el tener los métodos para aislarlos y estudiarlos por separado, conociendo las
características típicas de cada uno de ellos fue y es esencial para la mayoría de los
logros de esta área de la biología. Dichos aislamiento de microorganismos de un
solo tipo, es lo que se conoce en microbiología como cultivos puros o axénicos y
se lograron en gran parte por el control de crecimiento microbiano no deseado,
logrado con la esterilidad. (Rozo Jorge)
https://www.academia.edu/25707984/M%C3%A9todos_de_Esterilizaci%C3%B3n_
Desinfecci%C3%B3n_y_Antis%C3%A9pticos_OBJETIVO_GENERAL
 Esterilización: es el proceso mediante el cual se alcanza la muerte de todas las
formas de vida microbianas, incluyendo bacterias y sus formas es poruladas
altamente resistentes, hongos y sus esporos, y virus. Se entiende por muerte, la
pérdida irreversible de la capacidad reproductiva del microorganismo. Tenemos 3
tipos de esterilización:
 Por agentes físicos: provocan perdida de la variabilidad en los microorganismos.
Estos son:
- Calor: El calor provoca desnaturalización de proteínas, fusión y desorganización de
las membranas y/o procesos oxidativos irreversibles en los microorganismos.
La efectividad depende de: ( temperatura y tiempo de exposición)
- Calor húmedo: El calor húmedo produce desnaturalización y coagulación de
proteínas. Estos efectos se deben a 2 razones: 1. El agua es una especie química
muy reactiva y muchas estructuras biológicas (DNA, RNA, proteínas, etc.) son
producidas por reacciones que eliminan agua.
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2. el vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor mucho más elevado

que el aire. Por lo que, los materiales húmedos conducen el calor mucho más
rápidamente que los materiales secos debido a la energía liberada durante la
condensación.
El autoclave: es el aparato más comúnmente utilizado en los laboratorios para
esterilizar cultivos y soluciones que no formen emulsiones con el agua y que no se
desnaturalicen a temperaturas mayores a 100 °C. Una temperatura de 121 °C (una
atmósfera de sobrepresión) con un tiempo de exposición mayor a 15 minutos sirve
para destruir organismos formadores de esporas.
- Calor seco: El calor seco produce desecación de la célula, efectos tóxicos por
niveles elevados de electrolitos, procesos oxidativos y fusión de membranas. Estos
efectos se deben a la transferencia de calor desde los materiales a los
microorganismos que están en contacto con éstos. El aire es mal conductor del
calor, y el aire caliente penetra más lentamente que el vapor de agua en materiales
porosos.
- La estufa de esterilización: es el artefacto utilizado en los laboratorios para
esterilizar por calor seco. Se requiere mayor temperatura y tiempo de exposición
que el autoclave. La temperatura varía entre 120° y 180°C, requiriéndose distintos
tiempos de exposición. A 140°C se necesitan por lo menos 5 horas de exposición,
mientras que a 160°C se requieren al menos 2 horas de exposición.

Sirve para esterilizar material de vidrio. El papel y el algodón no pueden ser

esterilizados a más de 160°C.
- Radiaciones: Su acción depende de:
- Tipo de radiación
- Tiempo de exposición
- Dosis

- Ionizantes: Producen iones y radicales libres que alteran las bases de los ácidos
nucleicos, estructuras proteicas y lipídicas, y componentes esenciales para la
viabilidad de los microorganismos.
No se utilizan para medios de cultivo o soluciones proteicas porque producen
alteraciones de los componentes.

- Ultravioletas: Afectan a las moléculas de DNA de los microorganismos debido a

que forman dímeros de pirimidinas adyacentes que inducen errores en la
duplicación y por lo tanto la pérdida de la viabilidad de las células.
- Son escasamente penetrantes y se utilizan para superficies.

 Por agentes químicos: provocan perdida de la variabilidad en los

microorganismos.
- Peróxido de hidrogeno: Es un antiséptico débil, con capacidad oxidante y
formadora de radicales libres.
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Actualmente, el peróxido de hidrógeno gaseoso se está utilizando como desinfectante

de superficies o descontaminante de gabinetes biológicos debido a que no posee las
propiedades tóxicas y cancerígenas del óxido de etileno y formaldehído.
- Alcoholes: Lesionan la membrana celular de los microorganismos y
desnaturalizan proteínas celulares. Desorganizan la estructura fosfolipídica.
No destruyen esporas y tienen una acción germicida lenta. Los alcoholes de cadena
corta tienen un efecto nocivo mayor que los de cadena larga.
Se utilizan en concentraciones del 50 al 70%. Los más utilizados son el etanol e
isopropílico.
- Cloro: El cloro, los hipocloritos y las clora minas son desinfectantes que actúan
sobre proteínas y ácidos nucleicos de los microorganismos. Oxidan grupos -
SH, y atacan grupos aminos, índoles y al hidroxifenol de la tirosina.
El producto clorado más utilizado en desinfección es el hipoclorito de sodio (agua
lavandina), que es activo sobre todas las bacterias, incluyendo esporas, y además es
efectivo en un amplio rango de temperaturas.
 Por filtración: provocan una separación de los microorganismos de la sustancia
liquida. http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/Seminarioesterilizacion.htm

 Medios de cultivo: Uno de los sistemas más importantes para la identificación de

microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales
preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los
microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es
el Cultivo. Se han preparado más de 10.000 medios de cultivo diferentes.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe
reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión
de oxígeno adecuadas, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio
de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe
estar exento de todo microorganismo contaminante.
La mayoría de las bacterias patógenas requieren nutrientes complejos similares en
composición a los líquidos orgánicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos
medios de cultivo es una infusión de extractos de carne y Peptona a la que se
añadirán otros ingredientes.
- Tipos básicos de medio de cultivo:
- Líquidos
- Solidos
- Semisólidos

http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioMedios.htm

 Tinción de Gram: La tinción de Gram es una técnica de laboratorio que permite

identificar distintos tipos de bacterias según se coloree su superficie, aportando
información muy útil para orientar el tratamiento antibiótico.

La técnica se basa en aplicar una serie de colorantes a una muestra de cualquier

origen (esputo, orina, pus, etcétera) que supuestamente contenga bacterias no
identificadas. Los colorantes tiñen la pared de las bacterias de color morado y, tras
unos minutos, se realiza un lavado del colorante. Después de eso puede que el
colorante permanezca en la pared bacteriana o que se haya ido. En el primer caso
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permanecería el color morado, y se trataría de bacterias Gram positivas y, en el

segundo, la pared tendría un color rosado, y serían Gram negativas.
https://www.webconsultas.com/pruebas-medicas/tincion-de-gram-13399

MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS

MATERIALES EQUIPOS REACTIVOS

 3 cajas de Petri  Cajas de Petri  Agua destilada
 3 tubos de  Tubos de ensayo  Levadura
ensayo  Pipetas de 5 ml  Cristal violeta
 2 pipetas de 5ml  Erlenmeyer de  Lugol
 2 Erlenmeyer de 250 ml  Alcohol cetona
250 ml  Probeta de 100  Safrina
 1 probeta 100 ml ml
 1 gradilla  Gradilla
 Agua destilada  Microscopio
 Microscopio  portaobjetos
 Portaobjetos
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METODOLOGÍA

ESTERILIZACION

limpieza del mezon y enolver en papel kraf y

materiales con agua y sellar con cinta de
jabon enmascarar

llevar al horno por

Dejar envueltos hasta su 2 horas a una
uso temperatura de
180°C

Fuente: Reyes Paola 2019

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CULTIVOS

Lavar materiales

Pesar los reactivos

Mezclarlos y llevar a 100

grados por 10 minutos

Repartirlos en las cajas de

Petri

Dejar una estéril y las

otras 2 contaminadas

Sellarlas y marcarlas luego

llevarlas a la incubadora

Llevar a la incubadora por

7 dias a 37° C

Fuente: Reyes Paola 2019

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TENSION DE GRAM

Destapar los cultivos

Tomar una muestra en el porta

objetos y esparcirla bien

Tomar una muestra en el porta

objetos y esparcirla bien

Llevar al microscopio y observar

Sacar conclusiones

Fuente : Reyes Paola 2019

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TABLAS DE DATOS Y GRAFICAS

En la imagen N°1 se presenta la muestra Estéril,

se puede observar que esta muestra no
presenta crecimiento de microorganismos

Figure 1:CULTIVO AGAR PCA

ESTERIL

FUENTE: PAOLA REYES

En la imagen N°2 se presenta la muestra con un

suspiro el cual se puede observar que esta
muestra presenta un crecimiento de un
microrganismo de forma circular.

Figure 2. CULTIVO AGAR

PCA SUSPIRO

FUENTE : PAOLA REYES

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En la Imagen N°3 se presenta la muestra

contaminada con cabello, se puede observar
que esta muestra presenta crecimiento de
microorganismos que toman forma puntiforme
Figure 3. CULTIVO AGAR PCA ya que esta creció alrededor del cabello y tiene
CONTAMINADO CON microrganismos alrededor
CABELLO

FUENTE : PAOLA REYES

En la imagen N°4 se presenta de forma borrosa

de la muestra del pca con el cabello
contaminado, los microorganismos toman forma
puntiforme ya que los micoorganismos toman
esta forma y alrededor del cabello.

Figu

Figure 4. IMAGEN OBSERVADA CON EL

MICROSCOPIO AL 10%

FUENTE : PAOLA REYES

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En la Imagen N°5 pudimos observar la muestra

que tomamos del pca con el cabello contaminado
y se observa los microorganismos con mas
claridad ya que pusimos el lente al 40% y estos
se ven mas en forma filamentosa.

Figure 5IMAGEN OBSERVADA CON

EL MICROSCOPIO AL 40%

FUENTE : PAOLA REYES

En la imagen N°6 pudimos observar la muestra

que tomamos del pca con el cabello contaminado
y se observan microorganismos más esparcidos
por todos lados en forma filamentosa.

Figure 6.IMAGEN OBSERVADA CON EL

MICROSCOPIO AL 100%

FUENTE: PAOLA REYES

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ANÁLISIS DE RESULTADOS

 La muestra N° Estéril se mantuvo sin crecimiento debido a que se siguió un estricto

control en la preparación, no se alejó del mechero, lo que evito su contaminación.

 La muestra N° la del Suspiro, tuvo crecimiento ya que samyr andres blanco suspiro en
la muestra y la contamino, pudimos ver que tuvo crecimiento de microorganismos en
forma circular de color blanco.

 La muestra N°3 la del cabello de Paola Reyes, tuvo crecimiento de microorganismos ya

que notamos que los microorganismos se adaptaron a la forma del cabello y crecieron
a lo largo y a sus alrededores. (Reyes Paola 2019)

EVALUACIÓN

 QUE SON LAS BACTERIAS ?

Las bacterias son microorganismos unicelulares que presentan, un tamaño de algunos
micrómetros de largo entre (0.5 y 5 um por lo general y diversas formas incluyendo cocos,
(esferas) bacilos (barras) y espirilos (hélices).
Las bacterias son procariotas y por lo tanto a diferencia de las células (eucariotas de
animales, plantas .. etc)
No tienen núcleo definido y presenta orgánulos internos de lo conmoción.
Generalmente posen una pared celular compuesta de peptidoglicano. Muchas bacterias
disponen de flagelos o de otros sistemas de desplazamiento y son móviles, las bacterias
son los organismos mas abundantes del planeta.
Son ubicuas, se encuentran en todos los habitas terrestres, crecen hasta en los más
extremos como en los manantiales de aguas calientes y acidas, en desechos radioactivos,
en las profundidades tanto del mar como de la corteza terrestre.
https://es.scribd.com/doc/58653775/trabajo-bacterias (Guimaray Jonathan 2011)

 PARA QUE NOS SIRVEN LAS PRACTICAS DEL LABORATORIO?

El objetivo fundamental de la práctica de laboratorio es dar a conocer y comprender los
procedimientos y técnicas propias para el análisis microbiológico, teniendo como elementos
fundamentales en adquirir conocimiento y la comprensión de las técnicas de recuento
microbiano, los métodos de siembra microbiana y su importancia. En el laboratorio se
revisaron las temáticas: Métodos de siembra, Técnicas de Tinción y algunas técnicas
aplicadas en microbiología Ambiental.

Se destaca laboratorio la importancia de la realización de análisis microbiológicos de las

muestras, es necesario comprender el metabolismo microbiano y la caracterización de los
mismos, ya que de esto depende su identificación y conocimiento de la actividad es
necesario conocer sus características morfológicas, fisiológicas, metabólicas. (Guimaray
Jonathan 2011)
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 QUE PUDIMOS APRENDER SOBRE EL MICROSCOPIO ?

En microbiología el microscopio se utiliza de forma rutinaria, ya que proporciona

importante información para la identificación temprana y definitiva de los microorganismos.
En la valoración de las muestras, es trascendente el poder de resolución del microscopio,
el cual se define como la capacidad que posee un objetivo para distinguir la distancia
mínima entre dos puntos del objeto para que se puedan visualizar como dos puntos
separados. El poder de resolución de un objetivo es el responsable de la calidad, claridad,
nitidez y fineza detallada de la imagen, y depende de la longitud de onda (λ) del haz de luz
utilizado y de la apertura numérica del objetivo empleado. El máximo poder de resolución
en un microscopio de luz emitida es de 0.2 μm, por lo que se requiere de una amplificación
entre 1000-1400x, mientras que el poder de resolución del ojo humano es de
aproximadamente 0.2 mm.( Edgar Perez Aparicio 2011 )

CONCLUSIONES

ESTERILIZACIÓN :
1. Reconocer cuales son los agentes de control más empleados para combatir los
microorganismos.

2. Conocer el efecto que causa cada uno de los agentes de control microbiano sobre la célula.

Los microorganismos pueden producir enfermedades cuando infectan personas, animales y

plantas y cuya gravedad oscila entre una infección débil, intoxicación e incluso la
muerte. Pueden contaminar los alimentos y producir cambios físicos y químicos en ellos,
haciéndolos en algunos casos incomibles e incluso venenosos. Los microorganismos son
responsables también de la alteración de muchos otros materiales, generando graves
pérdidas económicas. Por ello es indispensable disponer de procedimientos para controlar la
contaminación.
Las principales razones para controlar la contaminación y el crecimiento microbiano
. Las principales razones para controlar a losmicroorganismos pueden resumirse de la
siguiente forma:
 Para evitar la transmisión de las enfermedades y las infecciones.
 Para eliminar los microorganismos de un hospedador que está infectado.
 Para eliminar microorganismos de diferentes materiales y así evitar su deterioro y
alteración.

MEDIO DE CULTIVO

Por regla general los ingredientes de los medios de cultivo se disuelven por agitación y calentando
ligera-mente en agua destilada. Los medios que contienen agente gelificante se suelen hervir durante
1 minuto para conseguir su disolución. Aunque en la mayor parte de los medios hay que calentar,
hay que evitar sobre calentamientos innecesarios Algunos medios presentan turbidez inevitable o precipitados,
por ejemplo, la Base de Caldo Tetrationato. Al distribuir el medio debe hacerse de forma uniforme,
para que el precipitado quede bien repartido. Posteriormente a la disolución se procede a la
esterilización del medio. En algunos casos existen componentes lábiles que no pueden
añadirse en el medio de cultivo deshidratado y que será necesario su esterilización por
separado y una posterior incorporación de forma aséptica para obtener el medio completo. El pH de los
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medios de cultivo se ajusta durante su fabricación a los valores descritos en cada uno de ellos. Sin
embargo, la calidad del agua que se utiliza en su hidratación, la utilización de medios no
recientes etc., pueden modificar este parámetro por lo que es aconsejable verificarlo y reajustarlo si
fuera necesario.
https://es.scribd.com/doc/8614571/Manual-de-Medios-de-Cultivo (Sanchez William 2008)

TINSION DE GRAM

Las tinciones en microbiología son las primeras herramientas que se utilizan en el laboratorio
para el diagnóstico de las enfermedades infecciosas. Desde hace más de un siglo han ayudado
a resolver problemas de etiología microbiana. Hay una gran variedad de tinciones, que se han
ido desarrollando para la detección de los diferentes agentes infecciosos –en los que se
incluyen bacterias, parásitos y hongos–. La tinción de Gram se considera básica en la
valoración inicial de muestras para análisis bacteriológico, mientras que la tinción de Wright se
ocupa para el diagnóstico de enfermedades muy particulares en el rubro de la parasitología.
Hay técnicas tintoriales específicas de gran utilidad, como la tinción de Ziehl-Neelsen, que se
utiliza para el diagnóstico de enfermedades crónicas como la tuberculosis o la actinomicosis, o
la tinción de azul de lacto fenol, que preserva e identifica a los componentes estructurales de
los hongos. Las diferentes tinciones en el laboratorio microbiológico tienen una utilidad
fundamental para el diagnóstico y tratamiento oportuno de múltiples patologías de etiología
infecciosa.
https://es.scribd.com/search?content_type=tops&page=1&query=TINSION%20DE%20GRAM
&language=4

OBSERVACIONES

Pudimos observar que después de haber transcurrido 24 horas en el horno hubo un crecimiento
bacteriano, en diferentes recipiente caja Petri, en el recipiente que le ingresamos el cabello
hubo un crecimiento de bacterias que tomo forma a lo largo del cabello y podemos observar
que es parecida a la forma filamentosa.
El recipiente cajas Petri que estaba con el suspiro pudimos observar un mínimo microorganismo
y se pudo observar con forma circular ya que se desarrolló en forma redonda.
Y por último pudimos observar el recipiente de caja Petri que era estéril en este quedo bien
esterilizado y no se pudo observar microorganismos a sus alrededores.
En cuanto a la desinfección en el laboratorio la hicimos lavando con agua y jabón el mesón y
aplicando después algo de límpido para que este esté algo estéril,
Lo importante de hacer estos procesos es conocer y comprender la importancia de la limpieza
y desinfección del laboratorio de microbiología
para mantener un espacio adecuado para el trabajo ;estético y que no afecte a la salud
ni al ambiente ( Reyes Paola 2019)
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REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

 http://www.icroinmuno.qb.fcen.uba.ar/Seminarioesterilizacion.htm
 http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/tp4.pdf.
 https://www.webconsultas.com/pruebas-medicas/tincion-de-gram-13399
 http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/Seminarioesterilizacion.htm
 http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioMedios.htm
 https://www.webconsultas.com/pruebas-medicas/tincion-de-gram-13399
 https://es.scribd.com/doc/58653775/trabajo-bacterias (Guimaray Jonathan 2011)
 https://es.scribd.com/doc/8614571/Manual-de-Medios-de-Cultivo (Sanchez William 2008)
 https://es.scribd.com/document/270969010/Tinsion-Gram-Negativas (Perez edgar 2015)
 https://es.scribd.com/search?content_type=tops&page=1&query=TINSION%20DE%20GRAM
&language=4
 SCRIBD
