DETALLES

Clase/proyecto Medios Selectivos y Diferenciales

Fecha/Hora/Ubicación 04/09/2019|1:00p.m|Universidad Nacional

Objetivo Reconocer la utilización de nutrientes por parte de las bacterias

en medios selectivos y diferenciales.

Asistentes Luis Vega & Cristian Fonseca

Resumen
Existen diferentes tipos de cultivos que facilitan la identificación de cepas bacteriana, estos
pueden ser clasificados como selectivos o diferenciales, incluso ambos. Un medio selectivo, es
aquel que inhibe el crecimiento de un tipo de bacteria promoviendo el crecimiento de otras.Un
medio diferencial es el cual crece cualquier tipo de bacterias, pero las clasifica (la mayoría de
las veces) con algún tipo de tinción. La mayoría de los agares utilizados en esta práctica de
laboratorio son selectivos y diferenciales.
MATERIALES

Placas de agar MacConkey

Placas de agar Levine

Placas de agar Manitol Sal

Placas de agar Baird parker

Placas de agar TCBS

Placas de agar Nutritivo

Reactivos para la tinción de Gram

Cultivos de Proteus sp., Klebsiella sp., Escherichia coli, Staphylococcus aureus y S.

epidermidis, Vibrio sp.

PROCEDIMIENTO
 1. Realice un frotis para cada cultivo y una tinción de Gram.

2.Con un marcador, divida en tres zonas las placas con los agares

3.En las placas de Mc Conkey y Levine raye los cultivos de Proteus sp., E. coli y
Klebsiella sp.

4.En las placas de manitol sal y Baird Parker raye los cultivos de Staphylococcus
aureus y Staphylococcus epidermidis.

5.En las placas de TCBS raye los cultivos de Vibrio sp. y Proteus sp.

6.Incube a todas las placas excepto la de TCBS a 35 °C por 24 h. Las de TCBS se

incubarán a temperatura ambiente por 16 h.

7. Observe el crecimiento.

RESULTADOS
Cepa incógnita: 1

Figura 1. Muestra bajo el microscopio de la cepa incógnita 1, denotando Gram negativa

(G-)
Figura 2. Resultados del cultivo de las 7 cepas de la clase en agar nutritivo (AN)
 Figura 3. Resultados del cultivo de las 7 cepas de la clase en agar Levine

Figura 4. Resultados del cultivo de las 7 cepas de la clase en agar Mc Conkey. (McCK)
Figura 5. Resultados del cultivo de las 7 cepas de la clase en agar Manitol Sal (MS)

Figura 6.Resultados del cultivo de las 7 cepas de la clase en agar

Tiosulfato-Citrato-Bilis-Sacarosa (TCBS)
N.Cepa BACTERIA GRAM AN LEVINE McCK MS TCBS

1 Klebsiella BG- ✓ ✓ ✓
2 Serratia BG- ✓ ✓ ✓
3 Pseudomonas BG- ✓
4 S.aureus CG+ ✓ ✓
5 E.Coli BG- ✓ ✓ ✓
6 Bacillus BG+ ✓
7 Vibrio BG- ✓ ✓

DISCUSIÓN
Los diferentes agares utilizados anteriormente son tanto selectivos como diferenciale,
excepto el agar nutritivo, el cual puede crecer la mayoría de las cepas bacterianas,
podemos notar como todas las cepas crecieron excepto la cepa #7, lo que indica que
es una cepa especialmente estricta con respecto a su nutrición.

Levine es utilizado para pruebas presuntivas de los miembros del grupo coliforme,
cuando se realizan análisis de agua, leche y otros productos lácteos. La eosina y el
azul de metileno inhiben el crecimiento de Gram positivas y algunas Gram negativas. El
medio contiene lactosa como único carbohidrato, las bacterias que la utilizan formarán
colonias que varían entre azul-negro con brillo metálico (E. coli) a colonias café
(Aerobacter aerogenes). Las que no la utilizan formarán colonias incoloras. La muestra
de Levine fue contaminada, pero según los registros de la clase creció la cepa 1,2 y 5,
siendo 1 y 2 incoloras y 5 con un especial brillo metálico el cual es característico de
E.Coli.

El agar MacConkey se utiliza para el aislamiento de bacterias Gram negativas

pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae. Contiene sales biliares y cristal violeta
que inhiben las bacterias Gram positivas y algunas Gram negativas que no pertenecen
a la familia Enterobacteriaceae (selectivo). Contiene lactosa como único carbohidrato y
rojo neutro como indicador de pH, las bacterias fermentadoras de lactosa producirán
colonias entre rojas y fucsia. Las no fermentadoras producirán colonias incoloras
(diferencial). El medio de cultivo de McCk fue contaminado ya que según los registros
de clase solo tuvieron que crecer las cepas 1,2 y 5. La cepa 2 y 5 correspondiente a
serratia produjo un color rojo fuerte por lo que podemos concluir que son fermentadoras
de lactosa, mientras que la 1 no lo es, ya que resultó ser incolora.

El agar Manitol Sal es un medio de cultivo altamente selectivo, ya que tiene una alta
concentración de cloruro de sodio, 7.5%, que impide el crecimiento de la mayoría de
las bacterias pero es tolerada por los Staphylococcus (selectivo). Además, el medio
contiene manitol como único carbohidrato y rojo fenol como indicador de pH. Cuando
hay producción de ácido como resultado de la fermentación del manitol, las colonias
aparecerán rodeadas de un halo amarillo. En colonias no fermentadoras de manitol, el
medio permanecerá sin cambio de color (diferencial). El medio de cultivo MS fue
contaminado ya que según los resultados de clase debieron crecer únicamente la cepa
4 y 7 las cuales corresponden a ​Staphylococcus Aureus ​y ​Vibrios sp, ya que estos
son halófilos y por su coloración amarilla fermentadores de manitol.

El agar TCBS es utilizado en el aislamiento selectivo de vibrios. Las altas

concentraciones de tiosulfato y citrato, la presencia de bilis y un pH fuertemente
alcalino actúan como agentes inhibidores de microorganismos Gram positivos y
coliformes. La degradación de la sacarosa es variable entre las especies de Vibrios y
las colonias son verdes para las cepas que no la utilizan y amarillas para aquellas que
producen ácido a partir de este azúcar. Esto es debido al viraje del color de los
indicadores de pH azul de timol y azul de bromotimol, del color azul al amarillo en
medio ácido. Aumentando la concentración de cloruro de sodio y disminuyendo la
temperatura de incubación, pueden aislarse especies marinas sin importancia sanitaria,
esta es la razón por la cual solo creció la cepa número 7 correspondiente a ​Vibrios sp,​
la cual es un tipo de bacteria marina, la cepa fue verde entonces no produce ácido a
partir de azúcar.