TEÓRICO 9: Receptores III.

El empleo de radioligandos (ligandos radioactivos) se lleva a cabo con los siguientes

objetivos:
• Medición de las constantes de equilibrio de disociación.
• Medición de las constantes de velocidad de asociación y disociación.
• Medición de la densidad de receptores.
• Reconocimiento y cuantificación de subtipos de receptores.
• Obtención de receptores mediante purificación química.
• Estudio de los mecanismos de acción de agonistas.

Los distintos estudios pueden ser de saturación, cinéticos, de competición o de retardo.

I) Estudios de saturación:
Para cualquiera de estos estudios debe tenerse en cuenta que la unión del radioligando a
sus sitios de unión se produce de acuerdo con la siguiente ecuación:

R  L 
KD
RL

Por lo tanto:

KD 
 R . L 
 RL

Como:

 RT    R    RL

 R    RT    RL

Entonces:

KD 
  RT    RL . L
 RL

KD 
 RT . L    RL. L
 RL
KD 
 RT . L   L
 RL

K D   L 
 RT . L
 RL

 RL   L
 RT  K D   L
 (1)

De este modo, obtenemos la ecuación que nos permite el cálculo de la fracción de sitios
de unión libres. Además, cuando:

 L  K D

Se observa que:

 RL  1 . RT 
2

Si graficamos [RL]/[RT]= f ([L]), obtenemos una gráfica de este estilo:

El ligando se une a los receptores de estudio (unión específica) y además se une a sitios
inespecíficos (unión inespecífica). La unión específica es saturable mientras que la
inespecífica no lo es. Por lo tanto:

UnionTotal  Unionespecifica  Unioninespecifi ca

El gráfico anterior nos brinda información acerca de la unión total. Por lo tanto, si
queremos obtener información acerca de los receptores de estudio, debemos de alguna
manera medir la unión inespecífica para luego restársela a la unión total y así obtener la
unión específica:

Unionespecifica  UnionTotal  Unioninespecifi ca

Se procede por lo tanto del modo detallado en el siguiente esquema. La unión total se
obtiene debido a que los ligandos radiactivos se unen a los sitios específicos y a los
sitios inespecíficos (izquierda), mientras que la unión inespecífica se obtiene debido a
que los ligandos no radiactivos se unen a los sitios específicos y los ligandos radiactivos
se unen a los sitios inespecíficos (derecha).
Sabiendo que:

KD 
 R . L
 RL

K D . RL
 R 
 L

Y que:

 RT    R    RL 

 RL    RT    R 

Nos queda:

 RL    RT   K D . RL
 L
Scatchard propuso esta ecuación utilizando diferentes términos, en donde B hace
referencia a la capacidad del ligando de unirse a los receptores y F hace referencia a la
fracción de ligando libre:
B   RL 
Bmax   RT 
F   L

Por lo tanto, la ecuación nos queda:

B
B  Bmax  K D
F

Si graficamos B = f (B/F), obtenemos una gráfica cuya pendiente es la constante de

disociación -KD y su ordenada al origen es la capacidad máxima de unión a los
receptores Bmax:

Rosenthal, por su parte, parte de la ecuación de Scatchard y la transforma según:

 RL   RT   K D . RL
 L
K D . RL 
  RT    RL 
 L

 RL 
 RT    RL
 L KD KD

Reemplazando por los términos B y F nos queda:

B Bmax 1
  .B
F KD KD

Si graficamos B/F = f (B) nos queda una gráfica cuya pendiente es -Ka y su raíz es Bmax.
Por otra parte, a partir de la ecuación (1):

 RL   L
 RT  K D   L

Y reemplazando luego por los términos correspondientes:

B F

Bmax KD  F

Puede obtenerse lo que se conoce con el nombre del coeficiente de Hill:

Bmax K F
 D
B F
Bmax KD
 1
B F

Bmax K
1  D
B F

Bmax  B K
 D
B F

B F

Bmax  B KD

 B 
log   log F  log K D
 Bmax  B 

Si graficamos log (B/(Bmax-B)) = log F obtenemos una gráfica cuya pendiente debe ser 1
en caso de que no exista regulación alostérica en lo que se refiere a la unión ligando-
receptor. En caso de que sí exista regulación alostérica, la pendiente será distinta de 1 y
la ecuación debe corregirse según:

 B 
log   n. log F  log K D
 Bmax  B 

Donde n representa al coeficiente de Hill.

En ocasiones el gráfico de Scatchard puede ser no lineal. Esto sucede cuando existen
dos receptores distintos, de modo tal que la afinidad de cada uno por el ligando es
diferente. Inicialmente el ligando se unirá a los receptores de baja y alta afinidad. Una
vez ocupados todos los receptores de alta afinidad, solo nos quedarán los receptores de
baja afinidad. Esto se da cuando pKD es mayor que dos.

II) Estudios cinéticos:

La disociación del complejo RL sigue una cinética de orden 1. Por lo tanto:

ln RL   ln RL  to  k1.t

Graficando ln [RT]= f (t) se obtiene una gráfica cuya pendiente es k-1.

Calcular la constante de velocidad de asociación es quizá un poco más complicado, ya

que la asociación de R y L para dar RL sigue una cinética de orden 2. Sin embargo, si
tenemos en cuenta que la constante de disociación es igual a:

k1
KD 
k1
Entonces la constante asociación k1 puede calcularse luego de calculada la KD por
estudios de saturación y la k-1 por estudios cinéticos.

III) Estudios de competición:

Estos estudios se realizan en aquellas situaciones en las que no se dispone de
radioligandos. Se evalúa la capacidad de un antagonista de desplazar de su receptor a un
agonista y por ende de modificar la KD en la curva dosis-respuesta.

IV) Estudios de retardo:

Se evalúa como es afectada la unión de un ligando irreversible a su receptor en

presencia de un receptor reversible que actúa como antagonista. Este receptor reversible
es aquel cuyos parámetros se buscan conocer.