UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANO PUNO

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AGRONÓMICA

TRABAJO DE PRACTICAS EN EL LABORATORIO DE

FITOPATOLOGIA

PRESENTADO POR: MARCO ANTONIO

SUMERINDE QUISPE

COMPONENTE CURRICULAR: PRACTICAS PRE-

PROFESIONALES

DOCENTE: GONZALES DIABUNO

HECTOR

SEMESTRE: “IX”

GRUPO: “UNICIO”

C.U.2 DE OCTUBRE DEL 2019

Preparación de Medios de Cultivo
Los medios de cultivo de microorganismos (hongos, bacterias, levaduras) son
esenciales en el Laboratorio de Fitopatología por lo que a diario se preparan y
utilizan. „ Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que, en
concentraciones adecuadas y en condiciones físicas óptimas, permiten el
crecimiento de los microorganismos.

El medio de cultivo constituye el aporte de nutrientes indispensables para el

crecimiento de los microorganismos. La composición precisa dependerá de la
especie que se quiera cultivar, porque las necesidades nutricionales varían
considerablemente. Hay microorganismos muy poco exigentes que crecen bien
en medios de laboratorio normales y microorganismos muy exigentes que
necesitan determinadas sustancias como vitaminas, suero o sangre para crecer.
Existen medios cuya composición permite el crecimiento de:
1. un gran número de especies (agar nutritivo, caldo ordinario, agar de
Sabouraud),
2. determinados microorganismos (impidiendo el desarrollo de otros), son los
denominados medios selectivos.
3. Otros en cambio, se desarrollan para el estudio de determinadas pruebas
fisiológicas o test bioquímicos (utilización de citratos, acidificación a partir de
azúcares, etc.).
Los medios de cultivo poseen una serie de componentes:
1. Indispensables: Entre los primeros se incluye el agua, nutrientes orgánicos
(hidratos de carbono, aminoácidos, vitaminas, etc) y nutrientes inorgánicos (P,
Fe, N, Mg, S, etc)
2. Alternativos: sustancias isosmotizantes (NaCl), agente solidificante (agar-
agar), tampones, indicador de pH, etc.

Durante las prácticas se van a manejar medios de cultivo de composición muy

variada y de tres tipos diferentes en cuanto a consistencia: medios sólidos,
semisólidos y líquidos. Este último aspecto es importante a la hora de la
preparación de los mismos. Aunque los medios artificiales o sintéticos se pueden
preparar a partir de sus componentes individuales, se pueden adquirir
comercialmente como medios deshidratados a los que solamente hay que añadir
la cantidad de agua necesaria. El fabricante indica la composición, la caducidad,
y la cantidad que debe pesarse por cada litro a preparar e incluso como debe
esterilizarse.

OBJETIVOS CONCRETOS DE LA PRÁCTICA

1. Preparar medios de cultivo como soporte y fuente de nutrientes para el
desarrollo de los microorganismos in vitro.
2. Manejar los instrumentos de uso rutinario, a la vez que imprescindibles, en
el laboratorio de microbiología.
3. Hacer un primer acercamiento a la manipulación de microorganismos. Adquirir
la idea de la importancia del trabajo en condiciones de esterilidad y las técnicas
más comunes para realizarlo.
Conocer a que denominamos medio de cultivo en el laboratorio de Fitopatología.
Reconocer la existencia de diferentes tipos de medio.
Reconocer la utilidad de los diferentes medios de cultivo en el trabajo con
patógenos de plantas.
El alumno debe:
1) ser capaz de elaborar medios de cultivo con el fin de ser utilizados
posteriormente para el aislamiento de hongos, bacterias o microorganismos
epifíticos.
2) Desenvolverse con soltura en la utilización de protocolos.

Realización práctica

Preparación de medios de cultivo

Cada mesa de trabajo se encargará de la preparación de una cantidad suficiente
de un determinado medio de cultivo, para ser utilizado, en su momento, por todos
los alumnos del grupo de prácticas. Las instrucciones a seguir dependerán del
número de mesa y el medio de cultivo asignado, pero en todos los casos, los
pasos son los siguientes:

1. Disolver los componentes del medio en agua destilada. En muchos casos se

parte de un preparado comercial con todos los componentes deshidratados.
Siguiendo las instrucciones del fabricante o del profesor, añadir la cantidad de
agua adecuada para conseguir la concentración deseada de los mismos. Si el
medio contiene un agente solidificante (agar-agar) hay que calentar el preparado
hasta la ebullición del mismo agitando de vez en cuando, para asegurar una
completa disolución del agar (medios sólidos y semisólidos); para medios
líquidos no es necesario calentar, únicamente se agita la mezcla hasta la
completa disolución de la misma.
2. Esterilizar la disolución.- Una vez disuelto el medio se debe esterilizar para
evitar el crecimiento de contaminantes. Dependiendo de la forma en que vaya a
utilizarse el medio, el procedimiento será diferente:

a) Medios sólidos en placa.- Tapar el matraz con tapón de algodón y cubrir con
papel de aluminio. Llevar a esterilizar al autoclave (1210C) durante 15-20
minutos. Una vez estéril repartir en placas de Petri estériles y dejar en reposo
para que solidifique.

b) Medios líquidos.- Una vez disueltos los componentes repartir en tubos a razón
de unos 2-4 ml por tubo, tapar con tapón de aluminio y llevar a esterilizar en
autoclave.
Condiciones que debe reunir un Medio de cultivo
 Para que los microorganismos crezcan adecuadamente, un medio de
cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones:
 contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios
 disponer de oxígeno
 temperatura adecuada
 humedad
 pH.
 exento de microorganismos contaminantes
Disponibilidad de nutrientes en los Medios de cultivo.
 Un medio de cultivo para que permita el crecimiento adecuado de
microorganismos debe contener como mínimo:
 Carbono
 Nitrógeno
 Azufre
 Fósforo
 Sales inorgánicas que suplan iones (K, Mg, Fe, Ca, etc.).
Disponibilidad de nutrientes en los Medios de cultivo
 Estos nutrientes generalmente se aportan con Extracto de malta,
Peptona, Papa, extracto de levadura, etc.
Disponibilidad de nutrientes en los Medios de cultivo
 Estos nutrientes generalmente se aportan con Extracto de malta,
Peptona, Papa, extracto de levadura, etc.
Medios de cultivo según su composición
 Medios complejos o de composición indefinida: Son medios cuya
composición no se conoce con exactitud.
 contienen nutrientes en abundancia pero sin saber con exactitud la
composición cualitativa ni cuantitativa de estos nutrientes.
 Ej: Agar Papa; Agar Malta.
Medios complejos
 Agar Papa Dextrosa:
 Medio para el cultivo y conteo de levaduras y hongos en general.
 Agar -15g
 Dextrosa - 20g
 Infusión papa - 4g
 Agua destilada 1L