UNIVERSIDAD NACIONAL JOSE MARIA ARGUEDAS

CARRERA PROFESIONAL DE

INGENIERIA AGROINDUSTRIAL

TEMA:

Practica N° 3 técnicas de sembrado de microorganismos

PRESENTADO POR:

Derry Intusca Ramos

Leibniz Gómez Huayllas

SEMESTRE:

CURSO:

Microbiología Agroindustrial

PROFESOR (A):

Ingeniera: Buleje Campos Dianeth

Andahuaylas- Apurímac 07 de octubre del 2019

 1. INTRODUCCIÓN
Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es
observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el
laboratorio. El medio de cultivo constituye el aporte de nutrientes indispensables
para el crecimiento de los microorganismos.

Un medio de cultivo está formado, por una parte, de componentes indispensables:

agua, nutrientes orgánicos (hidratos de carbono, aminoácidos, vitaminas, etc.),
nutrientes inorgánicos (P, N, Mg, S, etc.).

Por otra parte, está formado por componentes alternativos: agente solidificante
(agaragar), tampones, indicadores de pH, etc.

Existen diferentes clasificaciones de medios de cultivo en función de:

a) Su consistencia:
• Medios líquidos
• Medios sólidos (en tubo, en placa)
• Medios semisólidos b) Su uso:

• Medio general: Es aquel medio donde crecen todo tipo de microorganismos,

excepto aquellos que necesitan de unas condiciones especiales.

• Medio diferencial: permiten identificar una especie o grupo por su crecimiento ya

sea por su metabolismo, respiración, etc.

• Medio selectivo: permiten seleccionar el crecimiento de una especie o grupo

determinado (hongos, bacterias entéricas, protozoos...).

2. OBJETIVOS
2.1. Investigar, Conocer, aprender y realizar las siguientes técnicas de
sembrado de microorganismos en un medio de cultivo en el laboratorio de
microbiología agroindustrial.
2.2. Comprobar el crecimiento de los diferentes microorganismos en los
medios de cultivo y muestras.

3. MARCO TEORICO
AGAR XLD El agar XLD (Xilosa, Lisina, Desoxicolato) es un medio selectivo
diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciación de patógenos entéricos
Gram negativos, especialmente del género Shigella. Composición Xilosa 3,75 g L-
Lisina 5,0 g Lactosa 7,5 g Sacarosa 7,5 g Cloruro de Sodio 5,0 g Extracto de
Levadura 3,0 g Rojo Fenol 0,08 g Desoxicolato de Sodio 2,5 g Tiosulfato de Sodio
6,8 g Citrato Férrico de Amonio 0,8 g Agar 15,0 g Agua destilada c.s.p. 1000 mL

Condiciones generales para el cultivo de microorganismos

El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve

afectado por una serie de factores de gran importancia y que, en algunos casos,
son ajenos por completo al propio medio.

3.1- disponibilidad de nutrientes adecuados

Un medio de cultivo adecuado para la investigación microbiológica ha de contener,

como mínimo, carbono, nitrógeno, azufre, fósforo y sales inorgánicas. En muchos
casos serán necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras del
crecimiento. Siempre han de estar presentes las sustancias adecuadas para
ejercer de donantes o captadores de electrones para las reacciones químicas que
tengan lugar.

Todas estas sustancias se suministraban originalmente en forma de infusiones de

carne, extractos de carne o extractos de levadura. Sin embargo, la preparación de
estas sustancias para su aplicación a los medios de cultivo provocaba la pérdida
de los factores nutritivos lábiles.

Actualmente, la forma más extendida de aportar estas sustancias a los medios es

utilizar peptona que, además, representa una fuente fácilmente asequible de
nitrógeno y carbón ya que la mayoría de los microorganismos, que no suelen
utilizar directamente las proteínas naturales, tienen capacidad de atacar los
aminoácidos y otros compuestos más simples de nitrógeno presentes en la
peptona.

Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas específicas por lo que se añade a

muchas medias sustancias como suero, sangre, líquido ascítico, etc. Igualmente
pueden ser necesarios ciertos carbohidratos y sales minerales como las de calcio,
magnesio, manganeso, sodio o potasio y sustancias promotoras del crecimiento,
generalmente de naturaleza vitamínica.
Muy a menudo se añaden al medio de cultivo ciertos colorantes, bien como
indicadores de ciertas actividades metabólicas o bien por sus capacidades de
ejercer de inhibidores selectivos de ciertos microorganismos.

3.2- consistencia adecuada del medio

Partiendo de un medio líquido podemos modificar su consistencia añadiendo

productos como albúmina, gelatina o agar, con lo que obtendríamos medios en
estado semisólido o sólido.

Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos
microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al
punto de fusión de este solidificante y de que otros tienen la capacidad de licuarla.

Actualmente los medios sólidos son de uso universal, por su versatilidad y

comodidad, pero hay también gran cantidad de medios líquidos cuyo uso está
ampliamente extendido en el laboratorio.

3.3- presencia (o ausencia) de oxígeno y otros gases

Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmósfera con tensión de

oxígeno normal. Algunas pueden obtener el oxígeno directamente de variados
sustratos. Pero los microorganismos anaerobios estrictos sólo se desarrollarán
adecuadamente en una atmósfera sin oxígeno ambiental. En un punto intermedio,
los microorganismos microaerófilos crecen mejor en condiciones atmosféricas
parcialmente anaerobias (tensión de oxígeno muy reducida), mientras los
anaerobios facultativos tienen un metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de
las citadas condiciones.

3.4- condiciones adecuadas de humedad

Un nivel mínimo de humedad, tanto en el medio como en la atmósfera, es

imprescindible para un buen desarrollo de las células vegetativas microbianas en
los cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mínimas en las
estufas de cultivo a 35-37ºC proporcionando una fuente adecuada de agua que
mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar así
que se deseque el medio.

3.5- Luz ambiental

La mayoría de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en
presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sería el caso de los
microorganismos fotosintéticos.

3.6- pH

La concentración de iones hidrógeno es muy importante para el crecimiento de los

microorganismos. La mayoría de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH
neutro, aunque los hay que requieren medios más o menos ácidos. No se debe
olvidar que la presencia de ácidos o bases en cantidades que no impiden el
crecimiento bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus procesos
metabólicos normales.

3.7- Temperatura

Los microorganismos mesófilos crecen de forma óptima a temperaturas entre 15 y

43ºC. Otros como los psicrófilos crecen a 0ºC y los temófilos a 80ºC o incluso a
temperaturas superiores (hipertemófilos). En líneas generales, los patógenos
humanos crecen en rangos de temperatura mucho más cortos, alrededor de 37ºC,
y los saprofítos tienen rangos más amplios.

3.8- Esterilidad del medio

Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estériles para evitar la
aparición de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el
crecimiento microbiano normal del o de los especimenes inoculados en dichos
medios. El sistema clásico para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave
(que utiliza vapor de agua a presión como agente esterilizante)

4. MATERIALES
4.1. MATERIALES  1 rotulador
 5 Placas Petri
 1 pipeta de 10 ml  6 placas Petri
 1 mechero
 5 tubos de ensayo
 1 aza de col
 1 vaso precipitado de 500 ml
4.1. MUESTRAS Agua peptonada
 Yogurt

4. PROCEDIMIENTO
I. Primeramente, hacemos la dilución de la muestra de yogurt más el agua
peptonada

1 ml muestra de yogurt 9 ml de agua peptonada

Luego lo rotulamos los cinco tubos de ensayo con los siguientes nombres
10−1 10−2 10−3 10−4 10−5.
PROCEDIMIENTO DE LA DILUCIÓN:
 con la pipeta de 10 ml sacamos a 4 tubos de ensayo 9 ml de agua
peptonada.
 Y en el quinto tubo de ensayo ponemos 9 ml de agua peptonada más 1 ml
de muestra de yogurt, le rotulamos con el nombre de 10−1.
 se extrae 1 ml de solución del tubo de ensayo rotulado 10−1 y se le pasa al
tubo de ensayo 10−2.
 se extrae 1 ml de solución del tubo de ensayo rotulado 10−2 y se le pasa al
tubo de ensayo 10−3.
 se extrae 1 ml de solución del tubo de ensayo rotulado 10−3 y se le pasa al
tubo de ensayo 10−4.
 se extrae 1 ml de solución del tubo de ensayo rotulado 10−4 y se le pasa al
tubo de ensayo 10−5.
 Recuerde siempre usando la pipeta de 10 ml y esterilizando con el calor del
mechero y tapando cada tubo de ensayo con su algodón respectivo.

II.PRIMER MÉTODO DE SEMBRADO DE MICROORGANISMOS POR

INCORPORACIÓN:
 En la primera placa Petri le sacamos de la muestra del tubo de ensayo 10−1
0.1 ml y después le echamos el medio de cultivo agar TSI al cálculo de uno
mismo.
 En la segunda placa Petri le sacamos de la muestra del tubo de ensayo
10−2 0.1 ml y después le echamos el medio de cultivo agar TSI al calculo
de uno mismo.
  En la tercera placa Petri le sacamos de la muestra del tubo de ensayo 10−3
0.1 ml y después le echamos el medio de cultivo agar TSI al cálculo de uno
mismo.
 En la cuarta placa Petri le sacamos de la muestra del tubo de ensayo 10−4
0.1 ml y después le echamos el medio de cultivo agar TSI al cálculo de uno
mismo.
 En la quinta placa Petri le sacamos de la muestra del tubo de ensayo 10−5
0.1 ml y después le echamos el medio de cultivo agar TSI al cálculo de uno
mismo.
Hacemos este método siempre usando la pipeta de 10 ml y esterilizándolo con el
mechero y también después de usarlas tapando el tubo de ensayo con algodón.
III. SEGUNDO MÉTODO DE SEMBRADO DE MICROORGANISMOS POR
ESTRÍA:
a. En dos placas Petri en su base desplazamos con el aza de col el agar
macconkey todo completo en cruz, a esto se le llama muestra problema.
b. Y en la tercera placa Petri desplazamos la muestra del tubo de ensayo 10−1
todo completo.
c. A cada placa Petri hacemos el sembrado de la muestra de yogurt con el
aza de col lo desplazamos en la placa Petri en cruz.
d. Recomendaciones, siempre usando el mechero como esterilizador y
tapando con el algodón el tubo de ensayo para el sembrado de cultivo.

IV. TERCER MÉTODO DE SEMBRADO DE MICROORGANISMOS POR

DICEMINACION:
En una placa Petri en su base desplazamos con el aza de col el agar
macconkey todo completo en línea recta, a esto se le llama muestra
problema.
Y en las dos últimas placas Petri desplazamos la muestra del tubo de
ensayo 10−1 10−2 todo completo.
A cada placa Petri hacemos el sembrado de la muestra de yogurt con el
aza de col lo desplazamos en la placa Petri en línea recta.
Recomendaciones, siempre usando el mechero como esterilizador y
tapando con el algodón el tubo de ensayo para el sembrado de cultivo.

V. CUARTO MÉTODO DE SEMBRADO DE MICROORGANISMOS POR

PUNTURA:
 llenar a dos tubos de ensayo esterilizados el agar TSI en 1/3 parte del tubo
de ensayo.
 llenar a dos tubos de ensayo esterilizados el agar Lia en 1/3 parte del tubo
de ensayo.
 Para cada tubo de ensayo de cada muestra agarramos con un aza de col
en punta le metemos a la placa Petri del cultivo de agar más muestra y lo
sacamos al tubo de ensayo siempre esterilizando con el mechero.
 Luego lo llevamos a la estufa a una temperatura de 35°-37° C x 48 horas,
dependiendo al crecimiento microbiano si es rápido es en 24 horas.
 5.RESULTADOS
Resultado 1.
Resultado 2.
Resultado 3.

6. CONCLUSIONES
 Investigando sobre el tema logramos llenarnos de conocimiento y aprender
a realizar un sembrado de microorganismos o de cultivo con las diferentes
técnicas de sembrado de microorganismo en el laboratorio de microbiología
agroindustrial.
Además, lo pusimos en práctica en nuestra clase de práctica en el
laboratorio de microbiología agroindustrial.
7. CUESTIONARIO
7.1. ¿Qué criterios se debe tener en cuenta para elegir una técnica
de siembra?

Para una siembra se debe tener en cuenta la temperatura, el grado de

humedad, el oxígeno.

7.2. ¿Cuál es la finalidad de sembrar un microorganismo en un

medio de cultivo artificial?

En el sembrado de un microorganismo es con el fin de aportar la especie

aislado porque las bacterias crecen adecuadamente en medios de cultivos.

7.3. ¿Qué técnica de siembra utilizaría para hacer un transplante

bacteriano? ¿Por qué?

Se utiliza las siguientes técnicas para hacer el trasplante bacteriano; es una

siembra en las placas Petri, por estrías o difusión, porque se encarga de la
separación del cultivo.

7.4. ¿Por qué mediante la técnica de sembrado por estrías, es un

cuadrante de la placa Petri se desarrollan masas microbianas
indiferenciadas?
 En la cuadrante de la placa que fue sembrado existen masas microbianas
indiferenciados por las técnicas que se usó las muestras al ser difuminada
de lado a lado.

7.5. ¿Cree usted que la técnica de siembra está en función del medio
de cultivo a utilizar?

Sí; porque tiene que utilizarse el medio de cultivo dependiendo a tipo de

muestra; así elegir la técnica adecuada para poder realizar la siembra de
los microorganismos.

8.BIBLIOGRAFIA

 http://www.mclibre.org/otros/daniel_tomas/laboratorio/cultivo_bacterias/62_Cultivo_Ba
cterias_DAVID_AGUD.pdf
 file:///C:/Users/Asus%E2%84%A2/Desktop/Dialnet-PracticasDeMicrobiologia-100835.pdf
 https://es.slideshare.net/great-ayuda/microbiologa-informe-de-medios-de-cultivo-y-tipos-
de-siembras-de-microorganismos

9.ANEXOS