GUÍA DE PRÁCTICA EN SEG-REG-021

LABORATORIO Versión: 2

Carrera: Bioquímica y Farmacia Asignatura: Inmunología I

Código: BYF 515 - 605 Nivel: 6 Semestre

Reacciones febriles

 Introducción
Las pruebas para reacciones febriles son un conjunto de pruebas que sirven para diagnosticar
enfermedades que cursan con fiebre como Salmonella tiphy, Brúcela, Rickettsia y Salmonela
paratiphy. Estas pruebas son reacciones de aglutinación entre los antígenos de Salmonela, Brucela
y Proteus y los anticuerpos contra estos antígenos presentes en el suero del paciente. Esta práctica
tiene como objetivo conocer el desarrollo y fundamento de una prueba de aglutinación para el
diagnóstico de una enfermedad microbiana.

 Objetivo

Conocer el desarrollo y fundamento de una prueba de aglutinación para el diagnóstico de una

enfermedad microbiana.

 Significación Clínica

SALMONELLA: El género Salmonella pertenece a la familia Enterobacteriaceae. Son bacilos

gramnegativos de 0,7-1,5 x 2,0-5µm, móviles por flagelos perítricos que no fermentan la lactosa,
aunque la mayoría producen sulfuro de hidrógeno o gas por fermentación de los hidratos de
carbono.
Inicialmente, se agruparon en más de 2000 especies (serotipos) en función de sus antígenos
somáticos (O) y flagelares (H) (esquema de Kauffman-White). Actualmente se considera que esta
clasificación está por debajo del nivel de especie: en realidad sólo hay dos o tres especies
(Salmonella enterica o Salmonella choleraesuis, Salmonella bongori y Salmonella typhi) y los
serotipos se consideran subespecies. Todos los agentes patógenos entéricos, excepto S. typhi,
pertenecen a la especie S. enterica. Por convención, las subespecies se abrevian, de modo que el

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serotipo S. enterica Paratyphy A se transforma en S. Paratyphi A. Básicamente la estructura
antigénica de Salmonella es similar a la de otras enterobacterias, con dos clases de antígenos
principales presentes; antígenos O (somáticos) y antígenos H (flagelares). En algunas cepas se
encuentra un tercer tipo como antígeno de superficie, siendo análogo funcionalmente a los
antígenos K de otros géneros; ya que anteriormente se pensó, que se relacionaba con la virulencia,
éste antígeno se denominó antígeno VI.

Antígenos O
Son los antígenos de la pared bacteriana, de naturaleza polisacárida. Existen numerosos antígenos
O, a pesar de ello son los factores O principales, los que sirven para caracterizar los diferentes
tipos antigénicos, (Por ejemplo O4: grupo B, O9: grupo D).
Antígenos H
Son antígenos constituidos por una proteína, la flagelina, cuya composición en aminoácidos es
constante para un tipo antigénico determinado. Depende de dos genes estructurales, que
corresponden a la fase 1 y a la fase 2. La mayoría de las cepas del género Salmonella pueden
expresar las dos especificidades de su antígeno H (difásicos), sin embargo, existen algunas que
pueden expresar solamente una sola, ya sea la uno ó la dos (monofásicas).
Georges Fernand Isadore Widal desarrolló un test basado en el principio de aglutinación antígeno-
anticuerpo, para el diagnóstico serológico de la fiebre tifoidea.
La reacción de Widal demuestra la presencia de anticuerpos aglutinantes contra los antígenos H
flagelar u O somático de la Salmonella typhi en el suero de los pacientes con fiebre tifoidea.
Los anticuerpos contra el antígeno H aparecen entre los ocho y los doce días, y alcanzan títulos
más elevados con respecto a los anti-0 y pueden persistir por más de un año.
Esta prueba es muy utilizada en el mundo por su sencillez, sensibilidad y costo, aunque es poco
específica. Tiene grandes limitaciones por reacciones antigénicas cruzadas con otras bacterias,
parásitos, virus y hongos. Comparte su estructura antigénica con otras enterobacterias (antígeno
O, H).
Entre las limitaciones de la reacción de Widal, se debe considerar que hasta el 50 y el 33% de los
pacientes con fiebre tifoidea no tratada, no presentan el aumento característico en los títulos anti-
O y tienen negatividad en los títulos anti-H, respectivamente.

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REACCIONES FEBRILES
También llamadas antígenas febriles, son conjunto de pruebas que sirven para diagnosticar
enfermedades que causan fiebre, como brucelosis (fiebre ondulante, fiebre de Malta), fiebre
tifoidea (Salmonella) y rickettsiosis (fiebre Q, fiebre manchada de las montañas rocallosas).
Padecimientos a los cuales están expuestos tanto niños como adultos.
Las reacciones febriles son un conjunto de pruebas de aglutinación que buscan apoyar o descartar
el diagnóstico de infecciones causadas por Salmonella typhi, Salmonella paratyphi y Brucella
abortus, agentes etiológicos de infecciones comúnmente conocidas como Fiebre Tifoidea o Fiebre
Ondulante, Paratifoidea y, Fiebre de Malta o Brucelosis respectivamente. Para esto se utilizan
antígenos, que constan de suspensiones bacterianas de cepas patógenas específicas que han sido
muertas por procesos especiales que dejan íntegros los antígenos contra los que reaccionan los
anticuerpos producidos por el sujeto infectado.
Cuando el cuerpo humano es invadido por agentes infecciosos, responde produciendo anticuerpos
(tipo especial de proteínas) contra ellos, los cuales pueden ser observados en muestra de sangre
del paciente y ser identificados de acuerdo a cantidad y tipo de infección. Las infecciones se suelen
adquirir en áreas con mala higiene, como zonas después de desastre o guerras, extrema pobreza y
falta de servicios de drenaje y agua potable, epidemia de piojos y garrapatas, entre otros. No
obstante, la presencia de estos agentes infecciosos también se da en zonas urbanas donde se
consumen alimentos preparados con poca higiene y al aire libre.

 FUNDAMENTOS DEL METODO

La reacción de Widal en un método serológico usado comúnmente en el diagnóstico de las fiebres

tifoideas, entérica y ondulante, la reacción mide el título del suero contra una suspensión de
microorganismo conocidos.

La reacción de Widal es un test basado en el principio de aglutinación antígeno- anticuerpo, donde

se determina la presencia de anticuerpos contra el antígeno O y H de la Salmonella typhi para el
serodiagnóstico de fiebre tifoidea, sin embargo debido a su falta de especificidad, debe ser
interpretado en el contexto clínico del paciente. Para considerar el diagnóstico de fiebre tifoidea
con un título Anti-O y Anti-H aislado, se debe conocer su prevalencia en una determinada
comunidad, en términos generales, se acepta títulos anti- O y anti-H ≥1:160 -200 y≥1:50 -100 en
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zonas endémicas y no endémicas, respectivamente.
La fiebre tifoidea es una enfermedad infectocontagiosa de alta prevalencia a nivel mundial, deriva
su nombre del latín tyvphos, que significa oscurecimiento de los sentidos o mente turbia; es
causada por la bacteria Salmonella typhi, nombrada así en honor del bacteriólogo estadounidense
David Salmon.
El suero del paciente se pone en contacto con antígenos específicos. En este caso se utilizan
suspensiones de Salmonellas o Brucellas muertos. Si la muestra contiene los anticuerpos
correspondientes se producirá una aglutinación visible macroscópicamente.
Durante el curso de las enfermedades anteriores, el cuerpo humano forma anticuerpos, estos
además de ayuda a combatir la infección sirven para diagnosticar la enfermedad. El aumento de
anticuerpos contra determinado microrganismo en el suero de un paciente, indica que está
infectado, estuvo infectado recientemente. El título o cantidad de anticuerpos se forma o aumenta
lentamente a partid del séptimo día de evolución de la enfermedad, alcanza su máximo al partir
del séptimo día y disminuye mas tarde. Como regla general, las pruebas de aglutinación tienen
mayor valor diagnostico si se practican en forma seriada, para observar si el título de la
aglutinación aumenta progresivamente.
 LIMITACIONES DE LA REACCIÓN DE WIDAL
La importancia de la aglutinación de Widal radica en ser un método serológico, rápido, barato, y
ampliamente conocido para el diagnóstico de la fiebre tifoidea; sin embargo, tiene grandes
limitaciones por reacciones antigénicas cruzadas con otras bacterias (principalmente entero
bacterias, incluyendo Salmonellas no typhi), parásitos, virus y hongos, llevando con frecuencia al
clínico a sobre diagnosticar síndromes febriles como fiebre tifoidea.
Como ejemplo de estos falsos positivos, se ha descrito en fiebre paratifoidea por Paratyphi A,
títulos Anti-O y Anti-H ≥100 en un 53 y 22% de los pacientes, respectivamente.
En pacientes con malaria, estudiados en Nigeria, con hemocultivos negativos para Salmonella
typhi, se encontraron reacciones de Widal positivas con títulos 1:40, 1:80, y 1:160 en el 85, 12, y
3% de los casos, respectivamente.
En la India, se reportó test de Widal con titulos>1:100 en el 12, 17 y 24% de pacientes con malaria
por Plasmodium vivax, Plasmodium falciparum con bajas parasitemias, y altas parasitemias,
respectivamente.

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En Surat, se evidenciaron títulos Anti-O y Anti-H en el 15 y 10% de los pacientes con malaria,
respectivamente, informando que cuatro semanas después estos fueron negativos. Los falsos
positivos de la reacción de Widal también han sido descritos en procesos no infecciosos, como
enfermedades autoinmunes (artritis reumatoide-lupus eritematoso sistémico) y hepatopatias
crónicas, lo cual contribuye aún más a su baja especificidad. Dentro de las limitaciones de la
reacción de Widal, se debe tener en cuenta que hasta un 50 y 33% de los pacientes con fiebre
tifoidea no tratada no presentan el aumento característico en los títulos Anti-O y tienen
negatividad en los títulos Anti-H, respectivamente

 MATERIAL REQUERIDO

 Placa de vidrio
 Micropipetas
 Varilla o aplicadores
 Reloj o timer
 Agitador mecánico rotatorio (80-100 r.p.m)
Antígenos Febriles Salmonella: suspensión en solución salina con conservantes apropiados,
conteniendo los siguientes antígenos bacterianos:
 Antígenos Paratyphoid A (Salmonella, antígeno flagelar a).
 Antígenos Paratyphoid B (Salmonella, antígeno flagelar b).
 Antígenos Typhoid H (Salmonella, antígeno flagelar d).
 Antígenos Typhoid O (Salmonella, antígeno somático D).

Antígenos Febriles Controles:

 Control Positivo: dilución de suero humano inactivado positivo.
 Control Negativo: dilución de suero humano negativo

 MUESTRA

Suero
a) Recolección: debe obtenerse suero límpido en forma estéril. No inactivar ni calentar ya que

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los anticuerpos son termolábiles.
b) Sustancias interferentes conocidas: la hemólisis visible y los quilomicrones pueden dar
reacciones inespecíficas.

 PROCEDIMIENTO

I- TECNICA RAPIDA EN PLACA

Colocar en una placa una gota (50 ul) de suero y agregar una gota (50 ul) de suspensión de
Antígeno.
Mezclar y agitar la placa en forma circular durante 2 minutos.
Observar la presencia o ausencia de aglutinación utilizando una luz indirecta sobre fondo
oscuro.

II-TITULACION RAPIDA EN PLACA

1) Dividir una placa de vidrio en sectores de 4 cm2 aproximadamente.
2) Empleando las micropipetas apropiadas colocar en estos sectores 80 ul, 40 ul, 20 ul, 10 ul y
5 ul de suero límpido. Repetir el procedimiento para un control negativo y uno positivo.
3) Colocar 1 gota de Antígeno previamente agitado sobre cada gota de suero.
4) Mezclar el suero y el Antígeno utilizando una varilla abarcando un área de 2 cm de diámetro
aproximadamente. Debe emplearse una varilla distinta para cada dilución de suero o la misma
varilla mezclando a partir de la muestra más diluida.
5) Agitar la placa durante 2 minutos en forma circular.
6) Observar la aglutinación utilizando luz indirecta sobre fondo oscuro.

 INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS

4+: todos los microorganismos aglutinan.

3+: aglutinan aproximadamente el 75%.
2+: aglutinan aproximadamente el 50%.
1+: aglutinan aproximadamente el 25%.
Negativo: no aparece aglutinación.

Técnica I: se indica solamente positivo o negativo.

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Técnica II: el título se considerará la última dilución que da aglutinación del 50% (++). Los
resultados obtenidos en la titulación en placa se aproximan a los de la prueba en tubo descripta
en Bennett, C.W (ver Bibliografía), considerando las diluciones como se muestra a continuación:

Volumen deDilución
Suero (ml) aproximada en la
prueba en tubo

0,08 1:20
0,04 1:40
0,02 1:80
0,01 1:160
0,005 1:320

 VALORES DE REFERENCIA

Generalmente títulos de 1:40 ó 1:80 son sospechosos de enfermedad. Sólo títulos mayores de
1:80 pueden considerarse probatorios de diagnóstico de enfermedad cuando estén acompañados
de la sintomatología clínica. Títulos mayores de 1:320, son concluyentes.

Títulos significativos pueden obtenerse en individuos inmunizados por vacunas tifoideas. Pueden
observarse reacciones inespecíficas con antígenos de Salmonella O grupo D en suero de
pacientes con influenza.

También se encontraron reacciones inespecíficas en pacientes con enfermedad hepática crónica

activa y consumidores de narcóticos.
Los antígenos de Brucella pueden dar reacciones cruzadas en individuos vacunados contra
cólera.
 CONCLUSIONES
- Mediante la aplicación de pruebas febriles se determina la presencia de anticuerpos contra
varios antígenos de las bacterias anteriormente descritas.
- Una titulación de pruebas febriles es útil para diagnosticar si hay una infección aguda o
solo hay memoria inmunológica. Sin embargo, estas pruebas no son totalmente seguras ya

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 que hay otros factores que pueden interferir en los resultados y ocasionar falsos positivos
o negativos.
 BIBLIOGRAFIA
- Gómez Ruelas, P. (s.f.). Práctica4 reacciones febriles. Recuperado 16 septiembre,
2019, de https://es.slideshare.net/MedicinaUas/prctica4-reacciones-febriles
- N, N. N. (2019, 24 abril). Examen de Reacciones Febriles - CHRSITUS
MUGUERZA. Recuperado 16 septiembre, 2019, de
https://www.christusmuguerza.com.mx/laboratorio/reacciones-febriles/
- Ortiz Esparza, O. A. (s.f.). Reacciones febriles. Recuperado 16 septiembre, 2019, de
https://www.studocu.com/en/document/universidad-autonoma-de-ciudad-
juarez/microbiologia/practical/reacciones-febriles/2688046/view

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