TECNOLÓGICO DE ESTUDIOS SUPERIORES DE SAN FELIPE DEL PROGRESO

PRÁCTICA 2: DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN DE AZUL DE METILENO

EN UNA MUESTRA PROBLEMA MEDIANTE ESPECTROFOTOMETRÍA UV-VIS

ASIGNATURA: ANÁLISIS INSTRUMENTAL

DOCENTE: I.Q.I. NALLELY GUERRERO VIDAL

INTEGRANTES:

CADENA SÁNCHEZ URIEL

DE JESÚS CASTILLO MARÍA GUADALUPE

LÓPEZ TÉLLEZ PAOLA

CARRERA: INGENIERÍA QUÍMICA

GRUPO: IQ-401

SAN FELIPE DEL PROGRESO, MÉX., A 28 DE MAYO DE 2019

 OBJETIVOS

 Conocer las partes principales y el manejo de un Espectrofotómetro UV-Vis, así

como verificar las condiciones del equipo.
 Determinar la concentración de sustancias orgánicas en muestras problemas por
medio de una curva de calibración, aplicando la Ley de Beer.
 MARCO TEÓRICO

ESPECTROFOTOMETRÍA UV-VIS

La espectrofotometría uv-visible (UV-VIS) es una práctica analítica que permite determinar

la concentración de un compuesto en solución. La espectrofotometría UV-VIS se basa en
la medición de absorción de radiación UV o visible por determinadas moléculas, la radiación
correspondiente a estas regiones del espectro electromagnético causa transiciones
electrónicas a longitudes de onda característica de la estructura molecular de un
compuesto. (Brown, 2000)

APLICACIÓN DE LA ESPECTROFOTOMETRÍA UV-VIS

La espectrofotometría UV-VIS es utilizada generalmente en la valoración cuantitativa de

soluciones de iones metálicos de transición y compuestos orgánicos, ambos absorben la
luz. La Ley de Beer-Lambert estipula que la absorbancia de una solución es directamente
proporcional de la concentración de la solución, por lo que la espectrofotometría UV-VIS
puede usarse para determinar la concentración de la solución. (Christian, 1981)

ESPECTROFOTÓMETRO UV-VIS

El espectrofotómetro UV-VIS es un instrumento óptico que tiene la capacidad de resolver

radiaciones de diferentes longitudes de onda dentro del rango ultravioleta y visible (por lo
general este rango se encuentra dentro de los valores de 190 a 1,100 nm).

PARTES DE UN ESPECTROFOTÓMETRO UV-VIS

Está compuesto por una fase luminosa, monocromador, elementos fotodetectores y un

sistema de registro.

 Fase luminosa: una bombilla pequeña de filamento enrollado es ideal para

concentrar la luz en un haz intenso. “La incandescencia causada por la luz visible
 de la lámpara de tungsteno-halógeno se basa en las altas temperaturas de
calentamiento que alcanzan el filamento”. (Crowder, 1973)

 Monocromadores: descompone la luz incidente de un espectro de luz, es decir, se

encarga de separar y seleccionar la radiación de onda que se quiere analizar. Está
compuesto por las rendijas de entradas y salida de, colimadores y el elemento de
dispersión, en los monocromadores convencionales se usa el prisma como
elemento de dispersión.

 Elementos fotodetectores: es la parte del instrumento que recibe la intensidad de

radiación monocromática de la muestra analizada y la transforma en una señal
eléctrica que es medida y comparada con un valor de referencia. “El material
fotosensible del cátodo emite electrones al ser irradiados, debido al voltaje aplicado
entre los electrodos los electrones se dirigen a los ánodos, este flujo de electrones
permite que por el circuito fluya una corriente cuya intensidad es directamente
proporcional a la intensidad de la luz que se mueve al fototubo”. (Paz, 2002)

 Sistema de registro: sirve como controlador del equipo, ya que este será el
encargado de procesar la información que proviene de los circuitos electrónicos.

CALIBRACIÓN ADECUADA

1. Coloque el espectrofotómetro en la mesa de trabajo, en un lugar seguro donde no haya

riesgos de derrame de reactivos y evite moverlo durante las determinaciones.

2. Conecte el cable que se le proporciona, primero al equipo por el panel trasero usando la
entrada hembra y después al tomacorriente. Efectúe este proceso en la secuencia indicada,
no invierta los pasos pues el equipo puede sufrir una descarga.

3. Abra la compuerta de la porta celda y asegúrese de que no existe ninguna muestra, cierre
la compuerta y presione el botón de encendido. El equipo empezará por darle la bienvenida
con el logotipo de la marca, después calibrará los filtros y ajustará la lámpara
automáticamente (escuchará un sonido). Durante el proceso no abra la compuerta de la
porta celda y no presione ninguna tecla, sólo espere.
LEY DE LAMBER – BEER

La ley de Beer fue descubierta independientemente (y de distintas maneras) por Pierre

Bouguer en 1729, Johann Heinrich Lambert en 1760 y August Beer en 1852. En forma
independiente, Wilhel Beer y Johann Lambert propusieron que la absorbancia de una
muestra a determinada longitud de onda depende de la cantidad de especie absorbente
con la que se encuentra la luz al pasar por la muestra.

La ley de Lambert-Beer establece que la absorbancia está directamente relacionada con

las propiedades intrínsecas del analito, con su concentración y con la longitud de la
trayectoria del haz de radiación al atravesar la muestra. (Swenson, 1973)

La expresión matemática de la ley de Lambert-Beer es:

A=C. .L

donde:

A = Absorbancia de la muestra

C = Concentración del cromóforo.

L = Longitud del paso óptico que contiene la muestra

= Absortividad molar.
DIAGRAMA DE FLUJO DE DESARROLLO EXPERIMENTAL
DATOS EXPERIMENTALES OBTENIDOS ORGANIZADOS EN TABLAS Y/O CUADROS

C (ml) Abs
0.2 0.325
0.4 0.712
0.6 1.042
0.8 1.362
1.0 1.604
Muestra 1 1.114
Muestra 2 .532
Tabla 1 Concentración (ml)

C (ppm) Abs

2 0.325
4 0.712

6 1.042
8 1.362

10 1.604
Muestra 1 1.114

Muestra 2 .532
Tabla 2 Concentración (ppm)
 DESARROLLO DE CÁLCULOS CORRESPONDIENTES

1. Lecturas de absorbancia en los estándares y soluciones problema

Std V(soluto) Concentración en (ppm) Absorbancia Longitud de onda

1 0.2 ml 2 ppm .325 664.3
2 0.4 ml 4ppm .712 664.3
3 0.6 ml 6 ppm 1.042 664.3
4 0.8 ml 8 ppm 1.362 664.3
5 1.0 ml 10 ppm 1.604 664.3

Donde la concentración es para cada muestra:

1) C1= 100 ppm

V1= 0.2 ml
V2= 10 ml
C2= ¿?
Entonces si C1*V1=C2*V2

𝑪𝟏∗𝑽𝟏 𝟏𝟎𝟎𝒑𝒑𝒎 ∗ 𝟎. 𝟐𝒎𝒍

𝑪𝟐 = 𝑪𝟐 = = 2 ppm
𝑽𝟐 𝟏𝟎𝒎𝒍

2) C1= 100 ppm

V1= 0.4 ml
V2= 10 ml
C2= ¿?
Entonces si C1*V1=C2*V2

𝑪𝟏∗𝑽𝟏 𝟏𝟎𝟎𝒑𝒑𝒎 ∗ 𝟎. 𝟒𝒎𝒍

𝑪𝟐 = 𝑪𝟐 = = 4 ppm
𝑽𝟐 𝟏𝟎𝒎𝒍

3) C1= 100 ppm

V1= 0.6 ml
V2= 10 ml
C2= ¿?
Entonces si C1*V1=C2*V2

𝑪𝟏∗𝑽𝟏 𝟏𝟎𝟎𝒑𝒑𝒎 ∗ 𝟎. 𝟔𝒎𝒍

𝑪𝟐 = 𝑪𝟐 = = 6 ppm
𝑽𝟐 𝟏𝟎𝒎𝒍
 4) C1= 100 ppm
V1= 0.8 ml
V2= 10 ml
C2= ¿?

Entonces si C1*V1=C2*V2

𝑪𝟏∗𝑽𝟏 𝟏𝟎𝟎𝒑𝒑𝒎 ∗ 𝟎. 𝟖𝒎𝒍

𝑪𝟐 = 𝑪𝟐 = = 8 ppm
𝑽𝟐 𝟏𝟎𝒎𝒍

5) C1= 100 ppm

V1= 1.0 ml
V2= 10 ml
C2= ¿?
Entonces si C1*V1=C2*V2

𝑪𝟏∗𝑽𝟏 𝟏𝟎𝟎𝒑𝒑𝒎 ∗ 𝟎. 𝟖𝒎𝒍

𝑪𝟐 = 𝑪𝟐 = = 10 ppm
𝑽𝟐 𝟏𝟎𝒎𝒍

Construir una curva de calibración para el azul de metileno

X Y X*Y X^2
Concentración(ppm) Absorbancia
2 .325 0.65 4
4 .712 2.848 16
6 1.042 6.252 36
8 1.362 10.896 64
10 1.604 16.04 100
20 5.045 36.686 220

𝒏 ∑ 𝒙𝒚−∑ 𝒙 ∑ 𝒚 ∑𝒚 ∑𝒙
𝒎= 𝒃= − (𝒎 ∗ )
𝒏 ∑ 𝒙𝟐 −(∑ 𝒙)𝟐 𝒏 𝒏

𝟓(𝟑𝟔.𝟔𝟖𝟔)−(𝟐𝟎∗𝟓.𝟎𝟒𝟓) 𝟓.𝟎𝟒𝟓 𝟐𝟎
𝒎= = 0.1179 𝒃= − (𝟎. 𝟏𝟏𝟕𝟗 ∗ )= 0.5374
𝟓(𝟐𝟐𝟎)−(𝟐𝟎)^𝟐 𝟓 𝟓
 b= 0.5374
y=Mx+bl
y= 0.1179X+ 0.5374

Determinar la concentración de las muestras problema con la Curva de Calibración

Std Volumen Concentración Absorbancia Longitud de

onda
Muestra 1 6.6 1.114 664.3
Muestra 2 3.2 .532 664.3

CURVA DE CALIBRACION DEL AZUL DE METILENO

1.8

1.6 10, 1.604

1.4
8, 1.362
1.2
Absorbancia

Muestra 1, 1.114
1 6, 1.042

0.8
4, 0.712
0.6
Muestra 2, 0.532
0.4
2, 0.325
0.2

0
0 1 2 3 4 5 6 7 8
Concentración
ABSORBANCIA
Calculo de coeficiente de absorción a partir de las soluciones de la ley de Lambert-Beer

𝐴 = 𝜀𝑏𝐶
Donde
A= Absorbancia

𝜀 = coeficiente de absorción
C= Concentración
b= Ancho= 1cm

Por lo tanto al despejar 𝜀 y sustituyendo en la ecuación:

𝑨
𝜺=
𝒃𝑪
.𝟑𝟐𝟓
1) 𝜺 = = 0.1625
(𝟏𝒄𝒎)(𝟐𝒑𝒑𝒎)
.𝟕𝟏𝟐
2) 𝜺 = = 0.178
(𝟏𝒄𝒎)(𝟒𝒑𝒑𝒎)
𝟏.𝟎𝟒𝟐
3) 𝜺 = = 0.17366666
(𝟏𝒄𝒎)(𝟔𝒑𝒑𝒎)
𝟏.𝟑𝟔𝟐
4) 𝜺 = = 0.17025
(𝟏𝒄𝒎)(𝟖𝒑𝒑𝒎)
𝟏.𝟔𝟎𝟒
5) 𝜺 = = 0.1604
(𝟏𝒄𝒎)(𝟏𝟎𝒑𝒑𝒎)

Promedio= 0.168963332

Determinar la concentración de la muestra problema

𝑨
𝑪=
𝜺𝒃
𝟏.𝟏𝟏𝟒
1) 𝑪 = = 6.593146962 ppm
(𝟎.𝟏𝟔𝟖𝟗𝟔𝟑𝟑𝟑𝟐)(𝟏)

.𝟓𝟑𝟐
2) 𝑪 = = 3.14861215 ppm
(𝟎.𝟏𝟔𝟖𝟗𝟔𝟑𝟑𝟑𝟐)(𝟏)
 DISCUSIÓN DE RESULTADOS

En este caso el azul de metileno al momento de estar visualizando los espectrogramas va

incrementando, además de que se aprendió a utilizar el espectrofotómetro donde se puedo
observar el incremento puesto que utilizamos 5 estándares, además del blanco y las dos
muestras desconocidas, en esta práctica se hizo uso del aprendizaje que fue adquirido
durante el curso, puesto que tuvimos que determinar la concentración de las muestras
problema en base a la curva de calibración con la aplicación de la Ley de Lambert-Beer.
 CONCLUSIONES

Los objetivos previamente marcados al comienzo del reporte se han cumplido

satisfactoriamente; debido a que cada uno de los integrantes del equipo logro identificar las
partes que conforman el espectrofotómetro, así como la forma correcta en la que este debe
de ser utilizado.

Ahora bien, yéndonos a la parte de los resultados obtenidos de cada solución analizada en
el espectrofotómetro, sabiendo que de las 7 soluciones 2 eran muestras problemas, la
concentración pudo ser aproximada gracias a la curva de calibración realizada con todas
las muestras.
 FUENTES DE INFORMACIÓN

1. Brown, Ch. 2000. Utraviolet, visible, and near-infrared spectrophotometers. Applied

Spectroscopy Reviews, 35 (3), 151-173.
2. Christian, G. D. 1981. Química Analítica. 2a ed. Ed. Limusa.
3. Crowder, A. L., Barker, R. and Swenson, C. A. 1973. Ultraviolet difference
spectroscopic studies of the binding of ligands to rabbit muscle aldolase.
Biochemistry. 12(11), 2078-2083.
4. Paz, I. and Pinto, G. 2002. Spectroscopic study about the kinetics of the anthocyanin
pigments extraction during the maceration of cherries in liquor. Spectroscopy Letters.
35(3). 357-368.