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MORFOLOGIA DE LAS BACTERIAS

CÁTEDRA: Microbiología General

CATEDRÁTICO: Ing. Mg. Vilma Julia Reyes De La Cruz

ESTUDIANTES: Perez Samaniego, Cristina

Rojas Yupanqui, Anyela

Vásquez de la Cruz, Eduardo

SEMESTRE: IV

GRUPO: 02

Ing. Mg. Vilma Julia Reyes De La Cruz

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MORFOLOGIA DE LAS BACTERIAS

ÍNDICE

I.INTRODUCCIÓN ............................................................................................. 4
OBJETIVOS .................................................................................................... 4
II.REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA .......................................................................... 5
2.1.Morfologia de bacterias ......................................................................... 5
2.2.Tinciones bacterianas ............................................................................ 6
2.2.1.Tincion simple ............................................................................... 6
2.2.2.Tincion de Gram ............................................................................ 6
2.2.3.Tincion de Tiehl-Nelsen ................................................................ 6
2.3.Tincion de esporas ................................................................................. 7
III.MATERIALES Y MÉTODOS........................................................................ 10
3.1.Materiales .............................................................................................. 10
3.1.1.Equipos ........................................................................................ 10
3.2.Métodos................................................................................................. 11
IV.RESULTADOS Y DISCUSIONES ................................................................. 2
4.1.Resultados .............................................................................................. 4
4.2.Discusiones ............................................................................................ 4
V.CONCLUCIONES ........................................................................................... 2
VI.RECOMENDACIONES .................................................................................. 2
VII.BIBLIOGRAFÍA ............................................................................................ 2
VIII.CUESTIONARIO ......................................................................................... 2
IX.ANEXOS ........................................................................................................ 4

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CARACTERISTICAS MORFOLOGICAS DE LAS BACTERIAS

I. INTRODUCCIÓN

La tincion simple constituye una técnica sencilla y directa que a travez del uso
de un colorante, nos permite constatar y diferenciar los microorganismos de
su contorno. Los colorantes básicos los cuales se utilizan mas comúnmente
para teñir microorganismos, difieren en el grado de reactividad con las
células.
El azul de metileno reacciona con las células cargadas negativamente a la
tasa mas baja, tomando de 20 a 30 segundos para tenir apropiadamente una
preparación microbiana. El cristal violeta es mas reactivo y generalmente
requiere solo 10 segundos. La carbolfucsina es un colorante aun mas rápido,
requerido solo 5 segundos. Su reactividad es tan grande que ciertamente
puede dificultar una tincion apropiada, sobre todo cuando la muestra contiene
abundante materia organica.
La tincion gram requiere de 4 coloraciones: un colorante basico, un
mordiente, un agente decolorante y un contraste (otro colorante basico).
Las propiedades de los colorantes básicos ya fueron discutidas previamente.
Un mordiente es una sustancia que incrementa la afinidad entre la celula y el
colorante
, es decir ayuda a la fijación del colorante en la estructura de interés. Un
agente decolorante es una sustancia que retira el colorante de una estructura
teñida. Algunas células teñidas se decoloran mas rápidamente que otras, y
esta variación en la tasa de decoloración es la que diferencia tipos de
bacterias como la tincion gram y otras tinciones diferenciales. El contraste es
un colorante basico de un color difenteal usado inicialmente. El propósito de
su aplicación es dar a las células decoloradas un color contraste con el inicial.
Aquellas células que no se decoloran rápidamente retienen el color del
colorante basico inicial, mientras que las que se decoloran fácilmente toman
el color del contraste.
La tincion acido- resistente es una tincion diferencial que mide en células
teñidas la resistencia a la decoloración mediante acido. La propiedad de acido

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resistencia en ciertas micobacterias y actinomietos esta correlacionada con

su alto contenido domer requiere. Teñir estas bacterias requiere un
tratamiento de alta temperatura y la utilización de colorantes fuertemente
afines.
El procedimiento consiste en teñir con carbolfucsina caliente, decolorar con
una solución de alcohol-acido y reteñir con un contraste. Las bacterias acido
resistentes se decoloran muy lentamente con la solución de alcohol-acido en
comparación a otros microorganismos y retienen el color del colorante inicial.
Este tipo de coloración es utizada en el estudio y diagnostico de
enfermedades causado por especies acido- resistente como los de la
tuberculosis y la lepra, y también para la diferenciación

OBJETIVOS:

 Identificar los microorganismos previa coloración.

 Desarrollar las técnicas de coloración simple, diferencial y de
estructuras.
 Desarrolla la técnica de tinción diferencial de gram.
 Demuestra la existencia de dos grupos principales de bacterias.
 Identifica la presencia de endosporas bacterianas y diferencia la
presencia de endosporas bacterianas y diferencia las esporas
vegetativas normales.

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II. REVISIÓN BIBLIOGRÁFIA

2.1. Morfología de bacterias: Las bacterias presentan 3 tipos

morfológicos típicos: las formas esféricas, llamadas cocos; las
cilíndricas o blastocitos, de nominadas bacilos, y las que presentan
forma de espiral o resorte, llamados espirilos.

Las células bacterianas, principalmente los cocos, presentan agrupaciones que

son características de la especie, por lo que el tipo de agrupación tiene valor
práctico en la identificación. Vera (2001).

Las bacterias presentan una morfología y un tamaño muy variable, así como
diferentes sistemas de agrupación que permiten distribuirlas en grupo fines que
faciliten su estudio.

El reconocimiento de estas características se logra por diferentes métodos de

examen de las bacterias, en fresco o por tinción, utilizando el microscopio óptico.
Pumarola (1987).

2.2. Tinciones bacterianas:

Facilitan notablemente el examen microscópico y permiten, además, el

reconocimiento de ciertas estructuras externas. Pueden ser coloraciones
simples, que en síntesis consisten en recubrir superficie bacteriana con una
solución de un colorante en alcohol y agua, y generalmente son de carácter
básico (cristal violeta, fucsina, azul de metileno, etc.).

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Resultan más útiles las coloraciones compuestas o diferenciales, en las que se

emplean dos soluciones de colorantes, como los métodos de Gram y de Ziehl-
Neelsen. Pumarola (1987).

2.2.1. Tinción simple: Esta es una tinción directa que utiliza solo un
colorante, el cual debe ser básico para que la célula bacteriana se
tiña. Permite demostrar la morfología general de una célula de
manera rápida; al emplearse un único colorante, todas las células
se observan del color del colorante empleado. Los más empleados
son cristal violeta, azul de metileno y fucsina fenicada, estos
colorantes difieren en la velocidad y grado en que tiñen. El azul de
metileno reacciona a menor velocidad, tomo de 30 a 60 segundos
para teñir una preparación microbiana. El cristal violeta es más
reactivo y usualmente requiere solo de 10 segundos. La fucsina
fenicada es un colorante aún más rápido, generalmente requiere
solo de 5 segundos. Rodríguez (1988).
2.2.2. Tinción de Gram: Es el método más empleado en bacteriología
gracias a las cual las bacterias de pueden clasificar en dos grandes
grupos (Gram +, Gram-). Este distinto comportamiento en la tinción
de Gram es debido a la distinta composición de la pared de las
células bacterianas. De acuerdo con esto, la tinción de Gram se va
basar en el empleo de un primer colorante básico, generalmente
cristal violeta o violeta de genciana, que teñirá de color azul todas
las bacterias. Posteriormente, un mordiente, el Lugol, aumentará la
afinidad del primer colorante a las células, es decir, lo fijará;
finalmente, un agente decolorante decolorará solamente un tipo de
bacterias que serán teñidas con el colorante de contraste o
segundo colorante. Este distinto comportamiento frente a la
decoloración es dependiente de la composición de la pared
bacteriana, hecho que servirá para clasificarlo como Gram +
(aquellas que no han sido decoloradas y que por lo tanto quedan
teñidas con el cristal violeta de color azul violáceo) o como Gram-
(aquellas bacterias que han sido decoloradas y son teñidas con el

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colorante de contraste, la safranina; por lo tanto, su color es de rosa

rojo).

Granados (1997).

2.2.3. Tinción de Ziehl-Neelsen: Existen determinados grupos

bacterianos que contienen en su pared una gran cantidad de
componentes lipoideos y céreos, de tal forma que este tipo de
bacterias presentarán grandes dificultades a la hora de teñirse con
los colorantes convencionales que no pueden penetrar en el
interior de estas bacterias. De ahí que se necesiten, para este tipo
de tinciones, colorantes altamente concentrados, así como la
presencia de calor que facilite su penetración al interior de dichas
bacterias; de tal forma que, siguiendo tales instrucciones, una vez
que dichas bacterias han quedado teñidas, su decoloración
posterior no es posible, resistiendo incluso a decoloraciones
ácidas. Así pues, utilizando esta propiedad, podemos diferenciar
este tipo de bacterias, como es el caso del Genero Mycobacterium,
del resto que no presentan esta propiedad. Granados (1997).
2.3. Tinción de esporas: Las esporas en las bacterias son una forma de
resistencia. Se caracterizan por una prolongación del protoplasma que
adopta una configuración esférica u oval. Pueden tener una
localización central, subterminal o terminal.

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CARACTERISTICAS MORFOLOGICAS DE LAS BACTERIAS

Para su tinción se utilizan medios muy drásticos, en forma de colorantes

concentrados y tinción a emisión de vapores. Los más usados son el Moeller y
Wirtz. Del Carmen (2006).

III. MATERIALES Y MÉTODOS

3.1. Materiales:
3.1.1. Equipos y materiales:

3.1.1.1. Tinción simple con colorantes básicos:

 Microscopio óptico
 Laminas fijadas de microorganismos
 Aceite de inmersión
 Colorantes básicos
 Azul de metileno
 Cristal violeta
 Carbolfucsina
 Papel secante
 Pizeta de agua

3.1.1.2. Tinción diferencial gram:

 Cultivos jóvenes de microorganismos (18-24 horas)
Bacillus sp. Staphylococcus sp. Escherichia coli.
 Aceite de inmercion
 Asa de kolle
 Colorantes básicos: cristal violeta, safranina
 Decolorante: alcohol básico-cetona.
 Laminas cubre y porta obejetos
 Mordiente: lugol
 Papel secante
 Pizeta de agua

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CARACTERISTICAS MORFOLOGICAS DE LAS BACTERIAS

 Soporte para tincion

 Mechero Fisher

3.1.1.3. Tincion diferencial acido resistente

a. Técnica de dorner:
 Cultivos de 48 horas Bacillus y Clostridium
 Aceite de inmersión
 Asa de kolle
 Baño de agua a 100 C
 Laminas porta objetos
 Soluciones colorantes carbolfucsina nigrosina
 Tubos con agua destilada esteril

b. Técnica de schaeffer y fulton:

 Cultivo de 48 horas Bacillus y Clostridium
 Aceite de inmersión
 Asa de kolle
 Laminas portaobjetos
 Mechero de alcohol
 Pinzas
 Soluciones colorantes safranina verde malaquita
 Solución decolorante: alcohol acido

3.2. Métodos:
3.2.1. Tinción simple con colorante básico

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1. Coloque las laminas fijadas de microorganismos sobre el

soporte para tincion.
2. Agregue 5 o 6 gotas de cada colorante dejando que actúen por
un tiempo de: 30 segundos para el azul de metileno; 10
segundos para el cristal violeta; y 5 segundos para la
carbolfucsina.
3. Una vez cumplido el tiempo para los colorantes, lave cada
lamina con la pizeta de agua.
4. Seque las laminas al aire o dentro del papel secante.
5. Examine las preparaciones tenidas bajo el objetivo de
inmersión (100-150x) de un microscopio compuesto.
6. Elabore esuqemas de sus observaciones destacando las
diferencias en tamaño, forma y agrupaciones que se presenten.

3.2.2. Tincion diferencial gram

1. Prepare una lamina fija de cada uno d los cultivos microbianos
proporcionados una lamina fija con la mescla de
Staphylococcos y Scherichia coli.
2. Agregue cristal violeta y deje que actue por 30 segundos.
3. Enjuague con agua.
4. Cubra la película tenida con lugol y deje que actue por 30 a 60
segundos
5. Enjuague con agua
6. Decolore con alcohol-acetona. Para una película delgada, la
exposición decolorante por 10-20 segundos es suficiente.
7. Enjuague con agua.
8. Aplique el colorante de constraste safranina por 30 segundos.
9. Enjuague con agua y saque la lamina al aire o dentro de papel
secante.
10. Examine cada muestra bajo el objetivo de inmersión.

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3.2.3. Tincion iferencial acido resistente.

 Tecnica de Doner.
1. Haga una suspensión concentrada del organismo en 2 o
3 gotas de agua destilada contenida en un pequeño tubo
de prueba.
2. Añada igual volumen de carbolfucsina y coloque el tubo
en un recipiente con agua hirviendo por 10 minutos.
3. Transfiera una gota de suspensión de células hervidas a
una lámina portaobjetos.
4. Agregar una gota de nigrosinina y extienda la mezcla con
ayuda de otra lamina hasta obtener una delgada
película.
5. Seque la lámina al aire o dentro de papel secante.
6. Examine al microscopio compuesto bajo el objetivo de
inmersión.
7. Elabore los esquemas correspondientes.

 Técnica de Schaeffer y Fulton

1. Prepare una muestra fija del microorganismo
proporcionado y luego colocar sobre agua hirviente.
2. Agregue a la preparación verde malaquita hasta cubrirla
totalmente y dejarlo por 5 min
3. Lavar con agua suavemente.
4. Cubrir con safranina. Mantenga esta condición durante 3
min, evitando que el colorante se seque o entre a
ebullición
5. Lavar con agua y secar con papel filtro
6. Examinar con objeto de inmersión.
7. Lave con alcohol acido hasta que este resulte incoloro.
8. Enjuague con agua
9. Cubra la preparación con verde malaquita dejando que
actué por dos minutos

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CARACTERISTICAS MORFOLOGICAS DE LAS BACTERIAS

10. Enjuague con agua

11. Seque la lámina al aire o dentro de papel secante.
12. Examine al microscopio compuesto bajo un objetivo de
inmersión
13. Elabore los esquemas correspondientes.

TINCIÓN
DIFERENCIAL
CARACTERÍSTICAS TINCIÓN SIMPLE TINCIÓN GRAM
ÁCIDO
RESISTENTE

Streptococcus Streptococcus Clostridium

Especie
thermophilus thermophilus botulinum

Objetivo 1000X 1000X 1000X

Forma Esféricas Esféricas Bastoncillo

Diplococcus(pares) Diplococcus(pares)
Agrupamiento y en largas y en largas Bacilos
cadenas cadenas

Solo se nota las Se notó las de Contenía

Diferencias formas de las gram positiva(color endosporas y otras
bacterias azul) esporas
IV. RESULTADOS Y DISCUSIONES

4.1. Resultados:

4.2. Discusiones:

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CARACTERISTICAS MORFOLOGICAS DE LAS BACTERIAS

V. CONCLUSIONES

1)

VI. RECOMENDACIONES

 Idealmente no se debe de mover el microscopio de una mesa a otra,

pues se puede desajustar.
 La parte exterior de los lentes oculares y lentes objetivos puede
limpiarse únicamente con papel especial para lentes, frotándolos
suavemente.
 Nunca tocar los lentes con los dedos, ni soplar, porque las bacterias y
hongos estarían contaminando los lentes; además la grasa de los
dedos puede interferir con la imagen.

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CARACTERISTICAS MORFOLOGICAS DE LAS BACTERIAS

VII. BIBLIOGRAFÍA

1. García Vera. 2001. Introducción a la microbiología. Segunda edición.

Editorial Universidad Estatal a distancia.
2. Pumarola. 1987. Microbiología y parasitología médica. Segunda edición.
Editorial MASSON, S.A., Barcelona (España).
3. Rodríguez E. Gamboa M. y otros. 1988. Bacteriología General: Principios
Y Prácticas de Laboratorio. Primera edición. Editorial Universidad de
Costa Rica.
4. Granados R. y Villaverde M. 1997. Microbiología Ciencias de la Salud.
Tomo I. Primera edición. Editorial Paraninfo, S.A. Madrid (España).
5. Del Carmen S. García J. y otros. 2006. Técnico Especialista en
Laboratorio Del Servicio Gallego de Salud. Primera edición. Volumen 2.
Editorial MAD, S.L.

VIII. CUESTIONARIO

 TINCION SIMPLE
1. ¿Cuáles son las asociaciones más frecuentes de las bacterias?

Los estreptocos se unen en cadenas de cocos o estreptobacilus se unen

en cadenas de bacilos
Los diplococos se unen de 2 cocos
Sarcinas son agrupaciones de cocos en forma de cubo
Stafilococos son agrupaciones de cocos en forma de racimos

2. ¿En qué rango de tamaño se definen las bacterias?

Cocos: 0.5-1.0 micra

Bacilos: 0.5-1.0 micra de ancho por 1-4 micras de largo

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Espirilos: 5-40 micras de largo

3. ¿Cuáles son las formas bacterianas más frecuentes?

Son en forma redonda, pocas veces en bacilos y en cocos ya que estos

están en agrupaciones o cadenas

4. ¿Qué diferencia hay entre una tinción directa y una tinción negativa?

TINCIÓN DIRECTA: utilizamos un solo colorante en este caso solo sería

el azul de metileno, se reconoce su estructura y morfología y solo ve el
tamaño y forma de la bacteria.
TINCIÓN NEGATIVA:
Se emplea nigrosina o tinta china; para el caso de bacterias esta técnica
permite visualizar las esporas como entes refringentes sobre un campo
de fondo oscuro

5. ¿Cuáles son los colorantes ácidos y básicos empleados?

Colorantes básicos: son la tionina, safranina, azul de toluidina, el azul de

metileno o la hematoxilina.

Colorantes ácidos: son la fucsina ácida, verde rápido, naranja G o la

eosina.

 TINCIÓN GRAM
1. ¿Bajo qué circunstancias la tinción diferencial Gram podría resultar
errada?
- Uso de antibióticos
- Edad de la bacteria
- Errores del operador

2. ¿Qué efecto traería reemplazar el lugol con otro agente oxidante?

Ninguna porque el lugol es un agente oxidante y no produce efecto alguno

ya que cumpliría la misma función de incremento de afinidad del colorante
primario con la célula, formando complejos insolubles (complejo cristal)
Violeta-yodo sirve para intensificar el color

3. ¿Podría usted variar el colorante primario y el contraste obteniendo los

mismos resultados?

No, ya que el colorante primario es el cristal-violeta que su labor es teñir

a todas las bacterias de morado y el contraste es de safranina que tiñe de
rojo. El cambio en aquellas variaría de forma total a la tinción Gram, ya

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CARACTERISTICAS MORFOLOGICAS DE LAS BACTERIAS

que no se podría apreciar el color y así poder diferenciarlas, no se lograría

tener los mismos resultados.

4. ¿Qué es la influencia del pH en la reacción de Gram?

Los Gram positivos pueden ser Gram negativos al aumentar la acidez

Los Gram negativos pueden ser Gram positivos al aumentar la alcalinidad

5. Liste 5 ejemplos de bacterias Gram positiva y 5 de Gram negativa,

señalando su importancia

Gram positiva
a. STAPHYLOCOCCUS: están presentes en la catalasa, coagulasa,
fermentación del azúcar manitol, B lactamasa.
b. ESTREPTOCOCOS: forman parte de la flora saprofita de la boca, piel,
intestino y el tracto respiratorio superior.
c. SARCINA VENTRICULI: produce una capa de celulosa gruesa y
fibrosa en la pared celular. Vive en el estómago humano por
afecciones gastrointestinales.
d. LISTERIA: genero bacteriano q comprende 6 especies:
L. monocytogenes: patógeno causante de la listeriosis
L. ivanovii: patógeno de rumiantes se puede infectar a los ratones en
el laboratorio
e. C- BOTULINUM, un organismo productor de una toxina alimenticia
causante de botulismo, un desorden neurológico agudo
potencialmente letal.
Gram negativa
a. NEISSERIA MENINGITIDIS:
Puede causar meningitis y otras formas de enfermedad
meningocócica.
b. YERSINIA PESTIS:
Produce en el ser humano la peste pulmonar, la peste bubónica y
también la peste septicémica, aunque la última es muy poco común.
c. YERSINIA PSEUDOTUBERCULOSIS:
Agente causal de una enfermedad parecida a la tuberculosis que
afecta los nódulos linfáticos produciendo una adenitis o inflamación en
animales y raramente a los humanos.
d. YERSINIA ENTEROCOLITICA
Se multiplica en las mucosas y se puede transmitir a través del
contacto con animales, ingestión de productos alimenticios o
contaminados o agua contaminada. Raramente causa infecciones
mortales. Habita en el intestino de animales domésticos.
e. NEISSERIA GONORRHOEAE:

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CARACTERISTICAS MORFOLOGICAS DE LAS BACTERIAS

Causa la gonococia, una enfermedad de transmisión sexual que se

presenta en los humanos.

 TINCION ACIDO RESISTENTE

1. ¿Cuál de los métodos usados le permitió observar mejor las endoesporas
bacterianas? ¿a qué atribuye la diferencia?

Con la técnica de schaeffery fulton ya que con este método se observar

mejor el clostridium y su endosporas

2. ¿Qué efecto produciría al reemplazar el alcohol acido por otro decolorante

como el alcohol cetona?

El efecto sería que el alcohol acido sirve como decolorante en una tinción
el cambiar por el alcohol cetona esta variara de color

3. ¿Qué otro género de bacterias pueden formar endoesporas?

POROSARCINA (COCOS) DEL PHYLUM FIRMICUTES

Firmicutes (firmus = fuerte y cutis = piel en referencia a su gruesa pared
celular) son un filo de bacterias, la mayoría de las cuales tienen una
estructura celular Gram-positiva.
EPULOPISCIUM:
Algunos Epulopiscium simbiontes de pez cirujano forman endoesporas
maduros en la noche. Estas esporas poseen todas las capas protectoras
características vistas en endoesporas de B. subtilis y también contienen
cantidades grandes de ácido dipicolinico.

4. Revise otras técnicas de tinción de esporas y compárelas con las usadas

en este ejercicio. Determine ventajas y desventajas.

LA TÉCNICA DE MOELLER donde se utiliza el ácido crómico y fucsina

fenicada en caliente para sensibilizar y colorear a la espora, la
decoloración se realiza con ácido-alcohol y se contra colorea con azul de
metileno, se observan las endoesporas rojas y el resto de bacteria azul.

TÉCNICA DE SCHAEFFER Y FULTON la diferencia que en esta técnica

se tiñe de rojo y la parte vegetativa es verde, pero deben usarse con
precaución ya que pueden conducir a errores. Las moléculas de colorante
forman en ocasiones precipitados o agregados que parecen estructuras

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CARACTERISTICAS MORFOLOGICAS DE LAS BACTERIAS

celulares auténticas, pero son formaciones completamente artificiales

inducidas por el mismo colorante.

IX. ANEXOS

9.1. Evidencias:

a. TINCION SIMPLE CON COLORANTES BASICOS:

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CARACTERISTICAS MORFOLOGICAS DE LAS BACTERIAS

b. TINCION DIFERENCIAL GRAM:

c. TINCION DIFERENCIAL ACIDO RESISTENTE:

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CARACTERISTICAS MORFOLOGICAS DE LAS BACTERIAS

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