FUNDACIÓN UNIVERSITARIA SAN MARTIN

EN CONVENIO CON LA
UNIVERSIDAD DEL TOLIMA
PARASITOLOGÍA Y ENFERMEDADES PARASITARIAS
Docente: JORGE IVÁN ZAPATA VALENCIA

GUÍA 3 DE LABORATORIO DE PARASITOLOGÍA

Objetivos
Aplicar la técnica de examen coprológico directo con solución salina y lugol, también llamado
examen coproparasitológico o coprología, para la visualización de parásitos intestinales.

Familiarizar al estudiante con el manejo de muestras de interés parasitario.

Adquirir destreza en el manejo correcto del microscopio compuesto, herramienta primordial

para realizar el diagnóstico de parásitos intestinales.

Introducción.
Los parásitos intestinales, así como algunos pulmonares y hepáticos o biliares, pueden ser
diagnosticados por medio de técnicas conocidas como examen coprológico directo. Estas
técnicas se basan en la identificación directa del parásito con base en sus características
morfológicas y el conocimiento de los estadios del ciclo de vida que pueden estar presentes en
una muestra de materia fecal. Este examen es complementario al examen clínico y los datos
aportados por el propietario del paciente.

En ciertas ocasiones, por el tamaño o el número de las formas parasitarias evacuadas en

materia fecal, es necesario recurrir a técnicas de coloración o de concentración
(enriquecimiento) para aumentar la sensibilidad y especificidad del examen diagnóstico. En
otros casos, dependiendo del tipo de parásito y su ubicación se deben usar técnicas de
xenodiagnóstico, inmunológicas o moleculares. Sin embargo, las técnicas de diagnóstico
directo son las más usadas en la rutina de trabajo diario por su confiabilidad, simplicidad y bajo
costo.

Desarrollo de la práctica de laboratorio.

A. Aspectos importantes a tener en cuenta para el diagnóstico directo de parásitos en

muestras fecales por examen en fresco.
1. La primera cosa que hay que tener en cuenta es que una preparación en fresco es
tridimensional y, por lo tanto, es necesario ajustar el enfoque constantemente mediante
el uso del tornillo micrométrico para poder visualizar los objetos que estén en diferentes
planos.
2. Verifique que el diafragma del microscopio esté abierto para que pase suficiente luz
para trabajar adecuadamente. Cuando use los objetivos de 4X y 10X el diafragma debe
estar casi cerrado, ábralo un poco para el objetivo de 40X y aún más para el de 100X.
3. El condensador se debe llevar a su posición más alta. No ajuste la intensidad de la luz
con el condensador, use para ello el diafragma.

B. Como observar una muestra en fresco.

Cuando se examina una lámina en busca de huevos y quistes de parásitos se recomienda
empezar a hacer la búsqueda desde una de las esquinas de la laminilla cubreobjetos (22 mm X
22 mm) con el objetivo de 4X, el cual permite observar los huevos de helmintos de manera fácil
en toda la preparación. Una vez realizada esta primera parte del examen se pasa al objetivo de
10X en busca de objetos que parezcan compatibles con las formas quísticas de los
protozoarios. Una vez visualizada una de estas estructuras se debe pasar a enfocar en 40X
para hacer la identificación precisa. Tener presentes que al pasar al objetivo de 40X es
necesario abrir un poco el diafragma. Una vez terminado el examen en 10X recorrer al menos
un cuarto de la preparación con el objetivo de 40X para encontrar los quistes o trofozoitos más
pequeños.

Cuando no se tiene una amplia experiencia se recomienda en cada lámina portaobjetos hacer
dos preparaciones, una con solución salina y otra con lugol, para mejorar en esta última el
contraste y así poder observar estructuras claves en la identificación.

C. Colección y preparación de la muestra.

Las heces frescas y especialmente aquellas que se obtienen directamente del recto son las
más recomendadas para el examen directo por no presentar contaminación con elementos
ambientales que pueden dificultar la interpretación de los resultados. De no ser posible esto se
toman aquellas muestras que se observen en el momento de su eliminación. En último caso se
tomarán aquellas que se observen más frescas de las que están en el piso, pero evitando
tomar la parte contaminada con tierra u otros elementos. En algunos casos es recomendable
aislar los animales para estar seguros de cual es paciente del que toma la muestra.

Cuando se trata de lotes grandes de animales (aves de corral, cerdos, rebaños) se recomienda
tomar aleatoriamente muestras al 10% o 20% de los animales, bien de manera individual o
haciendo un “pool” de muestras.

Una vez recolectada la muestra se debe rotular el recipiente con su nombre o número de
identificación, el lote, fecha etc para el correcto registro de los resultados. La muestra debe ser
enviada en el menor tiempo posible al laboratorio para ser procesada y evitar que los
trofozoitos de los protozoarios se deterioren y los huevos de los nematodos maduren y
eclosionen. Para evitar esto, se pueden enviar las muestras en bolsas tipo “Ziploc” las cuales
deben cerrarse extrayendo todo el aire posible antes de llevarlas al laboratorio. Cuando la
muestra es recogida del suelo o de un animal pequeño se pude usar un recipiente limpio de
boca ancha y tapa rosca. Cuando se toma la muestra directamente del recto se puede usar el
guante o la bolsa plástica que se empleó para la toma de la muestra como envase para el
envío de la misma al laboratorio.

La cantidad de muestra de materia fecal que se debe recoger depende del tamaño del animal
en cuestión. Para especies mayores son necesarios unos 100 g, para especies de tamaño
medio unos 50 g y para especies menores unos 20 g. En el caso de los conejos se pueden
enviar unos 10 bolos de heces y para las aves la deposición completa. Como lo aconsejables
es realizar un examen seriado de al menos tres muestras en un lapso no mayor a 10 días (una
muestra puede detectar el 72% de las infecciones, mientras que tres muestras permiten
detectar >95%), las muestras deben recogerse los diferentes días aproximadamente a la
misma hora, para reducir la variabilidad por la inestabilidad en la excreción de los parásitos.

En el caso de animales que hayan recibido antibióticos, antiparasitarios o líquidos de contraste

para exámenes imaginológicos debe esperarse hasta por cinco días para recoger una muestra
que sea óptima para el examen directo.

D. Conservación de las muestras.

Cuando una muestra no puede procesarse inmediatamente se pude conservar por unas horas
en la nevera a 4ºC, excepto si se van a emplear para aislar larvas de nematodos. Si el
procesamiento se va a realizar un día diferente a aquel en que se toma la muestra se
recomienda conservarla en formol salino al 5% o 10% (formol en solución salina fisiológica), en
una proporción 3:1 de formol salino:heces. Puede conservarse de esta manera del 10% al 15%
de la muestra. Siempre que se haga este procedimiento se debe homogenizar muy bien la
materia fecal para asegurar que el preservante entra en contacto con toda la muestra.

Cuando la muestra se va a emplear para el aislamiento de larvas de nematodos no puede ser

fijada pues las técnicas que se emplean para este procedimiento requieren que los gusanos
estén viables. Las muestras enviadas selladas en bolsas “Ziploc” pueden tenerse a
temperatura ambiente hasta por cinco días.

Cuando el laboratorio está muy lejos del sitio de toma de la muestra y el envío puede tardar
entre 24 y 48 horas, se recomienda colocar los viales (cuyas tapas deben ser herméticas) con
las muestras en un recipiente con hielo para su conservación en buenas condiciones.

E. Análisis macroscópico.
Es importante registrar el color, el olor y la consistencia de la muestra, así como la presencia de
estructuras parasitarias (segmentos o parásitos completos), moco, sangre o restos alimenticios
sin digerir que puedan verse en la muestra. Cuando el propietario refiera que ha detectado la
presencia de estructuras parasitarias macroscópicas se le debe recomendar recogerlas en
recipientes herméticos con alcohol al 70% o agua y llevarlas al laboratorio tan pronto le sea
posible.

En algunos casos es aconsejable comparar la muestra con las de animales sanos del mismo
lote. Igualmente es bueno preguntar al propietario sobre los alimentos que ingirió el paciente
pues podría ser que su cuadro se deba a un problema de tipo intoxicación alimentaria más que
un problema parasitario.

F. Preparación de muestras en fresco para examen microscópico.

1. En una lámina porta-objetos colocar una gota de solución salina y otra gota de lugol,
separadas por unos 2 cm.
2. Con un palo agitador de madera pinchar la muestra en diferentes puntos u homogenizarla (si
su consistencia es blanda) y tomar una pequeña porción para hacer una mezcla con cada una
de las gotas puestas en el portaobjetos. Hacer primero la mezcla con la solución salina y luego
con el lugol.
2. Si la muestra está líquida, colocar una gota de la misma en el portaobjetos y usar solución
salina si es necesario adelgazarla un poco.
3. Cubrir la muestra con el cubre-objetos, asegurándose que no queden burbujas y que el
vidrio quede homogéneamente equilibrado. La muestra debe permitir ver las letras de una hoja
impresa cuando se mira a través de ella.
4. Examinar la preparación como se recomendó en el punto B.

Como este procedimiento examina una muy pequeña cantidad de muestra (no mayor a 0.2 mg)
se recomienda principalmente para cuando se sospecha la presencia de trozoitos, si la
cantidad de muestra es muy pequeña para usar otra técnica o como tamizaje previo a un
sistema de enriquecimiento o concentración.

G. Reporte de laboratorio.
1. Sistema de Cruces: Es un sistema cualitativo más que cuantitativo. Se basa en el número de
formas parasitarias observadas por campo de 10X y se utiliza la siguiente tabla:

Cruces Interpretación

+ 1-3 parásitos por campo

++ 4-7 parásitos por campo
+++ 8-10 parásitos por campo
++++ >10 parásitos por campo

Este método está cada vez en mayor desuso pues su interpretación es muy subjetiva y no
permite mayor certeza para cuando hay que hacer seguimiento a un tratamiento.

2. Recuento usando cámara de McMaster: Este método cuantitativo se basa en el empleo de

una cantidad estándar de muestra y una lámina porta-objetos con una cuadrícula y un volumen
específico que permite hacer la cuantificación de los huevos, quistes y ooquistes por gramo de
heces.

3. Reporte de presencia o ausencia de parásitos. Es un método cualitativo en el cual no se

realiza ningún tipo de recuento. Cuando no se observan formas parasitarias es aconsejable no
reportarlo como Negativo si no expresarlo como “No se observaron parásitos”.

En cualquiera de los casos se deben informar la especie (indicando Género y especie) y

estadio(s) observado(s).

H. Trabajo en grupo de 4 estudiantes.

1. Investigar en que consisten los Protocolos Operativos Estandarizados (POE, SOP por su
sigla en inglés), que información contienen y cuál es su utilidad.

2. Escribir el protocolo en formato POE para una de las siguientes técnicas, indicar en que
casos son útiles (para que parásitos) y cuál es la muestra óptima para realizar el protocolo:
(cada grupo debe escoger una de las técnicas y ponerse de acuerdo con los demás para no
repetirla)

Coloración de Hematoxilina Férrica para materia fecal

Coloración de Safranina para materia fecal
Coloración Tricrómica para materia fecal
Cultivo de heces en Agar para nematodos
Embudo o técnica de Baermann
Flotación en solución de Sacarosa
Flotación en solución saturada de Cloruro de Sodio
Flotación en sulfato de Zinc
Método de Harada-Mori
Método de Parfitt y Banks
Recuento de huevos en cámara de McMaster
Recuento de huevos por la técnica de Stoll
Sedimentación en Etil-Acetato
Sedimentación en Formol-Éter
Técnica de Kato-Katz

I. Referencias
II.
Bowman DD. Parasitología para Veterinarios. 8ª Edcn. Elsevier. 2004

Cordero del Campillo M y Rojo Vásquez FA. Parasitología veterinaria. McGraw-Hill. 1999

Velez RA. Guías en Parasitología Veterinaria. Exitodinámica Editores. Medellín. 1983

www.scholar.google.com
Materiales y reactivos para la práctica:
Muestras de materia fecal
Palos agitadores de madera
Láminas porta-objetos
Laminillas cubre-objetos
Solución salina fisiológica
Solución de lugol
Microscopio compuesto
Toallas absorbentes
Guantes

Recuerde dejar el microscopio apagado y limpio. Igualmente el laboratorio debe quedar

ordenado y limpio.