ASIGNATURA:

REALIZAR BIOMETRIA HEMATICA

PROFESORA:
Q.F.B. ISABEL RAMOS DOMINGUEZ

INTEGRANTES:
AGUILAR ZUÑIGA DIANA CAROLINA No.3
CORDERO GONZÁLEZ MARIA ARGELIA No.7
DÍAZ VELAZQUEZ JAVIER ALEJANDRO No. 11
ESPINOSA VILLATORO ERICK LEONEL No. 13
GUTIERREZ ZEPEDA MARIA XOCHITL No. 21
HERNANDEZ GONZÁLEZ CARLOS EDUARDO No. 23
NAVA GONZÁLEZ MARIANA JAQUELINE No. 35
ZAPATA ROBLES BLANCA PAOLA No. 46

EQUIPO: 5 4° “G”

SAN CRISTOBAL DE LA CASAS, CHIAPAS; 07 DE JUNIO DEL 2010

COMPONENTES DE LA SANGRE -------------------------------------------------------

RECOGIDA Y MANIPULACIÓN DE MUESTRAS -----------------------------------

HEMATOPOYESIS --------------------------------------------------------------------------

ESTUDIO MORFOLÓGICO Y FUNCIONAL DE LAS CÉLULAS SANGUÍNEAS---

ALTERACIONES DE LA SERIE ROJA --------------------------------------------------

TÉCNICAS HEMATOLÓGICAS BÁSICAS ---------------------------------------------

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4
 La sangre es un líquido viscoso que circula por todo el cuerpo humano a través
de vasos cerrados y contiene como pigmento respiratorio la hemoglobina.

PRINCIPALES FUNCIONES DE LA SANGRE

Produce el intercambio entre oxigeno y anhídrido

Respiratoria
carbónico
Energética Lleva las sustancias nutritivas a todas las células
Recoge todos los desechos y los conduce a los
Depurativa
órganos destinados a destruirlos.
Termorreguladora Distribuye el calor
Reguladora del
Por intermedio del plasma
equilibrio hídrico
Defensiva Transporta los glóbulos blancos y los anticuerpos
Gracias a la acción de las plaquetas y los factores
Coagulante plasmáticos de la coagulación.

CIRCULACION DE LA SANGRE

El aparato circulatorio está constituido por una bomba, el

corazón y un sistema de tubería cerrada por donde sale la
sangre desde el corazón (arterias) y regresa hacia el mismo
(venas), que están unidos por los vasos capilares.

El corazón es un órgano muscular hueco, situado en el

interior del tórax entre ambos pulmones; está dividido por un
tabique en dos partes totalmente independientes, izquierda y derecha. Ambas
partes presentan dos cavidades superiores llamadas aurículas y otras dos
inferiores, los ventrículos.

La circulación que parte del lado derecho del corazón asegura la oxigenación
de la sangre en los pulmones; se llama Circulación Pulmonar o Circulación Menor.
La sangre desoxigenada que ha llegado de todo el cuerpo a la aurícula derecha,
pasa a su respectivo ventrículo y sale del mismo por la arteria pulmonar y luego de
repartirse hacia ambos pulmones, en ramas cada vez más pequeñas de dicha
arteria, llega a los capilares pulmonares, en contacto directo con los alvéolos,
donde se intercambian los gases.

Una vez oxigenada la sangre, regresa al corazón hacia la aurícula izquierda, de

donde pasa al ventrículo izquierdo, de donde es bombeada, a través de la Aorta, a

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todo el cuerpo por sus ramas, hasta llegar a los vasos capilares, en cada uno de
los diferentes órganos y tejidos, para regresar desoxigenada nuevamente al
corazón a través de las venas; esta es la llamada Circulación Mayor.

Para bombear la sangre, es preciso que el corazón tenga unos movimientos o

latidos, estos son:

Diástole:

La sangre desoxigenada, proveniente de todo el

cuerpo entra a la aurícula derecha y la sangre
oxigenada, que viene de los pulmones, llega a la
aurícula izquierda. A continuación, la sangre pasa a su
ventrículo correspondiente.

Al final de esta fase, los ventrículos están llenos hasta

un 80% de su capacidad.

Sístole auricular:

Ambas aurículas se contraen y bombean la

sangre que les queda para que pase a los
ventrículos.

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 Sístole ventricular:

Los ventrículos se contraen y se cierran las válvulas

aurícula-ventriculares para evitar que la sangre se
devuelva y se abren las situadas en las salidas de los
mismos, con lo que fluye la sangre hacia la arteria
pulmonar y la aorta. Al terminar esta fase, se reinicia el
ciclo.

Trabaja indefinidamente, con un número de latidos normal, entre 60 a 100 por

minuto, en el adulto y un poco más rápido en los bebés (100 a 150).

La frecuencia cardíaca puede verse afectada por causas tan simples como el
realizar una actividad física, el embarazo, emociones, estrés o por causas más
graves como un dolor, hemorragia, entre las más comunes, con lo que aumenta.
Dicho ritmo rápido se denomina taquicardia (>100); un ritmo lento por debajo de
60 ppm, se denomina bradicardia. Si el ritmo es irregular se denomina arritmia.

La expulsión de sangre desde el ventrículo hacia la aorta, produce una onda de

presión y expansión que se trasmite por las paredes de las arterias, por donde
viaja en todo su recorrido, siempre que tengan un adecuado flujo de sangre
dentro, que puede ser vista en algunas de ellas y palpada fácilmente en arterias
cercanas a la superficie de la piel, llamada pulso arterial.

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ELEMENTOS CELULARES

Glóbulos rojos

ERITROCITO 7-8u

VCM 85+- 8 fl

NUMERO 5,5 X 1012/L

4,8 X 1012/L

VIDA MEDIA: 120 días

Los glóbulos rojos son conocidos también como eritrocitos o hematíes. Son el
componente más abundante de la sangre, y actúan transportando el oxígeno.
Como su nombre lo indica, son células de color rojo por su contenido de
hemoglobina ello se debe a que en el interior de cada uno de ellos existen de 200
a 300 millones de moléculas de hemoglobina, mediante las cuales realizan su
función, que es el transporte de oxígeno por la sangre. Se fabrican en la médula
roja de algunos huesos largos, y la disminución en el número normal de glóbulos
rojos produce anemia.

Su principal característica morfológica es que no poseen un núcleo organizado,

que al pasar a la sangre ya ha desaparecido. Tienen forma de disco bicóncavo
engrosado por el borde, su diámetro es de unas siete milésimas de milímetro, y en
cada milímetro cúbico de sangre existen de 4,5 a 5,5 millones de ellos, que
constituyen el 45% del volumen sanguíneo, subsisten durante cuatro meses antes
de ser destruidos por el sistema mononuclear fagocitico, poseen más membrana
de la estrictamente necesaria para contener su material intracelular. En
consecuencia son flexibles y pueden deformase fácilmente al ser comprimidos a
través de de los pequeños capilares de la microcirculación.

El numero de hematíes producidos y liberados por la medula ósea está

controlado por numerosos factores entre ellos la presión parcial de oxigeno, una
hormona llamada eritropoyetina y hormonas sexuales masculinas. La eritropoyesis
es el proceso que se corresponde a la generación de los eritrocitos (glóbulos
rojos). Un mm cúbico de sangre contiene un número de glóbulos rojos que va de
4.2 a 6 millones.

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 LEUCOCITOS

Glóbulos blancos

GRANULOSITOS 12 - 14 u

NUMERO: 2,0 – 7,5 X 109/ L

TOTAL DE GB: 40-75 %

Glóbulos blancos o leucocitos, son células que no tienen color, tienen un

tamaño mayor que los glóbulos rojos. Cumplen la función de defender al cuerpo
de los microorganismos infecciosos ya que tienen ciertas características que
hacen posible esta acción. Los valores normales van de 5.000 a 10.000 por mm
cúbico de sangre.

Los glóbulos blancos poseen la capacidad de responder frente a los órganos

dañados; cuando captan la fuente infecciosa, pueden atravesar las paredes de los
vasos sanguíneos y dirigirse al sitio de la infección. Esto lo hacen deformando su
"cuerpo" y desplazándose, y al llegar a la infección envuelven al agente patógeno
(o lo comen) y de esta manera lo destruyen. Se fabrican en la médula ósea.

Los glóbulos blancos de la sangre son de dos tipos principales: los granulosos,
con núcleo multilobulado, y los no granulosos, que tienen un núcleo redondeado.

Los leucocitos granulosos o granulocitos son las células con núcleo más
abundantes en la sangre. Estas células fagocitan (ingieren) los antígenos que
penetran en el cuerpo, sobre todo si estos antígenos han sido recubiertos en la
sangre por inmunoglobulinas o por proteínas del sistema del complemento del
Sistema inmunológico. Una vez ingeridos, los antígenos suelen ser destruidos por
las potentes enzimas de los granulocitos. Los granulocitos incluyen:

 Neutrófilos, que fagocitan y destruyen

bacterias.
 Eosinófilos, que aumentan su número y se
activan en presencia de ciertas infecciones
y alergias.
 Basófilos, que segregan sustancias como la
heparina, de propiedades anticoagulantes,
y la histamina que estimula el proceso de la
inflamación.

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 Los leucocitos no granulosos están formados por linfocitos y un número más
reducido de monocitos, asociados con el sistema inmunológico.

 Los linfocitos desempeñan un papel importante en la producción de

anticuerpos y en la inmunidad celular. En algunos aspectos, los linfocitos
son las células más importantes del sistema inmunológico. Existen dos
tipos principales de linfocitos:

LINFOCITO 6-9u
Los linfocitos B
NUMERO: 1,5 - 4,0 X 10 9/L
Los linfocitos T
TOTAL EN GB: 20 – 45 %

Los primeros son responsables de la inmunidad humoral o serológica; es decir,

los linfocitos B y sus descendientes directos, que reciben el nombre de células
plasmáticas, son las células responsables de la producción de unos componentes
del suero de la sangre, denominados inmunoglobulinas.

Los linfocitos T son responsables de la inmunidad celular; es decir, atacan y

destruyen directamente a los antígenos.

MONOCITO 16 - 20 U

NUMERO: 0,2 – 0,8 X 109/L

TOTAL DE GB: 2-10 %

 Los monocitos constituyen un pequeño porcentaje de la totalidad de las

células sanguíneas; cuando se encuentran localizados en los tejidos,
fuera de la circulación sanguínea, experimentan cambios físicos y
morfológicos, y reciben el nombre de macrófagos.

Al igual que los granulocitos, los monocitos también ingieren sustancias

extrañas, interaccionan con las inmunoglobulinas y con las proteínas del
complemento, y contienen enzimas potentes dentro de su citoplasma. Sin
embargo, los monocitos alteran además los antígenos, haciendo que la respuesta
inmune de los linfocitos, sea más fácil y más eficaz.

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 PLAQUETAS

Las plaquetas o trombositos son otro componente importante de tu sangre son

células diminutas de forma ovalada que se fabrican en la médula ósea.
Contribuyen al proceso de coagulación. Cuando se rompe un vaso sanguíneo, las
plaquetas se concentran en la zona afectada y ayudan a sellar la rotura para
frenar la hemorragia o sangrado. Las plaquetas solamente sobreviven unos 9 días
en el torrente sanguíneo y son sustituidas constantemente por nuevas células.
Tienen una vida muy corta, de 3 a 5 días y su función es importante en la
coagulación de la sangre.

Las plaquetas son pequeños trozos pegajosos de material celular que ayudan a
evitar las hemorragias y forman un coágulo de sangre cuando se produce un corte
o ruptura de un vaso sanguíneo.

Para producir plaquetas, la célula madre se transforma en una fábrica de

células llamada megacariocito. Ésta es una enorme célula con muchos núcleos,
que nunca sale de la médula ósea, pero produce muchos fragmentos
pequeñísimos. Esos fragmentos son las plaquetas, pequeños trozos de
citoplasma, o material celular.

Las plaquetas salen de la médula ósea para

circular libremente en el torrente sanguíneo.
Normalmente tienen un aspecto redondeado y liso,
pero cuando se activan para conectarse unas con
otras producen unas salientes puntiagudas y sus
bordes se hacen rugosos. Cuando, debido a una
herida, se produce una ruptura en la pared de un
vaso sanguíneo, las plaquetas reaccionan
adhiriéndose al corte y, en cuestión de minutos,
producen un tapón provisorio que detiene la
pérdida de sangre.

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 Las plaquetas también atraen una proteína presente en la sangre, la fibrina, y la
usan para formar una densa red en la que atrapan glóbulos rojos y rápidamente
forma un coágulo. Del lado exterior de un corte sólo se ve una costra dura que se
forma sobre la herida. Mientras quede parte de la herida sin sanar en la pared del
vaso, el coágulo constantemente se formará, se disolverá y se volverá a formar
con nuevas plaquetas, para evitar la pérdida de sangre. Cuando crezcan nuevas
células sobre la herida y ésta finalmente sane por completo, el coágulo se
eliminará y la sangre fluirá otra vez normalmente por el vaso.

COMPONENTES DEL PLASMA

SANGRE CON ANTICOAGULANTE

PLASMAN: 55% 65%

CELULAS: 45% 35%

El plasma es la parte líquida de la sangre. Compuesto fundamentalmente de

agua y proteínas, interviene en múltiples procesos metabólicos básicos para el
organismo como la coagulación de la sangre, la inmunidad y el transporte de
varias sustancias y medicamentos.

Entre las sustancias más importantes que transporta el plasma se encuentran

las siguientes:

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  La Albúmina

Es una proteína que ayuda a mantener el agua del plasma en una proporción
equilibrada.

 Las Globulinas

Son los anticuerpos encargados de la defensa de nuestro organismo frente a

las infecciones. Su disminución acarreará una bajada de defensas.

 Factores de Coagulación

Son imprescindibles para evitar las hemorragias. La ausencia de algún factor de

coagulación puede ocasionar trastornos hemorrágicos ya que se dificulta la
formación del coágulo.

Otras proteínas transportan sustancias necesarias para el normal

funcionamiento de las células (grasas, azúcares, minerales, etc).

El plasma se utiliza para elaborar concentrados específicos de proteínas, que

constituyen el tratamiento de varias enfermedades como la hemofilia y otros
defectos de la coagulación, inmunodeficiencias con riesgo de padecer múltiples
infecciones graves, la trombosis y otras.

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14
Normas generales para tratamiento de muestras biológicas

INTRODUCCIÓN
La calidad de los resultados de los análisis clínicos de muestras biológicas de
pacientes en unidad de cuidados intensivos pediátricos y neonatales comienza
con la solicitud del facultativo y una correcta obtención de la muestra. Igual de
importante es su manipulación, conservación, transporte y procesado. Una buena
metodología de trabajo por parte del personal y el resto del equipo aseguran la
fiabilidad de los datos obtenidos reduciendo al mínimo errores que conllevan el
rechazo de las muestras, repetición de los análisis y un perjuicio para el paciente
disminuyendo la calidad del servicio.
Una vez obtenida la muestra, normas para la correcta manipulación,
conservación y transporte para un correcto procesamiento en laboratorio.

Hematología

La Hematología es la especialidad médica que se dedica al tratamiento de los

pacientes con enfermedades hematológicas, para ello se encarga del estudio e
investigación de la sangre y los órganos hematopoyéticos (médula ósea, ganglios
linfáticos, bazo, etc.) tanto sanos como enfermos.
La hematología es la rama de la ciencia médica que se encarga del estudio de
los elementos formes de la sangre y sus precursores, así como de los trastornos
estructurales y bioquímicos de estos elementos, que puedan conducir a una
enfermedad.

La hematología es una ciencia que comprende el estudio de la etiología,

diagnóstico, tratamiento, pronóstico y prevención de las enfermedades de la
sangre y órganos hemolinfoproductores. Los especialistas en este dominio son
llamados hematólogos.

Las enfermedades hematológicas afectan la producción de sangre y sus

componentes, como los glóbulos rojos, glóbulos blancos, la hemoglobina, las
proteínas plasmáticas, el mecanismo de coagulación (hemostasia), etc.
La hematología comprende el estudio del paquete celular, el perfil o el estado
sanguíneo, los cuales son:

 Recuento de eritrocitos (y valor hematocrito)

 Recuento de leucocitos
 Determinación de hemoglobina
 Velocidad de sedimentación globular (VSG)
 Fórmula leucocitaria (recuento diferencial de leucocitos).

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 CÉLULAS SANGUÍNEAS O PARTE SOLIDA

LA SANGRE
La sangre (humor circulatorio) es un tejido fluido que circula por capilares,
venas y arterias de todos los vertebrados. Su color rojo característico es debido a
la presencia del pigmento hemoglobínico contenido en los eritrocitos.
Es un tipo de tejido conjuntivo especializado, con una matriz coloidal líquida y
una constitución compleja. Tiene una fase sólida (elementos formes, que incluye a
los glóbulos blancos, los glóbulos rojos y las plaquetas). Su función principal es la
logística de distribución e integración sistémica, cuya contención en los vasos
sanguíneos (espacio vascular) admite su distribución (circulación sanguínea) hacia
casi todo el cuerpo.

COMPOSICIÓN DE LA SANGRE

Los elementos formes constituyen alrededor del 45% de la sangre. Tal

magnitud porcentual se conoce con el nombre de hematocrito (fracción "celular"),
adscribible casi en totalidad a la masa eritrocitaria.
Como todo tejido, la sangre se compone de células y componentes
extracelulares (su matriz extracelular). Estas dos fracciones tisulares vienen
representadas por:
 Los elementos formes —también llamados elementos figurados—: son
elementos semisólidos (es decir, mitad líquidos y mitad sólidos) y
particulados (corpúsculos) representados por células y componentes
derivados de células.
 Las células sanguíneas, que son los glóbulos blancos o leucocitos, células
que "están de paso" por la sangre para cumplir su función en otros tejidos;
 Los derivados celulares, que no son células estrictamente sino fragmentos
celulares; están representados por los eritrocitos y las plaquetas; son los
únicos componentes sanguíneos que cumplen sus funciones estrictamente
dentro del espacio vascular.

PLASMA O PARTE LÍQUIDA

Una fase líquida, representada por el plasma sanguíneo.

El plasma sanguíneo: un fluido traslúcido y amarillento que representa la matriz
extracelular líquida en la que están suspendidos los elementos formes.
El otro 55% está representado por el plasma sanguíneo (fracción acelular). Está
formado fundamentalmente por agua (85%) y por múltiples sustancias, tales como
proteínas, enzimas, electrolitos, productos del catabolismo, factores de
coagulación, antígenos, anticuerpos, etc.

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 El plasma se obtiene por centrifugación de sangre mezclada con
anticoagulante, variando aspecto macroscópico del mismo según las condiciones
y patología del individuo, siendo el color en condiciones normales, amarillo,
adoptando otras tonalidades en casos patológicos, como amarillo intenso en caso
de aumento de bilirrubina (ictericia), quiloso o blanquecino y fundamentalmente
rojizo en caso de hemólisis de la muestra por mala manipulación de la extracción
sanguínea o del proceso de separación de la muestra sanguínea durante la
centrifugación de la mismas.
El suero se puede definir como el mismo plasma, pero que carece de
fibrinógeno y algunos otros factores de la coagulación, así como de plaquetas,
leucocitos y hematíes, siendo su aspecto de color amarillento transparente.

NORMAS PARA LA CORRECTA ESTRACCIÓN DE MUESTRAS DE

SANGRE

La obtencion de muestras para si estudio en un laboratorio de hematología ha

de ser lo más cuidadoso posible para poder obtenmer resultados precisos y
fiables. Generalmente se usa sangre venosa, aunque en determinadas
circunstancias se usa sangre capilar.
Una cez extraida la muestra de sangre total, ésta puede ser fraccionada en sus
componentes: células, plasma o suero.

CARACTERITICAS DE LA PUNCIÓN VENOSA

La punción venosa es el procedimiento invasivo más frecuente en los

hospitales, pues ofrece un medio directo de acceso al sistema vascular para
múltiples procesos diagnósticos y terapéuticos. Uno de los objetivos más comunes
es la recolección de muestras.
Esta labor debe practicarse de manera eficiente y segura, ya que los
especímenes recogidos en forma incorrecta, no solo pueden aportar informes
confusos que lleven a un diagnóstico y tratamiento erróneos; sino que además
pueden constituirse en el medio a través del cual el paciente adquiera una
infección severa.
El lugar de venopunción para la obtención de sangre venosa, es
preferiblemente en la región ante cubital (vena cubital interna y la cefálica), ya que
se trata de una región anatómica de fácil acceso para tratarse habitualmente de
venas superficiales y de un grosor adecuado para la punción. En determinadas
circunstancias se puede realizar la punción venosa en otras localizaciones, tales
como la vena yugular, femoral, en neonatos y en niños de corta edad por
presentar venas pequeñas y poco visibles en la zonas antecubital, así como en las
venas superficiales del dorso de la mano y del pie en el caso de ancianos o
individuos obesos.

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 La punción ha de ser lo más limpia posible, evitando explorar con la aguja, ya
que ello se traduce en la liberación de la tromboplastina tisular del endotelio de la
vena y en el desencadenamiento del mecanismo de la coagulación.
La punción ha de ser obligatoriamente limpia y cuidadosamente con posterior
presión durante un tiempo prudencial, aproximadamente 10 minutos, de la zona de
venopunción.

La punción venosa se verá facilitada por las siguientes medidas: mantener el

brazo caliente y aplicar en el antebrazo una cinta elástica (ligadura), a una presión
cercana a la diastólica; cerrar el puño del paciente para facilitar la visión de las
venas y seleccionar el sitio de la punción que parezca el mas adecuado; limpiar
con una torunda (algodón con alcohol), el lugar seleccionado para la punción;
sujetar el brazo del paciente y realizar la punción limpiamente, liberando la presión
del compresor para evitar la hemoconcentración de la muestra, abrir el puno del
paciente y extraer suavemente la aguja, realizando posteriormente presión en la
zona puncionada con un algodón estéril empapado en alcohol.

Actualmente el sistema de extracción con tubos estériles al vacío, el más

utilizado, permitiendo la recogida de la muestra de sangre total directamente en el
tubo.

CARACTERISTICAS DE LA PUNCIÓN CAPILAR

Se puede recurrir a la punción capilar en caso de que la muestra sanguínea a

utilizar sea muy pequeña (micrometodos), o haya dificultades para practicar una
punción venosa. El sito mas utilizado en el pulpejo del dedo, lóbulo de la oreja o
talón del pie en el neonato, para ello se utiliza lancetas estériles.

Técnica resumida: realizar una presión longitudinal o un masaje suave en la

zona para favorecer la vasodilatación, puncionar con la lanceta, desechando las
primeras dos gotas por contener líquido tisular, llenando el capilar, pipeta, con las
siguientes , siempre teniendo la precaución de que la sangre debe fluir
espontáneamente y que no se introduzca burbujas en el capilar.

Se puede realizar con esta técnica de punción capilar extensiones de sangre

periférica, teniendo en cuenta que al realizarla directamente en sangre total sin
anticoagulante se pueden producir agregados plaquetarios (coagulación).

ANTICOAGULANTES UTILIZADOS EN HEMATOLOGIA

Es importante conocer si el bote debe llevar anticoagulante en polvo o líquido y

seleccionar el apropiado para el estudio que se quiere realizar.

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 Los más utilizados son:
EDTA (ETILENDIAMINO TETRACETATO)
Anticoagulante líquido utilizado principalmente en el estudio de recuento de
células.
CITRATO DE SODIO
Anticoagulante líquido, generalmente se utiliza en estudios de coagulación.
HEPARINA
Su presentación puede incluir concentraciones de sodio y litio. Normalmente la
heparina con litio es utilizada para estudios bioquímicos y la sódica en recuento
celular.
OXALATO
Anticoagulante en polvo utilizado sobre todo en determinación de alcoholemia,
estudios del metabolismo de la glucosa.
Existen códigos de colores estandarizados para las diferentes presentaciones
comerciales de los tubos.

TAPÓN ROJO CAPACIDAD 9 cc

Tubo seco sin anticoagulante, se obtiene suero tras retracción del coágulo. Se
utiliza para pruebas cruzadas en banco de sangre.

TAPÓN ROJO, MARRÓN, AMARILLO, CAPACIDAD 3,5 cc, 5 cc. TAPÓN

AMARILLO MICROMETODO CAPACACIDAD 500 microlambdas.
Tubo con gelosa, se centrifuga y se separa el suero de las células. Se utiliza
para análisis bioquímico de la sangre.

TAPÓN VIOLETA: CAPACIDAD 2 cc, 2,5 cc, 3cc. TAPÓN VIOLETA

MICROMÉTODO CAPACIDAD 250, 500 microlambdas.

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 Con anticoagulante EDTA. Se utiliza para hemograma.

TAPÓN VERDE O BLANCO

Capacidad hasta 4 cc con anticoagulante heparina sódica. Se utiliza para
cariotipo.

TAPÓN NEGRO
Capacidad 1 +/- 0,2 ml con anticoagulante citrato, tubo de dos elementos
utilizado para VSG.

No confundir con el modelo de tapón negro para pruebas de alcoholemia,

capacidad 4 ml y con anticoagulante oxalato potásico y fluoruro sódico.

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 TAPÓN AZUL
Capacidad 1.8 cc, 2.5 cc, 4 cc con anticoagulante citrato de sodio 3.8% se
utiliza para estudio de coagulación.

Normas generales

La no consecución de estas normas conlleva el rechazo de la muestra o la no

realización de una o varias determinaciones.
La muestra debe ir debidamente identificada con una etiqueta o escrita a mano
y acompañada de una petición escrita por el facultativo. Se rechaza si carece de
identificación o esta es errónea, también si no es remitida o llega sin volante al
laboratorio.
El tubo debe estar íntegro, sin fracturas o grietas, sin defectos, con vacío,
dentro del periodo que indica la fecha de caducidad, con la cantidad adecuada de
aditivo o anticoagulante.
El tubo debe ser el indicado para el tipo de análisis con el aditivo o
anticoagulante adecuado. Por ejemplo un hemograma no se puede solicitar en un
tubo con gelosa, no tiene anticoagulante.
Volumen adecuado de sangre en el tubo. El volumen total extraído debe ser
suficiente para realizar el análisis en su totalidad. Para determinar un mayor
número de parámetros bioquímicos se requiere más cantidad de sangre. En
extracciones pediátricas se utilizan micro tubos y los analizadores permiten
realizar múltiples determinaciones con volúmenes pequeños de sangre. La
muestra insuficiente debe ser rechazada, pero también si se introduce más

21
cantidad de la adecuada, como ocurre en los tubos de estudio de coagulación o
hemograma si no se respeta la proporción sangre – anticoagulante
La sangre debe mezclarse inmediatamente con el anticoagulante una vez que
ha entrado en el tubo. Invertir suavemente varias veces o colocarlo en rotores para
obtener muestras homogéneas, nunca agitar enérgicamente.
Cumplir las condiciones de preparación del paciente ya que la ingesta de
alimentos altera numerosos parámetros como la concentración de glucosa,
colesterol o ácido úrico. Hay estudios que requieren guardar ayuno. En el caso de
los niños el tiempo de ayuno se relaciona con el peso y la talla y no debe
prolongarse demasiado. A veces la muestra de ser obtenida en un intervalo de
tiempo preciso debido a que el paciente toma alguna medicación que altera el
análisis o hay alguna variación biológica que queremos evitar.

Evitar la contaminación de las muestras.

Las muestras contaminadas están hemodiluidas o presentan substancias que
pueden alterar los valores del análisis.

Esto puede ocurrir en diversas situaciones:

Pacientes sometidos a procedimientos terapéuticos o diagnósticos antes de
realizar la extracción. P. Ej. Contrastes, quimioterapia, isótopos radiactivos.

Pacientes portadores de catéteres periféricos y que reciben una solución IV y

en los que se ha realizado una extracción en el mismo brazo por encima del
catéter sin interrumpir la administración y sin esperar al menos dos minutos. O
cuando se extrae del mismo catéter sin desechar sangre suficiente para lavar la
vía. También ocurre con las vías centrales y en reservorios heparinizados. Por ello
los estudios de coagulación no deben extraerse del catéter, porque incluso
cantidades mínimas de heparina pueden alterar resultados. Lo ideal es que se
extraigan individualmente mejor que como una parte de la extracción para varias
muestras.

En general y sobre todo con las muestras obtenidas por punción capilar tener
en cuenta si se ha utilizado povidona yodada, porque si la sangre está
contaminada pueden encontrarse niveles falsos elevados de potasio, fósforo y
ácido úrico.

Puede existir una contaminación progresiva de la muestra de un tubo a otro

cuando no se respeta el orden de llenado:
Tubos o envases estériles para estudio bacteriológico
(Hemocultivos) si los hubiere.
Tubos sin aditivos para análisis del suero.
Tubos con citrato para pruebas de coagulación.
Tubos con citrato para VSG.
Tubos con EDTA.
Resto de los tubos
Transporte adecuado de la muestra.

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 El tiempo excesivo o la temperatura inadecuada de la muestra hacen que se
deteriore y sea rechazada o aporte datos erróneos.

Hay determinaciones que han de enviarse de forma inmediata para su análisis o

conservación en el laboratorio hasta que este se realice, por ejemplo el amonio o
las catecolaminas.

Otras necesitan refrigerarse inmediatamente después de la extracción, por

ejemplo la gastrina o actividad de renina.
A veces es necesaria la congelación de la muestra como en la determinación de
ACTH (hormona adenocorticotropa).
Hay análisis como los de las crioglobulinas o el de ácido láctico donde la
muestra necesita una temperatura de 37º y un transporte rápido al laboratorio.

Con la correcta conservación y rápido transporte de la muestra se evita

formación de amoniaco, glicólisis, degradación de las proteínas, alteración de las
substancias por la luz y otros procesos que alteran los resultados.

Hay otros factores relacionados con el rechazo de la muestra que aun siendo
evitables dependen mas de la técnica del profesional y de la propia muestra que
de los protocolos.

Muestra hemolizada.
La hemólisis es la ruptura de los hematíes que libera hemoglobina y otras
substancias en el plasma y este adquiere un color entre rosa y rojo. Esto afecta a
varias determinaciones por el aumento en el suero de la sustancia a medir por
ejemplo sodio o potasio o también por interferencia óptica o química durante la
fase analítica.

Hay varias causas:

Relacionadas con la extracción sanguínea:

 Aguja demasiado fina, hay que elegir calibre 22G, 20G. Se aspira
demasiado fuerte durante la extracción. Desplazar el embolo
suavemente.
 Se fuerza el paso de la sangre al tubo a través de la aguja. Es mejor
quitar el tapón y dejar resbalar la sangre por las paredes del tubo.
 Evitar venas muy pinchadas para no extraer sangre de un hematoma.
Relacionadas con la manipulación en el laboratorio.
 La muestra debe centrifugarse antes de que este completamente
coagulada si el bote no contiene anticoagulante, como el tubo con
gelosa. Hay que centrifugar las muestras a las revoluciones adecuadas y
en aparatos bien calibrados.
 Relacionados con el paciente:
 Reacción antígeno anticuerpo, reacción postransfusional, anemia
hemolítica, enfermedades hepáticas.

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 Muestra coagulada.
Debido a una extracción difícil de larga duración, por no mezclar la sangre en
los tubos adecuadamente o por las características del paciente.

Muestra con ictericia.

La presencia de bilirrubina en la sangre puede alterar algunas determinaciones
pero no se considera error dado que no esta relacionado con la extracción o el
tratamiento de la muestra.

Muestra lipemica.
Son las que tienen alto contenido en grasa y aspecto lechoso y se pueden
presentar en pacientes que no han guardado el ayuno recomendado y con una
ingesta copiosa de alimentos. También en muestras contaminadas de pacientes
sometidos a nutrición parenteral.

REALIZACIÓN DE EXTENCIONES DE SANGRE

Realización de las extensiones de sangre periférica

La extensión sanguínea es de gran importancia en algunas enfermedades
hematológicas, ya que su diagnóstico puede realizarse o sospecharse sólo con
observar la morfología de las células de la sangre.

Las extensiones de sangre se pueden realizar en:

 Sangre capilar mediante punción en dedo, talón con microlanceta estéril

desechable, recordando que se deben desechar las primeras gotas y que
además deben fluir espontáneamente, teniendo en cuenta que al utilizar
sangre sin anticoagulante se pueden producir agregados plaquetarios

 Muestra anticoagulada aprovechando las muestras de tubos de

hemograma, siendo conveniente que el anticoagulante utilizado sea
EDTA, al ser el que menos altera la morfología de las células
sanguíneas. Se deben realizar estas extensiones preferentemente antes
de que pasen 2 horas de la extracción, ya que pasadas éstas se produce
modificaciones, fundamentales de la morfología leucocitaria, con
aumento del número de cayados o bandas.

MATERIAL NECESARIO

Material necesario
 Una lanceta de aplicación manual o automática
 Algodón.
 Un capilar no heparinizado, si la muestra es sangre venosa anticoagulada,
o heparinizado, si la muestra es sangre capilar.

24
  2 portaobjetos limpios y libres de grasa. Uno de ellos puede ser normal y el
otro ha de ser, preferentemente. Esmerilado y biselado (el porta extensor).
Para mantener limpios los portas, se deben seguir las siguientes
indicaciones:

Lavar los portaobjetos con agua y jabón líquido. Aclararlos con abundante agua
caliente. Sumergir los portaobjetos, durante una hora en una solución de etanol-
éter etílico o, simplemente etanol. Volver a aclarar los portas y dejar secar. Por
último recordar que siempre debemos tocar los portaobjetos por los bordes, de
esta forma evitamos manchar las superficies de los mismos con suciedad o grasa
procedente de los dedos.

TECNICA A UTILIZAR

Uno de los métodos más empleados para la realización del frotis sanguíneo es
el método de los dos portaobjetos. Consiste en la extensión de una gota de
sangre sobre un portaobjetos mediante otro portaobjetos. La técnica es la
siguiente:

 Con los dedos índice y pulgar de una mano, sujetar un extremo del porta
normal (porta soporte), a nivel de sus bordes, y situarlo sobre una mesa.
También puede apoyarse, simplemente, el porta soporte sobre el
extremo del dedo corazón de la mano que lo sujeta. De esta forma, el
porta soporte forma un ángulo con la mesa.
 Con un capilar cargado mediante capilaridad de sangre problema,
depositar una pequeña gota de ésta (de unos 5 microlitros) en la cara
superior de ese porta, a no menos de 2 cm del extremo opuesto al que
agarra la mano.
 Colocar un extremo del porta esmerilado (porta difusor o extensor) un
poco por delante de la gota de sangre y formando un ángulo de 45° con
el porta soporte. Es conveniente utilizar siempre el mismo portaobjeto
extensor, para adaptarlo a esta función.
 Desplazar suavemente hacia atrás el porta extensor, hasta que alcance
la gota de sangre.
 Dejar que la gota se extienda, por capilaridad, a lo largo del extremo del
porta extensor que toca el porta soporte.
 Antes de que la sangre alcance los bordes de ese extremo, deslizar el
porta extensor hacia delante, con un movimiento firme y uniforme, y a
una velocidad media. Este deslizamiento debe acabar,
aproximadamente, a 1 cm del extremo final del porta soporte, con un
movimiento de ascensión del porta extensor.
 Secar rápidamente la extensión, agitándola al aire, para que sus células
no se distorsionen.
 Escribir el nombre del enfermo, en el porta que soporta la extensión.

25
.

26
CABEZA.

 Es la zona inicial de la extensión.

 Es la región más gruesa.
 En ella se encuentra una mayor proporción de linfocitos, y los hematíes
forman aglomerados (pilas de monedas).

CUERPO.

 Es la zona media del frotis.

 Su espesor es el apropiado.
 En ella existe una adecuada proporción entre los distintos tipos de
leucocitos.
 Contiene la "zona ideal" de observación, que corresponde a la porción
que limita con la cola.

COLA.

 Es la zona final de la extensión.

 Suele tener un aspecto redondeado.
 Es la región más fina.
 En ella se encuentra una mayor proporción de leucocitos grandes
(granulocitos y monocitos), y además. los hematíes están deformados y
presentan una tonalidad uniforme.
 En su porción terminal suelen ser más abundantes las plaquetas, sobre
todo si son grandes.

DEFECTOS DE UNA EXTENSIÓN.

 Excesiva longitud y escaso grosor o escasa longitud y excesivo

grosor. Esto se debe a un inadecuado tamaño de la gota de sangre o/y
a un error en la velocidad o/y a un fallo en el ángulo de extensión de la
misma.
 Presencia de escalones o estrías. Esto está ocasionado por una falta
de uniformidad en el deslizamiento de la gota.

27
  Existencia de abundantes zonas redondeadas que carecen de
sangre. Esto se produce por la presencia de restos de grasa o de
suciedad en el porta.
 Extremo final excesivamente dentado.

Tinción de las extensiones de sangre periférica:

El frotis, una vez seco, se fija y se tiñe mediante colorantes adecuados.

Generalmente, en los laboratorios hematológicos se emplean colorantes basados
en la tinción de Romanowsky, basado en una combinación de eosina y azul de
metileno.

Con la tinción de los elementos formes de la sangre se pueden distinguir los

siguientes aspectos morfológicos de las células:

1. La forma, dimensión y contorno de los hematíes (de color rosa pálido),

leucocitos (células nucleadas) y plaquetas (pequeños corpúsculos).
2. El núcleo: de color púrpura.
3. El citoplasma: de color azulado o gris en los linfocitos y monocitos.

28
 4. Granulaciones: mezcla de colores pardos (neutrófilos), anaranjadas
(eosinófilos) y azul oscuro (basófilos).

Aunque cada laboratorio emplea su receta, los colorantes y los métodos de

tinción más empleados son la tinción de Giemsa, de May-Grünwald-Giemsa, y de
Wright.

MUESTRAS PARA EL LABORATORIO DE HEMATIMETRIA

¿QUÉ SE ESTÁ ESTUDIANDO?

En un estudio rutinario de hematimetría se van a cuantificar y evaluar diferentes

grupos celulares, los glóbulos rojos (hematíes), los glóbulos blancos (leucocitos),
las plaquetas, el contenido de hemoglobina, y otros parámetros relacionados con
su cantidad, forma y contenido.

VALORES QUE SE ESTUDIAN

Parámetro Valores Normales

Número de hematíes 4 - 5,5 millones/ml
Hemoglobina 12 - 16 g/dl
Hematocrito 37-52 %
VCM 80 - 99 fl
HCM 27-32 pg
CMHC 32-36 g/dl
Plaquetas 135-450 miles/ml
VPM 9,6 fl
Número de Leucocitos 4,5-11 miles/ml
Neutrófilos 42 -75 %
Linfocitos 20.5- 51.1 %
Monocitos 1.7 - 9.3 %
Eosinófilos 0-1 %
Basófilos 0-0.2 %

¿PARA QUÉ SE REALIZA?

1. La cantidad de hematíes puede ofrecer datos de salud o de la presencia de

una anemia, enfermedades generales, o diferentes tipos de cáncer. Como los

29
hematíes son los encargados de transportar la hemoglobina (proteína que porta el
oxígeno a los tejidos), su disminución produce cansancio y sensación de fatiga.
2. La concentración de hemoglobina nos ofrecerá datos complementarios
sobre la posible alteración del número de hematíes.
3. El hematócrito, es el porcentaje de la masa del eritrocito con relación al
volumen sanguíneo. Con esos datos son calculados los índices hematimétricos
(VCM, HCM, VMHC). La alteración de estos parámetros nos ayudarán a orientar
diferentes enfermedades que causan alteraciones en estos índices (Ejemplo:
diferentes tipos de anemias)
4. Los glóbulos blancos (leucocitos) son los encargados de las defensas de la
persona, por ello en cuadros de infección están aumentados, o en ciertas
enfermedades están disminuidos. También es importante saber cuales son las
poblaciones de cada tipo de leucocitos, por ello en los resultados aparecen los
neutrófilos, monocitos, linfocitos, basófilos y eosinófilos. Según los resultados de
cada una de estas poblaciones se puede orientar hacia una u otra enfermedad.
5. Las plaquetas son las células encargadas de parte de la coagulación por
ello si su número disminuye pueden aparecer cuadros de hemorragias
(sangrados) que puede deberse a diferentes problemas y enfermedades, y su
número aumenta en diferentes enfermedades reumáticas o autoinmunes.

Cada uno de estos valores puede ofrecer mayor información; por ello
recogeremos cada uno de ellos por separado.

PROCEDIMIENTO DE OBTENCIÓN

1. Para realizar este análisis no se precisa estar en ayunas.

2. Se puede realizar la toma en un lugar apropiado (consulta, clínica, hospital)
pero en ocasiones se realiza en el propio domicilio del paciente.
3. Para realizar la toma se precisa de localizar una vena apropiada y en
general se utilizan las venas situadas en la flexura del codo. La persona
encargada de tomar la muestra utilizará guantes sanitarios, una aguja (con una
jeringa o tubo de extracción).
4. Le pondrá un tortor (cinta de goma-látex) en el brazo para que las venas
retengan más sangre y aparezcan más visibles y accesibles.
5. Limpiará la zona del pinchazo con un antiséptico y mediante una palpación
localizará la vena apropiada y accederá a ella con la aguja. Le soltarán el tortor.
6. Cuando la sangre fluya por la aguja el sanitario realizará una aspiración
(mediante la jeringa o mediante la aplicación de un tubo con vacío).
7. Si se requiere varias muestras para diferentes tipos de análisis se le
extraerá más o menos sangre o se aplicarán diferentes tubos de vacío.
8. Al terminar la toma, se extrae la aguja y se presiona la zona con una
torunda de algodón o similar para favorecer la coagulación y se le indicará que
flexione el brazo y mantenga la zona presionada con un esparadrapo durante unas
horas.

30
31
HEMATOPOYESIS

La hematopoyesis o hemopoyesis es el proceso de formación, desarrollo y

maduración de los elementos formes de la sangre (eritrocitos, leucocitos y
plaquetas) a partir de un precursor celular común e indiferenciado conocido como
célula madre hematopoyética pluripotencial o stem cell. Las células madre que en
el adulto se encuentran en la médula ósea son las responsables de formar todas
las células y derivados celulares que circulan por la sangre.

 Durante las primeras semanas embrionarias se encuentran células madres

en el saco vitelino, las cuales van diferenciándose en células elitroides,
provistas de hemoglobina embrionaria.
 Desde el tercer mes hasta el séptimo de embarazo, las células madre
migran, primero al hígado fetal, y después al bazo fetal, donde sigue la
hematopoyesis.
 Desde el séptimo mes, va disminuyendo la hematopoyesis en el hígado y
bazo, hasta que desaparece para la época del nacimiento, y va adquiriendo
preeminencia el papel de la médula ósea.

La hematopoyesis es la formación de las células sanguíneas. En condiciones

normales existe una coordinación entre su formación y su destrucción. Los
hematíes viven una media de 120 días, los granulocitos 6 a 8 horas, y las
plaquetas 7 a 10 días, mientras que los linfocitos pueden tener una vida muy
prolongada, algunos sobreviven años. Para mantener unas cifras normales de
células sanguíneas es necesario que se estén produciendo constantemente
células nuevas.

En la fase embrionaria las células hematopoyéticas derivan del mesénquima

primitivo (saco vitelino) y de la región aorta-gonadal-mesonefros (AGM) (fig. 1). A
partir de la sexta semana de vida intrauterina, la hematopoyesis tiene lugar en el
hígado, bazo y timo, persistiendo hasta el décimo mes, aunque a lo largo de toda
la vida existe una pequeña capacidad hematopoyética, que en circunstancias
patológicas es capaz de expresarse, como en la metaplasia mieloide
hepatoesplénica.

32
 TEJIDO HEMATOPOYETICO:

TEJIDO

HEMATOPOYETICO

El sistema hematopoyético engloba a los tejidos y órganos que intervienen en la

producción, maduración y destrucción de las células sanguíneas.

Este sistema comprende:

 Sistema mononuclear fagocitico.

 Bazo
 Hígado
 Timo
 Medula ósea
 Ganglios linfáticos

SISTEMA MONONUCLEAR FAGOCITICO (SMF)

El sistema mononuclear fagocítico (SMF), antes llamado sistema retículo-

endotelial (SRE),[1] incluye todas las células derivadas de los precursores
monocíticos de la médula ósea (monoblasto y promonocito), los monocitos de la
sangre periférica y los macrófagos o histiocitos de los distintos órganos y
tejidos.[2] Entre estos últimos cabe considerar: los histiocitos del tejido conjuntivo,
las células de Kupffer del hígado, las células de Langerhans de la epidermis, los

33
osteoclastos del tejido óseo, la microglía del SNC, los macrófagos alveolares del
pulmón y los restantes macrófagos distribuidos por la médula ósea, el bazo o las
serosas pleural y peritoneal. Desde el punto de vista funcional existen dos grandes
grupos de células histiocíticas: el macrófago, entre cuyas funciones está el
procesamiento de los antígenos y la fagocitosis, y la célula dendrítica, cuya
función es la presentación de antígenos.

Se ha comprobado hace varios años que las células reticulares y endoteliales no

tienen relación con la actividad de este sistema, ni siquiera con los macrófagos,
principales componentes del SFM. Es por eso que actualmente se considera más
adecuado el nombre de SFM, ante el de sistema retículoendotelial.{demostrar}}sin
embargo este cambio se ha llevadopoco a poco progresivamente, es comunque
entre la comunidad medica aunse utilize el termino: sistema reticuloendotelial

BAZO

El bazo es un órgano de tipo parenquimatoso, aplanado y oblongo, situado en la

zona superior izquierda de la cavidad abdominal, en contacto con el páncreas, el
diafragma y el riñón izquierdo. Aunque su tamaño varía de unas personas a otras
suele tener una longitud de 14 cm, una anchura de 10 cm y un grosor de 3,8 cm
así como un peso de 200 g aproximadamente. Su función principal es la
destrucción de células sanguíneas rojas viejas, producir algunas nuevas y
mantener una reserva de sangre. Forma parte del sistema linfático y es el centro
de actividad del sistema inmune.

En el humano el bazo es el mayor de los órganos linfáticos, es intraperitoneal,

se sitúa habitualmente en el hipocondrio izquierdo de la cavidad abdominal, detrás
del estómago y debajo del diafragma, unido a él por ligamento frenoesplénico. El
bazo está sujeto por bandas fibrosas unidas al peritoneo (la membrana que reviste
la cavidad abdominal).

Funciones hemáticas
 Hematopoyesis: durante la gestación, el bazo se caracteriza por ser un
importante productor de glóbulos rojos en el feto. Sin embargo, en los
adultos esta función desaparece reactivándose únicamente en los
trastornos mieloproliferativos que merman la capacidad de la médula
ósea para producir una cantidad suficiente.

34
  Maduración y destrucción de los glóbulos rojos: en el bazo se
produce el moldeo de los reticulocitos hasta que se forman discos
bicóncavos, así como se produce la eliminación de los glóbulos rojos
viejos, anómalos o que se encuentran en mal estado. Cuando por
diferentes motivos, el bazo tuvo que ser extirpado, los eritrocitos
anormales que en presencia del órgano habrían sido destruidos
aparecen presentes en la sangre periférica; encontrándose entre ellos,
dianocitos y otros elementos con inclusiones intracelulares. A pesar de
que la función del bazo en el ser humano no consiste en el
almacenamiento de eritrocitos, es un lugar clave para el depósito de
hierro y contiene en su interior una parte considerable de las plaquetas y
macrófagos disponibles para pasar al torrente sanguíneo en el momento
que sea necesario.

HIGADO

El hígado es un órgano o víscera presente en los vertebrados y en algunos

otros animales; y es, a la vez, la glándula más voluminosa de la anatomía y una de
las más importantes en cuanto a la actividad metabólica del organismo.
Desempeña funciones únicas y vitales como la síntesis de proteínas plasmáticas,
función desintoxicante, almacena vitaminas, glucógeno, entre otros para el buen
funcionamiento de las defensas, etcétera. Además, es el responsable de eliminar
de la sangre las sustancias que pueden resultar nocivas para el organismo,
transformándolas en otras inocuas.

El hígado se localiza en la región del hipocondrio derecho del abdomen (no

sobrepasa el límite del reborde costal salvo en caso de hepatomegalia), en el
epigastrio y una porción del hipocondrio izquierdo, llenando el espacio de la cúpula
diafragmática, donde puede alcanzar hasta la quinta costilla, y se relaciona con el
corazón a través del centro frénico, a la izquierda de la cava inferior. Su
consistencia es blanda y depresible, y está recubierto por una cápsula fibrosa,
sobre la cual se aplica el peritoneo, parte de la superficie del hígado (excepto en el
área desnuda del hígado, que corresponde a su superficie posterior-superior).

35
 TIMO

El timo, en anatomía, es un órgano del sistema linfático, responsable de la

maduración de los linfocitos T, y endocrino, ya que secreta algunas hormonas. El
timo tiene su máxima actividad durante la infancia y la adolescencia. En la edad
adulta se atrofia parcialmente, siendo sustituido por tejido adiposo; no obstante
siempre conserva una actividad residual.

Generalmente consta de dos lóbulos y se localiza en el mediastino, detrás del

esternón. Una capa de tejido conectivo envuelve y mantiene unidos los dos
lóbulos tímicos; mientras que una cápsula de tejido conectivo delimita por
separado cada lóbulo; de ella tabiques (trabéculos) hacia el interior y los dividen
en lobulillos o pequeños lóbulos. Cada uno consta de córtex (o corteza) superficial,
córtex profundo y médula, tiñéndose el córtex superficial de color oscuro, y la
médula de color claro tras realizar una tinción. La corteza se compone de linfocitos
estrechamente apiñados, células epiteliales denominadas epiteliales reticulares
que rodean a grupos de linfocitos, y macrófagos. La médula contiene, ante todo,
células epiteliales reticulares, además de linfocitos muy dispersos. En la médula
existen los característicos corpúsculos del timo (o de Hassall), que son capas
concéntricas de células epiteliales reticulares aplanadas y llenas de gránulos de
queratohialina y queratina

GANGLIOS LINFATICOS

Los ganglios o nodos linfáticos son unas estructuras nodulares que forman
parte del sistema linfático que forman agrupaciones en forma de racimos.

Los ganglios linfáticos se localizan en:

 axilas.
 ingle.
 cuello.
 mediastino.
 abdomen.

36
Componentes del sistema linfático

 Plexos linfáticos Son redes de capilares linfáticos, que se originan en el

espacio extracelular de los tejidos.
 Vasos linfáticos Son conductos linfáticos ubicados en casi todos los lugares
del cuerpo que presentan irrigación sanguínea, exceptuando dientes,
Sistema Nervioso Central, Huesos y Médula ósea (es un tejido linfático).
 Nódulos ganglios linfáticos Son masas de tejido linfático que sirven de
"filtro" de la linfa en su trayecto hacia el sistema venoso.
 Linfocitos Son células inmunitarias que reaccionan frente a materiales
extraños.
 Órganos linfoides Son partes del cuerpo que producen linfocitos.

FUNCION

Los nodos linfáticos actúan como filtros, al poseer una estructura interna de
tejido conectivo fino, en forma de red, relleno de linfocitos que recogen y destruyen
bacterias y virus, por lo que los nodos linfáticos también forman parte del sistema
inmunitario. La linfa le llega a través de vasos aferentes, vacían la linfa, se filtra
dentro del nodo y se forma la respuesta inmunitaria humoral o celular al entrar en
contacto con los componentes activos inmunitarios. Una vez filtrada la linfa, ésta
sale por el vaso linfático eferente, propaga la respuesta inmunitaria y llega a la
sangre.

MEDULA OSÈA

La médula ósea es un tipo de tejido que se encuentra en el interior de los

huesos largos, vértebras, costillas, esternón, huesos del cráneo, cintura escapular
y pelvis.

Muchas veces se confunde con la médula espinal. Sin embargo, tienen

funciones totalmente distintas. La médula espinal se encuentra en la columna y
transmite los impulsos nerviosos hacia todo el cuerpo.

Son de 2 tipos:

37
  La médula ósea roja, que ocupa el tejido esponjoso de los huesos planos,
como el esternón, las vértebras, la pelvis y las costillas; es la que tiene la
función hematopoyética.

 La médula ósea amarilla, que es tejido adiposo y se localiza en los canales

medulares de los huesos largos.

La médula ósea es el lugar donde se produce la sangre (hematopoyesis),

porque contiene las células madre que originan los tres tipos de células
sanguíneas que son los leucocitos, hematíes y plaquetas.

La médula ósea puede trasplantarse, ya que puede extraerse de un hueso de

donante vivo, generalmente del esternón o de la cadera, mediante una punción y
aspiración y transfundirse al sistema circulatorio del receptor si existe
compatibilidad del sistema HLA (compatibilidad de órganos entre donante y
receptor). Las células madre transfundidas anidarán en la médula ósea de los
huesos del receptor. Es lo que se llama trasplante de médula ósea.

BIOLOGIA DEL SISTEMA HEMATOPOYETICO

El sistema linfohematopoyético está constituido por la sangre, la médula ósea, el

bazo, el timo, los vasos y los ganglios linfáticos.

En conjunto, la sangre y la médula ósea forman el sistema hematopoyético. La

médula ósea es el lugar en el que se producen las células para reponer
constantemente los elementos celulares de la sangre (eritrocitos, neutrófilos y
plaquetas). Esta producción está controlada estrechamente por un grupo de
factores del crecimiento.

Los neutrófilos y las plaquetas se consumen a medida que realizan sus

funciones fisiológicas, mientras que los eritrocitos acaban por envejecer y tienen
una supervivencia superior a su período de utilidad. Para cumplir adecuadamente
sus funciones, los elementos celulares de la sangre deben circular en las
cantidades

apropiadas y mantener su integridad estructural y fisiológica.

38
 Los eritrocitos contienen hemoglobina, que les permite captar oxígeno y
suministrarlo a los tejidos para mantener el metabolismo celular. Normalmente, los
eritrocitos sobreviven en la circulación unos 120 días cumpliendo estas funciones.
Los neutrófilos aparecen en la sangre cuando se dirigen a los tejidos para
participar en la respuesta inflamatoria a los microbios y otros agentes. Las
plaquetas circulantes desempeñan un papel esencial en la hemostasia.

La médula ósea tiene una capacidad de producción asombrosa. Cada día, la

médula sustituye 3.000 millones de eritrocitos por cada kilogramo de peso
corporal. Los neutrófilos tienen una vida media en la circulación de sólo 6 horas, y
cada día deben producirse 1.600 millones de neutrófilos por kg de peso corporal.
La población plaquetaria debe renovarse completamente cada 9,9 días. Debido a
esta necesidad de producir grandes cantidades de células funcionales, la médula
ósea es muy sensible a cualquier agresión infecciosa, química, metabólica o
ambiental que altere la síntesis del ADN o interrumpa la formación de la
maquinaria subcelular vital de los eritrocitos, los leucocitos o las plaquetas.
Además, como las células hemáticas derivan de la médula ósea, la sangre
periférica constituye un indicador sensible y muy exacto de la actividad medular.
Es muy fácil obtener sangre para su análisis mediante venopunción, y el estudio
de la sangre puede proporcionar indicios precoces de la existencia de
enfermedades de etiología ambiental.

Puede considerarse al sistema hematológico como un conducto para las

sustancias que penetran en el organismo y como un sistema en el que puede
influir negativamente la exposición laboral a agentes potencialmente nocivos. Las
muestras de sangre pueden servir como control biológico de la exposición y
ofrecer un medio de valorar los efectos de la exposición laboral sobre el sistema
linfohematopoyético y otros órganos del cuerpo.

39
 CELULA MADRE (STEM CELL)

Una célula madre es una célula que tiene capacidad de autorrenovarse

mediante divisiones mitóticas o bien de continuar la vía de diferenciación para la
que está programada y, por lo tanto, producir células de uno o más tejidos
maduros, funcionales y plenamente diferenciados en función de su grado de
multipotencialidad. La mayoría de tejidos de un individuo adulto poseen una
población específica propia de células madre que permiten su renovación
periódica o su regeneración cuando se produce algún daño tisular. Algunas
células madre adultas son capaces de diferenciarse en más de un tipo celular
como las células madre mesenquimales y las células madre hematopoyéticas,
mientras que otras son precursoras directas de las células del tejido en el que se
encuentran, como por ejemplo las células madre de la piel o las células madre
gonadales (células madre germinales). Es común que en documentos
especializados se las denomine stem cells, en inglés, donde stem significa tronco,
traduciéndolo lo más a menudo como «células troncales».

Las células madre embrionarias son aquellas que forman parte de la masa
celular interna de un embrión de 4-5 días de edad y que tienen la capacidad de
formar todos los tipos celulares de un organismo adulto. Una característica
fundamental de las células madre embrionarias es que pueden mantenerse (en el
embrión o en determinadas condiciones de cultivo) de forma indefinida, formando

40
al dividirse una célula idéntica a ellas mismas, y manteniendo una población
estable de células madre. Existen técnicas experimentales donde se pueden
obtener células madre embrionarias sin que esto implique la destrucción del
embrión.

ERITROPOYESIS

En condiciones normales la serie eritroblástica importa entre un 30 y 35 % de los

elementos nucleados de la médula ósea. La secuencia madurativa de esta serie
se inicia con el proeritroblasto, el cual da origen al eritroblasto basófilo, éste al
eritroblasto policromático y al eritroblasto ortocromático.

Los cambios morfológicos que se experimentan durante su maduración se

caracterizan por una notable disminución del tamaño nuclear de los eritroblastos,
con condensación progresiva de la cromatina y desaparición de los nucleolos. El
citoplasma evoluciona perdiendo la intensa basofilia propia de los estadios más
jóvenes, y adquiere la acidofilia típica que le proporciona la hemoglobina en los
estadios más maduros.

Una vez finalizada la maduración del eritroblasto ortocromático, el nucleo,

expulsado de la célula por un mecanismo no del todo conocido, es posteriormente
fagocitado por las células del sistema mononuclear fagocítico de la médula ósea.
Con la pérdida del núcleo, el eritroblasto ortocromático se transforma en
reticulocito, elemento anucleado que todavía posee cierta capacidad de síntesis
de RNA, proteínas y hemoglobina, gracias a la persistencia de algunas
mitocondrias, ribosomas y restos de reticuloendoplasma. A medida que el
reticulocito madura va perdiendo retículo granulofilamentoso hasta transformarse
en un hematíe o eritrocito maduro, desprovisto de él. El reticulocito permanece
algunos días en la médula ósea, pasando luego a sangre periférica, donde
persiste durante 24 horas y finaliza su maduración. El tiempo que tarda en
madurar el proeritroblasto a reticulocito es de 3-4 días.

El hierro, imprescindible para la síntesis hemoglobínica es captado por los

eritroblastos a través de diversos mecanismos, entre los que destaca el fenómeno
de la rofeocitosis. Este metal se acumula en el interior de los eritroblastos en
forma de inclusiones constituidas por varias moléculas de ferritina rodeadas de
una membrana, que reciben el nombre de siderosomas. A nivel óptico y con la
tinción de Perls, los siderosomas aparecen como pequeños gránulos de tonalidad
verde-azulada, localizados en el citoplasma de los eritroblastos. Los eritroblastos
que contienen moléculas de ferritina se denominan sideroblastos. Opticamente los
sideroblastos corresponden, por regla general, a eritroblastos en estadios
madurativos avanzados (eritroblastos policromáticos u ortocromáticos); sin
embargo, a nivel estructural se ha comprobado que todos los eritroblastos, incluso
los elementos más jóvenes de la serie, pueden contener moléculas

41
citoplasmáticas de ferritina, cuya demostración ultraestructural es básica para la
filiación eritroide de una célula determinada.

El proeritroblasto es la célula más inmadura de la serie roja capaz de ser

identificada ópticamente como tal. Su tamaño es grande con un núcleo redondo
central de gran talla que ocupa la mayor parte de la célula, por lo que la relación
nucleocitoplasmática es elevada. La cromatina muestra una estructura finamente
reticulada, y posee uno o dos nucleolos mal limitados. El citoplasma es
intensamente basófilo debido a su gran riqueza en polirribosomas, y queda
reducido a una delgada franja perinuclear en la que se aprecia una zona más
clara, de forma semilunar, que corresponde al centrosoma de la célula. En
ocasiones presenta unas protusiones citoplasmáticas a modo de casquetes
bastante característicos de este estadio madurativo. El eritroblasto basófilo es
una célula de menor tamaño que posee un núcleo central con cromatina algo más
madura. El citoplasma todavía tiene un color basófilo intenso. La relación
nucleocitoplasmática disminuye progresivamente debido al rápido descenso del
tamaño nuclear. El eritroblasto policromático tiene un tamaño inferior y un
núcleo redondo y central, cuya cromatina está fuertemente condensada. La
relación nucleocitoplasmática alcanza el 25%. El citoplasma, en el que se ha
iniciado poco a poco la síntesis hemoglobínica, va perdiendo basofilia y adquiere
una tonalidad gris rosada, acidófila. Es la última célula eritroblástica con capacidad
mitótica. El eritroblasto ortocromático tiene un tamaño pequeño con núcleo
intensament picnótico y cromatina muy condensada de aspecto homogéneo. El
citoplasma muy acidófilo va aumentando su contenido hemoglobínicohasta
adquirir la tonalidad propia del hematíe maduro. Este eritroblasto puede sintetizar
proteinas y hemoglobina. El núceo, una vez finalizada su maduración, es
expulsado de la célula por un mecanismo no del todo conocido, siendo éste
posteriormente fagocitado por las células del sistema mononuclear fagocítico de la
médula ósea.

Con la pérdida del núcleo el eritroblasto ortocromático se transforma en

reticulocito, elemento anucleado que todavía posee cierta capacidad de síntesis
de RNA, proteínas y hemoglobina, gracias a la persistencia de algunas
mitocondrias, ribosomas y restos de reticuloendoplasma. Su tamaño es algo
superior al del hematíe maduro (8-9 um), y conserva un cierto grado de basofilia
(policromatofilia). Tras la tinción vital con azul de metileno o azul de toluidina se
objetiva en su interior una sustancia reticulada granulo-filamentosa, que no es más
que la precipitación del colorante sobre restos de ribosomas, RNA mensajero y
otras organelas celulares. A medida que el reticulocito madura, va perdiendo el
retículo granulofilamentoso hasta transformarse en hematíe maduro, desprovisto
del mismo. El reticulocito permanece algunos días en la médula ósea, pasando
luego a sangre periférica, donde persiste 24 horas y finaliza su maduración. El
tiempo que tarda en madurar el proeritorblasto a reticulocito es de 3-4 días. El
recuento del número de reticulocitos en sangre periférica es un dato muy útil
para establecer el índice de efectividad global de la eritropoyesis y determinar el
origen central o periférico de una anemia, así como para enjuiciar el carácter
regenerativo o arregenerativo de los síndromes anémicos. Los valores normales

42
de los reticulocitos en sangre periférica oscilan entre 35 y 75 x 10 9/l. Valores
inferiore indican una eritropoyesis insuficiente. El hematíe o eritrocito es el
elemento más maduro de la eritropoyesis. Su misión fundamental es la captación
de oxígeno y su transporte a los tejidos. Los eritrocitos son elementos anucleados,
de color rosado y de forma redondeada u oval, con una depresión o zona más
clara en el centro.

GRANULOPOYESIS

La secuencia celular de los elementos granulocíticos morfológicamente

identificables se inicia con el mieloblasto, el cual da origen al promielocito; éste
al mielocito, metamielocito, banda y finalmente segmentado. El mielocito es el
último elemento con capacidad mitótica.

Las células de la granulopoyesis constituyen un 60-65% de los componentes

citológicos medulares. Los cambios morfológicos se resumen en la reducción de la
relación nucleocitoplasmática, desaparición de los nucleolos, maduración de la
cromatina nuclear, desaparición de la basofilia citoplasmática, aparición de la
granulación primaria o azurófila a partir del promielocito y aparición de la
granulación secundaria o específica (neutrófila, eosinófila, basófila) a partir del
mielocito. Por último tiene lugar la indentación y segmentación nuclear al llegar a
los estadios de metamielocito y segmentado respectivamente.

La granulación primaria o azurófila es característica de esta estirpe celular.

Por su elevado contenido en hidrolasas ácidas puede considerarse formada por
lisosomas primarios. Estas hidrolasas son segregadas en el retículo
endoplásmico, por lo que su demostración a nivel ultraestructural marcará los
estadios iniciales de la diferenciación granulocítica. Los gránulos primarios
contienen diversas enzimas, según se ha podido demostrar por técnicas
citoquímicas y bioquímicas. La mieloperoxidasa se localiza exclusivamente en la
granulación primaria, y es el mejor marcador enzimático de este tipo de
granulación. La lisozima, proteína catiónica rica en arginina cuya actividad en los

43
gránulos primarios corresponde a una tercera parte del total de dicha actividad
enzimática, se localiza también en los granulocitos neutrófilos. La fosfatasa ácida
se localiza igualmente en la granulación primaria, pero dependiendo de los
sustratos empleados para su demostración se puede hallar en otras estructuras.
En la granulación primaria pueden demostrarse otras hidrolasas como la beta-
galactosidasa, beta-glucuronidasa, N-acetil-beta-glucosaminidasa, arilsulfatasa,
esterasa y naftilamidasa. Los mucoplolisacáridos sulfatados contribuyen al
carácter azurófilo de la granulación primaria y determinan una fuerte
metacromasia al ser teñidos con azur A. La presencia de estos mucopolisacáridos
sulfatados contribuye a la PAS positividad de estos elementos. El color rojo
púrpura de los gránulos azurófilos mediante las tinciones panópticas deja de
observarse después del estadio mielocitario, ya que con el proceso madurativo
dichos gránulos pierden su metacromasia; se ha precisado de estudios
ultraestructurales para conocer que el gránulo primario persiste hasta el
polinuclear segmentado.

En estadios evolutivos posteriores, a partir del mielocito, aparece la granulación

secundaria o específica. Son gránulos de menor tamaño (0.3 um) y menos densos
que los gránulos primarios. A partir del mielocito en la granulopoyesis neutrofílica
coexisten los gránulos primarios y secundarios. Al sucederse las divisiones
celulares, las células hijas van poseyendo un número menor de gránulos
primarios, con lo que los secundarios adquieren un valor numérico superior,
preponderante sobre los primarios. Los gránulos secundarios son mieloperoxidasa
negativos y contienen lisozima en proporción superior a los primarios. El mejor
marcador de la granulación secundaria de los neutrófilos es la lactoferrina. La
ubicación de la fosfatasa alcalina en la granulación específica de los neutrófilos de
los humanos no se acepta actualmente. Se cree que dicha enzima se localiza en
alguna fracción tubular submembranosa, pero no en la granulación secundaria
propiamente dicha. Tal granulación contiene, asimismo, proteínas captadoras de
vitamina B12. La granulación primaria representa una tercera parte del total, y las
dos terceras partes restantes corresponderían a la granulación secundaria en el
polinuclear segmentado.Hay datos que sugieren la existencia de gránulos
terciarios que contienen gelatinasa con rasgos morfológicos similares al los
gránulos secundarios, pero algo menos densos. Se supone que se movilizan a la
superficie celular en respuesta a pequeños estímulos.

El mieloblasto es un elemento con ausencia de granulación al microscopio

óptico. Se trata de una célula de forma redondeada u oval y de contorno liso. El
núcleo, de gran tamaño en relación con el diámetro celular, es redondo y está
provisto de una cromatina finamente reticulada, con presencia de dos o tres
nucleolos bien visibles. El citoplasma, de color basófilo, es escaso y está
desprovisto ópticamente de granulación y vacuolas. El promielocito tiene un
tamaño ligeramente superior al de su precursor y es la célula mayor de la
granulopoyesis normal. Su forma es redondeada u oval. El núcleo, también de
aspecto redondeado, se sitúa en posición algo excéntrica. La cromatina, algo más
densa, presenta todavía algún nucleolo visible a nivel óptico. El citoplasma es
amplio y basófilo, y contiene un número variable de gránulos primarios o

44
zaurófilos, que se disponen alrededor del núcleo dejando una zona más clara,
agranular, que corresponde a la zona centrosómica. La granulación azurófila toma
una coloración rojo-violácea con las tinciones panópticas habituales. A medida que
progresa la maduración del promielocito, éste se transforma en mielocito, célula
redondeada de tamaño entre 12 y 18 um. El núcleo, también redondeado, posee
una cromatina condensada en cúmulos, de color violeta oscuro y sin nucleolo
visible. El citoplasma que ha perdido toda su basofilia, contiene un grn número de
gránulos. A partir de este estadio comienza la formación de la granulación
secundaria específica ( neutrófila, eosinófila, basófila), que junto a la primaria
persiste en todos los elementos de la serie. El metamielocito tiene un tamaño
entre 10 y 15 um, y posee las mismas características morfológicas del mielocito,
exceptuando la forma del núcleo, el cual adopta un aspecto reniforme al iniciar su
indentación, con la parte convexa situada en la periferia celular y la cóncava
dirigida hacia el centrosoma. El núcleo está dotado de una cromatina condensada
en numerosos cúmulos cromáticos. Esta célula ha perdido la capacidad mitótica y
al progresar en su maduración estrecha su núcleo hasta que éste se transforma
en una delgada banda, dando origen a la célula del mismo nombre. Las bandas
tienen un tamaño algo inferior al del metamielocito, con sus características
morfológicas idénticas a las de su precursor. La mayor parte de estas células se
localizan en la médula ósea, donde constituyen el compartimento de reserva
granulocítica medular.

Los granulocitos segmentados se originan a partir de las bandas por

segmentación nuclear, y son los elementos más maduros de la granulopoyesis.
Circulan por la sangre periférica donde ejercen sus funciones de fagocitosis y
bacteriolisis. Según el tipo de granulación específica se identifican los neutrófilos,
eosinófilos y basófilos. Los granulocitos segmentados neutrófilos son células
redondeadas con un núcleo segmentado en 2 a 5 lóbulos, unidos por unos finos
puentes cromatínicos. El citoplasma contiene numerosos gránulos neutrófilos que
se tiñen de color marrón con las coloraciones panópticas habituales, así como
cierto número de gránulos primarios o azurófilos dificilmente visibles al quedar
enmascarados por los neutrófilos. Los granulocitos segmentados eosinófilos
tienen un tamaño semejante a los neutrófilos, se caracterizan morfológicamente
por contener en su citoplasma gránulos acidófilos. Tienen una forma redondeada,
tamaño entre 0.5 y 1.5 um, ocupan todo el citoplasma de la célula y se tiñen de
color naranja o marrón anaranjado con las coloraciones panópticas. A diferencia
de los gránulos basófilos nunca se disponen por encima del núcleo. Los
granulocitos segmentados basófilos son células redondeadas cuyo tamaño
oscila entre 10 y 13 um. El núcleo, de cromatina densa, posee generalmente dos o
tres lóbulos unidos por puentes cromatínicos, en ocasiones difíciles de visualizar
dada la presencia de las numerosas granulaciones basófilas propias de esta
célula. Los gránulos basófilos se disponen encima del núcleo. la granulación
basófila, adquiere una coloración rojo-violácea oscura con las tinciones panópticas
y tiene una forma poligonal.

El origen clonal hemopoyético del mastocito o célula cebada queda

actualmente demostrado, a través de diversos estudios, que es a partir de un

45
progenitor pluripotente mieloide. Los precursores comprometidos abandonan la
médula ósea, determinando el microambiente de los tejidos el desarrollo de
propiedades diferenciales entre las células cebadas y los basófilos.

LINFOPOYESIS

 Linfopoyesis. Linfocitos B:
 Los linfocitos B derivan también de una célula germinal linfoide pluripotente
y adquieren su competencia inmunológica, en el hombre, en la médula ósea
y otros equivalentes de la bursa de Fabricio de las aves, como el hígado
fetal, y posiblemente, la placenta.
 Antes de llegar al estadio de célula pre-B, los precursores más inmaduros
de célula B, denominados linfocitos pre-pre-B, pueden ser identificadas
fenotípicamente mediante anticuerpos monoclonales. Estas células
expresan antígeno HLA-DR y son positivas a los antígenos CD 19, CD 24,
CD 10, así como a la enzima TdT. No poseen Ig, pero sí reordenamiento
genético respecto del patrón de la línea germinal. El linfocito pre-B presenta
todavía TdT y el antígeno Cd 10. Además expresa los antígenos HLA-DR,
CD 19, CD 24 y aparecen los CD20 y CD 22. En cuanto a la expresión de
las Inmunoglobulinas, este estadio es el primero en el que se pueden
identificar cadenas pesadas m en el interior del citoplasma en ausencia de
cadenas ligeras y de Ig de membrana.A medida que la maduración
progresa, se pierde el CD 10, se reordenan los genes de las cadenas
ligeras que se transcriben y se sintetiza y ensamblan con las m . La célula
pasa a expresar Ig M de superficie, denominándose linfocito B inmaduro.
Poco después, pasa a linfocito B maduro que sintetiza también Ig D y sigue
expresando los antígenos de membrana CD 19 y CD 24. También son
positivos para el CD 20, CD 22 y CD 21. El CD 21 reconoce un epitopo del
receptor del complemento CR 2, que a su vez constituye el receptor para el
virus de Epstein-Barr.

46
 La exploración funcional de los linfocitos B se realiza in vivo mediante la
administración de vacunas y dosificación de los anticuerpos generadas por
las mismas. Mediante determinadas técnicas es posible, así mismo,
dosificar in vitro el número exacto de linfocitos capaces de formar
anticuerpos.
 Los linfocitos maduros pasan de la médula ósea a la sangre periférica y se
dirigen a los órganos linfáticos periféricos para ubicarse en los folículos
linfoides. Aquí bajo un estímulo antigénico adecuado, se activan y proliferan
formando el centro germinal en el interior del folículo linfoide.Los linfocitos B
constituyen la minoría del pool linfocitario circulante (10%-20%),
afincándose en los órganos linfáticos periféricos en las zonas B-
dependientes.
 El linfocito sin memoria inmunológica de la sangre periférica procede
directamente de la stem-cell, y que bajo un estímulo antigénico adecuado
podría transformarse en las células centrofoliculares, haciéndose, hoy en
día, sinónimo para muchos autores el término de centroblasto pequeño y el
de linfoblasto. Más comprometida resulta la ubicación del prolinfocito. El
prolinfocito posee un fenotipo de membrana diferente al linfocito de la
leucemia linfática crónica B. La inmunoglobulina de superficie se halla en
alta concentración, lo que origina una intensa fluorescencia. Igualmente con
relativa frecuencia se detecta en su interior inmunoglobulina citoplasmática,
careciendo prácticamente de capacidad para formar rosetas M. Todo ello
sugiere que el prolinfocito representa un estadio madurativo más avanzado
que el linfocito B, aunque el término de prolinfocito hiciera pensar que se
trata de una célula precursora. Con todo, la mayoría de autores lo ubican
fuera del folículo linfoide, muy próximo en su evolución ontogénica al
tricoleucocito. La participación del prolinfocito en diversas entidades que
parten de zonas externas al folículo linfoide como la leucemia linfática
crónica y la tricoleucemia (tricoleucemia variante), parecen favorecer tal
hipótesis.
 El linfocito B activado incrementa la expresión de las inmunoglobulinas de
superficie y de algunos antíogenos de membrana, como el HLA-DR, CD 19
y CD 20, mientras que ptros disminuyen o desaparecen como el CD 24, CD
22 y CD 21. En este momento de activación y proliferación, aparecen en la
membrana nuevas moléculas que no se detectan en el estado de reposo,
como son el CD 23, el receptor para la transferrina y el receptor para la
interleucina 2 o CD 25, y en ocasiones el CD 10. En este estadio el linfocito
B pierde la Ig D, disminuye la intensidad de la expresión de la Ig M y
además, puede expresar Ig G o Ig A.
 Linfopoyesis. Linfocitos T:
 Los linfocitos T proceden de la célula primitiva linfoide, progenitor común a
todos ellos, ubicada en la médula ósea.
 El estadio incial en la formación del linfocito T se ha denominado
protimocito. Este presenta actividad para la transferasa terminal
desoxinucleotidasa (TdT). Posee los antígenos HLA-DR, CD 7, CD 2 y
expresa CD 3 citoplasmático. El protimocito, al ponerse en contacto con el

47
 epitelio tímico y bajo la influencia de hormonas (timosina y timpoyetina)
evoluciona hacia los diferentes estadios de diferenciación.
 El timo es un órgano de pequeño tamaño, que se localiza en la parte alta y
anterior del tórax. Es activo durante el periodo fetal y primeros años de la
vida para involucionar en el adulto. Está formado por unas áreas densas,
constituidas por linfocitos, que se hallan separadas entre sí por trabéculas
del tejido conectivo. En el seno del timo los linfocitos T (timocitos) maduran
y adquieren plena competencia inmunológica. En la zona más periférica o
corteza, que constituye un 80% de la glándula tímica, se localizan los
timocitos más inmaduros , que tras un proceso de maduración pasan a la
zona medular constituida por el 15% restante del timo y formada por
linfocitos T que poseen caracteres de madurez fenotípica y funcional. En
este estadio evolutivo el linfocito t adquiere los receptores que fijan los
eritrocitos de carnero con la formación in vitro de las rosetas espontaneas o
E rosetas, cuya demostración constituye la prueba definitiva para identificar
a los linfocitos T entre una población mononuclear heteromorfa.
 Hoy en día se conoce que en la médula del timo, especialmente alrededor
de los cuerpos de Hassal, se sitúan linfocitos B que se encuentran en
estado de activación con muchas mitosis. Estos linfocitos B del timo
presentan el antígeno Ki 67 y carecen de CD 21. Dichas células parecen
tener un papel funcional, actuando como presentadores de antígenos
somáticos a las células del timo. Por tanto no se puede seguir considerando
al timo como un órgano T exclusivo.
 Se reconocen tres poblaciones de timocitos:
 Los timocitos inmaduros o iniciales, localizados en la parte subcapsular de
la corteza tímica y que expresan CD 7 y CD 2, asimismo OKT 9 y CD 38 y
el enzima TdT. Esta población representa el 10% de todos los timocitos.
 Los timocitos de la parte más profunda de la corteza o timocitos corticales
tardíos, representan cerca del 80% de los timocitos, presentan el CD 7, CD
2 y CD 38 y adquieren el CD 1, CD 5, CD 4, CD 8 y aún tienen actividad
TdT.
 Los timocitos medulares constituyen el 10% restante; ya no poseen CD 1,
CD 38, ni son TdT (+). En este estadio adquiern un nuevo antígeno, el CD
3. Parte de estos timocitos, una mínima proporción, coexpresan los
antígenos CD 4 y CD 8, mientras que la mayoría expresan o uno o el otro
igual que lo que ocurre con los linfocitos de sangre periférica.
 Los linfocitos T de la sangre periférica constituyen entre un 65% y 75% de
los linfocitos circulantes. En la sangre periférica se distinguen cuatro tipos
de linfocitos T:
 Los linfocitos supresores.
 Los linfocitos colaboradores.
 Estos dos tipos son identificables por poseer un receptor para el fragmento
Fc de una determinada inmunoglobulina y por reaccionar con los
anticuerpos CD 4 y CD 8.

48
  Los linfocitos T citotóxicos.
 Los linfocitos T de la hipersensibilidad retardada.
 Los linfocitos T llegan con la sangre a los órganos linfoides periféricos,
asentando en localizaciones precisas: zona cortical profunda y área
interfolicular de los gánglios linfáticos, manto periarteriolar de la pulpa del
bazo, y áreas interfoliculares de las placas de Peyer intestinales y órganos
linfoides bucofaríngeos. Tras una estancia en dichos órganos regresan a la
circulación general, prolongándose este circuito durante meses o años. Los
linfocitos T, bajo la influencia de un primer estímulo antigénico, sufren una
etapa de transformación blástica, dando lugar al T-inmunoblasto, con
producción de unas glicoproteínas de bajo peso molecular, denominadas
linfocinas (sustancias mediadoras de la hipersensibilidad retardada). Estas
células blásticas dan origen posteriormente a los linfocitos T dotados de
memoria inmunológica, lo que significa que al enfrentarse con un segundo
estímulo antigénico responden inmediatamente con la producción de
linfocinas, siendo pues responsables de los fenómenos de inmunidad
celular.

TROMBOPOYESIS

La serie megacariocítica-plaquetar está formada por un conjunto de células, que

originadas en la médula ósea a partir de una célula progenitora común con el resto
de las células mieloides (CFU-GEMM), da origen a las plaquetas de sangre
perifériferica.

Se distinguen cuatro estadios evolutivos: megacarioblasto, elemento más

inmaduro, promegacariocito, megacariocito granular y el más maduro el
megacariocito liberador de plaquetas. El megacariocito, al desprender parcelas
citoplasmáticas delimitadas por las membranas de demarcación, como se ha
demostrado a nivel estructural, origina las plaquetas de la sangre periférica. En la
serie megacariocítica, a diferencia de lo que ocurre en el resto de las células
hematopoyéticas, las divisiones nucleares no van seguidas de las
correspondientes divisiones citoplasmáticas, lo que determina la formación de
células poliploides de gran tamaño con numerosos núcleos. En el estadio de
megacarioblasto se suceden en número variable las mitosis nucleares,
apareciendo las sucesivas ploidías nucleares. Ello se acompaña, gracias a una
elevada síntesis de DNA, de un aumento de la talla nuclear. Finalizada esta etapa
de síntesis de DNA y duplicación nuclear, se inicia en el citoplasma la
granulogénesis que dará origen a las futuras plaquetas sanguíneas.

El promegacarioblasto no tiene identificación morfológica. Es un elemento

mononucleado de aspecto a veces pseudolinfoide que precisa para su filiación
demostrar la presencia de peroxidasa plaquetar a nivel estructural o del empleo de
anticuerpos monoclonales específicos de esta línea (CD 41). El megacarioblasto

49
es el elemento de menor tamaño de esta serie con un núcleo es único, grande,
ovalado o bilobulado, con cromatina laxa y numerosos nucleolos. El citoplasma es
intensamente basófilo, agranular y puede presentar algunas prolongaciones a
modo de pseudópodos. El promegacariocito inicia ya la granulogénesis en
distintas áreas de su citoplasma. Es una célula fácilmente identificable por su gran
tamaño y por el aspecto característico de su citoplasma, que posee bordes mal
limitados y emite numerosas prolongaciones. El núcleo es multilobulado, con
cromatina densa y sin nucleolos. En el citoplasma persiste una tonalidad basófila,
cubierta zonalmente por numerosas granulaciones azurófilas. El megacariocito
posee como características más destacables su gran tamaño (80 o más um) y su
elevada ploidía. Se distinguen dos tipos de megacariocitos: el megacariocito
granular y el maduro. El granular tiene un núcleo multilobulado, de citoplasma de
tonalidad rosada y es de gran tamaño. Los maduros, liberadores de plaquetas,
poseen un extenso citoplasma que ha perdido todo resto de basofilia y está
cubierto totalmente por granulación azurófila. El núcleo, también multilobulado o
segmentado, posee una cromatina condensada sin nucleolos. Los gránulos
azurófilos se disponen especialmente en la periferia en cúmulos que irán
delimitando las futuras plaquetas. Las plaquetas pasan a la sangre periférica
donde ejercen sus funciones en los mecanismos de coagulación. Los trombocitos
son elementos formes de la sangre de menor tamaño (de 2 a 3 um) y están
desprovistos de núcleo, por lo que no se trata de verdaderas células, sino de
fragmentos celulares. Su forma fisiológica es discoide, aspecto que se modifica
con facilidad por las maniobras de extensión o centrifugación, adquiriendo un
aspecto redondeado y emitiendo finas prolongaciones.
La identifiación de los elementos megacariocíticos maduros o semimaduros es
muy sencilla por simples criterios morfológicos; sin embargo; los precursores
megacariocíticos (promegacarioblastos) precisan de la reacción de la peroxidasa
plaquetar a nivel ultraestructural y de la detección de glicoproteinas de superficie
mediante los anticuerpos monoclonales CD 41, CD 42 o de anticuerpos dirigidos
contra el factor VIII o plaquetar 4. En la mayoría de los casos el primer marcador
que aparece es la peroxidasa plaquetar que se anticipa a la presentación de las
membranas de demarcación o los gránulos en ojo de buey, orgánulos sólo
detectables a nivel ultraestructural. A ésta, le sigue la glicoproteina IIIa (CD 61), la
IIb/IIIa (CD 41) y la Ib (CD 42 ). Todos estos marcadores persisten a lo largo del
eje madurativo megacariocítico.

50
51
 SANGRE

La sangre (humor circulatorio) es un tejido fluido que circula por capilares,

venas y arterias de todos los vertebrados. Su color rojo característico es debido a
la presencia del pigmento hemoglobínico contenido en los eritrocitos. Tiene un pH
de 7.4, esto quiere decir que es alcalino.

Es un tipo de tejido conjuntivo especializado, con una matriz coloidal líquida y

una constitución compleja. Tiene una fase sólida (elementos formes, que incluye a
los glóbulos blancos, los glóbulos rojos y las plaquetas) y una fase líquida,
representada por el plasma sanguíneo.

Su función principal es la logística de distribución e integración sistémica, cuya

contención en los vasos sanguíneos (espacio vascular) admite su distribución
(circulación sanguínea) hacia casi todo el cuerpo.

Composición de la sangre

Como todo tejido, la sangre se compone de células y componentes

extracelulares (su matriz extracelular). Estas dos fracciones tisulares vienen
representadas por:

 Los elementos formes —también llamados elementos figurados—: son

elementos semisólidos (es decir, mitad líquidos y mitad sólidos) y particulados
(corpúsculos) representados por células y componentes derivados de células.

 El plasma sanguíneo: un fluido traslúcido y amarillento que representa la

matriz extracelular líquida en la que están suspendidos los elementos formes.

52
 Los elementos formes constituyen alrededor del 45% de la sangre. Tal
magnitud porcentual se conoce con el nombre de hematocrito (fracción "celular"),
adscribidle casi en totalidad a la masa eritrocitaria. El otro 55% está representado
por el plasma sanguíneo (fracción celular).

Los elementos formes de la sangre son variados en tamaño, estructura y

función, y se agrupan en:

 Las células sanguíneas, que son los glóbulos blancos o leucocitos, células
que "están de paso" por la sangre para cumplir su función en otros tejidos;

 Los derivados celulares, que no son células estrictamente sino fragmentos

celulares; están representados por los eritrocitos y las plaquetas; son los únicos
componentes sanguíneos que cumplen sus funciones estrictamente dentro del
espacio vascular.

53
 GLÓBULOS ROJOS O HEMATÍES

Los glóbulos rojos (eritrocitos) están presentes en la sangre y transportan el

oxígeno hacia el resto de las células del cuerpo.
Los glóbulos rojos, hematíes o eritrocitos constituyen aproximadamente el 96%
de los elementos figurados.
Su valor normal (conteo) en la mujer promedio es de alrededor de 4.800.000, y
en el varón, de aproximadamente 5.400.000 hematíes por cm³ (o mililitro).

Estos corpúsculos carecen de núcleo y orgánulos (solo en mamíferos), por lo

cual no pueden ser considerados estrictamente células. Contienen algunas vías
enzimáticas y su citoplasma está ocupado casi en su totalidad por la hemoglobina,
una proteína encargada de transportar oxígeno. El dióxido de carbono, contrario a
lo que piensa la mayoría de la gente, es transportado en la sangre (libre disuelto
8%, como compuestos carbodinámicos 27%, y como bicarbonato, este último
regula el pH en la sangre). En la membrana plasmática de los eritrocitos están las
glucoproteínas (CDs) que definen a los distintos grupos sanguíneos y otros
identificadores celulares.

Los eritrocitos tienen forma de disco, bicóncavo, deprimido en el centro, con un

diámetro aproximado de 7 micras y un espesor de 2 a 3 micras, esta forma
aumenta la superficie efectiva de la membrana. Los glóbulos rojos maduros
carecen de núcleo y desprovisto también de mitocondrias y ribosomas, porque lo
expulsan en la médula ósea antes de entrar en el torrente sanguíneo (esto no
ocurre en aves, anfibios y ciertos animales). Los eritrocitos en humanos adultos se
forman en la médula ósea. Posee una membrana citoplasmática y un citoplasma
celular.

Después de su coloración con las técnicas de rutina, aparece al microscopio de

color anaranjado (ácidofilo) por su alto contenido de hemoglobina.

54
  Membrana citoplasmática

La membrana plasmática está constituida por una doble capa de lípidos que
tiene asociadas proteínas. A este modelo de membrana se le ha denominado
mosaico fluido y fue propuesto por Singer y Nicholson en 1972.

Según este modelo, la bicapa de lípidos está compuesta principalmente por

fosfolípidos (fosfatidil colina, fosfatidil etanolamina, esfingomielina y fosfatidil
serina), que otorgan fluidez a la membrana. El carácter anfipático de los
fosfolípidos genera, como consecuencia, que el centro de la bicapa sea
completamente hidrófobo, mientras que las superficies son hidrófilas.

Otro lípido constituyente de la membrana plasmática es el colesterol, que se

fija a los fosfolípidos inmovilizándolos, lo que disminuye su fluidez y permite a la
membrana ser más estable.

Las proteínas que forman la membrana, según su disposición en ella, pueden

clasificarse en dos tipos.

 Proteínas Integrales: Están en total o parcialmente embebidas en la bicapa

lipídica. Si la atraviesan completamente, presentando regiones expuestas hacia el
medio intra y extracelular, se denominan proteínas transmembrana.

 Proteínas Periféricas: Pueden ser unidas tanto a la superficie citoplasmática

como a la extracelular de la bicapa lipídica.

La proteína estructural predominante es la espectrina que se encuentra

confinada en una zona estrecha bajo el lado citoplasmático de las cadenas polares
lipídicas se une de forma indirecta a la membrana por medio de otra proteína
esquelética, que es la anquirina o sindeína, esta se une a su vez otra proteína,
que es las glucoforina banda 3. A las proteínas se debe, por ejemplo; la carga
negativa exterior del eritrocito, por lo que tiende a separarse unos de otros y a no
formar pilas ni agrupamientos; al mantenimiento de la forma bicóncava, la
elasticidad y capacidad de deformación del eritrocito.
La membrana celular es permeable al agua, cloruros y bicarbonato.

55
  Funciones de la membrana plasmática

La membrana plasmática actúa como una barrera semipermeable que permite

el paso selectivo de moléculas, tanto hacia el interior como hacia el exterior de la
célula, manteniendo el medio intracelular estable y diferenciado de su entorno.
Gran parte de la funcionalidad de la membrana plasmática se debe a las
proteínas que la conforman. Algunas actúan como receptores de señales
extracelulares y otras como transportadores a través de la membrana. También
existen proteínas de unión, que sirven como puntos de fusión entre dos células o
entre el citoesqueleto y la matriz extracelular.
Además, la membrana participa en procesos de reconocimiento celular y
permite la interacción entre la célula y sus vecinas.

 Citoplasma

Contiene agua, iones (potasio principalmente), enzimas, glucosa y la

hemoglobina como componente fundamental y mayoritario, ya que presenta
aproximadamente 1/3 del peso del hematíe.

 Metabolismo del eritrocito

El metabolismo de los eritrocitos es limitado, debido a la ausencia de núcleo,

mitocondria y otros orgánulos subcelulares. Aunque la unión, el transporte y la
liberación de oxígeno y dióxido de carbono es un proceso pasivo que no requiere
energía, existe una variedad de procesos metabólicos dependientes de energía
que son esenciales para la viabilidad de la célula.

Las vías metabólicas más importantes para el eritrocito maduro necesitan

glucosa como sustrato. Estas vías se refieren a:

 la vía Embden–Meyerhof, mejor conocida como glucólisis;

 el ciclo de la hexosa-monofosfato
 vía de la hemoglobina reductasa
 ciclo de Rapoport–Luebering

Estas vías contribuyen con energía, al mantener:

 El potasio intracelular alto, el sodio intracelular bajo y un calcio intracelular

muy bajo (bomba de cationes);
 Hemoglobina en forma oxidada;
 Elevados niveles de glutation reducido;
 Integridad y deformabilidad de la membrana.

56
  Via Embden–Meyerhof o glucólisis

Proporciona ATP para la regulación de la concentración intracelular de cationes

(Na, K, Ca, Mg) a través de bombas de cationes. El eritrocito obtiene energía en
forma de ATP del desdoblamiento de la glucosa por esta vía. Aproximadamente
90 a 95 por ciento del consumo celular de oxígeno utiliza esta vía. Los eritrocitos
normales no tienen depósitos de glucógeno. Dependen por completo de la glucosa
ambiental para la glucólisis. La glucosa penetra a la célula mediante difusión
facilitada, un proceso que no consume energía. Es metabolizada a lactato, donde
produce una ganancia neta de dos moles de ATP por un mol de glucosa.

 Ciclo de las pentosas

Proporciona nicotinamida-adenina dinucleótido fosfato y glutatión reducido para

reducir oxidantes celulares. Aproximadamente el 5 por ciento de la glucosa celular
ingresa a la vía oxidativa de las pentosas, un sistema auxiliar para producir
coenzimas reducidas. El glutatión reducido protege a la célula contra muchas
lesiones producidas por agentes oxidantes permanentes. Los oxidantes dentro de
la célula oxidan los grupos sulfhidrilo (SH) de la hemoglobina, a menos que los
oxidantes sean reducidos por el glutatión reducido. Es por esto que es crucial en el
eritrocito la función de esta vía.

 Vía de la hemoglobina reductasa

Protege a la hemoglobina de la oxidación vía la NADH y metahemoglobina

reductasa. Se trata de una vía alterna a la vía Embden–Meyerhof, esencial para
mantener al hierro hem en el estado reducido Fe ++. La hemoglobina con el hierro
en estado férrico, Fe+++, es conocida como metahemoglobina. Esta forma de
hemoglobina no logra combinarse con el oxígeno. La metahemoglobina reductasa,
en unión con el NADH producido por la vía Embden–Meyerhof, protege al hierro
hem de la oxidación. Sin este sistema, el 2 por ciento de la metahemoglobina
formada todos los días se elevaría, con el tiempo, a un 20-40 por ciento, con lo
que se limitaría gravemente la capacidad transportadora de oxígeno en la sangre.
Los medicamentos oxidantes pueden interferir con la metahemoglobina reductasa
y producir valores aún más elevados de metahemoglobina. Esto provoca cianosis.

 Ciclo de Rapoport–Luebering

Este ciclo es parte de la vía Embden–Meyerhof, y tiene por finalidad evitar la

formación de 3–fosfoglicerato y ATP. El DPG está presente en el eritrocito en una
concentración de un mol BPG/mol de hemoglobina, y se une con fuerza a la
desoxihemoglobina, con lo que la hemoglobina se mantiene en estado
desoxigenado y se facilita la liberación de oxígeno. El incremento en la
concentración de difosfoglicerato facilita la liberación de oxígeno a los tejidos
mediante la disminución en la afinidad de la hemoglobina por el oxígeno. De esta
manera, el eritrocito cuenta con un mecanismo interno para la regulación del
aporte de oxígeno a los tejidos.

57
  Catabolismo del eritrocito

La vida media del hematíe en sangre periférica es unos 120 días. El

envejecimiento del hematíe se caracteriza principalmente por la disminución y
destrucción de sus componentes de la membrana y por la reducción de su ritmo
metabólico. La proporción de hematíes que mueren diariamente es del 1% de la
masa globular total, que se remueva cada 3 o 4 meses.
El eritrocito viejo se fragmenta y es fagocitado por las células del retículo
endotelial del bazo e hígado principalmente y la hemoglobina liberada es
degradada en sus componentes; es extravascular.

 Funciones de los eritrocitos

La función principal del eritrocito maduro es el transporte de oxigeno por medio

de su contenido en hemoglobina, actuando también en el transporte de dióxido de
carbono de los tejidos a los pulmones para su eliminación.

 Alteraciones morfológicas de los hematíes

En general podemos decir que, en condiciones normales, todos los glóbulos

tienen el mismo tamaño y forma.
Vistos de perfil presentan una imagen bicóncava y de frente de una forma
redondeada, pero en algunas ocasiones patológicas podemos encontrar
alteraciones morfológicas.

Para interpretar las alteraciones morfológicas eritrocitarias, estas pueden

clasificarse en cuatro grupos.

 Alteraciones del tamaño

 Alteraciones de la forma
 Alteraciones del color
 Presencia de inclusiones

Los trastornos que afectan a los eritrocitos pueden dividirse en dos tipos
principales: la eritrocitosis o aumento cuantitativo de los eritrocitos circulantes y la
anemia o defecto cuantitativo de los eritrocitos o cualitativo.

 Alteraciones del tamaño

Actualmente las alteraciones del tamaño eritrocitario se basan en los datos

cuantitativos aportados por el VCM.

 Anisocitosis: alteración del tamaño. Donde podemos encontrar tanto

microcitos como macrocitos.

58
 Aparecen clásicamente en la anemia megaloblastica debida a una deficiencia
de vitamina B12 o ácido fólico, en algunas ocasiones pueden observarse en otras
en otras formas de anemia con eritropoyesis ineficaz (congénitas o adquiridas.

 Esquistocitosis: hematíes pequeños y fragmentados.

 Megalocitos: son ovalados, de gran tamaño e

hipercromos.
 Microesferocitos: pequeños, muy redondos, sin halo claro central e
hipercromaticos.

 Alteraciones de la forma

La alteración de la forma eritrocitaria puede obedecer a las siguientes causas:

a) Defectos hereditarios o adquiridos de la eritropoyesis.
b) Defectos hereditarios o adquiridos del eritrocito.

 Poiquilocitos: eritrocitos con diversas formas.

 Esferocitos: eritrocitos en forma esférica, diámetro inferior al normal.
(Esferocitosis hereditaria o enfermedad de Minkowski-Chauffard).

 Codocitos o dianocitos: eritrocitos que poseen un exceso de superficie, por

lo que en su región central aparece un área con mayor
contenido hemoglobínico.
(Hemoglobinopatías, talasemias, anemias ferropenicas).

 Drepanocitos o eritrocitos falciformes: debido a un proceso de polimeración

hemoglobínica; los eritrocitos se alargan y adquieren forma de hoz o de media
luna.
(Hemoglobinopatía S).

 Eliptocitos u ovalocitos: son alargados u ovales y presentan un

diámetro longitudinal superior al transversal, por lo que adquieren la forma
de puro.

 Equinocitos: son eritrocitos cuya superficie se halla repleta de

prominencias cortas, de base de implantaciones anchas y distribuidas
regularmente (espiculados o craneados).
(Insuficiencia renal, enzimopatías de la glucolisis, sangre
conservada).

 Acantocitos: son esferoidales que presentan prominencias superficiales

alargadas y que casi siempre están distribuidos de
manera irregular.
(Enfermedad congénita -acantositosis-).
 Dacriocitos: tiene la forma de lágrima o de

59
raqueta.
(Trastornos de la eritropoyesis, fibrosis medular).

 Esquizocitos o esquistocitos: eritrocitos rotos o fragmentados.

Predominan triangulares o un aspecto de casco de guerrero.
(Anemia hemolítica de origen mecánica).

 Estomatocitos: en su región central clara poseen una

hendidura en forma de boca.
(Estomatocitosis congénita, alcoholismo).

 Exentrocitos: distribución irregular de la hemoglobina.

Contornos parcialmente arrugados, tamaño inferior al normal.
(Anemias hemolíticas).

 Leptocitos: células barquillo o cigarro. Son muy delgadas y planas con

hemoglobina concentrada en ambos extremos con diámetro normal o mayor.
(Anemias hipocromías graves –talasemias-, por deficiencia de hierro,
hemoglobinopatías y enfermedades del hígado).

 Alteraciones del color

Su aparición refleja alteraciones en el contenido

hemoglobínico.

 Hipocromía: eritrocitos que se tiñen débilmente.

(Ferropenia, talasemias).

 Hipercromía: coloración aumentada.

 Policromasia: su tonalidad gris azulada. Signo de

inmadurez celular, restos de ARN.
(Anemia regenerativa).

 Doble población o anisocromasia: coexistencia de

eritrocitos hipocromos y normocromos.
(Anemia ferropenica tratada).

 Presencia de inclusiones

En ocasiones, los eritrocitos pueden presentar inclusiones de naturaleza diversa

de acuerdo con el origen de las mismas.

60
  Punteado basofilo: tiene el mismo significado que la Policromasia y
corresponde a gránulos ribosómicos de color azul intenso: elevado contenido de
ARN.
(Saturnismo o Intoxicación).
 Granulación azurofila: pequeñas
granulaciones eritrocitarias de color violeta
purpura que corresponden a los restos del
núcleo eritroblastico.

 Cuerpos de Howell-Jolly: son remanentes nucleares compuestos de por

cromatina nuclear picnótica, aparecen como inclusiones esféricas y excéntricas de
tamaño entre 1 y 2 micras.
(Anemia regenerativa, anemias hemolíticas graves).

 Anillos de Cabott: constituyen unas finas fibras basofilas que se

tiñen con el azul de metileno y que algunas veces se disponen
concéntricamente en la membrana eritrocitaria y otras aparecen en forma
de ―ocho‖ atravesando el diámetro celular.

 Cuerpos de Pappenheimer: inclusiones intraeritrocitarias

que contienen gránulos de hierro en asociación con mitocondrias y
restos ribosomales.
(Anemias sideroblasticas, talasemias, alcoholismo grave).

61
 HEMOGLOBINA (Hb)

La hemoglobina —contenida exclusivamente en los glóbulos rojos— es un

pigmento, una proteína conjugada que contiene el grupo ―hemo‖. También
transporta el dióxido de carbono, la mayor parte del cual se encuentra disuelto en
el plasma sanguíneo.

Los niveles normales de hemoglobina están entre los

 12 y 19 g/dl en hombres
 12 y 14 g/dl en mujeres
 13.5 g/dl en recién nacidos

Esta cantidad es proporcional a la cantidad y calidad de hematíes (masa

eritrocitaria). Constituye el 90% de los eritrocitos y, como pigmento, otorga su color
característico, rojo, aunque esto sólo ocurre cuando el glóbulo rojo está cargado
de oxígeno.

Tras una vida media de 120 días, los eritrocitos son destruidos y extraídos de la
sangre por el bazo, el hígado y la médula ósea, donde la hemoglobina se degrada
en bilirrubina y el hierro es reciclado para formar nueva hemoglobina.

62
  Está constituida por una porción proteica y un grupo prostético llamado
hemo.
 Cada porción proteica está compuesta por 4 subunidades, y cada una
contiene un grupo hemo (4 en total).
 La hemoglobina se puede encontrar de dos formas de acuerdo a la
presencia o no de O2 en la molécula: como oxihemoglobina (Relajada) o
como desoxihemoglobina (Tensa). A esta última le cuesta más captar O2
ya que el hemo se dispone formando puentes salinos que dificultan la
entrada del mismo.
 Glicosilación: Normalmente parte de la hemoglobina se glicosila con un
residuo de glucosa, lo que se sirve como útil herramienta diagnóstica del
promedio semanal de glucemia (aumentado en diabetes).

HEMO: hay cuatro grupos hemo por hemoglobina. Cado uno capta una
molécula de O2.

 Formado por una protoporfirina (molécula compleja) unida a un átomo de

Hierro central. Se encuentra en estado ferroso (reducido, Fe++). Si se encuentra
en estado férrico (oxidada, Fe+++), en vez de hemoglobina se llama
metahemoglobina. La principal fuente de hierro para la formación de hemo
proviene de la destrucción de eritrocitos senescentes (viejos).

63
  El Fe presenta 6 valencias (4 ocupadas por nitrógenos de la protoporfirina,
1 por nitrógeno de un residuo histidina de la globina, y la sexta libre ó combinada
con O2).
 El hemo se encuentra en otras moléculas además de la hemoglobina como
son la peroxidasa y el citocromo.

 Hay cuatro grupos hemo por cada molécula de hemoglobina. Por lo tanto
una molécula de hemoglobina transporta cuatro moléculas de oxígeno (una cada
una).

 El catabolismo del grupo hemo da como resultado la bilirrubina, que es

eliminada por el hígado junto con la bilis.

GLOBINA: constituida por 4 cadenas proteicas: a2 b2 (dos a y dos b). Esta

configuración está dada en el 97% de la hemoglobina normal adulta y se la
denomina hemoglobina A. Un 2% corresponde a la denominada hemoglobina A2
(a2 d2, es decir alfa dos, delta dos) y un 1% corresponde a Hb fetal: a2 g2 (alfa
dos, gamma dos).

Es una proteína de estructura cuaternaria. En su estado tenso mantiene

uniones salinas entre las cadenas que se rompen cuando ingresa el O2
disminuyendo los espacios intracatenarios. Los H+ liberados son amortiguados
por la histidina de la globina.

 Reacciones de la hemoglobina

 Oxihemoglobina: representa la hemoglobina que se encuentra unida

al oxigeno normalmente (Hb +O2)
 Carbominohemoglobina: se refiere a la hemoglobina unida al CO 2
después del intercambio gaseoso entre los GR y los tejidos. (Hb +
CO2).
 Carboxihemoglobina: hemoglobina resultante de la unión con el CO.
Es letal en grandes cantidades.
 Desoxihemoglobina: desoxigenada (Hb reducida).
 Metahemoglobina: Hb con F3 (oxidado), así no se une al oxigeno.
 Hemoglobina glucolisada (Hb A 1e) glucosa unida a valina terminal
de cadena beta. Aumenta en diabetes más controlada.

 FUNCIÓN
 Transporte de O2. Cada gramo de hemoglobina transporta 1,34 ml de
oxígeno.

Cada molécula de oxígeno que se une a la hemoglobina aumenta la afinidad de

ésta por otro O2. A esto se le denomina interacción hemo-hemo.

64
 Curva de disociación: Esta se refiere a los cambios en la saturación de la
hemoglobina de acuerdo a los cambios en la presión parcial de O2. Se describe
una curva sigmoidea con una porción vertical (hasta PO2:70 mmHg) y otra
horizontal (de 70 a 100 mmHg). La Hb nunca se satura al 100%, (o saturaría a una
presión no fisiológica de 500 mmHg).

Obsérvese en el gráfico de la curva de disociación como al principio, cada vez

se necesita menos presión para aumentar la saturación de O2 (porción vertical de
la curva). Esto demuestra lo explicado anteriormente que la hemoglobina cada vez
tiene más afinidad por el O2. Esto es así hasta un punto, donde comienza la
porción horizontal, en que cada vez se necesita más presión de oxígeno para
saturar más a la hemoglobina.

P50: es la presión parcial de 02 necesaria para saturar la hemoglobina al 50%.

Este valor ronda normalmente los 25 y 28 mmHg.

1. Desviación a la derecha: Esto se refiere a que a la misma presión de oxígeno

hay menos % de saturación de la Hb que en condiciones normales. Equivale a
decir 'aumento de la P50'.

Circunstancias fisiológicas: ejercicio físico, altura.

2. Desviación a la izquierda: lo contrario. Circunstancias fisiológicas: feto debido

a que la Hb fetal posee más afinidad por el O2.

Factores que producen desviaciones de la curva:

ß à
¯P-CO2 P-CO2 Valor Normal: 40 mmHg
¯TEMPERATU -
RA TEMPERATURA
¯CO3H - CO3H - Valor Normal: 23-26meq/litro

65
 ¯P50 P50 Presión parcial de O2 para saturar la Hb
al 50 %(Val.Norm: 25-28 mmHg).
¯2,3 DPG 2,3 DPG Lo produce el mismo eritrocito
(metabolismo)
pH ¯pH (efecto El efecto Bohr se produce en los tejidos y
(efecto Haldane) Bohr) el efecto Haldane en el pulmon.
CO ¯CO

 Transporte de CO2. El CO2 puede viajar a los pulmones de 3 diferentes

maneras:

1 - Disuelto en plasma: la menor proporción de este gas viaja disuelto en

plasma, sin embargo esta es la forma que ejerce presión. De todas formas, como
la fracción disuelta es constante Þ a mayor presión mayor contenido de CO2.

2 - Formando los llamados Compuestos carbamínicos (25%): surgen de la

unión de CO2 con los grupos aminos de las proteínas.

3 - Como bicarbonato (65%): En el eritrocito el CO2 reacciona con el agua

formando HCO3- y H+, por medio de la anhidrasa carbónica. Los H+ generados se
unen a la desoxihemoglobina. El HCO3- generado difunde hacia el plasma en
contratransporte con Cl- . A ésto se lo llama Shift de Cloro. En el pulmón el
proceso es inverso: el HCO3- reingresa al eritrocito. Como vimos, el CO2 que es
un gas forma bicarbonato que es una partícula osmóticamente activa (que atrae
agua), esto produce la entrada de agua al eritrocito en el extremo venoso lo que
produce su hinchazón característica a este nivel.

Buffer de pH intracelular: Es otra de las funciones de la hemoglobina, y está

dada por la captación de H+ antes mencionada. La hemoglobina es el principal
buffer de la sangre aunque el más importante buffer del organismo es el
bicarbonato ya que el organismo puede regular la concentración de este último, a
nivel pulmonar y renal.

Hierro

· CONTENIDO TOTAL: 3 a 5 gr. (Hombre: 50 mg./Kg. y Mujer: 35 mg/Kg). Se

halla distribuido en un compartimiento funcional y uno de depósito.

· COMPARTIMIENTO FUNCIONAL (en estos compartimentos se halla el 80%

del total):

1. Hb. En la Hb se halla 80% del compartimiento funcional, es decir un 64% del

total.

2. Mioglobina

66
 3. Citocromos

4. Transferrina: La transferrina es la proteína transportadora de hierro en

sangre, la transporta en estado férrico. La transferrina es una de las proteínas
séricas que ustedes recordarán que vimos en la primera página ("proteínas
séricas"), de hecho, forma parte de las ß1-globulinas de la banda electroforética.

Normalmente la transferrina se halla unida al hierro en un 30% de su capacidad

total. Es decir que a la transferrina le sobran sitios en donde está libre de hierro
(70%). En el laboratorio se puede medir la cantidad total de transferrina que se
puede unir al hierro y la cantidad de hierro unida a la transferrina y por una regla
de tres simple se puede saber el porcentaje de saturación de la transferrina
(normal: 30%, aproximadamente). Estos datos son muy útiles a la hora de conocer
la causa de una anemia. Ejemplo: en una anemia ferropénica (por falta de hierro)
la saturación puede ser del 10%.

VALORES NORMALES

· CTFH: Significa: "Capacidad Total para Fijar Hierro por la transferrina (que no
significa que toda la transferrina se encuentre unida al hierro). Equivale
a:.............................. 300m g%.
· Ferremia: hierro unido a la transferrina:........................................................
100m g%.
· CLFH: Capacidad Latente para Fijar Hierro:.................................................
200m g%.
En conclusión: ferremia + CLFH = CTFH

COMPARTIMIENTO DE DEPÓSITO: se deposita en Sistema Fagocítico

Mononuclear de:

1. Hígado.

2. Bazo.

3. Médula ósea.

Se deposita en forma de:

1. FERRITINA: Es una proteina que se encuentra en los órganos mencionados.

Está constituido por una porción proteica (apoferritina) y cantidades variables de
Fe+++ (férrico). Es de rápida movilización, acorde a los requerimientos del
organismo. Una parte de esta proteína circula en la sangre (ferritina sérica). La
función que cumple en la sangre no se conoce, pero su medición en un laboratorio
da información indirecta muy útil de la cantidad de hierro de depósito del
organismo. Su valor normal es de: 100 ng/ml de suero. Cada nanogramo de

67
ferritina sérica corresponde a un depósito de 10 mg. Total 100x10=1000 mg = 1
gramo de depósito.

2. HEMOSIDERINA: polímero de Ferritina. Es la forma más estable y menos

disponible. (Si se encuentra aumentado se denomina hemosiderosis).

ABSORCIÓN INTESTINAL

La regulación de la cantidad de hierro del organismo se da en la absorción. La

excreción no se puede regular (se produce por descamación de epitelios y
menstruación). La absorción se realiza a nivel del doudeno. La dieta aporta hierro
en forma inorgánica (no hemo) y hierro hemo a partir de las células animales. El
hierro hemo se absorbe mucho más que el inorgánico. Por eso la falta de carne en
la dieta de muchas personas en el mundo limita la disponibilidad de hierro y puede
producir anemia.

Los factores que aumentan la absorción de hierro son: la carne roja, citrato y
vitamina C. Los fosfatos y la falta de acidez gástrica disminuyen la captación de
hierro.

La absorción se produce por medio de un receptor diferente de acuerdo a si se

trata de hierro hemo o hierro no hemo. Si se absorbe hierro hemo debe actual la
hemooxigenasa para separar el hierro del hemo.

El hierro absorbido se encuentra en forma reducida (Fe++) y debe ser

reoxidado por medio de una ceruloplasmina para poder unirse a la transferrina.
Finalmente la transferrina (que como habíamos dicho es la proteína que se
encarga de transportar al hierro por la sangre) lo lleva hacia los distintos lugares
del organismo, principalmente médula.

 Evolución de la hemoglobina en el desarrollo humano

La hemoglobina varia desde el desarrollo embrionario hasta el nacimiento y la

edad adulta; estas diferencias son debidas a los distintos tipos de cadenas de
globina.

 En el embrión: la hemoglobina del embrión se denomina Hb Gowers. Esta

hemoglobina se asocia a diferentes cadenas de globina, dependiendo de la edad
del embrión en:
  - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - cadenas embrionarias
  - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - cadena fetal
  - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - cadena del adulto

 En el feto: la hemoglobina fundamental es la fetal HbF  cuya afinidad

por el oxigeno es aún mayor que la HbA.

68
  En el nacimiento: en las semanas que preceden y siguen al nacimiento se
reprime la síntesis de HbF a favor de la HbA (está aparece al final del embarazo);
y de la HbA (. Aproximadamente a los seis meses de vida la composición de
la hemoglobina es semejante a la del adulto.
 En el adulto sano: se pueden diferenciar 3 tipos de hemoglobina.
 HbA 
 HbA2 
 HbF indicios

Cualquier variación, tanto del porcentaje como de la composición en las

cadenas de la globina, ocasiona las llamadas hemoglobinas anormales, que
producen patologías (hemoglobinopatías) que pueden ser muy graves en algunos
casos.

69
 LEUCOCITOS

Los leucocitos (también llamados glóbulos blancos) son un conjunto

heterogéneo de células sanguíneas que son los efectores celulares de la
respuesta inmunitaria, así intervienen en la defensa del organismo contra
sustancias extrañas o agentes infecciosos (antígenos). Se originan en la médula
ósea y en el tejido linfático.

CARACTERÍSTICAS

Los leucocitos son células móviles que se encuentran en la sangre

transitoriamente, así, forman la fracción celular de los elementos figurados de la
sangre. Son los representantes hemáticos de la serie blanca. A diferencia de los
eritrocitos (glóbulos rojos), no contienen pigmentos, por lo que se les califica de
glóbulos blancos.

Son células con núcleo, mitocondrias y otros orgánulos celulares. Son capaces
de moverse libremente mediante seudópodos. Su tamaño oscila entre los 8 y 20
μm (micrómetro). Su tiempo de vida varía desde algunas horas, meses y hasta
años. Estas células pueden salir de los vasos sanguíneos a través de un
mecanismo llamado diapédesis (prolongan su contenido citoplasmático), esto les
permite desplazarse fuera del vaso sanguíneo y poder tener contacto con los
tejidos al interior del cuerpo.

CLASIFICACIÓN

Según la forma del núcleo se clasifican en:

 Leucocitos con núcleo sin lóbulos o mononucleares:

 Linfocitos
 Monocitos

 Leucocitos con núcleo lobulado o polimorfonucleares:

 Neutrófilos
 Basófilos
 Eosinófilos

70
 La observación a través del microscopio ha permitido clasificarlos según sus
características tintoriales en:

 Granulocitos: presenta gránulos en su citoplasma, con núcleo redondeado

y lobulado, formados en las células madres de la médula ósea: eosinófilos,
basófilos y neutrófilos.

 Agranulocitos: no presenta gránulos en su citoplasma: linfocitos,

monocitos y macrófagos.

A pesar de estas clasificaciones y diferencias entre los leucocitos, todos se

relacionan con los mecanismos defensivos del organismo. Los granulocitos y los
monocitos destruyen a los microorganismos fagocitándolos mientras que los
linfocitos producen anticuerpos contra ellos.

VALORES DE REFERENCIA

El número total de leucocitos oscila en condiciones normales según la edad

variando desde el nacimiento hasta los 16 años, a partir de los cuales las cifras se
estabilizan dentro de unos márgenes de normalidad.

a. Valores de referencia de los distintos tipos de leucocitos en sangre

periférica.
Celula RN 1 mes 4 años 6años Adulto
Neutrofilo 37- 25- 25- 45-5% 50-65%
57% 35% 45%
Cayados 0-4% 0-4% 0-4% 0-4% 0-4%
Eosinofilos 1-5% 1-5% 1-5% 1-5% 1-5%
Basofilos 0-2% 0-2% 0-2% 0-2% 0-2%
Monocitos 4-10% 4-10% 4-10% 4-10% 4-10%
Linfocitos 25- 45- 40- 40-45% 25-40%
35% 65% 60%

Así mismo el porcentaje normal de los distintos tipos de leucocitos varía según
la edad:

b. Valores de referencia de leucocitos en sangre periférica.

Edad Leucocitos/mm3
Recién nacido 9 000 - 30 000

71
 8 dias 5 000 - 21 000
1 mes 5 000 - 19 500
1 año 6 000 - 17 500
4 años 5 500 - 15 500
8 años 4 500 - 13 500
16 años 4 000 - 12 000
Adultos 4 000 - 10 000

LEUCOCITOS EN SANGRE PERIFERICA

1. NEUTRÓFILO

Los neutrófilos, denominados también micrófagos o polimorfonucleares

(PMN), son glóbulos blancos de tipo granulocito. Miden de 12 a 18 μm y es el tipo
de leucocito más abundante de la sangre en el ser humano. Se presenta del 60 al
75%. Su periodo de vida media es corto, durando horas o algunos días. Su función
principal es la fagocitosis de bacterias y hongos.

Se llaman neutrófilos porque no se tiñen con colorantes ácidos ni básicos, por lo

que su citoplasma se observa rosa suave. Se caracterizan por presentar un núcleo
con cromatina compacta segmentada en 2 a 5 lóbulos conectados por delgados
puentes. En neutrófilos inmaduros el núcleo se presenta sin segmentar, como una
banda fuertemente teñida. Su citoplasma contiene abundantes gránulos finos color
púrpura, (con el colorante Giemsa) que contienen abundantes enzimas líticas, así
como una sustancia antibacteriana llamada fagocitina, todo esto necesario para la
lucha contra los gérmenes extraños.

1.1 FUNCION:

En general la función del neutrofilo es la de la protección del organismo contra

las infecciones por medio de la fagocitosis.

En este proceso pueden diferenciarse varias etapas:

72
 1) Proceso de quimiotactismo: Consiste en la
atracción de de la celula fagocitante a la zona de
actuación.
2) Proceso de fagocitosis: la capturacion del
antígeno por el neutrofilo.
3) Proceso de desgranulacion: Una vez formado
el fagosoma iniciándose la destrucción del antígeno.
4) Proceso de destrucción del antígeno: La
destrucción del antígeno dentro del antígeno.

2. EOSINOFILOS

Un eosinófilo es un leucocito de tipo granulocito pequeño derivado de la

médula ósea, que tiene una vida media en la circulación sanguínea de 3 a 4 días
antes de migrar a los tejidos en donde permanecen durante varios días. Su
desarrollo en la médula ósea es estimulado por diversas interleucinas, como la IL-
5, la IL-3 y el factor estimulante de colonias granulocito-macrófago. Es
característico su núcleo bilobulado, al igual que sus distintivos gránulos
citoplásmicos. Estas proteínas granulares son responsables de muchas funciones
proinflamatorias, principalmente en la patogénesis de las enfermedades alérgicas,
como célula efectora de hipersensibilidad inmediata, así como en la muerte de
parásitos. Una de las enzimas más importantes que contienen sus gránulos es la
histaminasa, que se encarga de hidrolizar la histamina, regulando así la respuesta
alérgica.

2.1 Función

Los eosinófilos interaccionan con otras células por la expresión de múltiples

receptores en su superficie. Además, son células fagocitarias que demuestran
especial afinidad por los complejos antígeno-anticuerpo, por lo que la mayoría de
los eosinófilos son atraídos por quimiotaxis. También los eosinófilos pueden ser
atraídos por sustancias liberadas de los basófilos, como la histamina.

Los eosinófilos pueden regular la respuesta alérgica y las reacciones de

hipersensibilidad mediante la neutralización de la histamina por la histaminasa, y a
su vez producir un factor inhibidor derivado de los eosinófilos para inhibir la
desgranulación de las células cebadas o de los basófilos, que contienen
sustancias vasoactivas.

Los eosinófilos juegan un papel de defensa del huésped frente a

microorganismos no fagocitables, poseen una función citotóxica (por sus proteínas
granulares), inmunoreguladora (por las citocinas que libera) y son capaces de
participar en la reparación y remodelación tisular (liberando TGF-β).

73
 Los mecanismos de acción de los eosinófilos mejor
estudiados tienen que ver con la alergia y en la defensa
contra parásitos. Sus receptores para IgA explican su
fijación a los parásitos recubiertos previamente por esta
inmunoglobulina, capacitándoles para destruir sus larvas,
como acontece en la esquistosomiasis o bilharziasis.

3. BASOFILOS

Se denomina basófilo a cualquier célula que se tiñe fácilmente con colorantes .

Sin embargo, cuando se emplea este término sin ninguna aclaración adicional,
suele referirse a uno de los tipos de leucocitos (glóbulos blancos de la sangre) de
la familia de los granulocitos.

Los gránulos de los basófilos son gruesos pero escasos. Son células de unas
10 μm de diámetro y su núcleo tiene una forma que recuerda a una S. Se originan
en el mismo lugar que el resto de los granulocitos (médula ósea), y son los menos
numerosos, ya que constituyen sólo el 0,5% del total. Al activarse y pasar a los
tejidos, se les llaman células cebadas o mastocitos. Tienen una activa
participación en la respuesta inmunitaria, a través de la liberación de histamina,
serotonina en bajas concentraciones, y otras sustancias químicas.

Tiene gránulos de dos clases:

 Gránulos azurófilos: Contienen lisosomas, que a su vez estos contienen

hidrolasas ácidas.

 Gránulos específicos o secundarios: Contienen histamina

(vasodilatador), heparán sulfato (vasodilatador), heparina (anticoagulante) y
leucotrienos (hacen contraer el músculo liso de las vias aéreas).

3.1 FUNCION:

Su función es actuar como mediadores en las respuestas inflamatorias, en

especial las de hipersensibilidad.

Contienen gran cantidad de histamina, que es liberada bajo estimulos

apropiados. Además poseen receptores de membrana capaces de fijar
anticuerpos IgE por su fragmento Fc, que al adherirse provoca la desgranulacion
celular lebrandose las enzimas vasoactivas, bronco constrictivas y quimiotacticas.

74
 4. Alteraciones morfológicas de los agranulocitos.

En ciertas circunstancias, como infecciones, intoxicaciones por drogas o

venenos, quemaduras, algunos tipos de anemias, leucemias y defectos genéticos,
los granulocitos pueden presentar alteraciones en su morfología.

Alteración Definición
Granulación toxica Abundantes granulos de color azul
neguzco obscuro.
Cuerpos de Dohle Pequeña zona de color azul claro,
resto de RNA, en el citoplasma.
Neutrofilos hipersegmentados Nucleos con 5 o mas lobulos.
Anomalía de Pelger-Huet Incapacidad del nucleo para
segmentarse.

5. MONOCITOS

Los monocitos son un tipo de glóbulos blancos agranulocitos. Es el leucocito

de mayor tamaño, su tamaño varía entre 7 y 15 μm, y representa del 4 a 8% en la
sangre. Presenta un núcleo arriñonado (forma de riñón), que se tiñe de color
violeta-azulado con una proporción 2:1 con respecto al resto de la célula, y tiene
una depresión profunda. El citoplasma es abundante y de color gris azulado
pudiendo estar acompañado de vacuolas blanquecinas.

Los monocitos se generan en la médula ósea y después viajan por la sangre,

para luego emigrar a diferentes tejidos como hígado, bazo, pulmones, ganglios
linfáticos, huesos, cavidades serosas, etc. Después de alrededor de 24 horas de
permanecer en el torrente sanguíneo, los monocitos lo abandonan y atraviesan el
endotelio de los capilares o las vénulas poscapilares hacia el tejido conectivo,
donde se diferencian rápidamente a macrófagos.

5.1 FUNCION:

Su principal función es la de fagocitar, es decir, comerse a diferentes

microorganismos o restos celulares. Para fagocitar se tienen en cuenta diversos
factores como la presencia de antígenos. No obstante, el procedimiento es
sencillo, y consiste en rodear con los pseudópodos la molécula, acción que es
inhibida en los casos en que el macrófago reconoce a la célula como integrante de

75
un tejido propio del organismo, por medio de las proteínas del CMH o complejo
mayor de histocompatibilidad presentes sobre las
membranas celulares.

6. LINFOCITOS

Los linfocitos son un tipo de leucocito (glóbulo blanco)

comprendidos dentro de los agranulocitos. Son los
leucocitos de menor tamaño (entre 7 y 15 μm), y
representan del 24 a 32% del total en la sangre periférica. Presentan un gran
núcleo esférico que se tiñe de violeta-azul y en su citoplasma frecuentemente se
observa como un anillo periférico de color azul. Poseen un borde delgado de
citoplasma que contienen algunas mitocondrias, ribosomas libres y un pequeño
aparato de Golgi.

Los linfocitos son células de alta jerarquía en el sistema inmunitario,

principalmente encargadas de la inmunidad específica o adquirida.

Estas células se localizan fundamentalmente en los órganos linfoides. Tienen

receptores para antígenos específicos y, por tanto, pueden reconocer y responder
al que se les presente. Por último, los linfocitos se encargan de la producción de
anticuerpos y de la destrucción de células anormales. Estas respuestas ocurren en
el interior de los órganos linfoides, los cuales, para tal propósito, deben suministrar
un entorno que permita la interacción eficiente entre linfocitos, macrófagos y
antígeno extraño. La principal causa de su aumento es el estrés.

6.1 TIPOS DE LINFOCITOS:

Los linfocitos son células difíciles de catalogar según su morfología, por eso se
recurre al uso de "CD's" o antígenos de diferenciación para su caracterización.

 Linfocitos B (bursodependientes): son los responsables de la respuesta

humoral, es decir, de la producción de anticuerpos, proteínas (inmunoglobulinas)
que se adhieren a un antígeno específico (al cual reconocen de manera unívoca).
Son capaces de reconocer lípidos, proteínas, glúcidos.
 Linfocitos T (timodependientes): Detectan antígenos proteicos asociados a
moléculas del complejo principal de histocompatibilidad (MHC 0 CMH)

- Linfocitos CD4+ o linfocitos T4. Reconocen antígenos presentados por el

MHC-II. También se les llama linfocitos "helper" o colaboradores que participan en
las sinapsis inmunitarias.

76
 - Linfocitos T citotóxicos o linfocitos CD 8+. Reconocen péptidos presentados
por MHC-I y tienen capacidad lítica.

 Células asesinas naturales, Natural Killer (NK) o linfocito grande granular.

No tienen marcadores característicos, participan en la inmunidad innata, son
capaces de reconocer lo "propio" también tienen propiedades líticas.

6.2 FUNCION:

Son las principales células en la respuesta inmunitaria, reconociendo por sus

receptores de membrana los determinantes antigénicos con la colaboración de
otras células como los macrófagos.

La estimulación de linfocitos B controlada por la subpoblacion de linfocitos T da

lugar a los anticuerpos.

Los linfocitos T, mediante sus diferentes subpoblaciones, y los mediadores

solubles, interleucinas, regulan prácticamente toda la función inmunitaria.

7. CELULAS PLASMATICAS

Las células plasmáticas también denominadas

plasmocitos pertenecen al sistema inmunitario y su papel consiste en la
secreción de grandes cantidades de anticuerpos. Se diferencian a partir de los
linfocitos B gracias a la estimulación de los linfocitos CD4+. Los linfocitos B actúan
como células presentadoras de antígenos (APC), consumiendo un patógeno
agresor. Éste se incorpora a la célula por endocitosis mediada por receptor y una
vez dentro es troceado en el interior de los endosomas tras la fusión con
lisosomas, liberando enzimas proteolíticas sobre el patógeno. Tras la proteólisis
de éste, sus pedazos (los llamados péptidos antigénicos) son cargados en
moléculas del tipo MHC II y presentados en su superficie extracelular. Una vez allí,
los linfocitos T CD4+ colaboradores se unirán al complejo MHC II/antígeno y
provocarán la activación del linfocito B, lo que implica su diferenciación en célula
plasmática y subsiguiente generación de anticuerpos contra el patógeno que ha
sido consumido.

77
 7.1 GENERALIDADES:

Tras dividirse durante unos cinco días(aproximadamente) los linfocitos B

maduros se pueden diferenciar o bien en células plasmáticas o en linfocitos B con
memoria. Las células plasmáticas se originan en la médula ósea, posteriormente
se desplazan al bazo o a los nódulos linfáticos para secretar anticuerpos
(aproximadamente 10 000 por segundo). Durante los estados iniciales de la
respuesta inmune el tiempo de vida de las células plasmáticas es muy corto,
típicamente de unos pocos días a semanas. No obstante, siguiendo al proceso de
maduración de la afinidad, las células plasmáticas pueden sobrevivir de meses a
años y continuar secretando altos niveles de anticuerpos. Los linfocitos B con
memoria tienden a ser más duraderos y por ello pueden responder rápidamente a
una segunda exposición al antígeno.

La clase de anticuerpo que se produce en una célula plasmática determinada

depende de señales denominadas citoquinas que le llegan a partir de otras células
del sistema inmunitario, como los macrófagos y los linfocitos T colaboradores. A
este proceso se le denomina cambio de isotipo. Por ejemplo, las células
plasmáticoas probablemente secretarán anticuerpos IgG3 si maduran en
presencia de la citoquina interferón gamma. Puesto que la maduración de los
linfocitos B también supone hipermutación somática, estos anticuerpos tienen una
afinidad muy grande por su antígeno.

7.2 FUNCION:

Estas proceden de la activación del linfocito B al ponerse en contacto, por sus

receptores, con el antígeno. El linfocito B prolifera formando una clona de células
plasmáticas, influyendo en este proceso una serie de linfocinas producidas por los
linfocito T4 activados.

8. PLAQUETAS

Las plaquetas, o trombocitos son células pequeñas, irregulares y carentes de

núcleo, de 2-3 µm de diámetro,1 las cuales derivan de la fragmentación de los
megacariocitos precursores; la vida media de una plaqueta oscila entre 8 y 12
días. Las plaquetas juegan un papel fundamental en la hemostasia y son una
fuente natural de factores de crecimiento. Estas
circulan en la sangre de todos los mamíferos y están
involucradas en la hemostasia, iniciando la formación
de coágulos o trombos.

Si el número de plaquetas es demasiado bajo,

puede devenir una hemorragia excesiva. Por otra
parte si el número de plaquetas es demasiado alto,
pueden formarse coágulos sanguíneos y ocasionar

78
(trombosis), los cuales pueden obstruir los vasos sanguíneos y ocasionar un
accidente cerebro vascular, infarto agudo de miocardio, embolismo pulmonar y el
bloqueo de vasos sanguíneos en cualquier otra parte del cuerpo, como en las
extremidades superiores e inferiores; cualquier anormalidad o enfermedad de las
plaquetas es denominada trombocitopatía,2 la cual puede ser, ya sea un número
reducido de plaquetas (trombocitopenia), un déficit en la función (tromboastenia), o
un incremento en el número (trombocitosis). Hay desórdenes que pueden reducir
el número de plaquetas, como la trombocitopenia inducida por heparina o la
púrpura trombocitopénica idiopática (PTI) que típicamente causan trombosis, o
coágulos, en lugar de hemorragia.

8.1 CINETICA:

 Las plaquetas son producidas en el proceso de formación de las células

sanguíneas llamado trombopoyesis en la médula ósea, por fragmentación en los
bordes citoplasmáticos de los megacariocitos.
 El rango fisiológico de las plaquetas es de 150-400 x 109/litro.
 Alrededor de 1 x 1011 plaquetas de media son producidas cada día por un
adulto sano.
 La expectativa de vida de las plaquetas circulantes es de 7 a 10 días.
 La producción de de megacariocitos y plaquetas está regulada por la
trombopoyetina, una hormona producida usualmente por el hígado y los riñones.
 Cada megacariocito produce entre 5.000 y 10.000 plaquetas.
 Las plaquetas son destruidas por fagocitosis en el bazo y por las células de
Kupffer en el hígado.
 Una reserva de plaquetas es almacenada en el bazo y son liberadas
cuando se necesitan por medio de contracción esplénica mediada por el sistema
nervioso simpático.

8.2 FUNCION:

Las plaquetas intervienen fundamentalmente en varios aspectos de la

hemostasia o coagulación. Forman los llamados tapones hemostáticos primarios y
participan y participan en la hemostasia secundaria.

79
80
 FISIOPATOLOGIA DE LAS ANEMIAS

La anemia se puede definir como la reducción de la concentración de

hemoglobina. Aunque este descenso se acompaña casi siempre de una
disminución proporcional del número de eritrocitos, esto no es obligatorio en todos
los casos, ya que existen situaciones en las que la anemia se acompaña de una
cifra de hematíes normal o aumentada.

Se debe tener presente que una anemia es un signo clínico y no una entidad
diagnostica (enfermedad).

La función del glóbulo rojo es llevar y liberar cantidades adecuadas de O2 a los

tejidos para satisfacer sus demandas metabólicas. La consecuencia más
importante de la anemia es la hipoxia tisular. Cuando la hemoglobina desciende
por debajo de un valor crítico, la hipoxia tisular desencadena la puesta en marcha
de mecanismos que aumentan su utilización por parte de los tejidos. El organismo
trata así de adaptarse a la hipoxia y mejorar la oxigenación de los tejidos hasta
conseguir, si la anemia no es muy intensa, un estado de compensación a veces
efectivo.

81
 El mecanismo intraeritrocitario más importante consiste en la disminución de la
afinidad de la hemoglobina por el oxígeno (O 2) (aumento de la P50) y el
consiguiente aumento de la liberación del mismo hacia los tejidos. Esto se logra
mediante el aumento del nivel de 2-3 difosfoglicerato (2-3 DPG) que desplaza
hacia la derecha la curva de disociación de la hemoglobina.

Los mecanismos extraeritrocitarios son de diversa índole y en ellos intervienen

varios órganos y sistemas, siendo los más importantes el estímulo de la
eritropoyesis y la redistribución sanguínea.

El estímulo de la eritropoyesis constituye junto con el aumento del 2-3DPG, el

mecanismo de adaptación a la anemia más fisiológico. Aparece como respuesta
inmediata del organismo a la hipoxia y se debe al aumento de la producción de
eritropoyetina. La eritropoyetina, además de aumentar el número de eritroblastos,
acorta el tiempo de maduración y favorece la salida precoz de los eritrocitos a la
circulación. Cuando la anemia es poco intensa, en especial en niños y jóvenes, la
combinación del estímulo eritropoyético y el aumento del 2-3-DPG puede
determinar una compensación tal que la anemia puede pasar inadvertida
clínicamente.

La redistribución de la sangre tiene como finalidad aumentar el flujo de la misma

hacia los órganos vitales y se realiza mediante vasoconstricción generalizada, que
afecta la piel y los riñones, y un aumento del débito cardíaco. La vasoconstricción
contribuye, junto con la anemia, a la palidez cutánea y el débito cardíaco
aumentado es responsable de la taquicardia, acompañada con frecuencia de
soplos sistólicos funcionales.

Las características de la redistribución sanguínea varían con la rapidez con que

se instala la anemia.

Una anemia aguda puede conducir al shock hipovolémico en el que la

taquicardia, la disminución de la presión venosa y el aumento de la resistencia
vascular periférica contribuyen a mantener la oxigenación de los tejidos. El
descenso de la volemia estimula la actividad de los sistemas simpático y
suprarrenal y aumenta el débito cardiaco a través del efecto sobre la contracción
del músculo cardiaco y el ritmo. La vasoconstricción arterial periférica, al disminuir
la tensión intracapilar, produce un aumento de la presión oncótica de la sangre,
con lo que se favorece la difusión de líquido intersticial hacia el intravascular y la
restitución de la volemia (2) (3)

En las anemias crónicas, los mecanismos compensadores tienden a aumentar

la circulación sanguínea. Los cambios son más lentos pero en definitiva se
produce un aumento del volumen plasmático y del débito cardiaco.

82
 CLASIFICACIÓN DE LAS ANEMIAS

Las anemias pueden clasificarse de acuerdo a su fisiopatología o morfología. La

combinación de ambas es utilizada en el diagnóstico diferencial inicial del
paciente. En el curso de la enfermedad, la clasificación de la anemia puede
cambiar de una categoría a otra como resultado de variables clínicas o
patológicas.

La manera más fácil de comprender los múltiples trastornos capaces de

producir anemia es separar las causas en dos categorías:

1. Desórdenes en la producción efectiva de glóbulos rojos, en los cuales la

producción está disminuida. Esto puede deberse a:

 Trastornos en la maduración (eritropoyesis ineficaz): la médula contiene

numerosos eritroblastos que mueren in situ antes de alcanzar la etapa de
reticulocito, mientras que en la última, hay una eritroblastopenia absoluta.
 Falla absoluta de la producción.

2. Destrucción acelerada (hemólisis) o la pérdida de los glóbulos rojos es

responsable de la anemia.

Estas dos categorías no se excluyen entre sí y en algunas situaciones, más de

83
 Las anemias también se clasifican de acuerdo al tamaño del glóbulo rojo y a la
morfología celular. Así las anemias se dividen en normocíticas, microcíticas y
macrocítica.

84
 ANEMIAS HEMOLITICAS

Las anemias hemolíticas son un trastorno de la sangre en el cual los glóbulos

rojos son destruidos mas rápido de lo que la medula ósea puede producirlos. El
término para la destrucción de los glóbulos rojos se denomina hemolisis.

FISIOPATOLOGIA:
El eritrocito tiene una vida aproximada de 120 dias, durante este tiempo debe
recorrer un trayecto de mas de 250 km para cumplir su función. En este viaje el
eritrocito tiene que pasar por diferentes cambios físicos y químicos, todo puede
lograrlo debido a que posee una membrana con las cualidades de ser elástica y
deformable.

85
 Cuando el eritrocito presenta problemas en su estructura o contenido, le resulta
difícil atravesar los capilares y queda atrapado en el bazo generalmente, donde es
fagocitado. Al disminuir los eritrocito circulantes disminuye el aporte de oxígeno
normal a las células de los tejidos periféricos, de donde, la hipoxia resultante
estimula la a las células peritubulares del riñón, aumentando la producción de
eritropoyetina con objeto de incrementar la función de la médula ósea y corregir el
aporte de oxígeno. Entonces la medula ósea es estimulada para producir mas
eritrocitos, si logra compensar la destrucción con la producción se encuentra lo
que se conoce como estado hemolítico compensado y si no lo logra, aparecen las
anemias.

SIGNOS EN EL SINDROME HEMOLITICO:

Existen dos tipos de signos según el tipo de hemolisis:

Signos de hiperdestrucción:
Estos se caracterizan por la anemia e ictericia y esplenomegalia y
hepatomegalia como los mas comunes, una corta vida del eritrocito, coloramiento
de las heces, hemoglobinemia, hierro sérico elevado, haptoglobina disminuida,
urobilinogeno fecal elevado, hemoglobinuria y hemosiderinuria.

Signos de hiperregeneración:
Los mas comunes son la febrícula, alteraciones óseas, metabolismo basal
aumentado, expansión del espacio medular óseo, reticulocitosis, hiperplasia
eritroblastica medular.
Los signos van a depender del lugar, la causa y la velocidad de la destrucción
de los eritrocitos para evaluar la intensidad de cada signo.

HEMOLISIS
Hemolisis es el término dado a la destrucción de los eritrocitos, esta se presenta
en dos formas: cuando ocurre dentro de la circulación se le denomina hemolisis
intravascular, y cuando ocurre en el bazo se le conoce como hemolisis
extravascular.

HEMOLISIS INTRAVASCULAR:
Cuando el eritrocito se rompe dentro de un vaso sanguíneo, la hemoglobina
sale al plasma donde se une a la haptoglobina, que la transporta al hígado en
forma de complejo hemoglobina/haptoglobina, donde se metaboliza en bilirrubina.
Si la hemolisis intravascular e es intensa, entonces la haptoglobina se agota y hay
un exceso de hemoglonbina libre en la sangre, parte de esta puede unirse a otra
proteína y otra parte puede ser desechada por la orina, haciendo que esta cambie
de color.
Los datos del laboratorio de la hemolisis intravascular pueden ser:
 Hemoglobinemia.
 Hemoglobinuria.
 Descenso de haptoglobina.

86
  Aumento de la LDH.
Los eritrocitos deben estar muy lesionados para que puedan expresar la
destrucción intravascular.
Causas:
 Activación del complemento sobre la membrana eritrocitaria.
 Daños físicos o químicos al eritrocito.
 Presencia de sustancias toxicas en la sangre.

HEMOLISIS EXTRAVASCULAR
En este caso la hemoglobina no se libera en el plasma sino que se degrada a
hemo y globina. El hemo se cataboliza a biliverdina y después a bilirrubina, que en
plasma se una a la albumina.
La hemolisis extravascular evoluciona crónicamente y se acompaña de
esplenomegalia. Por tanto, los datos más significativos de hemolisis extravascular
son:

- Bilirrubinemia (ictericia)
- Esplenomegalia, litiasis biliar
- Alteraciones de crecimiento
- A veces, valores disminuidos de haptoglobina y hemopexina.

La hemolisis extravascular la originan defectos como:

- Hemoglobinopatías estructurales.
- Defectos enzimáticos eritrocitarios.
- Alteraciones de membrana del hematíe.

CLASIFICACIÓN:

INTRACORPUSCULARES: cuando el defecto radica en el propio hematíe, ya

sea en la membrana, las enzimas o la hemoglobina. Son de origen hereditario y
generalmente la hemolisis es extravascular.

EXTRACORPUSCULARES: se producen cuando la causa de la rotura del

hematíe es ajena a éste. Así: anticuerpos plasmáticos dirigidos contra antígenos
eritrocitarios, parásitos, sustancias toxicas, fármacos, etc. Son generalmente
anemias adquiridas y la hemolisis puede ser extravascular o intravascular.

87
ANEMIAS HEMOLITICAS
1- INTRACORPUSCULARES

- DEFECTOS DE LA MEMBRANA (MEMBRANOPATIAS)

 ESFEROCITOSIS HEREDITARIA
 ELIPTOCITOSIS HEREDITARIA
 ENTRE OTRAS
- DEFECTOS DE LA HEMOGLOBINA (HEMOGLOBINOPATIAS)

 CUALITATIVAS: HEMOGLOBINOPATIAS ESTRUCTURALES

 CAUNTITATIVAS: TALASEMIAS
- TRANSTORNOS ENZIMATICOS (ENZIMOPATIAS)

 PIRUVATO QUINASA
 GLUCOSA 6-FOSFATO DESHIDROGENASA

2.- EXTRACORPUSCULARES
- ANEMIAS HEMOLITICAS DE ORIGEN NO INMUNITARIO

 POR FRAGMENTACION MECANICA

 LISIS MASIVA POR INFECCIONES
 DESTRUCCION DE HEMATIES EN SER
- ANEMIAS HEMOLITICAS DE ORIGEN INMUNITARIO

 LISIS
 FAGOCITOSIS
- AUTOINMUNITARIAS

 POR ANTICUERPOS CALIENTES

 POR ANTICUERPOS FRIOS
 POR ANTICUERPOS BIFASICOS
- ANEMIAS HEMOLITICAS INDUCIDAS POR MEDICAMENTOS

 MECANISMOS INESPECIFICOS
 MECANISMOS INMUNOLOGICOS NO AUTOINMUNITARIOS
 MECANISMOS INMUNOLOGICOS AUTOINMUNITARIOS

88
 ANEMIAS HEMOLITICAS INTRACORPUSCULARES (AHI)

Anemias producidas por alteración intrínseca del hematíe, que son casi en su
totalidad de origen congénito.

El lugar de la hemolisis en las AHÍ es generalmente extravascular. La anomalía

puede estar en la membrana, en la molécula de Hb o en las enzimas del hematíe.

1. Defectos de la membrana (membranopatias)

 Esferocitosis hereditaria
 Eliptocitosis hereditaria
 Piropoiquilocitosis hereditaria
 Estomatocitocis hereditaria
 Xerocitosis hereditaria
 Acantocitosis
 Hemoglobinuria paroxística nocturna (HAN)

2. Defectos de la hemoglobina (hemoglobinopatías)

 Cualitativas: hemoglobinopatías estructurales
 Cuantitativas: talasemias.

3. Trastornos enzimáticos (enzimopatias)

 Piruvato quinasa
 Glucosa-6-fosfato deshidrogenasa

DEFECTOS DE LA MEMBRANA (MEMBRANOPATIAS)

Para que el hematíe realice su función y complete su recorrido necesita una

membrana estructural y funcionalmente normal.
Los defectos de la membrana dan lugar a propiedades anormales en la
permeabilidad y en la estabilidad del hematíe que provoca la reducción de la vida
media.
En mayor parte de las ocasiones existe una alteración estructural de las
proteínas esqueléticas (espectrina. Actina, anquirina).
El hematíe finalmente queda atrapado en el bazo (hemolisis extravascular) y
fagocitado por el SMF.

89
 ESFEROCITOSIS HEREDITARIA (EH)

Es la causa más frecuente de anemia hemolítica crónica, afectando a una de

cada 5000 personas. Suele heredarse de manera autosomica dominante,
raramente, puede ser autosomica recesiva.
El defecto radica en las proteínas espectrina y anquirina, que provocan un
aumento de permeabilidad para el sodio. Es un trastorno clínicamente
heterogéneo caracterizado por la hemolisis de leve a moderada.
El hematíe va adquiriendo la forma esférica (esferocito) lo que le da el nombre a
esta enfermedad.
El hematíe esferocitíco es muy rígido, y al carecer de flexibilidad es atrapado
por el bazo, lo que reduce a la supervivencia del hematíe en la sangre periférica.
En este ambiente de concentración muy escasa de glucosa, la célula agota
rápidamente el ATP necesario para bombear hacia afuera el exceso de Na+. Al
cesar la producción de energía, las células con fatiga metabólica son destruidas
por los macrófagos esplénicos.

La EH produce anemia, ictericia y esplenomegalia.

La esplenectomía es el tratamiento de elección (extirpación del bazo)

Hb: normal o disminuida
Reticulocitos. Superior al 8%
Policromasia
Microesferocitos
Hiperhemoglobina superior a 41g/dl
Bilirrubina: aumentada.

ANEMIAS HEMOLITICAS POR TRANSTORNOS ENZIMATICOS

(ENZIMOPATIAS)

Al madurar, los Reticulocitos pierden sus mitocondrias y los microsomas, y en

consecuencia también pierden su capacidad para sintetizar proteínas.
Debido a la ausencia de mitocondrias, el eritrocito depende críticamente del
metabolismo anaerobio de la glucosa para sus necesidades metabólicas.
Una deficiencia hereditaria en una de estas enzimas puede deteriorar las
integridades de la membrana celular o de la Hb y causar hemolisis.

El metabolismo de la glucosa:

1. La glucosa se degrada un 90% por vía anaerobia o vía de Embden-

Meyerhoff. Por este camino la glucosa pasa a Piruvato y a lactato obteniendo 2
moléculas de ATP.
2. La otra vía glucolitica eritrocitaria es la de las pentosas-fosfatos o aerobia.
Por esta vía no se origina compuestos fosforilados, de alta energía, pero se
generan cantidades de NADPH, necesario paa mantener en estado reducido los
grupos sulfhidrilos de la globina, de las enzimas y de las proteínas de la
membrana del hematíe.

90
 Defectos enzimáticos de los hematíes

El hematíe tiene que obtener el ATP por la vía de Embden-Meyerhof para poder
manejar la bomba de cationes que mantiene el medio iónico intraeritrocitario.
También se necesita para manatener al hierro de la hemoglobina en estado
ferroso (Fe2+) y quizá para renovar los lípidos de la membrana eritrocitaria. Un 10
% aproximadamente de la glucosa que consumen los hematíes se metaboliza a
través de la vía de la hexosa-monofosfato.

DEFECTOS DE LA VÍA DE EMBDEN-MEYERHOF

Los pacientes presentan una anemia congénita no esferocítica de intensidad

variable. Los hematíes suelen tener un déficit relativo de ATP, considerando su
temprana edad. Como consecuencia de ello, se pierde parte del potasio
intracelular. Las alteraciones morfológicas se deben a alteraciones secundarias al
defecto enzimático. Hematíes más rígidos y secuestrados más fácilmente por el
sistema mononuclear fagocítico. Algunos de estos déficit de las enzimas
glucolíticas, como la piruvatocinasa (PK) y la hexocinasa, son exclusivas del
hematíe. En otros trastornos, el déficit enzimático es más extenso. Las personas
con déficit de isomerasa de triosafosfato tienen niveles bajos de esta enzima en
los leucocitos, las células musculares y el líquido cefalorraquídeo. Además, están
afectados por un proceso neurológico progresivo. Algunos pacientes con déficit de
fosfofructocinasa tienen una miopatía. Alrededor del 95 % de todos los defectos
conocidos de las enzimas glucolíticas se deben al déficit de PK, y un 4 % al déficit
de isomerasa de glucosa-fosfato. Los restantes son extraordinariamente raros.

El déficit de PK se debe a la sustitución de aminoácidos. Algunas de esas

sustituciones dan lugar a reacciones disminuidas con el sustrato
(fosfoenolpiruvato) con una molécula potenciadora (fructosa 1,6-difosfato), o con el
ADP. Por eso, las manifestaciones clínicas y los datos de laboratorio son muy
variables dentro de la población de sujetos afectados por el déficit de PK. La
mayoría de ellos son heterocigotos compuestos que han heredado un defecto
enzimático distinto de cada padre.
La mayoría de los defectos de las enzimas glucolíticas se heredan de forma
recesiva. Por tanto, los padres de los sujetos afectados son heterocigotos. Estos,
en general, poseen la mitad del nivel normal de la actividad enzimática defectuosa,
lo cual es más que suficiente para mantener una función metabólica normal. Por
ello, son individuos completamente asintomáticos. Como la frecuencia de los
genes de este grupo de enzimopatías es baja, no es sorprendente que los
homocigotos verdaderos sean muchas veces descendientes de una pareja
formada por sujetos consanguíneos. El déficit de cinasa de fosfoglicerato se
hereda como un proceso ligado al sexo. Los varones afectados sufren una anemia
hemolítica intensa, mientras que las mujeres portadoras pueden tener un trastorno
hemolítico leve.

91
 Manifestaciones clínicas

Los pacientes con hemólisis intensa suelen consultar en la primera infancia por
anemia, ictericia y esplenomegalia. DATOS DE LABORATORIO: anemia
normocítica (o ligeramente macrocítica) y normocrómica con reticulocitosis.
Cuando hay déficit de PK, en sangre periférica se ven eritrocitos de formas
abigarradas, incluso espiculados. Se ha utilizado el nombre de "anemia hemolítica
congénita no esferocítica" para estos trastornos. A diferencia de la esferocitosis
hereditaria, la fragilidad osmótica de la sangre recién ex-traída suele ser normal.
La incubación descubre una población de eritrocitos con aumento de la fragilidad
osmótica, trastorno que no se corrige añadiendo glucosa. Para el diagnóstico de
este grupo de anemias se necesitan análisis enzimáticos específicos. La mayoría
de los pacientes no precisa tratamiento. Quienes tienen hemólisis intensa deben
tomar diariamente suplementos de ácido fólico (1 mg/día). Se pueden necesitar
transfusiones de sangre durante una crisis hipoplásica.

Debido al defecto enzimático, los reticulocitos dependen de la respiración

mitocondrial más que de la glucólisis para mantener el ATP. Sin embargo, en el
ambiente hipóxico del bazo, el metabolismo aerobio queda interrumpido y las
células con su ATP agotado se destruyen in situ. Normalmente, los reticulocitos
quedan retenidos en el bazo durante 24 a 48 horas. Los pacientes con déficit de
PK mejoran a veces con la esplenectomía, pues con ella puede verse un marcado
aumento de los reticulocitos circulantes. Los pacientes con déficit de isomerasa de
glucosa-fosfato también pueden mejorar después de la esplenectomía.

DEFECTOS EN LA VÍA DE LA HEXOSA-MONOFOSFATO

El hematíe normal posee una dotación suficiente para estar protegido contra los
agentes oxidantes. Durante la exposición a un fármaco o agente tóxico capaz de
generar radicales de oxígeno, la cantidad de glucosa que se metaboliza a través
de la vía de la hexosa-monofosfato aumenta normalmente varias veces. De esta
forma se regenera el glutatión reducido y se protege de la oxidación a los grupos
sulthidrilo de la hemoglobina y a la membrana de los hematíes. Los individuos con
defectos heredados de la vía de la hexosa-monofosfato no pueden mantener en
sus hematíes un nivel suficiente de glutatión reducido. Como consecuencia de
ello, los grupos sulfhidrilo de la hemoglobina se oxidan, y la hemoglobina tiende a
precipitar dentro del hematíe formando los cuerpos de Heinz.

El más frecuente es el déficit de G6PD, un proceso que afecta a 200 millones

de personas en todo el mundo, y que, lo mismo que la hemoglobina S, es probable
que proteja parcialmente al paciente de padecer el paludismo, al crear un
alojamiento defectuoso para el merozoíto. En casi todos los casos de déficit de
G6PD la alteración consiste en la sustitución de una o más bases, lo que va
seguido del cambio de un aminoácido por otro, pero no de una deleción de la

92
proteína. Como pruebas de que existen alteraciones estructurales están las
diferencias en la movilidad electroforética, la cinética de las enzimas, el pH óptimo
y la estabilidad al calor. Estas diferencias justifican la gravedad clínica tan variable,
que va desde una anemia hemolítica no esferocítica sin estrés oxidante
demostrable (especialmente poco después de nacer), y pasando por una anemia
hemolítica que sólo se manifiesta ante un estímulo oxidante leve a intenso, hasta
la ausencia completa de alteraciones clínicas detectables. La G6PD normal se
conoce como tipo B. Alrededor del 20 % de las personas de origen africano tienen
una G6PD (llamada A+) que se distingue en un solo aminóacido y que puede
descubrirse por electroforesis, pero que funcionalmente es normal. Entre las
variedades de G6PD clínicamente importantes, la G6PD A(-) se encuentra
principalmente en los individuos con antepasados originarios de África central. La
G6PD de tipo A- tiene la misma movilidad electroforética que la de tipo A +, pero
es inestable y su cinética es anormal. El gen de la G6PD está situado en el
cromosoma X. Por eso, este déficit es un rasgo ligado a X. Los varones afectados
(homocigotos) heredan el gen anormal de su madre, que suele ser una portadora
(heterocigota). La mayoría de las mujeres son portadoras asintomáticas. Las
mujeres en quienes casualmente se descubre un elevado porcentaje de hematíes
deficitarios en esta enzima se parecen a los varones homocigotos. Normalmente,
la actividad de la G6PD desciende en un 50 % durante los 120 días que dura la
vida de los hematíes. Los individuos de la variedad A- pueden tener en
circunstancias normales una supervivencia de los hematíes ligeramente
abreviada, pero no presentan anemia. Los problemas clínicos aparecen solamente
cuando las personas afectadas se someten a alguna forma de estrés ambiental.
Lo más frecuente es que los episodios de hemólisis sean desencadenados por
infecciones virales y bacterianas. Además, los fármacos y agentes tóxicos que
amenazan con oxidar a los hematíes producen hemólisis en los individuos con
déficit de G6PD. De ellos, las sulfamidas, los antipalúdicos y la nitrofurantoína son
los que más a menudo se encuentran como responsables. Aunque se cita también
a la aspirina como un probable agente nocivo, carece de efectos perjudiciales en
los individuos A-. La ingestión accidental de agentes tóxicos, como el naftaleno
(que se encuentra en las bolas de naftalina), puede causar una hemólisis grave.
Finalmente, la acidosis metabólica puede desencadenar un episodio de hemólisis
en los sujetos con déficit de G6PD.

DEFICIENCIA DE LA GLUCOSA-6- FOSFATO DESHIDROGENASA (G6PD)

De la deficiencia de la G6PD, es el trastorno más común de las enzimas

eritrocitarias. La enfermedad es un trastorno ligado al sexo portador por un gen del
cromosoma X que se expresa completamente solo en el varón.
Las portadoras parecen tener 2 poblaciones de células, una deficiencia en
G6PD y otra normal. La enfermedad es heterogénea con deficiencias e intensidad
entre razas y sexos.
Se presenta mas frecuente en el área mediterránea, África y China. Es la mas
frecuente en nuestro país.

93
 Su expresión clínica es la aparición de un síndrome hemolítico agudo con
fiebre, ictericia, reticulocitosis, cefaleas, etc.
Individuos con la deficiencia de G6PDpueden presentar crisis hemolíticas
coincidiendo con infecciones bacterianas y virales.

El favismo; se denomina favismo a la hemólisis aguda que se desarrolla en

algunos individuos después de la ingestión de habas (Vicia faba) o la inhalación
del polen de esta planta. Se sabe que existe una relación directa entre esta
enfermedad y la deficiencia de glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6PD). Todos
los individuos que presentan favismo son deficientes de G6PD, si bien no todos
los deficientes en esta enzima presentan hemólisis por la ingestión de este
alimento.

En el frotis:
- Policromasia
- Esferocitos ocasionales
- Células mordidas (estomatocito)
- Células hipocromicas pequeñas
- Cuerpos de Heinz.

DEFICIENCIA DE PIRUVATO QUINASA (PK):

Es la más común de la vía Embden-Meyerhof, y la segunda deficiencia

enzimática mas frecuente en los eritrocitos.

Se transmite de forma recesiva autosomica (hereditario), y los individuos

homocigotos tienen manifestaciones clínicas.

El cuadro clínico es el de una anemia hemolítica de intensidad variable, con

anemia, ictericia, esplenomegalia y litiasis biliar.

El diagnostico de déficit de PK se realiza mediante la determinación de la

actividad enzimática a partir del hemolizado. No existe un tratamiento específico
para el déficit de PK, aunque hay casos en los que la esplecnotomia es una
solución. El uso de salicilatos está contra indicado, ya que agravan el metabolismo
energético de los hematíes con déficit de PK.

94
 ANEMIAS HEMOLÍTICAS POR DEFECTOS DE LA HB
(HEMOGLOBINOPATÍAS)

Las hemoglobinopatías son alteraciones cualitativas o cuantitativas de la

globina, secundarias a mutaciones genéticas, cuya consecuencia puede ser una
modificación estructural (hemoglobinopatías estructurales) o una disminución de la
síntesis de una cadena globínica estructuralmente normal (talasemias).

Hemoglobinopatías estructurales

Son el resultado de mutaciones al nivel de alguno de los genes que codifican la

síntesis de una determinada cadena globínica: α, β, γ, ψ, y δ. Se consideran
hemoglobinopatías solo aquellas mutaciones que afectan regiones esenciales de
la molécula y que, por tanto, poseen expresividad clínica. En general, las
mutaciones de aminoácidos situadas en la superficie de la molécula solo producen
modificaciones de la carga eléctrica, mientras que los aminoácidos internos
ocasionan, casi siempre, una importante alteración estructural y funcional de la
hemoglobina y su repercusión clínica suele ser mayor: anemia hemolítica
(hemoglobinas inestables), poliglobulia (hemoglobinas con alteración de su
afinidad por el oxígeno) o cianosis (hemoglobinas M).

Los síndromes drepanocíticos sólo dan clínica en el estado homocigoto o doble

estado heterocigoto. Por el contrario, las variantes inestables, las de alta afinidad
por el oxígeno, y las hemoglobinas M solo se encuentran en estado heterocigoto.

HEMOGLOBINA S

La Hb S tiene una alta prevalencia en Africa Tropical, en donde se observan

heterocigotos en el 20 y hasta el 40% de la población. La Hb S se puede encontrar
en tres formas diferentes como ya hemos visto antes.
La Hb S se produce por la sustitución del ácido glutámico por la valina. Al
descender la PO2 la sustitución de dicho aminoácido origina que la molécula de la
hemoglobina cristalice, deformando los hematíes, volviéndolos falciformes y
rígidos, e impidiendo su tránsito por los capilares pequeños. El proceso origina un
círculo vicio- so: los eritrocitos falciformes incrementan el estancamiento,
desciende más la PO2 y se acentúa la falciformación. Si esto se mantiene mucho
tiempo, se lesiona la membrana celular, permitiendo el paso de calcio al interior de
la célula, lo que determina rigidez de la membrana. En estas condiciones los
hematíes son eliminados de la circulación por el SMF.

95
 HEMOGLOBINA AS O FORMA HETEROCIGOTA (RASGO
DREPANOCÍTICO)

Los portadores de este trastorno son asintomáticos. Ocasionalmente sufren

hematurias e infartos esplénicos cuando se exponen a situaciones de hipoxia
prolonga- da (anestesia general y procesos neumónicos). La morfología
eritrocitaria es normal y no se observan drepanocitos en el frotis de sangre. Se
basa en la desoxigenación de la sangre in vitro cuando se pone en contacto con
un agente reductor, la proporción de Hb S oscila entre un 35 y un 45% del total.

HEMOGLOBINA S HOMOCIGOTA (SS) O ANEMIA DREPANOCÍTICA

Se caracteriza por una anemia hemolítica grave, que aparece a los pocos
meses de nacer cuando la Hb S reemplaza a la Hb fetal, que predomina al nacer y
durante los primeros meses de vida. En los niños es frecuente encontrar una
esplenomegalia, que desaparece a medida que se producen infartos esplénicos
produciéndose una verdadera atrofia esplénica.
La anemia es hemolítica crónica. Los valores de Hb oscilan entre 6 y 8 gr/dl y
se acompaña de una intensa reticulocitosis. En el frotis de sangre se observan
drepanocitos, que son claves en el diagnóstico. Este se confirma con la
electroforesis de Hb en medio alcalino y en agar citrato a pH ácido. La
hemoglobina fetal en los homocigotos se encuentra elevada en proporción variable
y parece actuar como mecanismo protector impidiendo la falciformación. La
demostración se hace de cuerpos de Heinz espontáneos.

Debe evitarse en lo posible el contacto con medicamentos oxidantes.

HEMOGLOBINOPATÍAS CON ALTERACIÓN DE LA AFINIDAD POR EL

OXÍGENO

Se producen por mutaciones situadas a nivel de las áreas de contacto entre las
subunidades a y b de la molécula de Hb o de la zona de unión del 2,3 DPG a la
cadena b. De acuerdo con la naturaleza de la mutación pueden observarse
aumentos o disminuciones de la afinidad de la hemoglobina por el oxígeno, siendo
las primeros mucho más frecuentes que las segundos. Se heredan con carácter
autosómico dominante, siendo la forma homocigota, al igual que otras
hemoglobinopatías estructurales, incompatibles con la vida.

Las hemoglobinopatías con aumento de la afinidad por el oxígeno cursan

clínicamente con poliglobulia de intensidad variable, mientras que las de baja
afinidad por el oxígeno son asintomáticas, cursando a veces con cianosis ligera
por desaturación de la Hb a nivel de sangre venosa.

96
 HEMOGLOBINAS M

Estas hemoglobinas se caracterizan por la presencia del hierro del hemo en

estado férrico (Fe+++) en vez de estar en estado ferroso (Fe++). Son mutaciones
que se caracterizan casi siempre por una sustitución del aminoácido histidina,
situado en la cavidad del hemo, por la tirosina. La tirosina al poseer una carga
negativa y al estar unida al hierro estabiliza su forma oxidada e impide la unión
reversible al oxígeno. Debido a ello, la cadena afecta por la mutación pierde su
capacidad funcional y la hemoglobina se comporta como metahemoglobina, de ahí
el nombre de hemoglobinas M. La mutación puede afectar a la cadena a o b.

TALASEMIAS

Bajo el nombre de ―talasemia‖ se incluyen un grupo muy heterogéneo de

alteraciones congénitas cuya característica común es un defecto en la síntesis de
una o varias cadenas de globina normales. La disminución de la síntesis de
cadenas alfa se denomina alfa talasemia, la de cadenas beta, beta talasemia, la
de cadenas delta y beta simultáneamente, delta/beta talasemia, y así
sucesivamente.

La disminución en la síntesis de un tipo de cadena globínica rompe el equilibrio

normal entre las cadenas alfa y beta y conduce a la acumulación intracelular de
una de ellas. Así, en la alfa talasemia se produce un exceso de cadenas beta y en
la beta talasemia un exceso de cadenas alfa.

La hemoglobina se compone de dos proteínas: la globina alfa y la globina beta.

La talasemia ocurre cuando hay un defecto en un gen que ayuda a controlar la
producción de una de estas proteínas.
Existen dos tipos principales de talasemia:
La talasemia alfa ocurre cuando un gen o los genes relacionados con la
proteína globina alfa
faltan o han cambiado (mutado).
La talasemia beta ocurre cuando defectos genéticos similares afectan la
producción de la
proteína globina beta.

Hay muchas formas de talasemia y cada tipo tiene muchos subtipos diferentes.
Tanto la talasemia alfa como la beta abarcan las siguientes dos formas:
- Talasemia mayor
- Talasemia menor

Uno debe heredar el gen defectuoso de ambos padres para padecer la

talasemia mayor.

97
 La talasemia menor se presenta si uno recibe el gen defectuoso de sólo uno de
los padres. Las personas con esta forma del trastorno son portadores de la
enfermedad y por lo regular no tienen síntomas.
La talasemia beta mayor también se denomina anemia de Cooley.

ANEMIA DE COOLEY

Es cuando ambos (dos) genes de la cadena beta tienen deleciones, causando

el tipo más grave de beta talasemia. Los pacientes que tienen talasemia grave
necesitan frecuentes transfusiones de sangre y puede que no vivan mucho tiempo.
Durante el primer año o dos primeros años de vida, pueden estar pálidos,
irritables, tener poco apetito y padecer muchas infecciones. Sin tratamiento,
aumenta el tamaño del hígado, del bazo y del corazón, y los huesos pueden
volverse delgados y quebradizos. Uno de los problemas principales es la
acumulación de hierro en el corazón y otros órganos, provocando insuficiencia
cardiaca en algunos pacientes en los años de adolescencia o a principios de los
veinte.
La forma más severa de talasemia alfa mayor causa la hidropesía.

Hidropesía fetal

Es una afección seria en la cual se acumulan cantidades anormales de líquido

en dos o más áreas del cuerpo de un feto o recién nacido.
La causa exacta depende de cuál sea la forma que tenga el bebé.
La hidropesía fetal inmunitaria es una complicación de una forma severa de
incompatibilidad
Rh. La compatibilidad Rh causa la destrucción masiva de los glóbulos rojos, lo
cual lleva a que se presenten varios problemas, incluyendo hinchazón total del
cuerpo. La hinchazón severa puede interferir con la forma cómo funcionan los
órganos del cuerpo.

La hidropesía fetal no inmunitaria ocurre cuando una enfermedad o afección

altera la capacidad del cuerpo para manejar los líquidos.

El número de bebés que desarrollan hidropesía fetal inmunitaria ha descendido

enormemente desde la introducción del medicamento RhoGAM, el cual se usa
para tratar a las madres embarazadas en riesgo de presentar incompatibilidad Rh.
La hidropesía fetal a menudo ocasiona la muerte del bebé poco antes o
después del parto. El riesgo es más alto entre los bebés más prematuros y
aquellos que están muy enfermos al nacer.

Otros síntomas pueden abarcar:

- Deformidades óseas en la cara
- Fatiga
- Insuficiencia del crecimiento
- Dificultad respiratoria

98
 - Piel amarilla (ictericia)

Los glóbulos rojos aparecerán pequeños y de forma anormal al examinarlos

bajo un
microscopio.

Un hemograma o conteo sanguíneo completo (CSC) muestra anemia.

99
 ANEMIAS HEMOLITICAS ADQUIRIDAS

Resultan de la destrucción incrementada de glóbulos rojos, manteniendo sus

características normales, excepto por la hemoglobinuria paroxística nocturna.

Se clasifican en: inmunes y no inmunes.

Ante la sospecha de una anemia hemolítica adquirida se debe realizar:

 Hemograma completo (biometría hemática)

 Recuento sanguíneo: muestra una concentración de hemoglobina reducida
y un VCM aumentado.
 Extensión sanguínea: permite detectar anomalías que indicaran las
pruebas complementarias a realizar.

Anemias hemolíticas inmunes:

En ellas la destrucción de eritrocitos se produce por autoanticuerpos

(anticuerpos producidos por el paciente contra sus propios eritrocitos) y
aloanticuerpos (anticuerpos que un individuo genera contra eritrocitos alogenitos,
es decir de otra persona; que a su vez se clasifican en: autoinmunes, por
isoanticuerpos e inducidos por droga.

 Anemias hemolíticas autoinmunes (AHAI)

Se clasifican de acuerdo con las propiedades térmicas de los autoanticuerpos

involucrados:

Autoanticuerpos de reacción en caliente: por inmunoglobulinas IgG que

facilitan el secuestro esplénico de los eritrocitos sensibilizados (destrucción
extravascular). Se fijan a los GR con mayor avidez a 37º C. Los síntomas son:
anemia intensa, fiebre, dolor abdominal y lumbar, palidez. En frotis se observan
microesferocitos, anisocitosis.

Autoanticuerpos de reacción en frío: Las aglutininas frías se unen a los

glóbulos rojos a temperaturas de 4 a 18º C. Se da por inmunoglobulinas IgM que
causan destrucción inmediata intravascular por mecanismos independientes del
complemente o secuestro hepático. Los síntomas son: anemia moderada, ataques
de acrocianosis precipitados. La anemia hemolítica depende de la capacidad de
las crioglutininas para iniciar la activación del complemento en la superficie del
eritrocito. En extendido se observa anisocitosis, microesferocitosis.

La prueba de Coombs directa es positiva.

100
 Hemoglobinuria paroxística al frío (HPF). Se da por la inmunoglobulina IgG,
en personas con sífilis terciaria, niños y adultos que desarrollaron una enfermedad
viral. Con exposición al frío hay paroxismo de inmunoglobinuria.

 Anemias hemolíticas por isoanticuerpos:

En ellas se encuentra la enfermedad hemolítica del recién nacido, en la que hay

trastorno hemolítico producido por el paso transplacentario de anticuerpos
maternos que reaccionan con los del niño y producen anemia.

También por reacción hemolítica transfuncional incompatible; es decir en

transfusiones sanguíneas cuando las inmunoglobulinas recibidas reaccionan
contra el paciente.

 Anemias hemolíticas no inmunes:

Son causadas por:

 Causa mecánica: anemia hemolítica cardiaca, hemoglobinuria de la

marcha y anemia hemolítica microangiopatica.
 Secundaria a infección: malaria, bacteriana y viral.
 Defecto genético.
 Agentes físicos y químicos.
 Agentes animales y vegetales.
 Hiperesplenismo.

ANEMIAS APLASICAS

Es un síndrome resultado de una insuficiencia medular, que se caracteriza por

la existencia de pancitopenia periférica o hipoplasia medular. Otras lesiones que
aparecen en las lesiones de la médula ósea son la mieolodisplasia y aplasia pura
de células rojas.

El 70% de los casos no se conoce la causa d e la enfermedad (forma

idiopática).

Las formas heredadas de la anemia aplásica abarcan la anemia Fanconi, la

disqueratosis congénita y el síndrome de Swachman.

101
  La anemia Fanconi es una enfermedad en el cual el paciente es homocigoto
o heterocigoto para mutaciones en cualquiera de los 13 genes.

 Disqueratosis congénita: se caracteriza por hiperpigmentacion en cara,

nuca, hombros, uñas distróficas y leucoplasia en mucosas.

 Síndrome de Swachman: se debe a mutaciones en el gen del mismo

nombre localizado en el cromosoma 7. Se caracteriza por insuficiencia
pancreática, exocrina, disfunción medular y anomalías esqueléticas

Factores de riesgo:

 Antecedentes familiares de anemia aplásica.

 Factores genéticos como los asociados a la anemia hipoplástica congénita.
 Uso de ciertos medicamentos y drogas.
 Contacto o, más frecuentemente, inhalación de tóxicos volátiles, como el
benceno, en el trabajo.
 Radiaciones ionizantes

Síntomas:

Son el resultado de la insuficiencia de la médula ósea y la pérdida de la

producción de células sanguíneas.

El conteo bajo de glóbulos rojos provoca:

 Fatiga
 Palidez
 Frecuencia cardíaca rápida
 Dificultad para respirar con el ejercicio
 Debilidad

El conteo bajo de glóbulos blancos (leucopenia) produce aumento del riesgo de

infección.

El conteo bajo de plaquetas (trombocitopenia) ocasiona sangrado,

especialmente de las membranas mucosas y de la piel. Produciendo:

 Encías sangrantes
 Tendencia a la formación de hematomas
 Infecciones frecuentes o graves
 Sangrado nasal

102
 Tratamiento:

El tratamiento idóneo es el transplante de médula ósea:

La médula donada se inserta gradualmente en las venas del paciente, para tratar
de sustituir las células defectuosas de la médula ósea por células sanas

ANEMIA FERROPENICA

Se produce por deficiencia de hierro, el cual es necesario para la formación de

los hematíes.

El hierro es fundamental sobre todo en niños menores de 10 años en la

formación de la hemoglobina, ya que es el elemento que capta el Oxígeno. El
organismo recicla el hierro: cuando los glóbulos rojos mueren, el hierro presente
en ellos vuelve a la médula ósea para ser reutilizado en la formación de nuevos
glóbulos rojos.

Causas:

 Nutricional: cuando las necesidades diarias del mineral no son satisfechas.

La absorción deficiente de hierro (mala absorción) rara vez causa deficiencia del
mineral
 Disminución de la absorción:
 Pérdida de sangre: el origen más frecuente de deficiencia de hierro en los
adultos es la pérdida de sangre, la cual puede deberse a muy diversas causas. En
mujeres entre 15 y los 45 años de edad son las pérdidas por menstruación. En los
varones adultos pérdida crónica por la vía gastrointestinal, la cual puede ser
debida a: enfermedad ulceropéptica y esofagitis péptica por reflujo
gastroesofágico.

Síntomas:

 Coloración azul en la parte blanca de los ojos

 Uñas quebradizas
 Disminución del apetito (especialmente en niños)
 Fatiga
 Dolor de cabeza
 Irritabilidad
 Color pálido de la piel
 Dificultad respiratoria
 Dolor en la lengua
 Antojos alimentarios inusuales (llamados pica)
 Debilidad

103
 Diagnostico:

 Hematocrito y hemoglobina (Biometría hematica)

 Capacidad de fijación del hierro (CFH) en la sangre
 Ferritina sérica
 Nivel de hierro sérico

Tratamiento:

La ingestión de sales de hierro, con lo cual se logra la restauración gradual de

la función hematopoyetica normal.

ANEMIAS DE LAS ENFERMEDADES CRONICAS

Es la causa más frecuente de anemia después de la ferropenia y las dos tienen

en común una alteración en el metabolismo del hierro. En la anemia ferropénica
por su carencia y en esta entidad por un bloqueo en su utilización. Pese a su
frecuencia es una entidad poco diagnosticada. Las causas más frecuentes de
anemia de enfermedades crónicas (AEC) son los procesos tumorales o
inflamatorios crónicos de causa infecciosa o no, como artritis reumatoide, lupus
eritematoso sistémico, enfermedad de Crohn, vasculitis, etc.

Las infecciones que dan anemia de este tipo son crónicas, duran un mes o más,
que es el tiempo que tarda en desarrollarse. Las más frecuentes son: tuberculosis,
empiema y abscesos pulmonares, bronquiectasias, osteomielitis, endocarditis
bacteriana subaguda, infecciones fúngicas crónicas e infección por el VIH. Pero no
todas las anemias en el seno de una infección pueden catalogarse de AEC o el
mecanismo puede ser mixto. Se puede producir anemia por hemólisis inmune
(mycoplasma, virus de Epstein-Barr); hemólisis no inmune como en endocarditis
bacterianas, paludismo; hemólisis microangiopática como la infección por VIH o
por E. Coli O157; por infección de los progenitores hematopoyéticos: el parvovirus
B19 y el VIH y por hemofagocitosis en el caso de brucelosis, leishmaniasis e
infecciones por virus del grupo herpes y VIH. También algunos de los fármacos
usados para el tratamiento de las infecciones pueden producir anemia. Es una
anemia moderada, en general no menor de 9g/dL de hemoglobina y la clínica es
consecuencia de la enfermedad de base. Su inicio es insidioso durante un
período de 3-4 semanas.

104
 Patogenia:

1. Mala movilización del hierro almacenado en el SMF.

En un proceso inflamatorio o infeccioso se produce un aumento de interleuquina-1

(IL-1) y otras citoquinas producidas por los macrófagos activados. La IL-1 es la
responsable en los hepatocitos del aumento de los reac-tantes de fase aguda (uno
de ellos, la alfa1 antitripsina dificulta la unión de la transferrina a sus receptores en
los precursores eritroides) y de la disminución de la transferrina y albúmina.

En los macrófagos origina un aumento de la síntesis de ferritina con el

consiguiente incremento de la capacidad de depósito de hierro, de la actividad
fagocítica de los macrófagos y de su activación con mayor secreción de IL-1.
La acción de la IL-1 sobre los granulocitos aumenta la liberación de lactoferrina.
Es una proteína similar a la transferrina y con mayor afinidad por el hierro. Pero el
hierro unido a la lactoferrina no se transfiere a los precursores eritroides y se
acumula en el SMF; debido a esta captación de hierro, la concentración sérica
disminuye. Se cree que es un mecanismo de defensa frente a infecciones que
depriva a los microorganismos del hierro que necesitan para proliferar.

2. Defectuosa respuesta eritropoyética medular.

- Por una deficiencia moderada de EPO: La IL-1 y otras citoquinas inhiben la

producción de eritropoyetina (EPO). En la AEC la EPO sérica no está tan elevada,
para los niveles de Hb, como en la anemia ferropénica.
- Por índice la eritropoyesis: la respuesta de los progenitores eritroides de la
médula ósea a la EPO es anormal y está causada por la IL-1, factor de necrosis
tumoral (TNF) y algunos interferones. Los efectos inhibidores de algunas de estas
citoquinas pueden ser superados in vitro por altas concentraciones de EPO; es
una explicación de la respuesta a la EPO en algunos pacientes.

3. Supervivencia de los hematíes acortada.

Por eritrofagocitosis de los macrófagos y explica la esplenomegalia que se puede

presentar en algunos enfermos.

Laboratorio:

 Frecuentemente es una anemia normocítica y normocrómica, aunque

también puede ser microcítica e hipocroma (20-50 por ciento). Es hipoproliferativa
con reticulocitos bajos.
 El hierro sérico y los niveles de transferrina están descendidos. El índice de
saturación de la transferrina está ligeramente descendido (10-20 por ciento),
menos que en la anemia ferropénica que es menor del 10 por ciento.

105
  La ferritina sérica está aumentada o es normal, pero dado que es un
reactante de fase aguda, puede no reflejar fielmente el hierro de depósito y se
puede dar el caso de depósitos de hierro bajos con ferritina normal. En el caso en
que la ferritina sérica sea normal, se puede determinar los niveles séricos del
receptor soluble de la transferrina. Los receptores de la transferrina se expresan
en los precursores eritroides y están muy elevados en la anemia ferropénica y
menos en la AEC; puesto que en la anemia ferropénica existe una hiperplasia
eritroide, aumentan aún más los receptores de la transferrina. Por tanto, unos
niveles de receptor de la transferrina elevados se correlacionan con unos
depósitos medulares bajos de hierro. Si la ferritina está disminuida es indicativo de
deposito medular bajo de hierro.
 En la médula ósea los depósitos férricos están normales o aumentados y
en los sideroblastos están disminuidos, por un aporte inadecuado del hierro del
sistema mononuclerfagocítico (SMF) a los precursores de los hematíes
(sideroblastos). El estudio de médula ósea puede ser necesario para descartar
una neoplasia (o un síndrome mielodisplásico), una infección y para valorar los
depósitos. Este aporte insuficiente de hierro también se refleja en los estudios de
ferrocinética con aclaramiento plasmático rápido del hierro y lenta incorporación a
los sideroblastos.

Tratamiento:

Se ha visto que el tratamiento con el anticuerpo anti-TNF, infliximab, en

enfermos con artritis reumatoide mejora la anemia. . La eritropoyetina (EPO) es
eficaz para corregir la anemia en enfermos de cáncer y también existe experiencia
en la anemia de los enfermos con infección por el VIH. El grado de respuesta es
variable y depende de los niveles de EPO sérica; cuanto más bajo, mayores
posibilidades de respuesta y de los niveles elevados de proteína C reactiva que en
este caso la respuesta es peor. En el tratamiento con EPO debe administrarse
hierro oral (como hemos visto en la patogenia, una característica de la AEC es la
dificultad para movilizar el hierro de los depósitos).

106
 ANEMIAS SIDEROBLASTICAS

Las anemias sideroblísticas constituyen un conjunto de anemias de origen

complejo, caracterizadas por la existencia de un incremento de los depósitos de
hierro del organismo (hemosiderosis) y anemia hipocrómica.

Morfológicamente, el rasgo diagnóstico fundamental de las anemias

sideroblísticas es el hallazgo de un gran número de sideroblastos (pueden
constituir hasta el 40% de los blastos medulares), los cuales no son más que
eritroblastos en los que el hierro, en lugar de estar situado en el citoplasma
como ferritina, se acumula en el interior de las mitocondrias en forma de
micelas ferruginosas que pueden ser vistas como anillos alrededor del núcleo .

Una clasificación sencilla y funcional agrupa a las anemias

sideroblísticas en dos grupos: las hereditarias, ligadas al cromosoma X y las
adquiridas, que son a su vez subdivididas en primarias o idiopáticas (anemias
refractarias sideroblísticas) y secundarias a medicamentos (Cicloserina,
Penicilamina , Piracinamida, Cloramfenicol, Fenacetinas, Melfalín, Aziatropina,
Mostaza nitrogenada, Isoniacida), tóxicos(plomo, etanol.), hemopatías
(anemias hemolíticas, ndromes mieloproliferativos, mieloma, leucemias,
linfomas, anemia perniciosa); y otras condiciones (artritis reumatoidea,
hipotiroidismo, hipertiroidismo, carcinosis sea metastísica, insuficiencia renal
crónica, síndrome de Pearson).

Tratamiento:

Administrar vitamina B6 o fosfato de piridoxal.

ANEMIAS MEGALOBLÁSTICAS

La anemia megaloblástica, es un tipo de anemia caracterizada por la presencia

de glóbulos rojos muy grandes. Además del gran tamaño de estos glóbulos, su
contenido interno no se encuentra completamente desarrollado.

En la anemia megaloblástica existe una disminución de las síntesis del ADN,

con detención de la maduración que compromete a las líneas celulares.

Este trastorno es producto de la síntesis defectuosa de ADN y RNA, que lleva a

la producción de ―megaloblastos‖ debido a un mayor aumento de la masa y la
maduración citoplasmática con respecto a la nuclear.

107
 Causas

 deficiencia de ácido fólico

 Deficiencia de vitamina B12.

Síntomas

 Palidez anormal o pérdida de color en la piel

 Disminución del apetito
 Irritabilidad
 Falta de energía o cansancio injustificado (fatiga)
 Diarrea
 Dificultad para caminar
 Entumecimiento u hormigueo en pies y manos
 Lengua lisa y sensible
 Debilidad muscular

Dentro de los exámenes a realizar están:

Biometría hematica, aspirada de MO, prueba de Schilling (absorción de B12)

CONCEPTO Y CARACTERES GENERALES

Las anemias megaloblásticas, causadas por deficiencia de folato o vitamina

B12, tienen en común una alteración en la síntesis del ADN, ya que tanto el folato
como la vitamina B12, participan en una reacción necesaria para la síntesis de
dicho ADN, que consiste en la formación de timidilato a partir de uridilato.
A causa de la disminución de velocidad de síntesis de ADN, se produce un
retardo en la división celular, y esta alteración provoca los cambios morfológicos
característicos de las anemias megaloblásticas, consistentes en un gran tamaño
de los precursores de las células sanguíneas en la médula ósea y en la sangre
periférica. Como el trastorno afecta también a otras series hematológicas, es
frecuente la pancitopenia. En la médula ósea de las anemias megaloblásticas,
además de un crecimiento en el tamaño de los precursores hematopoyéticos, se
produce un aumento de la población hematopoyética, a consecuen cia del retardo
en la división celular.
También puede ocasionarse la destrucción intramedular de las células
hematopoyéticas (situación de eritropoyesis ineficaz). La sangre periférica se
caracteriza por hematíes de gran tamaño (macroovalocitos, con un aumento de
VCM y también del HCM), neutrófilos hipersegmentados y reticulocitos no
aumentados.

108
 Entre las alteraciones bioquímicas, es muy característica de las anemias
megaloblásticas la elevación de LDH sérica, al igual que en las hemólisis, como
consecuencia de la destrucción de las células hematopoyéticas en la médula ósea
(eritropoyesis ineficaz). Una de las características más útiles en el diagnóstico de
las anemias megaloblásticas es la presencia de neutrófilos hipersegmentados. Sin
embargo, hay que tener en cuenta que dicha alteración desaparece cuando el
enfermo ha recibido tratamiento.

ANEMIA POR DEFICIENCIA DE VITAMINA B12

Metabolismo

La vitamina B12, también denominada cobalamina por presentar cobalto en su

molécula, aparece en alimentos de origen animal. Los almacenes de vitamina B12
se sitúan fundamentalmente en el hígado, y su nivel es tan elevado que la
deficiencia tarda años en producirse. Mediante la acción de los jugos gástricos, se
produce una liberación de la cobalamina de las proteínas del alimento. A
continuación, la vitamina B12 se une al factor intrínseco (elaborado por las células
parietales gástricas), que va a transportar a la vitamina B12 a lo largo del todo el
intestino delgado hasta el íleon terminal, donde, a partir de receptores específicos,
se produce la absorción de la vitamina B12 hacia el plasma. En la sangre la
vitamina B12 está unida a la transcobalamina. La transcobalamina II es la principal
proteína de transporte de la vitamina absorbida ―de novo‖, pero presenta una corta
vida media. Dicha transcobalamina es sintetizada en el hígado. La
transcobalamina I (sintetizada en los neutrófilos) transporta la mayor parte de la
vitamina B12 circulante como consecuencia de su mayor vida media.
Etiología

1) Disminución de la ingesta: dietas vegetarianas estrictas.

2) Disminución de la absorción.
 Deficiencia de factor intrínseco: gastrectomía, anemia perniciosa o
enfermedad de Biermer (de la que se hablará posteriormente).
 Alteración intestinal, sobre todo del íleon terminal.
 Infestación por bacterias o parásitos (síndrome de sobrecrecimiento
bacteriano, Diphyllobothrium latum).

 Deficiencia de receptores ileales para factor intrínseco (síndrome de

Imerslund).
 Alteraciones pancreáticas.

109
  Fármacos (anticonceptivos, alcohol, colestiramina).
3) Alteración en la utilización: inactivación de la vitamina B12 de almacén
mediante el óxido nitroso de la anestesia.
La causa habitual de deficiencia de cobalamina es la anemiaperniciosa. La
anemia perniciosa suele ser una enfermedad que aparece en edades avanzadas,
en razas nórdicas y que presenta agrupación familiar. El trastorno consiste en una
gastritis crónica atrófica, que ocasiona destrucción de las células parietales
gástricas, lo que produce disminución del factor intrínseco, y como consecuencia,
carencia de absorción de vitamina B12. Se trata de un proceso autoinmune,
objetivándose en el suero del enfermo anticuerpos contra células parietales y
contra el factor intrínseco (más específicos). Por ello se asocia a otros trastornos
autoinmunes, sobre todo tiroideos. La anemia perniciosa es un proceso
premaligno, por lo cual es necesario el seguimiento del enfermo para diagnóstico
precoz de cáncer gástrico. Debe tenerse en cuenta que por la destrucción de las
células parietales, se ocasiona aclorhidria, que puede a su vez ocasionar una
disminución de la absorción del hierro de los alimentos.

Diagnóstico de la deficiencia de Cobalamina

La forma más sencilla consiste en determinar la concentración sérica de

vitamina B12, aunque no siempre está disminuida. Se puede observar también un
incremento en la eliminación urinaria de metilmalónico (que no se objetiva en la
deficiencia de folato), al igual que los niveles séricos de dicha sustancia y
homocisteína.

Clínica de la deficiencia de Cobalamina

Además de las citadas alteraciones hematológicas, que afectan no solamente a

la serie roja, sino también al resto de las series hematopoyéticas, se objetivan los
siguientes trastornos: alteraciones digestivas (glositis atrófica de Hunter y
malabsorción por afectación de la mucosa intestinal), alteraciones neurológicas
que son motivadas por alteración en la mielinización, ya que la vitamina B12
participa en la formación de una sustancia imprescindible para la formación de
mielina (la s-adenosilmetionina). Las alteraciones neurológicas más frecuentes
son las polineuropatías. La alteración más característica es la denominada
degeneración combinada subaguda medular, en donde se producen alteraciones
en los cordones lateralesy posteriores de la médula espinal, manifestadas por
alteración de la sensibilidad vibratoria y propioceptiva. En fases avanzadas se
puede ocasionar demencia (descartar siempre la deficiencia de cobalamina en
personas con demencia, ya que, tratadas precozmente, pueden mejorar, al igual
que en la demencia provocada por hipotiroidismo). Cuando hay deficiencia de
cobalamina, la médula ósea y el sistema nervioso compiten entre sí para
aprovechar la escasa vitamina. Por ello, característicamente, las alteraciones

110
neurológicas no siempre se presentan con alteraciones hematológicas, e incluso
los trastornos neurológicos más graves se suelen ver en enfermos con anemias
poco importantes.

Tratamiento

Administración de vitamina B12, parenteral en el caso de la anemiaperniciosa

donde debe ser de por vida. Se produce una respuesta reticulocitaria rápida al
cuarto o quinto día. Es aconsejable la administración de ácido fólico, ya que la
deficiencia de cobalamina ocasiona a su vez un déficit intracelular de folato.
Imprescindible seguir la eventual transformación de la gastritis crónica de la
anemia perniciosa en carcinoma gástrico.

ANEMIA POR DEFICIENCIA DE ACIDO FÓLICO

Es el ácido pteroil-L-glutámico. Es una vitamina B que ayuda a prevenir los

defectos congénitos relacionados con el cerebro y la médula espinal Es sintetizado
por las bacterias de la flora intestinal y alimentos como una necesidad diaria de
50-100υg.

Anemias megaloblasticas por deficit de ácido fólico:

Las causas pueden ser:

 Dieta inadecuada
 Aumento de necesidades
 Síndrome de mala absorción

111
112
 TÉCNICAS HEMATOLÓGICAS BÁSICAS

La Hematología es la especialidad médica que se dedica al tratamiento de los

pacientes con enfermedades hematológicas, para ello se encarga del estudio e
investigación de la sangre y los órganos hematopoyéticos (médula ósea, ganglios
linfáticos, bazo, etc) tanto sanos como enfermos.

La hematología es la rama de la ciencia médica que se encarga del estudio de

los elementos formes de la sangre y sus precursores, así como de los trastornos
estructurales y bioquímicos de estos elementos, que puedan conducir a una
enfermedad.

La hematología es una ciencia que comprende el estudio de la etiología,

diagnóstico, tratamiento, pronóstico y prevención de las enfermedades de la
sangre y órganos hemolinfoproductores. Los especialistas en este dominio son
llamados hematólogos.

Existen unas técnicas básicas sencillas que permiten ofrecer al medico unos
datos de laboratorio de gran interés para el diagnostico y el seguimiento de un
gran número de enfermedades.

Al conjunto de determinaciones que ofrece una información sobre el estado

físico del enfermo se le denomina hemograma.

Las determinaciones que constituyen el hemograma son:

113
Además de los índices eritrocitarios:

114
 MÉTODOS DE EXTRACCIÓN DE SANGRE

Los métodos para la extracción de sangre, que generalmente es la venosa son

utilizados en el laboratorio para la realización de las técnicas hematológicas y en
base de esto dar los resultados o dar un diagnostico con mayor certeza.

Obtención de sangre venosa

Materiales requeridos:

 Algodón.
 Alcohol al 70%.
 Ligadura o torniquete de 25 a 30 cm de largo.
 Jeringas de 5 ml.
 Viales con anticoagulante EDTA.

Obtención de la muestra:

 Verificar que los elementos por utilizar estén listos, y que el paciente se
sienta cómodo.
 Aplicar el torniquete aproximadamente cuatro dedos por encima de la
flexión del codo o a 10 cm del codo, sujetar con un medio nudo.
 Limpiar la zona con alcohol al 70% o alcohol yodado, en un área de 2
pulgadas.
 El paciente deberá abrir y cerrar la mano durante unos segundos y después
la mantendrá cerrada, esto ayudará a visualizar las venas superficiales.
 Se retira el estuche protector de la aguja y se coge la jeringa de tal manera
que el bisel se encuentre hacia arriba.
 Se coloca la aguja en dirección paralela a la vena, se perfora la piel
haciendo avanzar la aguja 0,5-1 cm en el tejido subcutáneo, luego se
perfora la vena.
 Se aspira la jeringa hasta el volumen requerido.
 Retirar el torniquete e indicar al paciente que deje de hacer puño. Se coloca
el algodón seco encima de la punción y se retira la aguja.
 Retirar la aguja de la jeringa. Verter la muestra lentamente por las paredes
del vial con anticoagulante.
 Agitar el vial en círculos sobre la mesa para homogeneizar la muestra con
el anticoagulante.

115
Puntos para la extracción de sangre
(Toma de muestra)

Se obtiene de las venas de la fosa cubital

116
 Obtención de sangre capilar

Cuando la cantidad de sangre que se precisa es muy pequeña o cuando por

diferentes motivos no pueda practicarse una punción venosa, debe recurrirse a la
punción capilar.

Materiales requeridos:

 Algodón.
 Alcohol al 70%.
 Lancetas desechables.

Procedimiento

 La sangre capilar se obtiene de la cara lateral del dedo medio o anular en

los adultos y del dedo gordo del pie o talón en los niños.
 Desinfectar la zona con alcohol al 70%, secar con algodón estéril.
 Punzar la piel con una lanceta estéril desechable (2 mm de profundidad).
 Usar gasa estéril para desechar la primera gota y recoger las siguientes en
tubos capilares. Evitar comprimir la extremidad para obtener sangre porque
se altera la composición sanguínea.

117
TÉCNICAS MANUALES

Recuento de glóbulos rojos

Principio

La sangre se diluye en un líquido que nos permite observar claramente los

hematíes, luego esta dilución se coloca en una cámara de Neubauer con la ayuda
de una pipeta automática o pipeta Pasteur y se cuentan en el microscopio a un
objetivo de 40x para calcular el número de glóbulos rojos por mm3.

Equipos

 Microscopio.
 Hemocitómetro (cámara de Neubauer).

118
 Materiales y reactivos requeridos

 Pipeta de glóbulos rojos (De Thoma) o pipeta automática (de 0-100 mL).
 Presenta cerca del extremo superior una marca de 101, inmediatamente
continúa una dilatación (bulbo) que contiene una perla roja mezcladora,
luego sigue el tallo (extremo más largo), el cual está dividido en 10 partes
con 2 marcas: 1 acabando el bulbo y 0,5 a la mitad del tallo. Se requiere
igual que el recuento de leucocitos una boquilla para aspirar.
 Diluyente de glóbulos rojos: Cloruro de Sodio al 0,9% (ver anexo).
 Diluyente de Hayem (ver anexo).
 Contador manual (sólo si fuera necesario).
 Papel filtro.

Procedimiento

1) Mezclar la sangre obtenida con el anticoagulante o tomar sangre capilar.

2) Llenar la pipeta de glóbulos rojos con sangre hasta la marca de 0,5 para
realizar una dilución de 1/200, y si se carga hasta 1, la dilución será 1/100. Limpiar
la punta con gasa o papel absorbente.
3) Introducir la pipeta en el tubo o frasquito conteniendo diluyente (Hayem) y
llenar de líquido de dilución hasta la marca de 101.
4) Se coloca en un rotador automático o se hace rotar manualmente de
5) 2 a 3 minutos.
6) Agitar bien la pipeta y descartar 3 a 4 gotas del tallo, luego colocar una gota
pequeña cerca de un extremo de la cámara para que por capilaridad se llene
exactamente.
7) Hacer el recuento con objetivo de 40x.
8) Se puede realizar con la pipeta automática, se toma 20 mL (0,02mL)
9) de sangre total con anticoagulante, o sangre capilar y se deposita en un
tubo de 12 x 75 que contenga 4 mL de solución de Hayem (aquí setiene una
dilución de 1:200). Se deja reposar aproximadamente 5minutos y se procede a

119
cargar la cámara con la misma pipeta usandoun nuevo tip. El inconveniente aquí
es el gasto de reactivo (4 mL) perolas medidas son mas exactas.
10) Dejar en reposo por 3 minutos.
11) Enfocar la cuadrícula a 10x, luego con el objetivo de 40x contar sobre
12) el cuadrado grande central de la cámara sólo en 5 cuadrados pequeños:
uno central y cuatro angulares (80 cuadraditos en total).
13) En el recuento se incluyen las células que cubren o tocan por dentro
14) por fuera las líneas limitantes superior e izquierda en el cuadrado pequeño
de recuento y no se consideran los correspondientes a los límites inferior y
derecho. Se hace el recuento en los puntos ABCD y E y se sigue los mismos
parámetros del recuento de leucocitos.

Resultados

Nº de hematíes x mm3
= hematíes contados en 5 cuadrados pequeños / altura x dilución X área

Reemplazando
= hematíes contados en 5 cuadrados pequeños/
1/10 x 1/200 x 1/5
= hematíes contados en 5 cuadrados pequeños/

120
 1/10 000
= hematíes contados x 10 000

Valores de referencia

(Unidades tradicionales millones de células/mm3).

Hombres 4 500 000 - 5 500 000
Mujeres 4 000 000 - 5 000 000
Niños (4 años) 4 200 000 - 5 200 000

Lactantes (1 - 6 meses) 3 800 000 - 5 200 000

Recién nacidos 5 000 000 - 6 000 000
Determinación del volumen globular (hematocrito)

Mide la fracción que comprende a los glóbulos rojos (masa globular), respecto
al volumen total de la muestra de sangre venosa o capilar. Puede expresarse en
porcentaje o como valor decimal.

Hto
= altura de la columna de glóbulos rojos altura de la columna de sangre total
(glóbulos rojos más plasma)

Método de Wintrobe

Materiales requeridos:

 Tubo de Wintrobe graduado de 0 - 100 mm.

 Pipetas Pasteur o pipetas de transferencia.
 Tapón de goma.

121
 Procedimiento:

1) Llenar la sangre extraída con anticoagulante con una pipeta pasteur,

comenzando desde el fondo hasta la marca superior de 100 mm, teniendo cuidado
de no provocar espuma.
2) Tapar el tubo con un tapón de goma para evitar la evaporación.
3) Centrifugar a 3000 rpm por 30 minutos.

Resultados (lectura):

Del tubo graduado se mide directamente el nivel de la columna de glóbulos

rojos.

Valores de referencia:

Hombres: 40% - 54%

Mujeres: 38% - 48%

Método de microhematocrito

Materiales requeridos:

 Capilares rojos y azules (75 mm x 1,5 mm).

 Plastilina.

Procedimiento:

1) Tomar la muestra en capilares rojos heparinizados directamente del pulpejo

del dedo, o utilizar capilares azules sin heparina para sangre venosa con
anticoagulante de Wintrobe o EDTA. Debe llenarse aproximadamente 70% - 80%
del capilar.
2) Ocluir (tapar) un extremo del capilar con plastilina.
3) Colocar el capilar sobre la plataforma del cabezal de una centrífuga de
microhematocrito, con el extremo ocluido adherido al reborde externo de la
plataforma.
4) Centrifugar por 5 minutos entre 10 000 - 12 000 rpm.

122
 Resultados (lectura):

La lectura se realiza con una escala estandarizada que expenden en el

comercio.
Uso de la escala:
Sostenga el tubo frente a la escala de manera que el fondo de la columna de
eritrocitos (no el extremo inferior del tubo) quede exactamente al mismo nivel de la
línea horizontal correspondiente al cero.
Desplace el tubo a través de la escala hasta que la línea marcada con el
número 1,0 quede al nivel del tope de la columna de plasma. Vigile que el fondo
de la columna de eritrocitos continúe sobre la línea cero. El tubo debe encontrarse
completamente en posición vertical.
La línea que pase al nivel del tope de la columna de eritrocitos indicará la
fracción de volumen de éstos.

Valores de referencia:

Hombres 40% - 50%

Mujeres 38% - 44%

Niños (5 años) 38% - 44%

Lactantes (3 meses) 37% - 42%

Recién nacidos 50% - 58%

123
 ÍNDICES CORPUSCULARES

Se denomina índices corpusculares o constantes eritrocitarios a una serie de

valores que se calculan a partir de los datos de hematocrito, concentración de
hemoglobina y número de hematíes, son principalmente tres:

VCM: Volumen Corpuscular Medio.

HCM: Hemoglobina Corpuscular Media.

CHCM: Concentración de Hemoglobina Corpuscular Media.

VCM: Volumen Corpuscular Medio.

VCM (micrómetros cúbicos) = Hematocrito en porcentajes X10

Núm. hematíes/mm3 en millones

Ejemplo: si el hematocrito de un paciente es de 41 por 100 y su recuento de

eritrocitos es de 4,5 X 106/mm3 su VCM será:

VCM = (41/4,5) X 10= 91 micrómetros cúbicos.

Los valores normales son de 85 +- 10 micrometros. Valores por encima de 95

se denominan macrocitosis y por debajo de 75 microcitosis.

HCM: Hemoglobina Corpuscular Media.

HCM= hemoglobina en gramos/decilitro X 10

Núm. hematíes/mm3 en millones

Ejemplo: si la hemoglobina de un paciente es de 16 g/dl y su recuento de

hematíes 5,5 X 106/mm3 su HCM será:

HCM= (16/5,5) X 10= 29 picogramos

124
 Los valores normales don de 29 +- picogramos. Valores por encima de 32 pg
indican hipercromía y por debajo de 29 pg hipocromía.

CHCM: Concentración de Hemoglobina Corpuscular Media.

CHCM= Hemoglobina en gramos por decilitro X 100

Hematocrito en porcentaje

Ejemplo: Si la hemoglobina de un paciente es de 17 g/dl y si hematocrito 44 por

100 su CHCM será:

CHCM = (15/44) X 100 = 34 por 100

Los valores normales son de 32 +- 3 por 100. Valores por encima de 35son
hipercromicos y por debajo de 30 hipocromicos.

REALIZACIÓN Y TINCIÓN DEL FROTIS SANGUÍNEO

La práctica del frotis sanguíneo, también llamado extendido, es de gran
importancia en hematología ya que el diagnóstico de muchas enfermedades
hematológicas puede realizarse con sólo observar las características morfológicas
de las células sanguíneas, de manera que éste no debe ser excesivamente grueso
ni excesivamente fino. Todas las láminas por usar, sobre todo nuevas, deben ser
limpiadas con algodón y alcohol al 70% para eliminar la grasa que viene adherida.

Método con los dos portaobjetos

Consiste en la extensión de una gota de sangre sobre un portaobjeto (25 x 75),
empleando el canto biselado de otro portaobjeto de igual dimensión.

Materiales:

 Alcohol al 70%.
 Algodón.

125
  Sangre venosa o capilar.
 Portaobjetos de vidrios limpios y desgrasados (25 x 75 mm).

Procedimiento:

 Una vez extraída la sangre con cualquiera de las metodologías, se coloca

una pequeña gota de sangre (5mL) (aprox. 3 mm de diámetro) sobre un
portaobjeto a 2 cm aproximadamente de uno de los extremos.
 Colocar el canto de otro portaobjeto esmerilado sobre la superficie del
primer portaobjeto (en la que se encuentra la gota de sangre) formando un
ángulo de 45º.
 Deslizar suavemente y a velocidad moderada el portaobjeto sobre el otro en
sentido longitudinal, hasta que la gota de sangre quede bien extendida
sobre la superficie del primer portaobjeto. El grosor del frotis sanguíneo
puede variar según sea el ángulo que formen entre sí ambos portaobjetos.
Así, si es superior a 45º, la extensión obtenida será gruesa y corta, si es
inferior a 45º será larga y fina. El secado del frotis es a temperatura
ambiente y en posición horizontal.

Zona excesivamente gruesa: Se halla en la región inmediata al punto de partida

de la extensión (cabeza). En ella se aprecia siempre un aumento de linfocitos.

Zona excesivamente fina: Corresponde al final de la extensión y termina en un

área donde las células adoptan una posición acartonada (barbas). En esta región
existe un exceso de granulocitos y monocitos.

Zona ideal: Corresponde a la región intermedia del frotis y en ella existe un

reparto equilibrado de células.

126
 COLORACIONES USADAS

Una vez seco el frotis, se procede a la tinción hematológica con el colorante de

Romanowsky, constituido por la mezcla de eosina y azul de metileno. Dentro de
éstas tenemos:

1) Colorante de Giemsa.
2) Colorante de May-Grunwald.
3) Colorante de Wright.
4) Colorante de Leishman.

Tinción de Wright
Una vez seco el frotis, se procede a la tinción hematológica. El colorante de
Wright va a permitir suministrar un medio para estudiar la sangre y determinar las
variaciones y anormalidades de estructura, forma y tamaño de los eritrocitos, su
contenido de hemoglobina y sus propiedades de coloración. La información
obtenida de un frotis de sangre periférica depende en gran parte de la calidad del
extendido y la coloración.

Materiales:

 Colorante de Wright.
 Frotis sanguíneo.
 Solución amortiguada Buffer.

Procedimiento:
 Una vez obtenido el frotis sanguíneo, se le dejará secar entre 15 y 20
minutos.
 Luego se coloca la preparación en un soporte y se cubre con el colorante
de Wright, dejándolo por espacio de 5 minutos.
 Posteriormente se añade solución amortiguada Buffer, dejando 3 minutos
adicionales.
 Finalmente se lava con agua corriente y se deja secar.
 Se coloca en el microscopio y, con pequeño aumento, se revisa la calidad
de la coloración, la cantidad aproximada de glóbulos blancos y se escoge el
sitio para iniciar el recuento. Se coloca una gota de aceite de inmersión y se
enfoca a un aumento de 100x.

Coloración excesivamente azul, debido a:

 Frotis excesivamente grueso.
 Lavado insuficiente.
 Tinción muy prolongada.

127
  Empleo de colorante excesivamente alcalino.

Coloración con una tonalidad rosada:

 El colorante, el tampón o el agua de lavado tienen un pH demasiado ácido.

Presencia de precipitados:
 Obedecen a una acción excesiva del colorante. Esto se puede evitar con la
filtración.

FÓRMULA LEUCOCITARIA

La fórmula leucocitaria tiene por objetivo determinar los porcentajes de las

distintas clases de leucocitos normales y anormales en la sangre. A partir de los
porcentajes puede incluso calcularse el número real de cada clase de leucocitos
por mm3 de sangre (valor absoluto), conociéndose el total de leucocitos.

Por ejemplo:
Si se tiene 60% de neutrófilos segmentados y el recuento total de leucocitos
total es de 20 000, entonces la cifra absoluta de neutrófilos segmentados sería:
60/100 x 20 000 = 12 000 (valor absoluto)
Valores de referencia absolutos de neutrófilos segmentados = 3000 - 5000

Conclusión: Los valores relativos sólo nos sirven cuando los valores totales de
leucocitos se encuentran dentro del valor normal. En caso contrario (leucocitosis o
leucopenia) se debe emplear la fórmula para obtener el valor real, y así determinar
que elemento celular se encuentra fuera del rango normal, sea elevado o
disminuido.

Procedimiento

1) Se examina la lámina a pequeño aumento para comprobar si los elementos

celulares están bien distribuidos.
2) Si es favorable se examina con el objetivo de inmersión. La parte ideal para
visualizar células para la fórmula leucocitaria es en la parte final del cuerpo y
comienzos de la cola, recorriendo la lámina de izquierda a derecha o de arriba
hacia abajo hasta contar 100 leucocitos incluidos los agranulocitos y granulocitos.
Aquí no se incluyen los elementos inmaduros de sangre roja.
3) A medida que se va contando, se va anotando el número de cada una de
las clases de glóbulos blancos observados.
4) Se determina luego los porcentajes de cada uno de ellos para luego
comparar con los porcentajes normales.
5) Si se tiene en el recuento de leucocitos valores por encima de 10 000 y por
debajo de 5000 se debe repetir el recuento.

128
 Valores de referencia

Leucocitos Valores relativos (%) Valores absolutos

(%)

Neutrófilos 55-65 3000-5000

segmentados

Neutróifilos cayados 3-5 150-400

Eosinófilos 0.5-4.0 20-350

Basófilos 0-0.5 10-60

Monocitos 4-8 100-500

Linfocitos 25-35 1500-4000

129
 Recuentos celulares.

Los recuentos celulares son una serie de procedimientos que tienen por objeto
determinar el número de cada uno de los tipos celulares que están comprendidos
en una unidad de volumen de sangre (generalmente, en 1 mm3).

Todos los recuentos celulares constan de 3 fases descritas a continuación.

 Dilución de la sangre.
 Cómputo del número de células.
 Cálculo matemático del número de células presentes en 1 mm3 de
sangre.

Los recuentos celulares pueden realizarse mediante métodos manuales

(recuentos en cámara) o automáticos (recuentos en contadores electrónicos),
siendo éstos los dos bloques diferenciados en el presente tema. La primera
opción, tal y como podremos descubrir a lo largo del tema, se encuentra
actualmente en desuso debido al amplio margen de error de la técnica. Otro de los
motivos a destacar es la falta de operatividad en los laboratorios actuales debido a
la necesidad de tiempo invertido y elevado volumen de trabajo.

Recuento manual o recuento en cámara.

El recuento de los distintos elementos formes presentes en sangre, es una de

las prácticas más antiguas en hematología. Siendo además muy útiles los
resultados obtenidos en estos puesto que permiten la detección e alteraciones
cuantitativas (en la cantidad o número) de las distintas células sanguíneas.

 Recuento de plaquetas. En determinadas situaciones patológicas

(alteraciones en el tamaño de las plaquetas) el recuento automático no
resulta efectivo, puesto que el aumento de tamaño de dichas células no
permite al aparato diferenciarlas de otras células sanguíneas de un tamaño
mayor.
 Estudio celular en otras muestras biológicas. Existen otras muestras
biológicas ( líquido cefalorraquídeo, peritoneal y otros muchos), en los que
a menudo es necesario llevar a cabo el recuento de hematíes o leucocitos
que por situación patológica se encuentra en ellos. No se realiza
automáticamente, sino que se opta por la práctica de un recuento en
cámara.

Por ello, además de por la inclusión de este apartado dentro de la Legislación

Vigente para el presente Ciclo Formativo, procederemos al estudio de dicha
técnica.

130
 Material necesario.

Cámara de Neubauer.

También se llama cámara cuentaglóbulos o hemocitómetro. Consiste en una

placa gruesa de cristal con forma de porta, cuya porción central está dividida en 3
ejes perpendiculares al eje longitudinal de la cámara. De ellas, las dos laterales se
hallan sobreelevadas 0.1 mm con respecto a la central, y en esta última hay
grabado un retículo cuadrangular ( cámara simple).

La banda central puede estar, a su vez, subdividida en 2 semi bandas idénticas

y separadas por un surco paralelo al eje longitudinal de la cámara ( cámaras
dobles). En cada una de estas dos semibandas hay grabado un retículo idéntico
que facilitará el recuento celular.

No todas las cámaras de recuento son iguales, la más utilizada en hematología

es la cámara de neubauer. Se trata de una cámara doble, cuyos retículos ( 2 al
tratarse de una cámara doble) se denominan retículos de neubauer. La siguiente
figura muestra las dimensiones de dicho retículo:

Tal y como puede apreciarse en la figura, cada retículo se divide en nueve

cuadrados grandes de 1mm de lado. Siendo los cuadrados de las esquinas los
destinados al recuento de leucocitos ( al existir éstos en menor número que

131
hematíes, se precisa menor número de líneas de referencia), a su vez dichos
cuadrados se subdividen en 16 cuadrados denominados medianos de 0.25 mm de
lado.

El cuadrado central es el destinado al recuento de hematíes y plaquetas. Dicho

cuadrado se subdivide en 25 cuadrados medianos ( 0.2mm de lado), y a su vez
éstos se subdivide en 16 cuadros denominados pequeños. Por tanto el número
total de cuadraditos constituyentes del cuadro central es de 400 cuadrados.

cubreobjetos.

Preferiblemente, debe ser algo más grueso que los normalmente utilizados. Se
coloca de forma que apoye sobre las dos bandas laterales de la porción central de
la cámara. De esta manera, queda delimitado un espacio entre la banda central y
el cubre en el que se deposita la muestra y cuyo espesor es de 0,1 mm.

Algunas cámaras también constan de dos pinzas especiales que parten, cada
una, de una de las porciones laterales de la cámara y que tienen por misión la de
asegurar la fijación del cubre a la misma.

PIPETAS DILUIDORAS DE THOMA.

Son unas pipetas especiales de cristal que constan de un largo tubo capilar
graduado y de una dilatación ampular o bulbo.

El tubo capilar termina en punta, a nivel de uno de sus extremos, y se continúa

con el bulbo, a nivel del otro de sus extremos. Además, está dividido en 10 partes
iguales, y en su superficie están especialmente bien marcadas la 5a división (con
un 0,5) y la 10ª (con un 1).

132
 El bulbo contiene una perla de vidrio para facilitar la mezcla de la sangre con el
líquido de dilución, y acaba en un tubo capilar corto. La perla de vidrio es roja en
las pipetas empleadas para el recuento de hematíes, y blanca en las usadas para
el recuento de leucocitos. Además, en las pipetas para hematíes la capacidad del
bulbo es 100 veces superior a la del tubo capilar largo, por lo que en el tubo
capilar corto hay una marca de 101, Y en las pipetas para leucocitos la capacidad
del bulbo es 10 veces mayor que la del tubo capilar largo, por lo que en el tubo
capilar corto hay una marca de 11.

GOMA DE ASPIRACIÓN Y BOQUILLA.

Es un tubo de goma que permite la aspiración de la muestra y del líquido de

dilución.

En uno de sus extremos tiene encajada una boquilla, y por el otro se ensambla
al tubo capilar corto de cualquiera de las pipetas de Thoma. Al tubo se le aplica
una boquilla por la cual el técnico procederá a la aspiración. Todo ello queda
reflejado en la siguiente figura.

133
 Reactivos.

Como reactivo se utiliza líquido de dilución. Existen varios tipos. Su composición

varía según el tipo de células que se pretende contar.

Los que se utilizan para el recuento de hematíes contienen cloruro sódico para
hacerlos isotónicos con respecto al plasma y evitar, de esta forma, la hemólisis.
Pero algunos incorporan también anticoagulantes como el citrato de sodio, e
incluso antisépticos como la formalina.

Los que se emplean para el recuento de leucocitos contienen una sustancia,

como el ácido acético glacial que rompe los hematíes y un colorante, como el
violeta de genciana, que tiñe el núcleo de los leucocitos.

Los que se usan para el recuento de plaquetas pueden incorporar una sustancia
hemolítica y un antiagregante plaquetario.

Los líquidos diluyentes más utilizados son el de Hayem, para el recuento de

hematíes, y el de Turck, para el recuento de leucocitos.

Muestra problema.

Sangre capilar o venosa anticoagulada con EDTA. Esta sangre se utilizará

convenientemente diluida.

134
 Limpieza del material.

Con respecto a la limpieza de la cámara de neubauer, tras su uso, ha de ser

aclarada con agua tibia y posteriormente debe secarse con un paño suave y limpio
dejándola al aire.

Tras el empleo de las pipetas de Thoma, éstas deben lavarse interiormente del
siguiente modo:

 Primero, haciendo pasar a través de ellas agua corriente, una vez.

 Luego, haciendo pasar a través de ellas agua destilada, 3 veces.
 Finalmente, haciendo pasar a través de ellas acetona o alcohol de 95°,
otra vez.

Tras ello, ha de secarse su interior, preferentemente mediante un secador de aire.

GENERALIDADES ACERCA DEL RECUENTO MANUAL.

Atendiendo al elemento forma del cual queramos llevar a cabo el recuento,

además de utilizar un líquido de dilución diferente, la dilución a realizar también
será distinta, lo cual se encuentra directamente relacionado con el número de
cada tipo celular presente en la muestra sanguínea en condiciones normales.

Las diluciones a realizar en cada caso, así como las indicaciones para la
correcta práctica de la dilución y llenado de la cámara se expondrán en las
prácticas correspondientes en cada caso.

Como generalidad importante, debemos citar que en todos los casos, una vez
llevemos a cabo el recuento de las células correspondientes en las regiones
apropiadas de la cámara ( dependiendo del tipo celular objeto de estudio), los
resultados deben ser referidos a un volumen ( lo conseguimos al conocer las
dimensiones del retículo y cómo no la altura de la cámara) y al tiempo ser
corregidos por el factor de dilución utilizado. Sólo de este modo expresaremos los
resultados tal y como es debido: número de células ( leucocitos, hematíes o
plaquetas) / mm3.

Por otro lado, es necesario remarcar el amplio margen de error presentado por
el método que nos ocupa en estos momentos. La técnica de recuento manual se
caracteriza presentar un alto margen de error motivado por:

 Errores en la práctica de la dilución.

 Contaminación del líquido de dilución.
 Error en el montaje y / o llenado de la cámara.
 Error en los cálculos a realizar.
 Error en el recuento propiamente dicha.

135
 El margen de error puede disminuirse con una buena práctica y destreza del
operador, pero existe una sistemática a seguir para evitar o disminuir el error en el
recuento propiamente dicho, puesto que de no ser así, sería sencillo que una
célula fuese contada por partida doble o a la inversa.

La sistemática a seguir es la siguiente:

El recuento presupone un conocimiento exacto de las líneas límite de las

cámaras de conteo utilizadas. Éstas se pueden ver en la ilustración.

Para que las células, que están en o cerca de las líneas de limitación, no se
cuenten dos veces o se sobrepasen en el conteo, hay que atenerse a
determinadas reglas. Se cuentan todas las células dentro de una zona de
medición definida. También se cuentan las células (marcadas en negro), que se
apoyan o tocan en las 2 caras: la línea de medida izquierda y superior.

Esto también es válido para el tipo de la operación de conteo propiamente

dicha, que debe efectuarse en forma de meandro.

El recuento se efectúa en el ángulo superior izquierdo en dirección de la flecha.

136
RECUENTO AUTOMÁTICO: CONTADORES ELECTRÓNICOS.

Los autoanalizadores hematológicos o contadores electrónicos, son actualmente

la opción en los laboratorios modernos. El margen de error obtenido mediante los
métodos manuales, el cual oscila en torno al 20%, se ve disminuido enormemente
con el desarrollo de estos aparatos, siendo el margen de error en torno o incluso
inferior al 1%.

Tal y como se podrá observar a lo largo de este apartado, como norma general los
contadores electrónicos no se limitan a llevar a cabo el recuento celular de los
distintos elementos formes. Por lo general proporcionan los resultados de todos y
cada uno de los parámetros constituyentes del hemograma.

COMPONENTES QUE CONSTITUYEN EL CONTADOR ELECTRÓNICO.

DILUIDOR.

Disminuye la concentración de la sangre hasta el nivel adecuado para el

funcionamiento del contador.

Generalmente diluye poco para el recuento de leucocitos (por ejemplo, a 1/300

en el contador ABX MICROSOT) y mucho para el recuento de hematíes (por
ejemplo, a 1/20.000 en el contador ABX MICROSOT). La dilución realizada por
dicho elemento variará dependiendo del contador electrónico en cuestión, aunque
todo ello no es necesario que sea tenido en cuenta en el trabajo del técnico.

Como líquido diluyente utiliza una solución isotónica con capacidad conductora.

137
 COMPRESOR- ASPIRADOR.

Aporta la presión y el vacío necesarios para transportar la sangre,

convenientemente diluida, al dispositivo de medida.

DISPOSITIVO DE MEDIDA.

Es la cámara donde se cuentan realmente las células sanguíneas (cámara de

medida o de lectura). Su diseño depende del método de recuento utilizado por
cada modelo de contador.

Puede basarse en un sistema de detección celular por medida de la impedancia

o en sistemas ópticos de detección celular.

En los contadores electrónicos más avanzados, una válvula de cerámica reparte

la muestra hacia distintas cámaras de medida. Cada cámara de medida está
especialmente diseñada para el recuento de un tipo celular (glóbulos rojos,
leucocito s o plaquetas) o para determinación de hemoglobina.

TRANSDUCTOR.

Transforma las señales, procedentes del dispositivo de medida, en impulsos

eléctricos. Suele ser un fotomultiplicador.

DISCRIMINADOR.

Diferencia los impulsos eléctricos generados por cada uno de los tipos de células
sanguíneas.

PROCESADOR.

Recoge los datos obtenidos, los procesa y los proyecta en una pantalla.

REGISTRADOR.

Imprime en papel los resultados conseguidos.

MÉTOTODOS ELECTRÓNICOS DE RECUENTO CELULAR.

Cada contador electrónico, se basa en su propio fundamento para obtener los

resultados. En este apartado trataremos de adentrar al alumno en el interior del
autoanalizador, para que trate de entender cómo se hace posible el recuento.

138
 Lógicamente, no se recogen todos y cada uno de los fundamentos existentes,
pero si los más habituales e importantes.

MÉTODO DE LA RESISTENCIA ELÉCTRICA O DE LA IMPEDANCIA.

Es el utilizado por los primeros contadores, ya que fue descubierto por Coulter
en 1956. Se basa en lo siguiente:

 Mientras que las células sanguíneas conducen mal la electricidad, el

líquido diluyente es un buen conductor de la electricidad (posee una
gran conductividad eléctrica).
 El dispositivo de medida consiste en un pequeño orificio, a través del
cual se hace pasar la sangre diluida. Tiene colocados un electrodo a su
entrada y otro a su salida.
 También se hace pasar una corriente eléctrica constante a través de ese
mismo orificio.
 Si el orificio es atravesado solamente por líquido diluyente, la resistencia
eléctrica medida por los electrodos es mínima y constante, pero cuando
el orificio es atravesado por una célula sanguínea, se produce un
aumento de la resistencia eléctrica y un cambio de potencial entre los
electrodos.
 El número de señales eléctricas generadas indica el número de células
presentes en la sangre y la amplitud de estas señales es directamente
proporcional al volumen celular. De este modo es posible la
identificación de las células y por tanto el recuento.

MÉTODO DE LA DISPERSIÓN DE LA LUZ O DE LA DIFRACCIÓN.

MÉTODO DEL CAMPO OSCURO.

El dispositivo de medida consiste en un capilar por el que circula la sangre

diluida y que es atravesado por un haz de luz halógena.

Cuando no pasan células a lo largo del capilar, el haz de luz incide sobre una
zona no sensible (disco campo oscuro); pero si una célula pasa a través del
capilar, dispersa los rayos del haz luminoso hacia afuera del disco, donde son
captados por un fotodetector.

El número de señales luminosas detectado indica el número de células

presentes en la sangre, y la intensidad de la dispersión luminosa producida por
cada una de ellas es directamente proporcional al tamaño y contenido de las
células, siendo de este modo posible la identificación y por tanto el recuento.

139
 MÉTODO DEL RAYO LÁSER.

El dispositivo de medida consta de un detector situado detrás de un capilar por

el que circula un flujo continuo de sangre diluida; es pues un citómetro de flujo. Un
rayo láser atraviesa el capilar y se dirige hacia el detector.

Cuando no pasan células a lo largo del capilar, el rayo láser incide sobre el
detector, pero si una célula pasa a través del capilar, el rayo láser es interceptado
por ella y deja de incidir sobre el detector.

El número de interferencias indica el número de células presentes en la sangre,

y el grado de interferencia que produce cada célula a su paso es directamente
proporcional a su tamaño.

En estos contadores, la luz láser puede ser, por ejemplo, un láser de helio-neón
polarizado verticalmente a una longitud de onda de 632,8 nm (el empleado en los
contadores CELL-DYN 3000 y 3500 de los Laboratorios Abbott).

PARÁMETROS QUE DETERMINA UN CONTADOR ELECTRÓNICO.

Los modernos contadores electrónicos pueden llegar a determinar hasta más de

50 parámetros. Entre éstos cabe destacar los siguientes:

 Número de hematíes por mm3 de sangre.

 Porcentaje de reticulocitos.
 Número de leucocitos por mm3 de sangre.
 Fórmula leucocitaria.
 Número de plaquetas por mm3 de sangre.
 Índices hematimétricos (eritrocitarios, reticulocitarios, leucocitarios y
plaquetarios).
 Valor hematocrito.
 Concentración de hemoblobina en la sangre.
 Velocidad de sedimentación globular.

Todos estos parámetros constituyen las determinaciones analíticas incluidas en

el hemograma o también denominado perfil hematológico básico, del cual
trataremos en temas sucesivos.

140
 VELOCIDAD DE SEDIMENTACIÓN

La velocidad de sedimentación es un examen hematológico que no está incluido

en el desarrollo de un hemograma; sin embargo, es una prueba muy importante
por su gran sensibilidad, pues resulta normal en las enfermedades funcionales, así
como en los procesos inactivos o estrictamente locales.

MÉTODO DE WESTERGREN

Fundamento
Este examen mide la tendencia de los eritrocitos a sedimentar, al colocar sangre
anticoagulada en un tubo en posición vertical. Se lee macroscópicamente la
columna de plasma al cabo de una hora de reposo.

Materiales
 Tubos de Westergren.
 Soporte para tubos de Westergren.

Procedimiento

En un tubo que contiene 0,5 ml de anticoagulante citrato de sodio al 3,8% se

extrae sangre venosa, se mezcla mediante movimientos rotatorios sobre una
superficie lisa.
Se vierte mediante una pipeta Pasteur o una jeringa de metal en el tubo de
Westergren, el cual tiene una graduación de 0 a 200 mm de arriba hacia abajo
y presenta ambos extremos abiertos.
La sangre debe llenarse hasta la marca cero, se coloca en posición vertical sobre
una gradilla especial que obtura ambos extremos.

Resultados

Medir los milímetros descendidos de glóbulos rojos mediante la columna de

plasma por encima del paquete globular.

Valores de referencia

Hombres: 1 - 10 mm de altura/hora
Mujeres: 3 - 14 mm de altura/hora

RECUENTO DE GLÓBULOS ROJOS

Principio
La sangre se diluye en un líquido que nos permite observar claramente los
hematíes, luego esta dilución se coloca en una cámara de Neubauer con la ayuda

141
de una pipeta automática o pipeta Pasteur y se cuentan en el microscopio a un
objetivo de 40x para calcular el número de glóbulos rojos por mm3.

Equipos

 Microscopio.
 Hemocitómetro (cámara de Neubauer).

Materiales y reactivos requeridos

 Pipeta de glóbulos rojos (De Thoma) o pipeta automática (de 0-100 mL).
Presenta cerca del extremo superior una marca de 101, inmediatamente
continúa una dilatación (bulbo) que contiene una perla roja mezcladora,
luego sigue el tallo (extremo más largo), el cual está dividido en 10 partes
con 2 marcas: 1 acabando el bulbo y 0,5 a la mitad del tallo. Se requiere
igual que el recuento de leucocitos una boquilla para aspirar.
 Diluyente de glóbulos rojos: Cloruro de Sodio al 0,9% (ver anexo).
 Diluyente de Hayem (ver anexo).
 Contador manual (sólo si fuera necesario).
 Papel filtro.

Procedimiento

 Mezclar la sangre obtenida con el anticoagulante o tomar sangre capilar.

 Llenar la pipeta de glóbulos rojos con sangre hasta la marca de 0,5 para
realizar una dilución de 1/200, y si se carga hasta 1, la dilución será 1/100.
Limpiar la punta con gasa o papel absorbente.
 Introducir la pipeta en el tubo o frasquito conteniendo diluyente (Hayem) y
llenar de líquido de dilución hasta la marca de 101.
 Se coloca en un rotador automático o se hace rotar manualmente de 2 a 3
minutos.
 Agitar bien la pipeta y descartar 3 a 4 gotas del tallo, luego colocar una gota
pequeña cerca de un extremo de la cámara para que por capilaridad
 se llene exactamente.
 Hacer el recuento con objetivo de 40x.

Se puede realizar con la pipeta automática, se toma 20 mL (0,02mL) de sangre

total con anticoagulante, o sangre capilar y se deposita en un tubo de 12 x 75 que
contenga 4 mL de solución de Hayem (aquí se
tiene una dilución de 1:200). Se deja reposar aproximadamente 5 minutos y se
procede a cargar la cámara con la misma pipeta usando un nuevo tip. El
inconveniente aquí es el gasto de reactivo (4 mL) pero
las medidas son mas exactas.

 en reposo por 3 minutos.

142
  Enfocar la cuadrícula a 10x, luego con el objetivo de 40x contar sobre el
cuadrado grande central de la cámara sólo en 5 cuadrados pequeños: uno
central y cuatro angulares (80 cuadraditos en total).

 En el recuento se incluyen las células que cubren o tocan por dentro o por
fuera las líneas limitantes superior e izquierda en el cuadradopequeño de
recuento y no se consideran los correspondientes a los límites inferior y
derecho.Se hace el recuento en los puntos ABCD y E y se sigue los
mismos parámetros del recuento de leucocitos.

LECTURA
Fig. 14
CÁMARA DE NEUBAUER
Acercamiento de la cuadrícula para el conteo de
eritrocitos

Resultados

Nº de hematíes x mm3 = hematíes contados en 5 cuadrados pequeños altura x

dilución X área
Reemplazando = hematíes contados en 5 cuadrados pequeños 1/10 x
1/200 x 1/5
= hematíes contados en 5 cuadrados pequeños 1/10 000
= hematíes contados x 10 000
Valores de referencia

(Unidades tradicionales millones de células/mm3).

Hombres 4 500 000 - 5 500 000

Mujeres 4 000 000 - 5 000 000
Niños (4 años) 4 200 000 - 5 200 000
Lactantes (1 - 6 meses) 3 800 000 - 5 200 000
Recién nacidos 5 000 000 - 6 000 000

143
 RECUENTO LEUCOCITARIO

Principio

La sangre anticoagulada se deposita en un líquido que permite evidenciar los

leucocitos, manteniéndolos visibles, mientras que los eritrocitos son hemolizados.
El recuento del número de leucocitos o glóbulos blancos se expresa por mm3
(milímetro cúbico).

Equipos

 Microscopio.
 Hemocitómetro (Cámara de Neubauer).
Consta de los siguientes elementos:
 Una lámina portaobjeto gruesa, en el centro se hallan dos superficies
cuadriculadas iguales separadas del resto de la lámina por surcos y dos
barras transversales algo más elevadas.
 Una laminilla cubreobjetos ópticamente plana, que, al colocarse sobre las
barras elevadas de la lámina forma una cámara entre el cubreobjetos y la
superficie cuadriculada.

La altura entre el cubreobjetos y la lámina portaobjetos es de 0,1 mm. Cada

cuadrícula mide 3 mm de lado y se divide en 9 cuadrados grandes. Cada uno de
los cuales mide 1 mm2 de superficie, que se subdivide a su vez en 16 cuadrados
medianos. El cuadrado grande central se divide en 25 cuadrados pequeños y cada
uno de ellos en 16 cuadraditos. Cada cuadrado pequeño mide 0,2 mm de lado
(0,04 mm2 de superficie), y cada cuadradito mide 0,05 mm de lado (0,0025 mm2
de superficie).

Materiales y reactivos requeridos

 Pipeta de glóbulos blancos (De Thoma) o pipeta automática (de 0 a 100

mL). Presenta cerca del extremo superior una marca de 11,
inmediatamente continúa una dilatación (bulbo) que contiene una perla que
funciona como mezcladora, luego sigue el extremo más largo de la pipeta
(tallo) que está
 Dividida en 10 partes, con 2 marcas: 1 (parte final del bulbo) y 0,5 (a la
mitad del tallo). Se le acopla a su extremo superior 1 tubo de goma y una
bombilla para aspirar.
 Diluyente de glóbulos blancos: Solución de Turk al 1%.
 Contador manual (Sólo si fuera necesario).
 Papel filtro.

144
 Procedimiento
 Una vez obtenida la sangre con anticoagulante o sangre capilar del dedo,
se procede a aspirar la sangre con la pipeta de glóbulos blancos hasta la
marca de 0,5 y a limpiar la punta con una gasa.
 Introducir la pipeta en el tubo que contenga solución de Turk y absorber
hasta la marca de 11 (no debe haber burbujas).
 Tapar ambos extremos y proceder a mezclar manualmente o en un rotador
automático por 2 ó 3 minutos.
 Monte la laminilla de vidrio en la cámara para recuento que debe estar
limpia y seca.
 Agitar la pipeta y descartar las cuatro primeras gotas para luego colocar
una gota pequeña de esta solución en la cámara.
 Deje reposar por espacio de 3 minutos para que las células se sedimenten.
 Enfocar primero con la lupa y después con el objetivo de 10x y contar en 4
cuadrados grandes angulares. Cuando se usa la pipeta automática, se
toma 20 mL (0,02 mL) de sangre total con anticoagulante o sangre capilar
con anticoagulante y se diluye en un tubo que contenga 380 mL de solución
de Turk (aquí tenemos una dilución 1:20).

LECTURA

La lectura se realiza en los campos 1, 3, 7 y

9 como está indicado en la figura.

Además de los leucocitos contados dentro de cada uno de los cuadrantes,

sedeben contar todos los leucocitos que se encuentren adheridos en la línea
horizontal superior y vertical exterior, o de lo contrario, todos los leucocitos,
adheridos a la línea horizontal inferior y vertical interior.

Resultados

Nº de leucocitos x mm3 = leucocitos contados en 4 campos altura x dilución x

área
Reemplazando = leucocitos contados en 4 campos 1/10 x 1/20 x 4
= leucocitos contados en 4 campos 4/200
= X/1
= Nº leucocitos contados x 50 4/200

145
 Valores de referencia

5000 - 10 000 leucocitos / mm3

Corrección de valores para restar eritrocitos nucleados

Los normoblastos no se destruyen (lisis) en el líquido de dilución, por lo tanto

pueden observarse al realizar el recuento leucocitario y confundirse con los
leucocitos, de tal manera que se debe emplear la siguiente fórmula:

Cálculo:

La concentración del número de normoblastos (por litro) es: Número de

normoblatos contados x concentración o número de leucocitos 100 + Nº de
normoblastos contados

Ejemplo:

Si se cuentan 50 normoblastos y la concentración del número de leucocitos es

16 x 109/l, la concentración del número de normoblastos será:

50 x 16/100 + 50 = 5,3 x 109/l

Y la concentración de leucocitos corregida será: 16 - 5,3 = 10,7 x 109/l En

unidades tradicionales las concentraciones de normoblastos y leucocitos se
expresan por milímetro cúbico. En tales unidades el cálculo correspondiente al
ejemplo que se ha dado sería:

50 x 16 000 = 5300 / mm3 100 + 50

Recuento corregido de glóbulos blancos o leucocitos

= 16 000 - 5300 = 10 700 / mm3

146
 HEMOGLOBINA

Principio

La sangre se diluye en líquido de Drabkin, el cual hemoliza los hematíes y

convierte la hemoglobina en cianometahemoglobina (cianuro de hemoglobina).
La solución que se produce se lee por medio de un espectrofotómetro o
fotocolorímetro. Su grado de absorbancia es proporcional a la cantidad de
hemoglobina que contenga la sangre.

Materiales y reactivos

 Un colorímetro fotoeléctrico o un espectrofotómetro.

 Pipetas:
 Una pipeta para sangre (pipeta de Sahli) graduada hasta 0,02 mL, con tubo
de goma y boquilla.

 Una pipeta de vidrio graduada de 5 mL.

 Tubos de ensayo.
 Reactivo de Drabkin para dilución.

Este reactivo se puede adquirir en tabletas o polvos para disolver en 1 litro de

agua destilada. Si se dispone de una balanza analítica la preparación se puede
hacer en el laboratorio. Esta solución se puede conservar durante un mes en un
frasco de vidrio oscuro. Deséchese si se enturbia.

El líquido de Drabkin no debe enfriarse demasiado, pues puede causar una

decoloración con reducción del ferrocianuro. Referencia para
cianometahemoglobina (estandarizada): Esta solución se puede adquirir en el
comercio o en un laboratorio de referencia.

En las soluciones de referencia comerciales casi siempre indica la concentración

en miligramos por 100 mL (generalmente en mg%). Se preparan diluciones con
reactivo de Drabkin de tal manera que los patrones contengan concentraciones de
60 mg, 40 mg, 20 mg de CNHi. Leer los tubos en absorbancia con filtro verde a
540 nm, llevando el fotómetro a cero con el reactivo de Drabkin. Para calcular la
concentración de hemoglobina en cada tubo, realizar el siguiente cálculo:

Hb en g/100 mL = P x D
1000
P = Concentración del patrón.
D = Dilución de la muestra de sangre,
que es 251 veces.

147
 Para una concentración de patrón de:

60 mg 15 g/100 mL
40 mg 10 g/100 mL
20 mg 5 g/100 mL
Luego graficar una curva patrón colocando en el eje de las ordenadas las
lecturas en absorbancia y en la abcisa la concentración de hemoglobina en g/100
mL.

Calibración del colorímetro

Antes de usar el colorímetro para calcular la hemoglobina se debe elaborar una
curva de calibración. Con esta curva se puede preparar un gráfico y un cuadro de
valores de hemoglobina.

Procedimiento

 En un tubo de 13 x 100 colocar exactamente 5 mL de reactivo de Drabkin.

 La sangre que puede utilizarse es de punción del dedo (sangre capilar) o de
sangre venosa recién extraída.
 Con una pipeta automática o pipeta de Salhi se toma exactamente 0,02 mL
(20 mL) de sangre total, limpiar luego la punta de la pipeta y se vierte en el
tubo que contenga reactivo de Drabkin. Se enjuaga 3 veces y se mezcla.
 Dejar en reposo por espacio de 5 a 15 minutos.
 Leer en absorbancia con filtro verde a 540 nm llevando a cero el fotómetro
con agua destilada / Drabkin.

Resultados

La lectura en absorbancia del problema debe ser comparada en la curva patrón

para encontrar a que concentración de hemoglobina corresponde expresándose
en g/100 mL.

 Valores de referencia:
Niños al nacer 13,6 - 19,6 g/dL
Niños de 1 año 11,3 - 13,0 g/dL
Niños de 10 -12 años 11,5 - 14,8 g/dL
Mujeres 11,5 - 16,5 g/dL
Hombres 14,0 - 18,0 g/dL

148
 RECUENTO DE PLAQUETAS

Principio
El recuento de plaquetas se realiza directamente en un microscopio de contraste
de fases, previa lisis de los hematíes, o también se puede observar en un
microscopio convencional.

Recuento en cámara

Materiales

 Hemocitómetro o cámara de Neubauer.

 Solución de procaína (Anexo A).
 Pipetas automáticas de 100 a 1000 mL y 0 a 100 mL.
 Cámara húmeda.
 Tubos de plástico de 12 x 75.
 Microscopio convencional.

Método

 Mezclar bien la muestra de sangre obtenida con EDTA.

 Hacer una dilución de 20 uL de sangre total con 380 uL de solución de
procaína en un tubo de plástico de 12 x 75 (dilución 1/20).
 Dejar en reposo por 15 minutos en una gradilla.
 De esta dilución, llenar en cámara de Neubauer.
 Dejar en reposo por 15 minutos en cámara húmeda.
 Enfocar con objetivo de 45x y contar las plaquetas en el retículo central de 1
mm2 cuadrado.
 Calcular el número total de plaquetas según la fórmula que se lee a
continuación:

Resultados

Se aplica la siguiente fórmula:

Nº de plaquetas x mm3 = plaquetas contadas en 5 cuadrados pequeños altura x

dilución x área

Reemplazando = plaquetas contadas en 5 cuadrados pequeños 1/10 x 1/20 x 1/5

= plaquetas contadas en 5 cuadrados pequeños 1/1000

= plaquetas contadas x 1000

Valores de referencia
150 000 - 450 000 plaquetas/mm3

149
 Recuento en lámina
Se cuentan 10 campos con objetivo de 100x y se multiplica por 1000 que es la
fórmula convencional para recuento de plaquetas.

Valores de referencia

150 000 - 450 000 plaquetas/mm3

Causas de aumento (trombocitosis)

♦ La trombocitosis puede ser secundaria a un estímulo medular inespecífico
(posthemorrágica o tras una crisis hemolítica), paraneoplásica o posquirúrgica. Es
especialmente importante la que se produce tras la esplenectomía
.
♦ La trombocitopenia esencial aislada es muy rara, pero puede aparecer asociada
a trastornos mieloproliferativos. En estos casos, las plaquetas pueden ser
funcionalmente inoperantes y cursar, paradójicamente, con hemorragias.

Causas de disminución (Trombopenia)

♦ Es fundamental descartar que no se haya producido un error de lectura como

consecuencia de una agregación parcial de las plaquetas en la muestra estudiada.
Especialmente llamativos son los casos en los que existe una agregación
precisamente en presencia de EDTA, que es el anticoagulante utilizado para
mantener incoagulable la muestra de sangre en la que se ha de realizar la lectura.

♦ Las verdaderas trombopenias pueden obedecer a una causa central

(generalmente asociada a leucopenia y anemia), periférica (inmunológica,
secuestro, consumo) o mixta (vírica). La púrpura trombocitopénica idiopática es
relativamente frecuente.

150
SÍNDROMES DREPANOCÍTICOS

Hemoglobina S

La Hb S tiene una alta prevalencia en Africa Tropical, en donde se observan

heterocigotos en el 20 y hasta el 40% de la población. La Hb S se puede encontrar
en tres formas diferentes como ya hemos visto antes.

La Hb S se produce por la sustitución del ácido glutámico por la valina. Al

descender la PO2 la sustitución de dicho aminoácido origina que la molécula de la
hemoglobina cristalice, deformando los hematíes, volviéndolos falciformes y
rígidos, e impidiendo su tránsito por los capilares pequeños. El proceso origina un
círculo vicioso: los eritrocitos falciformes incrementan el estancamiento, desciende
mas la PO2 y se acentúa la falciformación. Si esto se mantiene mucho tiempo, se
lesiona la membrana celular, permitiendo el paso de calcio al interior de la célula,
lo que determina rigidez de la membrana. En estas condiciones los hematíes son
eliminados de la circulación por el SMF.

Hemoglobina AS o forma heterocigota (rasgo drepanocítico)

Los portadores de este trastorno son asintomáticos. Ocasionalmente sufren

hematurias e infartos esplénicos cuando se exponen a situaciones de hipoxia
prolongada (anestesia general y procesos neumónicos). La morfología eritrocitaria
es normal y no se observan drepanocitos en el frotis de sangre. Hay varias
pruebas de laboratorio para poner en evidencia la presencia de Hb S:

– El test de falciformación: se basa en la desoxigenación de la sangre in vitro

cuando se pone en contacto con un agente reductor (figura 2).
– Prueba de solubilidad: consiste en la observación de que la hemoglobina en
estado reducido, es muy insoluble en tampón fosfato concentrado.
– Electroforesis de Hb: Se verá una banda de desplazamiento lento con relación a
la Hb A. En los verdaderos heterocigotos la proporción de Hb S oscila entre un 35
y un 45% del total.

Hemoglobina S homocigota (SS) o anemia drepanocítica

Se caracteriza por una anemia hemolítica grave, que aparece a los pocos meses
de nacer cuando la Hb S reemplaza a la Hb fetal, que predomina al nacer y
durante los primeros meses de vida. En los niños es frecuente encontrar una
esplenomegalia, que desaparece a medida que se producen infartos esplénicos
produciéndose una verdadera atrofia esplénica.
A la exploración física se aprecia un tinte ictérico conjuntival. La anemia es
hemolítica crónica. Los valores de Hb oscilan entre 6 y 8 gr/dl y se acompaña de
unaintensa reticulocitosis. En el frotis de sangre se observan drepanocitos, que
son claves en el diagnóstico. Este se confirma con la electroforesis de Hb en
medio alcalino y en agar citrato a pH ácido. La hemoglobina fetal en los

151
homocigotos se encuentra elevada en proporción variable y parece actuar como
mecanismo protector impidiendo la falciformación.

En la anemia drepanocítica son frecuentes dos tipos de complicaciones:

– Crisis vasculares oclusivas o crisis de dolor: por acumulación de Drepanocitos

que determina éxtasis arterial e infartos. Las crisis vasculares se inician
bruscamente, con intenso dolor y fiebre. En los niños los lugares más frecuentes
son los huesos de las manos y los pies. Son frecuentes los procesos
osteomielíticos por Salmonella. En los adultos predominan los infartos
pulmonares.

Puede presentarse priapismo.

– Crisis aplásicas: por interrupción brusca de la producción de eritrocitos,

secundario, generalmente, a infecciones por parvovirus y deficiencias de ácido
fólico.

El tratamiento específico no existe. Algunas precauciones y medidas generales

contribuyen a reducir el número de crisis, por ejemplo, evitar los cambios de
temperatura, la deshidratación y las infecciones a las cuales son muy susceptibles,
por la hipoesplenia que determinan los infartos repetidos del bazo

1. Inducción de drepanocitos: En un medio carente de oxígeno (O2) la

hemoglobina S se hace menos soluble y forma agregados cristalinos con la
consiguiente formación de drepanocitos. Se coloca una gota de sangre en un
portaobjetos, se le agrega metabisulfito de sodio 2%, que es un reactivo
consumidor de O2, se tapa con un cubreobjetos y se sellan los bordes con
petrolato;8 en pocos minutos se puede observar el fenómeno. Si no se agrega el
metabisulfito habría que esperar entre seis y 24 horas para que ocurriera.

2. Prueba de solubilidad de la hemoglobina: Aquí también ocurre una

desoxigenación de la hemoglobina S, pero utilizando sustancias como el dithionato
(comerciales, como Sickledex) la hemoglobina S se hace insoluble y se precipita,
observándose turbia la solución. Esta prueba es más fácil y rápida de realizar,
pero puede dar falsos negativos en los pacientes con anemia severa a menos que
se realice en el hematocrito y en casos de hemoglobina F aumentada, y los falsos
positivos pueden estar dados por otras causas de turbidez como en las
disglobulinemias. Algunas hemoglobina raras, como la C (Harlem), pueden
producir un fenómeno de drepanocitosis y dar positivas las pruebas mencionadas.
Por todo ello, la prueba diagnóstica principal es la electroforesis de hemoglobina,
que involucra separación de las diferentes clases de hemoglobina por movilidad
diferente según su carga molecular y tamaño. Sin embargo, algunas hemoglobinas
migran juntas en un medio alcalino (acetato de celulosa) y es necesario repetirla a
un pH ácido (agar citrato) en que pueden migrar diferente. Por ejemplo, la
hemoglobina C y la A2 migran juntas en acetato de celulosa, pero separadas en el

152
agar citrato, y en este medio la hemoglobina F también se separa mejor. Entre las
técnicas complementarias utilizadas para identificar hemoglobinas anormales o
electroforéticamente ―silenciosas‖, se menciona la isoelectrofocalización como el
método de elección por su rapidez y facilidad, además de la seguridad de los
resultados. Por eso, se ha utilizado en diversos estudios de rastreo de
hemoglobinopatías, sobre todo en estudios de hemoglobina.

RECUENTO DE RETICULOCITOS

Los reticulocitos son glóbulos rojos inmaduros formados por ARN y protoporfirina
en el citoplasma.

Fundamento

Los reticulocitos contienen una fina red de ARN y protoporfirina que se puede
teñir con el azul de cresil brillante. Este colorante en combinación con una misma
cantidad de sangre anticoagulada se mezcla y con la ayuda de la temperatura
(baño maría) se produce la coloración de estos eritrocitos jóvenes visualizándose
en los frotices sanguíneos por microscopía.

Materiales

 Láminas portaobjetos.
 Tubos de ensayos de 12 x 75 mm.
 Embudo.
 Filtro de papel.
 Pipetas Pasteur con chupones.
 Contador manual (no imprescindible).
 Solución saturada de azul de cresil brillante (filtrada).

Procedimiento

 En el tubo de ensayo colocar dos gotas de sangre total con anticoagulante.

 Inmediatamente adicionar con la ayuda de una pipeta Pasteur la misma
cantidad de colorante.
 Mezclar la solución.
 Se coloca luego en baño maría por espacio de 10 a 15 minutos.
 Se realizan frotis sanguíneos.
 Se lee con objetivo de 100x

Resultados

Examine por lo menos 100 eritrocitos con el objetivo de inmersión. Cuente

cuidadosamente:
 Cantidad total de glóbulos rojos.

153
  Número total de reticulocitos que haya entre ellos.
El recuento se ha venido haciendo clásicamente de forma manual mediante la
observación en el microscopio óptico. El resultado se da en porcentaje sobre cada
100 hematíes. Es más útil calcular el número de reticulocitos por litro, mediante la
fórmula:

Reticulocitos/L = % reticulocitos x número hematíes/L100

Observación

En la actualidad existe la posibilidad de hacer el recuento rutinario de forma

automática, mediante aparatos específicamente diseñados al respecto, bien
a través de adaptaciones de los clásicos autoanalizadores para hemogramas.
En estos casos se puede conocer, además, las distintas proporciones de
reticulocitos según su grado de maduración, su volumen medio y el índice de
maduración.

Valores de referencia

Adultos 0,5 - 1,5%

Al nacer 2,5 - 6,0%

Causas de aumento

El número de reticulocitos aumenta en todas las circunstancias en las que existe

un incremento de la eritropoyesis, tales como en la hemólisis, como respuesta a
sangrados o tras el inicio de un tratamiento antianémico que ha resultado eficaz.

Causas de disminución

Como la producción de reticulocitos es necesaria para compensar las pérdidas

fisiológicas de glóbulos rojos maduros, una disminución de su número es la
expresión de un estado arregenerativo o hiporregenerativo de la serie roja. Esta
circunstancia es típica de anemias aplásicas, anemias carenciales y
enfermedades inflamatorias y neoplásicas.

Recuento Diferencial Automatizado

El RLD (recuento diferencial automatizado) es una de las determinaciones mas

solicitadas al laboratorio de análisis clínicos, por ello, unos resultados exactos y
precisos son de vital importancia.

El desarrollo de la automatización del RDL se ha visto precedido de un

verdadero periodo de adaptación con discusiones sobre el procedimiento más
idóneo para conseguirla y sobre la necesidad de la automatización.

154
 Actualmente, la automatización permite mejorar la especificidad, la exactitud,
disminuir errores y abaratar los costes de los recuentos diferenciales de
leucocitos.

En los sistemas actualmente empleados se dispone de distintos procedimientos

del RLD:

a) Sistema digital de imagen

b) Sistemas que utilizan las medidas de diferentes unidades de los leucocitos
en suspensión y que además informan sobre el recuento celular completo
(sistemas de flujo continuo)

Se basan en la:

 Medida de la impedancia y de la conductividad celular que informaran

sobre el tamaño de la partícula de su estructura celular interna.
 Medida de la disposición de la luz laser o alógena.
 Utilización de técnicas citoquimicas sobre la suspensión leucocitaria y
estudio de las distintas poblaciones leucocitarias por métodos ópticos.

Según su capacidad de discriminación se pueden clasificar en sistemas de 3 p

Oblaciones y 5 poblaciones.

Análisis digital de imagen.

Se basa en la identificación de los leucocitos mediante análisis con ordenador de

las imágenes, de frotis sanguíneos teñidos, obtenidas al microscopio.

La extensión de sangre, uniformemente teñida, se coloca sobre la platina de un

microscopio. El movimiento de la platina (con una técnica similar a la empleada en
el análisis manual) es controlado mediante ordenador.

De esta forma se recorre la superficie del frotis y el ordenador detiene el

movimiento cuando encuentra un leucocito en su campo de visión.

Las imágenes ópticas (tamaño, color, gránulos citoplasmáticos, etc.) son

registradas por una cámara de televisión y digitalizadas por el ordenador, que
compara las características de la célula con una memoria en la que se incluyen.
Las características correspondientes a los distintos tipos celulares. Si las
características ―coinciden‖ con la de un tipo celular normal, se identifican como tal;
de lo contrario se clasifica como desconocido. Las coordenadas de estas últimas
células son archivadas, para que el técnico pueda clasificar.

155
 Los leucocitos son clasificados en cinco categorías: polinucleares Neutrófilos-
segmentados y no segmentados-, linfocitos, monocitos, polinucleares eosinófilos,
y polinucleares basófilos. Algunos sistemas son capaces de identificar otros
elementos celulares, que eventualmente pueden aparecer en sangre periférica
como mielocitos, metamielocitos, promielocitos, células plasmáticas, linfocitos
atípicos o blastos.

Estos sistemas identifican los leucocitos en base a aspectos morfológicos por lo

que además de requerir células perfectamente conservadas necesita que exista
una muy pequeña variación tintorial, para evitar la clasificación errónea de células.
Es por ello de gran importancia el empleo de sistemas de realización de frotis
sanguíneos adecuados, para la obtención de preparaciones homogéneas y con la
mayor similitud tintorial.

En los sistemas actuales se están consiguiendo una aceptable rapidez y se han

mejorado considerablemente la composición, estabilidad y reproducibilidad de las
tinciones sanguíneas.

Sistema de tres poblaciones.

Son los llamados sistemas de análisis del volumen leucocitario.

La medida del tamaño leucocitario sobre un gran numero de células permite

elaborar una curva de distribución diferenciado tres subpoblaciones leucocitarias.

 Pequeñas (linfocitos)
 Medianas (monocitos, eosinófilos, y linfocitos grandes)
 Grandes (Neutrófilos)

Los autoanalizantes diferenciales basados en este principio pueden utilizar 2

métodos distintos de obtención de las poblaciones leucocitarias:

 Análisis de los volúmenes del núcleo

 Análisis de los volúmenes de las células intactas (serie ELT de Ortho)

Sistemas de 5 poblaciones

Estos sistemas obtienen el análisis diferencial de leucocitos de acuerdo con su

tamaño y su comportamiento citoquimicos ante determinados colorantes.

156
 Estos sistemas tienen la ventaja de analizar rápidamente mayor número de
células (unas 10000) y reducir significativamente el error estadístico del recuento.
La desventaja es que las categorías de las células no resultan totalmente
concordantes con aquellas con las que estamos familiarizados en las extensiones
teñidas con la técnica de Romanowsky. Toda categoría ―no clasificada‖ resulta
difícil de analizar. Cuando se producen resultados anormales, hay que preparar
una extensión y someterla a examen. No obstante, anteriormente no se disponía
de este tipo de precisión en el recuento diferencial de leucocitos.

Sobre cada célula individual son aplicados tres métodos:

 Citoquimico, por la acción de un reactivo, en distintos canales: canal de

peroxidasa alcalina, azul alcian, etc.
 Medida del volumen por impedancia
 Medida de la transmisión óptica para obtener información sobre la
estructura interna de las células.

Estos aspectos son analizados y comparados por la parte informática del

aparato para producir unos resultados precisos, exactos y fiables.

De estos parámetros se obtienen los datos referentes a 4 poblaciones

leucocitarias: linfocitos, monocitos, Neutrofilos y eosinófilos. Y adicionalmente dos
poblaciones más: las grandes células inmaduras (LUC) y los linfocitos atípicos.

 La peróxidasa es una enzima contenida en el citoplasma de todos los

leucocitos, excepto linfocitos, en cantidad variable, y esta característica es
utilizada para la obtención de la formula leucocitaria clásica.

Esta enzima actúa sobre el agua oxigenada como substrato y el 4-cloro-1naftol

como cromógeno, en función de la cantidad de peroxidasa contenida en cada
célula se produce una mayor o menor absorción de luz.

De acuerdo con la información obtenida en el canal de la peroxidasa se obtiene

una representación grafica en la que se observan diferentes zonas.

- Los basófilos son detectados en un canal independiente (canal de

lobularidad). Mediante un reactivo lisante, son destruidas las membranas de
todos los leucocitos excepto la de los basófilos.

En algunos aparatos como el H1 y el H2 de technicon, el recuento se basa en

la medida de la difracción de la luz en un ángulo bajo y alto sobre las células
previamente lisadas, separándose los basófilos resistentes de la lisis y otras 2
poblaciones que son mononucleares.

157
 Tamaño nuclear
 Lobulacion nuclear (esquema de Arneth).

158
159