Evaluación de la temperatura, pH y concentración de sales sobre la tasa de

crecimiento de ​Escherichia coli​ Y ​Saccharomyces cerevisiae

Daniela Montoya Arango, Sebastián Bedoya Álvarez, Juliana Álzate Cadavid,

Andrea Carolina Llanes Angarita

DATOS CRUDOS

Se tomaron 7 erlenmeyers que contenían 50 mL de Luria Bertani inoculados con ​Escherichia coli​; y
otros 7 con 50 mL de Extracto de Malta inoculados con ​Saccharomyces cerevisiae​. Cada Erlenmeyer
correspondía a una combinación de los factores ambientales evaluados a lo largo de la práctica. Para
luego evaluar por medio de espectrofotometría la tasa de producción de biomasa de cada
microorganismo en intervalos de alrededor de una hora.

RESULTADOS

Tabla 1. Resultados del crecimiento de​ E.coli y S.cerevisiae​ cultivadas a condiciones

óptimas de pH 7, 37°C y 1% NaCl
Absorbancia OD​600
Hora de Lectura Tiempo (min)
E. coli S. cerevisiae
6:30 0 0,062 0,040
7:20 50 0,128 0,190
8:18 108 0,277 0,303
9:35 185 0,879 0,541
10:30 240 0,975 0,744
11:45 315 0.403 DL 0,491 DL
12:35 365 0,397 DL 0,740 DL
DL: dilución de 1/5

Gráficos 1 y 2.​ Curvas de crecimiento en condiciones óptimas (pH 7, 37°C, 1% NaCl)

de ​E. coli​ y ​S.​ ​cerevisiae
 Tabla 2. Resultados del crecimiento de E.coli y S.cerevisiae
cultivadas a pH 5,5 Y 8,5
Absorbancia OD​600
Hora de
Tiempo (min) E. coli S. cerevisiae
Lectura
pH 5,5 pH 8,5 pH 5,5 pH 8,5
6:30 0 0,081 0,054 0,036 0,035
7:20 50 0,264 0,101 0,191 0,168
8:18 108 0,350 0,165 0,242 0,248
9:20 170 0,835 0,352 0,485 0,365
10:10 220 0,696 0,341 0,609 0,551
11:35 305 0,411 DL 1 0,407 DL 1 0,413 DL 1 0,995 DL 1
12:40 370 0,577 DL 1 0,448 DL 1 0,496 DL 1 0,782 DL 2
DL 1: dilución 1/5
DL 2: dilución 1/2

Gráficos 3 y 4.​ Curva de crecimiento de ​E. coli​ ​y S.cerevisiae​ a 37 °C y 1% de NaCl, variando el pH a 5.5

Gráficos 5 y 6.​ Curva de crecimiento de ​E. coli​ ​y S.cerevisiae​ a 37 °C y 1% de NaCl, variando el pH a 8.5
Tabla 3. Resultados del crecimiento de E.coli y S.cerevisiae cultivadas a temperatura de 28
°C Y 45 °C
Absorbancia OD​600
Hora de
Tiempo (min) E. coli S. cerevisiae
Lectura
28 °C 45 °C 28 °C 45 °C
6:30 0 0,059 0,060 0,035 0,032
7:20 50 0,117 0,193 0,165 0,175
8:18 108 0,188 0,401 0,258 0,250
9:13 163 0,466 0,911 0,347 0,309
10:30 240 ND 0,727 ND 0,416
11:20 290 0,666 DL 2 0,798 DL 2 0,764DL 1 0,313 DL 1
12:20 350 0,706 DL 1 0,354 DL 1 0,979 DL 1 0,280 DL 2
DL 1: dilución 1/5
DL 2: dilución 1/2
ND: no determinado

Gráficos 7 y 8.​ Curva de crecimiento de ​E. coli​ ​y S.cerevisiae​ a pH 7 y 1% de NaCl, temperatura a 29 °C

Gráficos 9 y 10.​ Curva de crecimiento de ​E. coli​ ​y S.cerevisiae​ a pH 7 y 1% de NaCl, temperatura a 45 °C

 Tabla 4. Resultados del crecimiento de E.coli y S.cerevisiae cultivadas a 0,1% y 5% en
Concentración de Sales (NaCl)
Absorbancia OD​600
Hora de
Tiempo (min) E. coli S. cerevisiae
Lectura
0,1% 5% 0,1% 5%
6:30 0 0,068 0,073 0,032 0,031
7:20 50 0,212 0,156 0,163 0,154
8:18 108 0,326 0,211 0,266 0,185
9:25 175 0,812 0,081 0,503 0,265
10:20 230 0,063 DL2 0,040 0,680 0,277
11:30 300 0,486 DL1 0,125 0,495 DL1 0,329
12:30 360 0,568 DL1 0,165 0,478 DL1 0,362
DL 1: dilución 1/5
DL 2: dilución 1/2

Gráficos 11 y 12.​ Curva de crecimiento de ​E. coli​ ​y S.cerevisiae​ a pH 7 y 37 °C,

variando la concentración de sales a 0,1% de NaCl

Gráficos 13 y 14.​ Curva de crecimiento de ​E. coli​ ​y S.cerevisiae​ a pH 7 y 37 °C,

variando la concentración de sales a 0,1% de NaCl
 Fase de Latencia
Fase Exponencial
Fase Estacionaria

DISCUSIONES

En las curvas de ​E. coli y ​S. ​cerevisiae, ​con respecto a los factores químicos y físicos óptimos para
estos microorganismos, se observa que para ​E. coli la fase de latencia va hasta 108 minutos, la
exponencial hasta los 315 minutos, y la estacionaria hasta los 365 minutos; ​y ​para ​S. cerevisiae la
fase de latencia es más larga, llegando a los 240 minutos para empezar la fase exponencial que va
hasta los 365 minutos y sin llegar a la fase estacionaria ​(Gráficas 1 y 2).​ [1]
En la gráfica de ​E.coli en pH 5,5 vs el control, el crecimiento es muy similar, pues ambas comienzan
sus fases en los mismo tiempos, sólo se diferencian de los 305 a los 370 minutos, pues ​E. coli a pH
5,5 tiene una fase exponencial más prolongada. En cambio, la gráfica de ​E.coli en pH 8,5 vs el
control, a pesar de que ambas tienen fases similares, es notable que el control es más eficiente. Por
lo que se deduce que ​E. coli t​ iene buena tolerancia a los cambios de pH (Gráficas 3 y 5). ​[8] La
​ n pH 5,5 vs el control también presenta similitudes en sus fases, siendo más
gráfica de ​S. cerevisiae e
veloz el control en la fase exponencial. Sin embargo, en la gráfica de ​S. cerevisiae en pH 8,5 vs el
control, se presenta una anomalía, puesto que según la literatura esta levadura tiene un crecimiento
óptimo en pH más ácidos, por lo que se esperaría que la gráfica en este pH fuese menos eficiente
que el control, no como se presenta en los resultados de la práctica ​(Gráficas 4 y 6)​. [2] ​Es
importante resaltar que el pH interno de S.cerevisiae es ácido, lo que le permite tener una mayor
adaptabilidad a medios de cultivo con pH bajos, por el contrario si el pH es alto se modifican los
componentes de su membrana. ella cuenta con un mecanismo que le permite producir ácidos
orgánicos como productos de su metabolismo para modificar el pH alto del medio en el que se
encuentre [3].

Otro mecanismo para controlar el pH interior es un sistema de antiporte H+/K+, este sistema
introduce protones en el interior y saca iones potasio. De esta manera neutralizan el pH interior y
siguen teniendo un potencial de membrana para establecer una fuerza protón motriz que les
suministre energía [3].​ ​Por lo anterior, los pHs evaluados no inhiben el crecimiento microbiano.

La temperatura es uno de los parámetros ambientales más importantes que condicionan el

crecimiento de los microorganismos, ya que afecta la velocidad de crecimiento y el tiempo de
generación. Cada bacteria muestra una curva de crecimiento característica en función de esta
temperatura, donde se puede determinar la tasa de crecimiento que brinda información del efecto del
factor físico sobre la población microbiana [4].
​ 28°C vs el control se ve que inician una fase de latencia muy similar, pero al
En la gráfica de ​E.coli a
llegar a la exponencial se ve que la eficacia de ​E.coli es menor frente al control, se presenta una
anormalidad pues ​E.coli pese su baja eficiencia en un punto tiene un gran crecimiento por lo cual se
deduce que debió hacerse una dilución en dicho punto. Se observa que ​E.coli en 45°C vs el control
las gráficas comienzan sus fases en los mismos puntos y también hay una menor velocidad de
crecimiento y menor biomasa que el control, lo que demuestra que ​E.coli aunque se adapta a los
cambios, su eficacia es menor en temperaturas diferentes a 37°C ​(Gráficas 7 y 9). ​[5]. En
S.cerevisiae en 28°C vs el control se muestra como la fase de latencia es casi igual en el control y el
microorganismo, pero este bajo cambio de temperatura es más eficiente que el control, mientras que
S.cerevisiae e ​ n 45°C vs el control el microorganismo es menos eficiente que el control, lo cual
demuestra que S.cerevisiae es más sensible a los cambios de temperatura ​(Gráficas 8 y 10). ​[6]
La temperatura de 45°C influye en la desnaturalización de proteínas, desestabiliza los ácidos
nucleicos y solubilizar los lípidos; lo cual altera la estructura y funcionamiento de la membrana celular
[7]. Los microorganismos tienen mecanismos de resistencia a altas temperaturas como aumentar la
cantidad de ácidos grasos saturados y de cadena larga, generar enlaces iónicos entre aminoácidos y
aumentar el porcentaje de guanina-citosina en los ácidos nucleicos.

Algunas bacterias como ​E.coli crece en ausencia de sales y también pueden adaptarse a pequeñas
concentraciones en su medio.esto puede explicar el crecimiento de ella en una concentración de 5%
de NaCl, estos microorganismos crean diferente medios de supervivencia en osmolaridades mayores
a las óptimas, en el caso de ​E.coli que cuenta en su metabolismo con una vitamina (colina), la cual
funciona como osmoregulador que se bombea como un soluto compatible al interior de la célula [6]
(Gráfico 13)​. el crecimiento de ​E.coli a una concentración de sales de 0,1 % NaCl tuvo una fase de
latencia de 0-50 minutos, menor que en la curva de 5% de NaCl que fue de 0-108 min y una fase
exponencial mayor que el control en la ​(Gráfico 11)​, esto indica que su crecimiento se ve favorecido
en concentraciones bajas de sal.

observando el ​(Gráfico 12) S.cerevisiae tiene mejor crecimiento a bajas concentraciones de sal, y es
mayor su fase exponencial en comparación a la fase exponencial del control​. ​en el ​(Gráfico 14) se
puede observar que la tasa de crecimiento fue relativamente nula en comparación al control. este se
puede entender como una respuesta adaptativa cuando el medio tiene una osmolaridad mayor a la
del rango fisiológico, la acumulacion interna de glicerol en la levadura le permite evitar una
deshidratación de la célula como respuesta a la situación de estrés.

CONCLUSIONES

Es de gran importancia el conocimiento de la fisiología y del metabolismo de un microorganismos al

momento de realizar una siembra , ya que tiene algunas aplicaciones prácticas; En principio porque
permite conocer el modo de vida y el hábitat de diferentes especies bacterianas. conociendo esto
sabremos cómo hacer un medio de cultivo en óptimas condiciones para que se pueda dar un
correcto desarrollo de este.

Los microorganismos tiene un rango óptimo, así como un mínimo y un máximo de temperatura para
crecer. Por lo tanto, la temperatura ambiental no solo determina la tasa de proliferación sino también
los géneros de microorganismos que prosperan y el grado de actividad microbiana que realizan; es
por esto que los hongos y levaduras tienden a ser menos termofílicos que las bacterias.

El pH tiene efectos adversos que afectan la célula microbiana como se evidencio, en el

funcionamiento de sus enzimas y el transporte de nutrientes hacia la célula; ya que la membrana
citoplasmática de los microorganismos es relativamente impermeable a iones H+ Y OH-.

se encuentra una relación directa con la presencia de sal en el cultivo y el crecimiento, ya que estos
microorganismos tienen un óptimo crecimiento en ausencia de sal y toleran pocas cantidades de
estas aunque su crecimiento se ve afectado.
REFERENCIAS

[1] ​factores que afectan el crecimiento . s.f.

http://www.biblioteca.upibi.ipn.mx/Archivos/Material%20Didactico/Microbiolog%C3%ADa%20ambienta
l/IV.%20Crecimiento%20microbiano%202-Factores%20ambientales.pdf.

[2] Cánovas, Raquel Serrano. ​mecanismos de adaptación de S.cerevisiae a la alcalinizacion del

ambiente .​ julio de 2006. http://www.tdx.cat/bitstream/handle/10803/3555/rsc1de1.pdf?sequence=1.

[3] Folch-mallol JL, Garay-arroyo A, Lledías F, Robles A a C. La respuesta a estrés en la levadura

Saccharomyces cerevisiae. Rev Latinoam Microbiol. 2004;46:24–46.

[4] Cayre M, Vignolo G, Garro O. Validación y comparación de modelos de crecimiento microbiano.

Univ Nac Del Nord … [Internet]. 2001;3–6. Available from:
http://www1.unne.edu.ar/cyt/2001/8-Exactas/E-005.pdf

[5] Flores, Miguel Alejandro Muñoz. ​Estimation of kinetic parameters of Saccharomyces cerevisiae in
batch fermentation . septiembre de 2013.
https://www.researchgate.net/profile/Miguel_Munoz_Flores/publication/257310255_Estimation_of_kin
etic_parameters_of_Saccharomyces_cerevisiae_in_batch_fermentation_during_different_growth_con
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[6] Kim S, Lee S, Hong S, Oh Y, Seoul M, Kweon J, et al. Biofouling of reverse osmosis membranes:
Microbial quorum sensing and fouling propensity. Desalination [Internet]. Elsevier B.V.;
2009;247(1–3):303–15. Available from: http://dx.doi.org/10.1016/j.desal.2008.12.033

[7] Vásquez R, Dávila Z, Humedad EDELA, Ph TY, Suelo DEL, La EN. Redalyc EFECTO DE LA
HUMEDAD , TEMPERATURA Y PH DEL SUELO EN LA ACTIVIDAD MICROBIANA A NIVEL DE
LABORATORIO SOIL MICROBIAL ACTIVITY IN RESPONSE TO DIFFERENT CONDITIONS OF
MOISTURE , TEMPERATURE OR PH. 2008;7.

[8] Ramírez., Abigail Reyes. ​Escherichia coli. s.f.

https://www.uv.mx/personal/sbonilla/files/2011/06/Escherichia-coli-I.pdf.