Practica N°3 COLUMNA DE WINOGRADSKY

Practica N°3
COLUMNA DE
WINOGRADSKY
(70% humus y 30% tierra
pobre)
COLUMNA DE WINOGRADSKY
UNIVERSIDAD NACIONAL
FEDERICO VILLARREAL
FACULTAD DE INGENIERÍA GEOGRÁFICA, AMBIENTAL Y ECOTURISMO
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL
PRÁCTICA N°3
“ESTUDIO DE LOS MICROORGANISMOS DEL SUELO

COLUMNA DE WINOGRADSKY (70% HUMUS Y 30% TIERRA
POBRE)”
GRUPO: LOS MICROAMBIENTALES

CURSO: MICROBIOLOGÍA (LABORATORIO)
PROFESORA: MUJICA
INTEGRANTES:
 ADRIANO MARTINEZ, JAIME (100%)
 CARIAPAZA ROQUE, DIANA CAROLINA (100%)
 DEUDOR CASIMIR, YORLIN WILMER (100%)
 ESPINOZA HUASHUAYO, KELLY GINA (100%)
 HINOSTROZA GONZALES, JOSEPH JORDIN (100%)
 PACHECO ANGLAS, LUIS ALBERTO (100%)
Lima, 4 de octubre del 2019
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ÍNDICE
1. INTRODUCCIÓN............................................................................................................... 4
2. OBJETIVOS ........................................................................................................................ 4
2.1. Objetivos generales ..................................................................................................... 4
2.2. Objetivos específicos ................................................................................................... 4
3. MARCO TEÓRICO ........................................................................................................... 5
3.1. Microorganismos de la columna de Winogradsky ................................................... 5
3.2. Zonas de la columna De Winogradsky ...................................................................... 6
3.2.1. Zona aeróbica ...................................................................................................... 6
3.2.2. Zona microaerófila .............................................................................................. 7
3.2.3. Zona anaeróbica .................................................................................................. 7
4. MATERIALES .................................................................................................................... 9
5. PROCEDIMIENTO .......................................................................................................... 12
6. RECOMENDACIONES ................................................................................................... 16
7. CONCLUSIONES ............................................................................................................. 16
20. BIBLIOGRAFÍA ............................................................................................................... 18
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1. INTRODUCCIÓN
La columna de Winogradsky es una demostración clásica de cómo los microorganismos
ocupan "microespacios" altamente específicos de acuerdo con sus tolerancias
medioambientales y sus necesidades vitales (requerimientos de carbono y energía) y que,
además, se observa cómo los diferentes microorganismos desarrollan sus ciclos, y la
interdependencia que llega a existir entre ellos (las actividades de un microorganismo
permiten crecer a otro y viceversa). Esta columna es un sistema completo y autónomo de
reciclamiento, el cual es iluminada solo por la energía de la luz.
Esta técnica fue desarrollada inicialmente por el microbiólogo ruso Serge Winogradsky
(1856 – 1953), quien utilizó la columna para estudiar los microorganismos del suelo. La
columna de Winogradsky es un sistema que permite observar en el laboratorio el proceso
evolutivo de los microorganismos, es decir, el proceso de adaptación a los diferentes
ambientes.
2. OBJETIVOS
2.1.Objetivos generales
 Demostrar mediante la columna de Winogradsky como los microorganismos
ocupan microespacios específicos de acuerdo con sus tolerancias ambientales.
2.2.Objetivos específicos
 Reconocer cómo las condiciones ambientales influyen para el desarrollo de estos
microorganismos.
 Comparar los microorganismos que crecen a lo largo de la columna en diferentes
tiempos.
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3. MARCO TEÓRICO
3.1.Microorganismos de la columna de Winogradsky
Una vez establecida la columna, se pueden diferenciar tres zonas características en base
a su concentración relativa de oxígeno:
1) zona aeróbica: es la más superficial, dispone de una alta concentración de oxígeno;
2) zona microaerófila: inmediatamente debajo de la anterior, con una menor
concentración de oxígeno.
3) zona anaeróbica: que constituye el lecho de lodo. Las algas y cianobacterias forman
una capa superficial de color verde brillante, y al producir oxígeno ayudan a mantener la
aerobiosis en la zona superior de la columna. Mientras que, en el fondo de la columna,
las bacterias reductoras del sulfato producen sulfuro, que provoca el crecimiento de
bacterias rojas y verdes del azufre (fotótrofos anoxigénicos). De modo que se establecen
dos gradientes en la columna, uno de oxígeno y otro de sulfuro de hidrógeno (H2S).
- Las bacterias quimiorganotrofos crecen a lo largo de toda la columna, los
microorganismos aerobios y microaerófilos en la parte superior, los anaerobios en las
zonas donde hay sulfuro de hidrógeno.
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Figura 1. Columna de Winogradsky
3.2.Zonas de la columna De Winogradsky
3.2.1. Zona aeróbica
Esta es la parte de la columna más rica en oxígeno y más pobre en azufre. El agua de la
parte superior de la columna contiene abundantes poblaciones de microorganismos
aerobios, que aparecen normalmente en hábitats acuáticos ricos en materia orgánica
(estanques poco profundos, arroyos, etc.). Suelen ser microorganismos flagelados, lo que
les permite moverse y establecerse en nuevas áreas, así como microorganismos
fotosintéticos: algas (diatomeas) y cianobacterias filamentosas. El oxígeno que producen
estos productores primarios difunde desde la superficie, creando condiciones similares a
las que existen en un lago con sedimentos ricos en nutrientes.
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3.2.2. Zona microaerófila
Es la zona en la que solapan ambos gradientes, el de oxígeno y el de sulfuro de hidrógeno.
Aparecen bacterias oxidadoras del azufre como Beggiatoa, Thiothrix o Thiobacillus, que
usan como fuente de carbono lamateria orgánica, y oxidan el H2S que llega por difusión
desde las capas inferiores a azufre elemental.
3.2.3. Zona anaeróbica
Esta zona contiene H2S (procedente del fondo), en la zona anaeróbica superior
predominan las bacterias fotosintéticas anaerobias, y en la columna se observan una serie
de bandas de colores rojo y verde.
- Bacterias rojas no del azufre: Rhodospirillum, Rhodomicrobium o Rhodopseudomonas,
son bacterias anaerobias fotoorganótrofas, que sólo pueden realizar la fotosíntesis en
presencia de una fuente de carbono orgánico. Forman una capa de color rojo-anaranjado.
Las bacterias verdes no del azufre son termófilas y, por lo tanto, no crecen en la columna
a temperatura ambiente.
- Bacterias rojas del azufre (Chromatium, Thiospirillum, Thiocapsa, forman una capa de
color rojo-púrpura) y bacterias verdes del azufre (Chlorobium, Pelodyctium). Estas
bacterias son fotolitótrofas y realizan una fotosíntesis anoxigénica. Estos
microorganismos aparecen como zonas decrecimiento en el lodo de la columna, pero
también pueden desarrollarse en el agua si los fotótrofos oxigénicos son escasos.
En la zona anaerobia más profunda, de color negro intenso, aparecen microorganismos
capaces de realizar respiración anaeróbica y fermentación.
 Bacterias reductoras del sulfato (BRS): Desulfovibrio, Desulfobacter,
Desulfotomaculum Desulfomonas. Usan el sulfato, u otras formas parcialmente
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oxidadas de azufre como el tiosulfato, y generan grandes cantidades de H2S en el
proceso. La reacción de reducción bacteriana del sulfato es la siguiente: SO42 –+ 8
H+→H2S + 2 H2O + 2 OH. EsteH2S reaccionará con el hierro presente en el
sedimento, produciendo sulfuro de hierro (II), que precipita y da el color negro. Es
por esto que, en la naturaleza, los sedimentos acuáticos son frecuentemente negros.
La reacción sería la siguiente:
SO42 –H2S (sulfuro de hidrógeno) (ión sulfato) Fe2+SFe (Sulfuro de hierro)
→Precipitado negro
 Bacterias fermentadoras: utilizan la celulosa del papel aportado como fuente
primaria para su metabolismo, aparecen las bacterias del género Clostridium. Son
anaerobias estrictas, y no empiezan a crecer hasta que el oxígeno desaparece del
sedimento. Estas bacterias degradan la celulosa hasta residuos de glucosa y, a
continuación, fermentan la glucosa para obtener la energía que necesitan,
produciendo una serie de compuestos orgánicos simples (etanol, ácido acético, ácido
láctico, ácido succínico, etc.) como productos finales de esa fermentación. Estos
compuestos orgánicos serán, a su vez, respirados por las bacterias reductoras del
sulfato. Cuando la celulosa se agote, usarán la materia orgánica producida por el resto
de bacterias.
 También pueden aparecer bacterias metalogénicas que generan CH4, que se observa
como burbujas de gas en el fondo de la columna. (Brock, 2003)
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Figura 2. Elementos que intervienen en la columna

de Winogradsky
4. MATERIALES
Tabla 1: Materiales fácil de conseguir que serán usados en el trabajo práctico
MATERIALES
Botellas De litro y medio
balde Con capacidad de uno cinco litros
espatula De unos treinta centímetros
periodico Seco preferentemente viejo
hojas secas Que se trocen a presión de la
mano
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abono Un kilo
tierra Dos kilos
huevo Cocido, usaremos solo la yema
agua depositada Dos litros
Figura 3. huevo, hojas de papel y periódico picados
Tabla 2: ayudan a mejorar el proceso de maduración del caldo preparado
REACTIVOS
carbonato de calcio CaCo3 diez mililitros
sulfato de calcio CaSO4 diez mililitros
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Figura 4. reactivos que se usaran en el trabajo
Tabla 3: para obtener las cantidades deseadas
INSTRUMENTOS
balanza De alta precisión
probeta Para medir los reactivos
Figura 5. para obtener las cantidades adecuadas
Página | 11
5. PROCEDIMIENTO
1) Pesar 300 gramos de tierra pobre y 700 gramos de humus.
Figura 6. Pesar la cantidad de

humus y tierra pobre necesaria
2) En un balde mezclar los 300 gramos de tierra pobre y 700 gramos de humus
pesados en la balanza.
Figura 7. Mezclar el humus y la tierra pobre
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3) Mezclar las hojas secas, papel periódico picado en trozos y la yema de huevo
sancochado.
Figura 8. Mezclar las hojas secas, el

periódico y la yema de huevo sancochado
4) Cortar un poco de la parte superior de la botella, luego en ella colocar la tierra
mezclada con el humus primero como primera capa.
Figura 9. En la botella colocar primero la capa de humus con la

tierra y luego la capa de las hojas secas combinadas y así intercalado.
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5) Luego colocar en la botella una segunda capa de la mezcla de hojas secas,
periódico trozado y la yema de huevo sancochado.
6) Para preparar la solución de agua estancada, en una probeta añadir 10 ml de sulfato
de calcio y luego agregar en el agua estancada.
Figura 10. Añadir 10 ml de

sulfato de calcio en la probeta
7) Luego añadir 10 ml de carbonato de calcio en una probeta y añadir en el agua
estancada y mezclarlo.
Figura 11. Preparar la solución

con el agua estancada
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8) Luego de colocar las capas en la botella una por una, agregar la solución del agua
estancada hasta que se asiente en el fondo de la botella.
Figura 12. Agregar la solución de agua

estancada en la columna de Winogradsky
9) Por último, tapar la botella con un papel filtro y amarrarlo con una pita y colocar
una etiqueta con información de tu grupo.
Figura 13. Columna de Winogradsky
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6. RECOMENDACIONES
 Tener limpio el espacio donde se realiza la práctica.
 Tener todos los materiales necesarios que se requieren para la práctica.
 Usar guantes, guarda polvos, gorro. Mascarilla, para evitar algún contagio, de por
medio.
 No comer en hora de la práctica para que no perjudique el desarrollo de dicha
práctica.
 Estar registrados todos los compañeros del grupo en lista, para así poder realizar
la práctica, de la columna de Winogradsky.
 Usar correctamente los materiales, que se indicados durante las explicaciones que
se dijeron dentro del aula.
 Estar en un ambiente libre, cómodo.
 Escuchar las explicaciones de la profesora para así poder realizar la práctica, sin
ningún problema.
 Tomar apunte durante el desarrollo, de la práctica que se está efectuando, cada
punto o, proceso en el momento indicado.
 Guardar las cosas en su lugar adecuado.
 Al finalizar la práctica debe mantenerse limpio el espacio donde se realizó la
práctica.
7. CONCLUSIONES
8. Han proliferado organismos anaerobios, debido a que la columna fue sellada y
nunca fue removida, por lo que no hay forma que su contenido haya sido
oxigenado.
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9. En cada paso del ciclo de los elementos que se observan dentro de la columna
siempre está implicado algún grupo de organismos.
10. Un microorganismo particular y sus productos metabólicos suele servir como
fuente de nutrientes esenciales para otros organismos, generándose una red trófica
dentro de la columna.
11. Los procesos bioquímicos utilizados por estos microorganismos para obtener
energía (ATP y poder reductor) y fuente de carbono son los mecanismos más
eficientes para sortear las condiciones fisicoquímicas adversas imperantes en
estos hábitats.
12. El único requerimiento es la fuente de carbono orgánico para generarlos productos
de la fermentación necesarios para las silfo-reductoras.
13. Esta columna es un sistema completo y autónomo de reciclamiento, mantenido
sólo por la energía de la luz
14. Hemos diferenciado los grupos microbianos presentes en un microambiente
también pudimos comparar los microorganismos que crecen a lo largo de la
columna en diferentes tiempos, relacionando la diversidad microbiana presente en
un microambiente con algunas de sus características fisiológicas.
15. Esto es una clásica demostración de cómo los microorganismos ocupan micrositio
muy específico de acuerdo a su medio ambiente y sus tolerancias de carbono y las
necesidades de energía.
16. El oxígeno difunde desde la superficie, creando condiciones similares a las que
existe en un largo sedimento ricos en nutrientes.
17. Con la luz se reproduce la penetración de la luz solar en la región inferior
anaeróbica, para facilitar el desarrollo, de los microorganismos fotosintéticos
anoxigénicos y en la parte más alta se pueden ver cianobacterias.
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18. La columna de Winogradsky es un método para demostrar como los
microorganismos ocupan lugares altamente específicos según sus necesidades de
carbono, energía y sus tolerancias medioambientales, además enseña cómo
diferentes microorganismos desarrollan sus ciclos y la interdependencia que llega
existir entre ellos.
19. Esta columna es un sistema completo y autónomo de reciclamiento, mantenido
sólo por la energía de la luz.
20. BIBLIOGRAFÍA
Parker, J. (2003). Columna de Winogradsky. Obtenido de Biologia de los microorganismos:

http://es.scribd.com/doc/59281261/Columna-de-Winogradsky
Pérez, J. P. (2008). Columna Winogradsky. Obtenido de Columna Winogradsky:

http://www.redalyc.org/pdf/920/92050311.pdf,
Wesley, A. (2001). Ecología microbiana y microbiología ambiental.
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“ESTUDIO DE LOS MICROORGANISMOS DEL SUELO

GRUPO: LOS MICROAMBIENTALES

Lima, 4 de octubre del 2019

ocupan "microespacios" altamente específicos de acuerdo con sus tolerancias

medioambientales y sus necesidades vitales (requerimientos de carbono y energía) y que,

además, se observa cómo los diferentes microorganismos desarrollan sus ciclos, y la

interdependencia que llega a existir entre ellos (las actividades de un microorganismo

permiten crecer a otro y viceversa). Esta columna es un sistema completo y autónomo de

reciclamiento, el cual es iluminada solo por la energía de la luz.

columna de Winogradsky es un sistema que permite observar en el laboratorio el proceso

evolutivo de los microorganismos, es decir, el proceso de adaptación a los diferentes

 Demostrar mediante la columna de Winogradsky como los microorganismos

ocupan microespacios específicos de acuerdo con sus tolerancias ambientales.

 Reconocer cómo las condiciones ambientales influyen para el desarrollo de estos

 Comparar los microorganismos que crecen a lo largo de la columna en diferentes

3.1.Microorganismos de la columna de Winogradsky

a su concentración relativa de oxígeno:

1) zona aeróbica: es la más superficial, dispone de una alta concentración de oxígeno;

2) zona microaerófila: inmediatamente debajo de la anterior, con una menor

aerobiosis en la zona superior de la columna. Mientras que, en el fondo de la columna,

dos gradientes en la columna, uno de oxígeno y otro de sulfuro de hidrógeno (H2S).

- Las bacterias quimiorganotrofos crecen a lo largo de toda la columna, los

microorganismos aerobios y microaerófilos en la parte superior, los anaerobios en las

zonas donde hay sulfuro de hidrógeno.

Figura 1. Columna de Winogradsky

3.2.Zonas de la columna De Winogradsky

3.2.1. Zona aeróbica

parte superior de la columna contiene abundantes poblaciones de microorganismos

aerobios, que aparecen normalmente en hábitats acuáticos ricos en materia orgánica

les permite moverse y establecerse en nuevas áreas, así como microorganismos

fotosintéticos: algas (diatomeas) y cianobacterias filamentosas. El oxígeno que producen

estos productores primarios difunde desde la superficie, creando condiciones similares a

las que existen en un lago con sedimentos ricos en nutrientes.

3.2.2. Zona microaerófila

Es la zona en la que solapan ambos gradientes, el de oxígeno y el de sulfuro de hidrógeno.

desde las capas inferiores a azufre elemental.

3.2.3. Zona anaeróbica

predominan las bacterias fotosintéticas anaerobias, y en la columna se observan una serie

de bandas de colores rojo y verde.

- Bacterias rojas no del azufre: Rhodospirillum, Rhodomicrobium o Rhodopseudomonas,

son bacterias anaerobias fotoorganótrofas, que sólo pueden realizar la fotosíntesis en

color rojo-púrpura) y bacterias verdes del azufre (Chlorobium, Pelodyctium). Estas

bacterias son fotolitótrofas y realizan una fotosíntesis anoxigénica. Estos

microorganismos aparecen como zonas decrecimiento en el lodo de la columna, pero

también pueden desarrollarse en el agua si los fotótrofos oxigénicos son escasos.

En la zona anaerobia más profunda, de color negro intenso, aparecen microorganismos

capaces de realizar respiración anaeróbica y fermentación.

 Bacterias reductoras del sulfato (BRS): Desulfovibrio, Desulfobacter,

Desulfotomaculum Desulfomonas. Usan el sulfato, u otras formas parcialmente

oxidadas de azufre como el tiosulfato, y generan grandes cantidades de H2S en el

proceso. La reacción de reducción bacteriana del sulfato es la siguiente: SO42 –+ 8

H+→H2S + 2 H2O + 2 OH. EsteH2S reaccionará con el hierro presente en el

sedimento, produciendo sulfuro de hierro (II), que precipita y da el color negro. Es

La reacción sería la siguiente:

SO42 –H2S (sulfuro de hidrógeno) (ión sulfato) Fe2+SFe (Sulfuro de hierro)

 Bacterias fermentadoras: utilizan la celulosa del papel aportado como fuente

anaerobias estrictas, y no empiezan a crecer hasta que el oxígeno desaparece del

sedimento. Estas bacterias degradan la celulosa hasta residuos de glucosa y, a

continuación, fermentan la glucosa para obtener la energía que necesitan,

como burbujas de gas en el fondo de la columna. (Brock, 2003)

Figura 2. Elementos que intervienen en la columna

Tabla 1: Materiales fácil de conseguir que serán usados en el trabajo práctico

Botellas De litro y medio