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INFORME DE ALIMENTOS

INTRODUCCION

Pseudomonas aeruginosa es un patógeno ubicuo, oportunista y bastante persistente en el medio


ambiente, esta bacteria tiene forma de bastón aproximadamente de 0,5-1 µm de diámetro y de 1,5-5
µm de largo, adicionalmente cuentan con un flagelo polar que le confiere la motilidad necesaria. Se
considera a esta especie como bacteria aerobia facultativa debido a la capacidad que tiene para crecer
en medios anaerobios tomando el nitrógeno o arginina como terminal de aceptación de protones. Es
preciso mencionar que este patógeno ubicuo en el medio ambiente puede llegar a persistir de manera
eficaz en el agua y en el suelo viviendo con un requerimiento nutricional mínimo y tolerando diversos
medios físicos (puede crecer entre 20 y 43ºC) y al crecer en altas temperaturas se diferencia del resto
de las otras especies de Pseudomonas. Se caracteriza por ser parte del grupo de no fermentadores
que tienen en común la incapacidad de fermentar lactosa, con la capacidad de utilizar fuentes de
carbono y nitrógeno como acetato y amoniaco, obteniendo energía de la oxidación de azúcares 1.

Es de este modo como el objetivo de la practica consistió en determinar el microorganismo


Pseudomonas auriginosa en muestras de agua mediante la técnica de NMP.

PALABRAS CLAVE: Agua de grifo, piocianina, piorubina,

METODOLOGIA
RESULTADOS

Los resultados de esta práctica estuvieron constituidos por la determinación de fluorescencia en


muestras seriadas de 5 tubos que contenían 10 mililitros de caldo asparagina doble concentración,
simple concentración acompañado de 1 mL de agua en cada tubo como muestra problema,
adicionalmente 1 serie de 5 tubos con una dilución de 10-1.

Figura 1. Serie de 5 tubos con caldo asparagina simple concentración

Figura 2. Serie de 5 tubos con caldo asparagina doble concentración

Figura 3. Serie de 5 tubos con caldo asparagina simple concentración con dilucion 10-1.
DISCUSION

La especie Pseudomonas aeuriginosa se encuentra en los ambientes acuosos, como son las
instalaciones de distribución de agua (cañerías, tanques de almacenamiento, duchas, aguas tratadas
ríos, lagos, piscinas entre otras.) esto debido a la facultad de este microorganismo de sintetizar una
capa densa polisacárida o también denominada biopelícula que genera la formación de microcolonias
2 las cuales crecen por la adhesión de nuevas bacterias y la reproducción de las bacterias ya adheridas,
este fenómeno establece una barrera física y química capaz de proteger a dicho microorganismo de
las moléculas e iones de cloro libre residual, es decir posee resistencia superior a este elemento en
comparación con otros microorganismos presentes en el agua,3por tanto es probable que aunque los
niveles de cloro residual libre este dentro de los parámetros exigidos por la legislación colombiana,
estos no sean los suficientes para eliminar este microorganismo patógeno, siendo esto un indicador
de riesgo para la salud del usuario, especialmente en neonatos, paciente hospitalizados e
inmunodeficientes ya que se conoce que estos microorganismos pueden causar diferentes
enfermedades como septicemias, bacteriemias; es necesario mencionar que P. auriginosa presenta
la capacidad de generar catabolitos como corresponde a la piocianina quien tiene un efecto
bactericida sobre coliformes principalmente como Escherichia coli , produce su disminución
conduciendo a resultados erróneos en el control de calidad del agua ya que este no indica la ausencia
de riesgo microbiológico , pudiéndose encontrar Pseudomonas como patógeno oportunista 4.

Cabe resaltar que los tanques de agua domiciliarios se encuentran expuestos a contaminación debido
al acumulo de impurezas siendo estas partículas una suspensión ajena al agua potable. Es debido a
esto que se debe realizar una inspección sanitaria, limpieza y desinfección de los tanques de
almacenamiento con el fin de garantizar la inocuidad del agua potable para esto se deben tomar
precauciones mínimas en cuanto a seguridad del tanque, como lo es que todo tanque debe contar con
su correspondiente tapa debidamente ubicada y sin rupturas, así mismo, se debe verificar el estado
sanitario del tanque al menos cada 6 meses y finalmente se debe realizar 1 limpieza y desinfección
cada 3 meses garantizando de esta forma agua apta para el consumo humano.5 Para dicha
desinfección se puede utilizar distintos químicos o desinfectantes como lo son hipoclorito de sodio al
15% y sales de amonio cuaternario al 2.5% los cuales impedirán el crecimiento de microorganismos,
siendo pseudomonas la excepción por su resistencia natural al cloro como se menciona
anteriormente; es importante mencionar que a pesar de que pseudomonas presenta resistencia a
desinfectantes como el cloro el establecimiento multifamiliar de donde fue tomada el agua para llevar
a cabo la practica presenta condiciones óptimas de limpieza en sus tanques de almacenamiento como
se pudo observar en los resultados obtenidos de la práctica en donde tras exponer la muestra junto
con el medio de cultivo a luz ultravioleta no se observa fluorescencia característica de Pseudomonas
aeuriginosa. 6-7

TEMAS PARA REVISIÓN:

1. Fundamentos de medios de cultivo

Caldo de asparagina: El Caldo Asparagina es un excelente caldo de enriquecimiento para


Pseudomonas aeruginosa. Este medio se recomienda para su enumeración e identificación,
basada en la hidrólisis de asparagina a ácido aspártico realizado por la bacteria. La fórmula
contiene una base estrictamente mineral, con asparagina como única fuente de nitrógeno y con
glicerol como fuente de carbono. Las sales de potasio actúan como sistema tampón y el sulfato
de magnesio aporta iones magnesio, requeridos en una gran variedad de reacciones enzimáticas,
incluida la replicación del ADN 8

Caldo acetamida: Caldo Acetamida contiene acetamida como única fuente de carbono. Es
empleado para la confirmación e identificación de Pseudomonas aeruginosa, según lo
especificado por la ISO 16266. Se basa en la habilidad de las bacterias Gram-negativas no-
fermentadoras de desaminar la acetamida.La desaminación de la acetamida produce amoníaco
que aumenta el pH del medio, la desaminación de acetamida es realizada por P. aeruginosa, P.
acidovorans, Grupo III (Achromobacter xylosoxidans), y Alcaligenes odorans. La acetamida es la
única fuente de carbono. La sal de potasio tiene una alta capacidad de amortiguación y el cloruro
de sodio suministra electrolitos esenciales para el transporte y el equilibrio osmótico. El sulfato
de magnesio, el molibdato sódico y el sulfato de hierro permite el crecimiento selectivo de
Pseudomonas en el medio. 9

2. Características e importancia de la Pseudomonas aeruginosa en la industria de alimentos.

En la industria alimentaria es muy común la presencia de biofilms producido por pseudomonas


auriginosa en conducciones, equipos y materiales, ya que pueden formarse en cualquier tipo de
superficie, incluyendo plástico, cristal, madera, metal y sobre los alimentos. Puesto que estas
formaciones pueden contener microorganismos patógenos y presentan una mayor resistencia a la
desinfección, se incrementan las probabilidades de contaminación del producto y de provocar
infecciones alimentarias, razón por la que se considera que la presencia de biofilms en las superficies
de contacto de la industria alimentaria constituye un evidente riesgo para la salud.
La presencia de biofilms en estas superficies es la causa principal de contaminación del producto final.
Las consecuencias de esta contaminación pueden conducir a pérdidas económicas debidas tanto al
necesario rechazo del producto como a el desarrollo de enfermedades. Los biofilms formados sobre
las carnes crudas y en el entorno del manipulador (superficies, utillaje e instrumento) aumentan
considerablemente los problemas de contaminación cruzada y de contaminaciones posteriores en el
procesado, por este motivo es preciso eliminar todos los microorganismos de las superficies en
contacto con los alimentos, antes de que los contaminen y establezcan un biofilm que les servirá de
reservorio.

Finalmente, Además del riesgo de contaminación, el desarrollo de biofilms puede interferir en


diferentes procesos y causar daños en los equipos, la formación de biofilm en intercambiadores de
calor y como consecuencia su eficiencia en el proceso 10.
3. Métodos rápidos y técnicas moleculares que existen en el mercado para la identificación
de Pseudomonas aeruginosa en alimentos y aguas.

Microarrays: Los microarrays de ADN son dispositivos innovadores recientemente aplicados a la


detección e identificación microbianas. Se trata de pequeños dispositivos que contienen de forma
ordenada una colección de moléculas biológicas (ácidos nucléicos, proteínas, anticuerpos o tejidos),
ordenadas en dos dimensiones e inmovilizadas sobre un soporte sólido.

Un microarray de ADN es una red muy precisa de alta densidad compuesta de moléculas de ácidos
nucleicos de una sola cadena, denominadas “sondas”, unidas covalentemente a la superficie de un
pequeño soporte sólido. La utilidad del ADN en este formato deriva de la propiedad que tienen las
sondas para hibridar, con una elevada especificidad, a una secuencia complementaria. Por ello, los
microarrays de ADN pueden emplearse para “interrogar” mezclas complejas de miles de ácidos
nucleicos, permitiendo localizar una secuencia diana en una muestra problema (62). Desde su
descubrimiento a finales de la década de los 80, los microarrays de ADN han ido progresivamente
introduciéndose en las principales áreas de investigación biomédica y biotecnológica como la
fisiología, epidemiología, ecología, patogénesis y filogenia microbiana. Sin embargo, no ha sido hasta
esta última década cuando ha comenzado a despuntar el empleo de esta tecnología en el ámbito del
control de calidad y seguridad microbiológica de los alimentos.

Reacción en cadena de la polimerasa - PCR: La reacción en cadena de la polimerasa es una reacción


enzimática in vitro que amplifica millones de veces una secuencia específica de ADN durante varios
ciclos repetidos en los que la secuencia blanco es copiada fielmente. Para ello, la reacción aprovecha
la actividad de la enzima ADN polimerasa que tiene la capacidad de sintetizar naturalmente el ADN en
las células. En la reacción, si usamos como sustrato ADN genómico, entonces típicamente hablamos
de una PCR, pero si usamos ADN complementario (ADNc) proveniente del ARNm (ácido ribonucleico
mensajero) se le conoce como RT-PCR (Reverse Transcription-PCR, por sus siglas en inglés) 11.

BIBLIOGRAFIA

1. Paz V, et al. Pseudomonas auriginosa: patogenicidad y resistencia antimicrobiana en la


infección urinaria. Revista chilena de infectología [internet] 2019 [consultado 11 de octubre
de 2019] 36 (2); 1-10. Disponible en:
https://scielo.conicyt.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0716-
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2. Martínez A, et al. Pseudomonas auriginosa: patogenicidad y resistencia antimicrobiana en la
infección urinaria. Revista chilena de infectología [internet] 2019 [consultado 11 de octubre
de 2019] 36 (2); 1-10. Disponible en: https://scielo.conicyt.cl/pdf/rci/v36n2/0716-1018-rci-
36-02-0180.pdf
3. Pajares M, Orlando E. Microorganismos indicadores de la calidad del agua consumo humano.
[internet] 2018 [consultado 11 de octubre de 2019]. Disponible en:
http://sisbib.unmsm.edu.pe/bibvirtual/tesis/basic/marchand_p_e/anteced.htm
4. Martín I. Riesgo sanitario por presencia de pseudomonas aeuriginosa en el agua para consumo
[internet] 2004 [consultado 11 de octubre de 2019] ;1-19. Disponible en:
http://observatorioconurbano.ungs.edu.ar/Tesis%20de%20ecologia/2004_IreneMartin.pdf
5. Limpieza de tanques- Protocolo para el mantenimiento de tanques de almacenamiento de
agua potable en multifamiliares y establecimientos comerciales e industriales [internet] 2008
[consultado 11 de octubre de 2019]; 2-14. Disponible en:
http://www.cali.gov.co/salud/publicaciones/descargar.php?id=41369
6. Agua Ecosocial. Mantenimiento y limpieza de tanques elevados [internet] 2015[consultado
11 de octubre de 2019]. Disponible en : https://aguaecosocial.com/mantenimiento-y-
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2008 [consultado 11 de octubre de 2019];1-14. Disponible en:
http://www.enress.gov.ar/mantenimiento-limpieza-y-desinfeccion-de-tanques-
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en: https://www.condalab.com/int/es/medios-de-cultivo-deshidratados/972-5393-caldo-
asparagina.html
9. Condalab. Caldo acetamida ISO [internet] 2010 [consultado 11 de octubre de 2019].
Disponible en https://www.condalab.com/int/es/medios-de-cultivo-deshidratados/1276-
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10. Palou A, et. Informe del comité científico de la agencia española de seguridad alimentaria y
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alimentaria [internet] 2010 [consultado 11 de octubre de 2019]; 1-25. Disponible en:
http://www.aecosan.msssi.gob.es/AECOSAN/docs/documentos/seguridad_alimentaria/eval
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11. Dios T, Ibarra C, velasquillo C. Fundamentos de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR)
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