Proyecto: Caracterización genética, composición química, actividad antioxidante y anti-

proliferativa de Oenocarpus bataua “ungurahui” de rodales naturales para la identifcación

de poblaciones sobresalientes en la Amazonía peruana
METODOLOGÍA
Material vegetal
El fruto de O. bataua (ungurahui) es una drupa de forma ovoide de color púrpura
negra, de diámetro y peso que varían entre 2,14 a 2,55 cm y de 8 a 15,3 g. Los frutos serán
colectados en estado de maduración, listos para el consumo, libre de daños físicos y lesiones
causadas por insectos e infecciones fúngicas, durante el primer año del proyecto entre los
meses de enero a julio, según la estacionalidad de la especie en la zona, en 8 localidades
pertenecientes a 7 regiones amazónicas (Huánuco, Junín, Loreto, Madre de Dios, Pasco, San
Martín y Ucayali). Se tomará como puntos de colectas las localidades que se han sido
descritas por Khan & Moussa (1994), donde reportan la ubicación de los rodales naturales,
localidad de colecta, provincia, región, coordenadas geográficas, hasta el nombre de los
herbarios donde se conservan las muestras y sus duplicatas.
Cada muestra colectada será georeferenciada utilizando equipos GPS para registrar
latitud, longitud y altitud.
Después de la colecta, los frutos se pondrán en bolsas especiales para ser transportadas
al laboratorio con mucho cuidado. Una vez en el laboratorio y realizado la caracterización
morfológica de los frutos (se describe a continuación), se pelan los frutos y las pulpas que se
obtienen se trituran y homogenizan en un molino semi-industrial (warning comercial). Luego se
congela la pulpa para después ser lioflizada (equipo Lioflizador a comprar con el proyecto).
Posteriormente será molido a un polvo fno. La materia seca se almacena a -20°C en bolsas
especiales, para evitar degradaciones, hasta su respetivo análisis (Kim & Verpoorte, 2010).
Cabe recalcar que el IIAP tiene sedes institucionales en todas las regiones amazónicas,
brindándonos el apoyo para realizar el trabajo de campo.

Componente 1: Caracterización morfológica y genética de O. bataua “ungurahui” de rodales

naturales de la Amazonía peruana
Caracterización morfológica
Se realizará mediciones biométricas de 125 a 150 frutos elegidos al azar de los racimos
cosechados por procedencia. Se tomarán mediciones de longitud de fruto, diámetro de fruto,
peso de fruto, peso de cáscara, peso de pulpa, largo de semilla, diámetro de semilla, peso de
una semilla, % de pulpa, % de cáscara, % de semilla, color de fruto y color de pulpa (Gonzáles
Coral et al., 2014). Para el análisis estadístico de los datos del peso de fruto, peso de pulpa,
largo de fruto y diámetro de frutos, se utilizará el análisis de varianza con 95% de confanza. Los
datos serán analizados en el Software Estadístico InfoStat versión 2015.
Caracterización genética y extracción de ADN
La variabilidad genética será evaluada en base a 30 plantas por cada una de las 8
poblaciones naturales identifcadas en la Amazonía peruana.
Los tejidos foliares serán identifcados, colectados y preservados en sobres de papel
dentro de una bolsa hérmetica con Silica gel. La extracción de ADN se realizará mediante el
protocolo CTAB de Doyle & Doyle (1987) modificado de acuerdo al estudio, a partir de 100 mg
d tejido foliar y/o kit de extracción de ser necesario. Luego se verificará la calidad y cantidad de
los extractos por medio de electroforesis y espectofometría (cuantifcador Nanodrop). Para el
proceso de amplifcación del ADN se seleccionarán los marcadores microsatélites más
polimórficos diseñados para Oenocarpus bataua (Montafur et al., 2006), se optimizarán las
condiciones para la amplificación por medio de la técnica de PCR (Reacción en Cadena de la
Polimerasa). La reacción de amplifcación se realizará en un volumen total de 15 µl,
conteniendo
5 U/ µl de TAq polimerasa, 100 ng/ µl de ADN molde, 10X de Buffer, 10 mM dNTPs, 25 mM de
MgCl2, 10 µM de cada primer y agua ultrapura. Las condiciones de temperaturas serán:
denaturación inicial a 96°C x 2 min; seguido de 35 ciclos denaturación a 95°C x 30 s, hibridación
a 55° x 30 s, extensión a 72°C x 45 s y una extensión fnal de a 72°C x 10 min. La amplifcación
será verifcada por medio de electroforesis en geles de agarosa al 2%.
Análisis de datos
Obtenido las amplifcaciones, se requerirá el servicio de análisis de datos para obtener
los pesos de los alelos que serán determinados mediante el sofware Peak Scanner versión1.0.
La variabilidad genética será establecida mediante el Análisis Factorial de Correspondencia
(AFC) considerando el genotipo individual. La diferenciación entre las poblaciones será
estimada en base al índice de fjación (Fst) propuesto por Weir & Cockerham (1984). Los
ancestros comunes de las poblaciones serán evaluadas por medio de la estructuración
genética y las relaciones entre las agrupaciones serán establecidas en base a un
dendrograma (programa Neighbor Joining), que se elaborará a partir de la distancia genética
(D) (Reynolds et al., 1983). Los análisis se realizarán con los Softwares GENETIX versión 4.05
(Belkhir et al., 2004), Structure version
2.3.1 (Pritchard et al., 2010) PHYLIP versión 3.5 (Felsenstein, 1993) y Treeview (Page, 1996).

Componente 2: Composición química, propiedades fisicoquímicas y análisis ftoquímicos de

frutos de O. bataua “ungurahui” de rodales naturales de la Amazonía peruana
Composición química
Análisis proximal
El análisis proximal de las pulpas será realizado según los métodos recomendados por
la AOAC (2005). El contenido de humedad se determinará por secado de las muestras a
105°C durante 3 h en una estufa. Las cenizas se determinarán por incineración a 550°C durante
5 h en una mufa. El contenido total de lípidos será determinado por el método de soxhlet. El
contenido de nitrógeno será determinado usando el método kjeldahl y mulplicado por un
factor (6,25) para determinar el contenido de proteína cruda. Fibra por tratamiento
con ácido y base. Carbohidratos por diferencia (100 – suma de los porcentajes de cada
uno de los anteriores). Todos valores serán expresados en g/100 g de muestra fresca.
Análisis de minerales
Se realizarán digestiones sucesivas con ácido clorhídrico 3N a las cenizas obtenidas de
la pulpa lioflizada. Los minerales (Na, K, Ca, Mg, Mn, Fe, Zn y Cu) se medirán por absorción
atómica utilizando un espectrofotómetro Varian AA240, previamente calibrado con
soluciones estándares que contienen cantidades conocidas de los minerales que se
determinarán, utilizando reactivos de grado analítico. Se utilizará dos tipos de llama, aire-
acetileno y óxido nitroso-acetileno, este último solo para el análisis de calcio. Se emplearán
lámparas de cátodo hueco monometálicas para cada elemento analizado (Osborne & Voogt,
1978; AOAC, 2005).
Perfil de ácidos grasos del aceite
La composición de los ácidos grasos del aceite extraído de la pulpa será determinada
por cromatografía gaseosa de acuerdo con la metodología empleada por Rodrigues et al.
(2010). Los ácidos grasos de las muestras de los aceites serán derivatizados a ésteres
volátiles vía saponificación y esterifcación con hidróxido de potasio (KOH) en metanol (0,1
mol/L) y ácido clorhídrico en metanol (0,12 mol/L). Los ésteres metílicos de ácidos grasos
serán extraídos con Heptano y serán analizados en un equipo Varian 450-GC equipado con un
detector de ionización de llama y autoinyector Varian CP-8400. La columna usada fue una VF-
WAXms, 60 m x 0,25 mm ID, 0,25 µm, CP9207. La temperatura del horno se programará de la
siguiente manera: desde
130°C (isotérmico durante 3 minutos) hasta 220°C a 1,3°C/minuto. Las temperaturas del
inyector y del detector se ajustarán a 245°C y 280°C respectivamente. Se usará helio como gas
portador. Los ácidos grasos esterificados serán identifcados y cuantifcados por comparación
con el tiempo de retención conocido de los estándares que serán previamente inyectados.
Propiedades fisicoquímicas
Propiedades fisicoquímicas del aceite
Los análisis fsicoquímicos se realizarán al aceite extraído con éter de petróleo a partir
de las pulpas lioflizadas de O. bataua, de acuerdo con la metodología recomendada por la
AOAC (2005). Se determinará el índice de peróxido, índice de yodo, ácidos grasos libres,
índice de saponificación y materia insaponificable.
Análisis fitoquímicos
Determinación de tocoferoles
Los tocoferoles se extraerán a partir de la pulpa lioflizada de O. batua, mediante una
reacción de saponificación de acuerdo con Rezaire et al. (2014). Se coloca 3 g de muestra en un
matráz con ácido ascórbico (1 g), metanol (150 ml) e hidróxido de potasio (50 ml; 50 g/ 100 ml)
a refujo durante 40 minutos a 80°C. Después de la saponificación, el matráz se enfría con agua
y se extrae los tocoferoles con diclorometano, luego el solvente se evapora en un rotavapor a
35°C . El residuo se disuelve en 10 ml de metanol y se realiza el análisis en un HPLC
(cromtaografía líquida de alta performance) marca Hitachi, con un bomba cuaternaria con un
detector de arreglo de diodos, en una columna de fase reversa (100 RP 18 Merck Lichrospher,
250 x 4 mM; 5 µM). Se utilizará la fase movil agua/metanol (3/97) con una velocidad de fujo de
1,5 ml/min. La detecticón de tocoferol se llevará a cabo por espectrofuorometría (longitud de
onda de exitación: 295 mM; longitud de onda de emisión: 330 mM). Las concentración se
calcurará unsando las áreas de los picos. Las curvas de calibración se establecerán usando α-
tocoferol comercial (sigma-aldrich) como estándar. Los resultados se expresarán en mg de
equivalente de α-tocoferol / 100 g de muestra fresca.
Extracción de fenoles totales y polifenoles
Se realizará una extracción hidroalcohólica con una solución de etanol:H2O (1:1). La
pulpa lioflizada se contactará con la solución hidroalcohólica a 40ºC en el sonicador por 40min.
Posteriormente se fltra con papel fltro wathman grado 1. Se repite el procedimiento de
extracción (2 veces más) con el residuo fltrado. El extracto hidroalcoholico es llevado al
rotavapor para eliminar el solvente, a 50 °C. El residuo acuoso posteriormente se congela y se
liofliza. El extracto lioflizado está listo para ser posteriormente analizado.
Perfiles metabolómicos
Para la realización de los perfles metabólicos se utilizarán las técnicas analíticas de
HPLC-DAD y UHPLC MS/MS. El extracto hidroalcohólico lioflizado, será analizado inicialmente
por HPLC-DAD, en esta etapa del análisis se quiere conseguir las condiciones óptimas de
trabajo, de tal manera que se logre la mejor separación de los compuestos presentes.
Una vez obtenido la optimización en la separación, estas mismas condiciones
cromatográficas serán utilizadas en el análisis por UHPLC MS/MS con lo cual se busca identifcar
los principales metabolitos encontrados en las muestras a analizar.
Condiciones analíticas para HPLC-DAD
Las muestras serán analizadas por un equipo de cromatografía líquida Agilent 1260, que
consta de una bomba cuaternaria con un detector de arreglo de diodos (DAD), UV-Visible y una
columna Kromasil 100-5C18 (25 cm x 4,6 nm). 5 mg de extracto lioflizado se disuelve en ácido
fórmico al 1% en MeOH, se fltra a través de una membrana de microporos de 0,45 micras
(PTFE, Water, Milford, MA, EE.UU.) inyectándose en el equipo HPLC-DAD. Los
cromatogramas se controlarán a 254 nm y 330 nm. El sistema de gradiente lineal consiste en
ácido fórmico al 0,1% (A) y acetonitrilo (B) como sigue: 0-15 min, 40-60% B; 15 - 30 min, 60%
de B; 30 - 40 min, 60 -
80% de B; 40 - 50 min, 80 - 100% de B; 50-60 min, de nuevo a 40% B. El fujo será de 1 ml /
min.,
con un volumen de inyección de 20 μl. Las condiciones para el análisis HPLC-DAD se usarán
para las mediciones de HPLC-ESI-MS/MS.
Condiciones analíticas para UHPLC MS/MS
Un sistema Thermo Scientifc Dionex Ultimate 3000 UHPLC, equipado con una bomba
cuaternaria serie RS y un compartimiento de columna Thermo Scientifc Dionex Ultimate 3000
Serie TCC-3000RS con inyector automático Thermo Fisher Scientifc Ultimate 3000 Serie WPS-
3000RS, un detector PDA de rápidas separaciones controlado por el software Chromeleon 7.2 y
un detector espectrómetro de masas de alta resolución Q Exactive Focus serán usados para el
análisis. El sistema cromatográfico se acoplará al MS con una Fuente de Electrospray de
Ionización climatizado (HESI-II). El software XCalibur 2.3 (thermo Fisher Scientifc, Germany) y el
Trace Finder 3.2 (Thermo Fisher Scientifc, San José, CA, USA) serán usados para controlar el
UHPLC y procesar los datos, respectivamente. El software Q Exactive 2.0 SP2 del Thermo Fisher
Scientifc se utilizará para controlar el espectrómetro de masas.
 Seguidamente las muestras se disuelven en ácido fórmico al 1% en MeOH, para ser
posteriormente inyectadas en el equipo de UHPLC-PDA y ESI-Orbitrap-MS. La cromatografía
liquida usará una columna C18 UHPLC (Acclaim, 150 mm X 4.6 mm ID, 5 µm, Restek
Corporation, Bellefonte PA, USA) a 25°C. Las longitudes de onda de detección serán 254, 280,
320 y 440 nm, y la señal de PDA se registrará de 200 a 800 nm para la caracterización de los
peaks. Las fases móviles serán solución acuosa 1% de ácido fórmico (A) y acetonitrilo (C).
El programa de gradiente [tiempo (min), %C] será: (0.00, 5); (5.00, 5); (10.00, 30); (15.00, 30);
(20.00, 70); (25.00,
70); (35.00, 5) y 5 min para el equilibrio de la columna antes de cada inyección. Se utilizará una
velocidad de fujo de 1 mL/min y un volumen de inyección de 10 µL. La temperatura de
mantenimiento durante el almacenamiento en el inyector automático de los extractos
metanólicos será de 10 °C.
Los parámetros del HESI serán optimizados de la siguiente manera: velocidad de fujo
del gas envolvente de 75 unidades; velocidad de fujo de gas aux. de 20 unidades; temperatura
del capilar de 400°C; temperatura del calentador del gas aux. de 500 °C; tensión del atomizador
de 2500 V (para ESI); y el nivel del S-lente RF de 50. Los datos de análisis se analizarán en modo
positivo y negativo a un poder de resolución de 70,000 FWHM (anchura máxima total media) a
200 m/z. Para los compuestos de interés se elegirá un rango de exploración de 100-1500 m/z.
El
control de ganancia (AGC) se establecerá en 1E6 y el tiempo de inyección se fjará en 200 ms.
La
velocidad de barrido será de 1 scans⋅s-1. La calibración externa será utilizando una solución de
calibración en modo positivo y negativo antes de cada serie de muestras. La energía de colisión
(Celda HCD) se operará a 30 kv. La detección calculará la masa exacta calculada y la
fragmentación de los compuestos de interés.
Análisis de Datos (identificación de metabólitos)
Al obtener los espectros de UHPLC/MS/MS, cada uno de estos serán analizados
comparando las masas de los compuestos y de sus respectivos fragmentos con los reportados
en bibliografía o en bases de datos específcas (Blaženović et al., 2018). Debido a que
compararemos diferentes muestras de una misma especie, recolectadas en diferentes puntos,
se van a comparar los principales compuestos encontrados mediante métodos estadísticos
multivariados como el análisis de componentes principales, (ACP). El análisis estadístico
multivariante se utilizará como una herramienta para el análisis biométrico de poblaciones de
plantas. Es utilizado ampliamente con la fnalidad de detectar diferencias en la composición
química que pueden asociarse a parámetros como la edad, clima, tiempo de colecta, para
discriminar entre el origen de la muestra en plantas medicinales y alimenticias (Gu et al., 2013).
Interpretación de datos
La identificación de los compuestos en las muestras nos permitirá relacionar la composición
química con la actividad biológica encontrada y completar nuestro estudio.
Componente 3: Evaluación de la actividad antioxidante y contenido de fenoles totales de
frutos de O. batua “ungurahui”de rodales naturales de la Amazonía peruana
Extracción de fenoles totales y polifenoles
Se utiliza el mismo procedimiento que en el componente anterior, se realiza una
extracción hidroalcohólica con una solución de etanol:H2O (1:1). La pulpa lioflizada se
contactará con la solución hidroalcohólica a 40ºC en el sonicador por 40min. Posteriormente se
fltra con papel fltro wathman grado 1. Se repite el procedimiento de extracción (2 veces más)
con el residuo fltrado. El extracto hidroalcoholico es llevado al rotavapor para eliminar el
solvente, a 50 °C. El residuo acuoso posteriormente se congela y se liofliza. El extracto
lioflizado está listo para ser posteriormente analizado.
Actividad antioxidante
Método DPHH
Se utilizará el método desarrollado por Brand-Willians et al. (1995), con algunas
modificaciones. A 3,9 mL de una solución del radical DPPH• (100 µM) disuelto en metanol al
80%, se añade 0,1 mL del extracto fenólico lioflizado disuelto en metanol al 80%, fltrado
previamente en un fltro de membrana (0,45 µm), la mezcla se agita vigorosamente y se deja
reposar en la oscuridad por 30 minutos a 25°C. Transcurrido ese tiempo se lee la absorbancia a
517 nm en un espectrofotómetro UV-visible Cary60. La concentración de DPPH• en el medio de
reacción se calcula a partir de una curva de calibrado obtenida por regresión lineal. El control
consistió en 0,1 mL de metanol acuoso al 80% y 3,9 mL de solución de DPPH• (100 µM). Los
resultados se expresan en TEAC, o sea, actividad antioxidante equivalente a Trolox (μmol
Trolox/g de muestra peso seco). El antioxidante sintético de referencia Trolox, a una
concentración de 5-30 µM en disolución de metanol al 80%, se ensaya en las mismas
condiciones.
Método ABTS
Se utilizará la metodología desarrollada por Re et al. (1999) y descrita por Kuskoski et
al. (2005). El radical ABTS•+ se obtiene tras la reacción con persulfato potásico (2,45
mM, concentración fnal) incubados a temperatura ambiente (25°C) y en la oscuridad durante
16 h. Una vez formado el radical ABTS•+ se diluye con etanol hasta obtener una
alsorbancia comprendida entre 0,70 (±0,1) a 754nm. El extracto fenólico lioflizado obtenido
se diluye con etanol hasta que se produsca una inhibición entre el 20 al 80%, en
comparación con la absorbancia del blanco, tras añadir 20 µL de la muestra. A 980 µL de
dilución del radical ABTS•+ que se genera se le determina la Absorbancia a 754 nm, se añade 20
µL de la muestra y se mide de nuevo la absorbancia a 754 nm pasado 1 minuto. La absorbancia
se mide de forma continua transcurridos 7 minutos. El antioxidante sintético de referencia,
Trolox, se ensaya a una concentración de 0-15 20 µM en etanol, en las mismas condiciones.
Los resultados se expresan en TEAC (μmol Trolox/g de muestra peso seco).
Método DMPD
Se determinará utilizando el método propuesto por Fogliano et al. (1999). Se añade 1
mL de la disolución de DMPD (N,N-dimetil-p-fenilendianima) 100 mM a 100 mL de disolución
tamponada con ácido acético/acetato de sodio 0,1M (pH 5,25). Tras la adición de 0,2 mL de una
disolución de cloruro férrico 0,05 M (concentración fnal de 0,1 mM) se forman radicales
cationes coloreados (DMPD•). Un mililitro de esta solución se traslada a una cubeta para medir
su absorbancia, comprendida entre 0,90 (±0,1), a 506 nm. Luego se añade 50 µL de una
disolución patrón de antioxidante o de muestra diluida, se deja reaccionar 10 minutos, pasado
ese tiempo se hace otra medida de absorbancia a 506 nm. La disolución tamponada de acetato
se utiliza como blanco de referencia. Los resultados se expresan en TEAC (μmol Trolox/g de
muestra peso seco).
Contenido de fenoles totales
Se utilizará el método propuesto por Rezaire et al. (2014). Se determinará usando el
reactivo de Folin-Ciocalteu y ácido gálico como estándar. Se mezclan 2370 µL de agua, 30 µL de
la disolución apropiada del extracto fenólico lioflizado y 450 µL del reactivo de Folin-Ciocalteu.
Seguidamente se agrea 150 µL de una solución de carbonato de sodio al 20% (Na 2CO3) a
temperatura ambiente. Se deja incubar por 2 h, después se registra la absorbancia de color
azul, que se desarrolla en cada mezcla de ensayo, a 750 nm. El resultado se expresa en mg de
ácido gálico (GAEq) por gramo de extracto.
Determinación de antocianos totales
Método por diferencia de pH
Se utilizarán dos sistemas tampón: ácido clorhídrico/ cloruro de potasio de pH 1,0
(0,025
M) y ácido acético sódico de pH 4,5 (0,4 M). A 0,2 mL de una muestra del extracto diluido (para
conseguir una absorbancia en el rango de 0,100 – 1,200 a 510 nm) se añaden 1,8 mL de la
correspondiente disolución tampón y se mide la absorbancia frente a un blanco a 510 y 700
nm. Se calcula la absorbancia final a partir de:
A = (Amax vis – A700nm)pH1,0 – (Amax vis –
A700nm)pH4,5

La concentración de pigmentos monoméricos en el extracto se expresará en cianidina-

3-glucósido.
Antocianos monoméricos (mg/100 g) = A x PM x FD x 100
(ε x 1)
A = Absorbancia; PM = peso molecular
FD = Factor de dilución; ε = absortividad molar
La concentración fnal de antocianos (mg/g de extracto seco) se calculará en base al
volumen de extracto y peso de muestra. Se expresará en cianidina 3-glucósido (PM: 449,2 y ε:
26900).
Análisis estadístico
Todas las pruebas se realizarán por triplicado. Los resultados se expresarán como
promedio ± DS. Los promedios serán comparados de dos en dos usando la prueba de t-Student,
con un nivel de significancia de p<0,05.

Componente 4: Evaluación de la actividad anti-proliferativa de frutos de O. batua

“ungurahui”de rodales naturales de la Amazonía peruana
Actividad citotóxica
Los modelos de células en cultivo representan una herramienta muy útil en la
evaluación de la efcacia de fármacos y sustancias de distinto origen. En el presente proyecto
se utilizarán las líneas celular cancerosas: MCF-7 (Adeconcarcinoma mamario humano; ATCC®
HTB-22), HeLa (Adenocarcinoma cérvico humano; ATCC® CCL-2) y HT-29 (Adenocarcinoma de
colon humano; ATCC® HTB-38) y la línea celular normal Vero (Epitelio de riñón; ATCC ® CCL-81).
Las líneas celulares se cultivarán en medio esencial mínimo de Eagle (MEM)
suplementado con 10 % de suero fetal de bovino (SFB) a 37º C en frascos de poliestireno, en
atmósfera húmeda con 5% de CO2. Se utilizará una mezcla de antibióticos compuesta por
penicilina y estreptomicina (200, 000 UI: 0.5 g; 1mL/1L de medio).
Se utilizará el ensayo de MTT [bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-
difeniltetrazolio)] el cual se basa en la reducción de esta sal mediada por las enzimas succinato
deshidrogenada mitocondrial y formación de cristales de formazán, los cuales se disuelven en
alcohol isopropilico acidificado, determinándose la viabilidad celular midiendo el cambio de la
absorbancia a 545 nm (Mosmann, 1983).
Para el ensayo se utilizarán microplacas de 96 pozos donde se colocarán 5000 células
por pozo, después de 24 h la línea celulares se cultivarán en presencia con diferentes
concentraciones de los extractos de fenoles obtenidos de los frutos de O. bataua por periodo
de 24 h, después de este tiempo se realizará el ensayo de MTT descrito a continuación: una vez
decantado el medio de cultivo se agregará 100 µL de una mezcla de MTT (2 mg/mL): PMS (3.5
mg/mL) a razón 5:1, se incubará 75 min, transcurrido el tiempo se decantará el reactivo y lavará
cada pozo con 200 µL de solución salina balanceada de Hank’s, posteriormente los cristales de
formazán se disolverán en alcohol isopropílico ácido (0.04 M) y se leerá a 545 nm. Se realizarán
tres ensayos independientes con seis repeticiones cada uno, los resultados se evaluarán con
probit, donde se obtendrá la concentración inhibitoria media (CI50) en μg/mL. Como control
positivo de muerte celular se utilizará taxol y como control negativo DMSO al 1%,
concentración que se utilizará para para disolver los compuestos.
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