INMUNODIFUSIÓN RADIAL

SEMINARIO INMUNOLOGIA
Grace Vanessa Pájaro – Marìa José Viera – Angie Sandoval C ifuentes

ANTECEDENTES  Características propias del Ac como la

REACCIÓN ANTIGENO – ANTICUERPO (Ag-Ac) afinidad, la avidez y la concentración relativa

Es una unión molecular entre el epitope (antígeno) y la de éstos en el medio

región hipervariable del anticuerpo, mediante INMUNODIFUSIÓN

interacciones no covalentes o secundarias. Es Es una técnica que puede determinar
necesario recalcar que en caso de anticuerpos cuantitativamente la concentración de un antígeno. Es
monoclonales es necesario que estos tengan una técnica sensible que es usada clínicamente para
complementariedad estructural con el epitope para detectar niveles de proteínas plasmáticas o de
que se pueda ejercer la correcta interacción. Alguna anticuerpos como IgG, IgM e IgA que hay en el suero
de las interacciones que ocurren entre estos son: de un individuo y también para determinar fracciones
 Puentes de hidrógeno de C3 y C4 del complemento, entre otras.
 Fuerzas iónicas La inmunodifusión pasiva se divide en
 Fuerzas de van der Waals  Inmunodifusión radial: si uno de los
 Hidrofobicas: constituyen el 50% de la fuerza reactivos, sea el Ag o el Ac, permanece fijo y
total el otro se mueve y se une a él
Entre más se complementan las configuracione s  Inmunodifusión doble: si el Ag o el Ac puede
moleculares, más uniones secundarias se forman moverse libremente en el medio
entre el antígeno y el anticuerpo y por lo tanto, es más
difícil que el complejo sea alterado por fuerzas tales INMUNODIFUSIÓN RADIAL
como la agitación térmica. Fue introducido por Mancini en 1965, empleaba la
difusión única para la medición de concentración de
REACCIONES antígenos, los procedimientos basados en esta
En la unión Ag – Ac ocurre en dos reacciones las técnica son los más sencillos entre los actualmente
cuales son utilizadas principalmente en las pruebas utilizados y su límite de detección es inferior a 100
serológicas mg/L.
1. Formación del complejo Ag – Ac
2. Evidencia de esos complejos mediante la F undamento:
observación de un fenómeno Se basa en la existencia de una relación cuantitativa
entre la concentración de Ag colocado en un pocillo
FACTORES QUE AFECTAN LA FORMAC IÓN DE excavado en una placa de agar, que contiene el
INMUNOCOMPLEJOS anticuerpo correspondiente, y el halo de precipitación
 pH resultante. En primer lugar, el área de precipitación

 Temperatura alcanzada está en función del tiempo transcurrido

 Fuerza iónica del medio desde la colocación del Ag y el momento de la lectura,

lo cual a menudo requiere de 48 a 72 horas de
difusión. Desde el comienzo de la difusión del
antígeno se va formando complejo Ag -Ac y
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transcurrido el tiempo suficiente se alcanza el punto

final de difusión que se denomina zona de INMUNODIFUSION RADIAL PRUEBA
equivalencia. Se trata de una reacción in vitro.
En segundo lugar, en el punto final de difusión, el área El agar noble es el gel utilizado para este
del halo de precipitación es directamente proporcional cultivo, generalmente este se prepara en
a la concentración del antígeno. cajas de PETRI de 100x15mm.
La calibración se establece usando varios
calibradores, que proporcionan una recta siendo: PROC EDIMIENTO
𝑦 = 𝑎 +𝑏 ∙𝑥 1. Se prepara una solución de agar noble al
Siendo “y” el cuadrado del diámetro del halo, “b” la 1% y con una solución amortiguadora
pendiente de la recta, que es inversamente (buffer), el cual varía de acuerdo a la
proporcional a la concentración del anticuerpo en el enfermedad.
gel, “x” la concentración de masa de antígeno 2. Se colocan 15 ml de esta solución en la
aplicada en el pocillo, “a” el punto de corte de la recta caja Petri, se deja endurecer y se perforan
con la ordenada Y agujeros de 5.3mm de diámetro
La especificidad de la reacción dependerá de la formando 4 rosetas de 7 agujeros cada
calidad y de la mono especificidad del antisuero uno.
utilizado en el gel. Si no se cumple esta primicia se 3. Se coloca el Ag en el orificio del centro de
puede aparecer más de un halo de precipitación. El cada roseta y los sueros control positivo
deterioro del material también puede dar como ,control negativo y sueros problema en
resultado la formación de halos anómalos los orificios restantes
4. Entre los orificios que contienen sueros
control positivo o sueros problema con Ac
específicos contra la enfermedad
estudiada y el Ag, se forma una banda de
precipitación, la cual indica que se
efectuó una Rx Ag-Ac
5. Los complejos se precipitan formando un
anillo
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Si hay grandes cantidades de Ac, el antígeno

no se difunde muy lejos antes de alcanzar la
equivalencia y el anillo es más grueso o
espeso.

ALTERACIÓN EN LA CONCENTRACIÓN DE
NOTA:
ALGUNAS PROTEÍNAS SÉRICAS Y SU
 La colocación de los controles varia en lugar y
numero de acuerdo a la enfermedad RELACIÓN CON ALGUNA PATOLOGÍA.
estudiada  IgA: cirrosis, infecciones crónicas, mieloma,
 Las cajas de Petri con las mue stras se fiebre, síndrome de inmunodeficiencia
incuban a 30°c en cámara húmeda, la adquirida, hígado graso, inflamación, etc.
lectura inicial de la prueba se efectúa a las  IgG: enfermedades infecciosas crónicas,
24h y la lectura final a las 48h mieloma, mononucleosis infecciosa, Kala-
 El área del anillo de la precipitación, medida azar, Lepra Es la más abundante (80% del
por el cuadrado del diámetro del anillo , es total de inmunoglobulinas). Se une
proporcional a la [ ] del Ag. rápidamente con macrófagos y neutrófilos,
provocando la destrucción del

INCONVENIENTES DE LA INMUNODIFUSIÓN microorganismo. Puede atravesar la barrera

Es necesario que las concentraciones de Ag y placentaria y se secreta en la leche materna.

Ac sean similares o de lo contrario no se Por ello, es responsable de la inmunidad

alcanza la equivalencia y no se forma el fetal y la del recién nacido

precipitado. El precipitado solo se forma en el  IgM: hepatitis aguda, infecciones aguda,

punto de equivalencia o cuando hay un ligero mieloma

exceso de Ag.  IgE: tumores, bronquitis, dermatitis atópica

Las moléculas más pequeñas migran con La cuantificación de IgE requiere de métodos

más rapidez que las de gran tamaño y de mayor sensibilidad debido a su baja
conforme la migración continúa el precipitado concentración
puede re disolverse y volverse a formar de  Patología de C3: reacciones inflamatorias
acuerdo con los cambios de concentración de agudas, infecciones recurrentes con
Ag o Ac en el gel. bacterias piógenas, glomerulonefritis
 Patología de C4: angiedema hereditario
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