INFORME DE PRÁCTICAS

DE LABORATORIOS Y TALLERES.

ASIGNATURA: Microbiología Grupo Nº 1 Mesa Nº 1

General

CARRERA: (En Lab) Ingeniería de Integrantes

alimentos

NIVEL Y PARALELO (En 2A Calderon Leslie

Lab) :

Fecha realización : 25/05/2016 Espín Londoño David

Sebastian

Fecha presentación 02/06/2016 Romero Sebastian

informe:

Práctica Nº: 4 Silva Maria Teresa

TÍTULO DE LA PRÁCTICA

TÉCNICAS DE INOCULACIÓN (Parte I)

1. INTRODUCCIÓN
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​ os microorganismos se encuentran normalmente formando poblaciones mixtas con

L
otros tipos de microorganismos en la naturaleza, sin embargo, su estudio se da a partir
de colonias aisladas, cultivadas en laboratorios en cultivos puros o también llamados
cultivos axénicos. Un aislamiento significa la separación de un microorganismo
determinado del resto de microorganismos que lo acompañan. (Pineda, s.f.)

Las modalidades de inoculación se diferencian según las características del producto:

sólido, líquido, con flora acompañante, etc. El objetivo que se tiene planeado es la
obtención de colonias aisladas y para ello existen distintos tipos de técnicas de
inoculación los cuales son: para medios sólidos en placa, para medios sólidos en tubo
y para medios líquidos. (Paredes, Salido ​& del Barrio, 1993​)

Una siembra significa transferir un inóculo de un ambiente determinado a un medio de

cultivo para fines cuantitativos o cualitativos, para sembrar debemos tener en cuenta
las condiciones de oxígeno, la temperatura y el tiempo de incubación. El producto será
una colonia bacteriana la cual es una agrupación de bacterias que se originan a partir
de una bacteria madre las cuales se extienden en un medio. (Udelar, s.f.)

Las reglas fundamentales para sembrar son:

Realizarlas asépticamente
Verificar que los medios de cultivo e instrumentos a utilizar estén esterilizados
Que se realicen solo los manipuleos indispensables
Trabajar fuera de toda corriente de aire, si se puede con un mechero o flujo laminar
(Utn, 2009)

Los métodos de siembra a emplear dependerá de los objetivos que se tengan

previstos, ya que en ciertas ocasiones se requiere el desarrollo del microorganismo en
forma masiva mientras que en otros casos se requiere que las colonias queden
aisladas o que las manifestaciones de metabolismo se den con tensiones reducidas,
los métodos de siembra más empleados son: siembra por estrías, por punción,
volumétrica, masiva. (Gonzalez, Gonzalez ​& Barrial, 2004​)
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2. OBJETIVOS:

El objetivo de la presente práctica fue conocer las diferentes técnicas de inoculación de

microorganismos.

3. MATERIALES Y MÉTODOS

Técnica de Hisopado
Se esterilizó el área de trabajo, se encendió el mechero bunsen, se abrió el recipiente
de los hisopos y se esterilizó la boquilla, se retiró el hisopo sin meter los dedos en el
recipiente y se esterilizó de nuevo la boquilla y se lo tapó. Posteriormente se cogió la y
de igual manera se esterilizó la boquilla antes y después de destaparle, se tomó la
muestra que era de ​Klebsiella y se la colocó en toda la caja Petri que anteriormente se
colocó agar nutritivo en la misma, al final se pasó el hisopo por todo el filo, se tapó y se
etiquetó.
Técnica de Estriado
Se esterilizó el asa, se cogió la muestra con el asa y en la caja Petri previamente con
agar nutritivo se inoculó la muestra de E. coli en zigzag, se lo hizo en 4 direcciones sin
tocar el final del anterior movimiento y al final se hizo una “Z” en la mitad de la misma,
se la cerró y se la etiquetó, además se esterilizó de nuevo el asa.
Técnica de Punción
Se esterilizó la aguja y se la dejó enfriar, se cogió la muestra de ​Klebsiella con la
aguja. Se esterilizó la boquilla del tubo de ensayo con agar (medio semisólido) y se
hizo una punción sin tocar las paredes del tubo y se la retiró por el mismo agujero.
Finalmente se esterilizó la aguja y se etiquetó.
Cola de Pez
Se esterilizó la aguja y se la dejo enfriar. Se cogió la muestra de E. coli con la aguja y
se la inoculó en tu tubo con Agar Simmons Citrato y suavemente se retiró hasta la
superficie y se realizó movimientos en zigzag. Se volvió a esterilizar la aguja.
Siembra en medio líquido
Se esterilizó la aguja o el asa y se la dejó enfriar. Se tomó el tubo con caldo nutritivo y
se esterilizó la boquilla, se inoculó la muestra de E. coli prendiendo en la pared la
muestra y suavemente se movió el medio para desprender la muestra. Se esterilizó la
aguja o asa y la boquilla del tubo.
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4. RESULTADOS

A B C D

Klebsiella​ en agar nutritivo

Técnica de Hisopado:

A B C D

Se dio lugar a un Se presentó un No se logró obtener El microorganismo

crecimiento de crecimiento un crecimiento creció en forma
manera homogéneo en microbiano homogénea en
homogénea en toda la placa. homogéneo por la todo el medio, se
toda la placa. ruptura del agar denota un color
nutritivo. blanco.

Discusión:

​ n agar nutritivo
E. coli e

Técnica de Estriado:

Se presentaron Se aislaron Al realizar el Hubo aislamiento

bacterias aisladas bacterias de aislamiento del ​E. del microorganismo
de alrededor de 2 mm coli​ se observó un de diámetro 4 mm
aproximadamente de color color blanco, forma también se denota
1 mm de color blanquecino. circular con 2 mm un color blanco.
blanco. de diámetro.
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Discusión:

En la técnica de estriado se observaron colonias formadas, las mismas que se dan al

arrastrar los microorganismos desde la sección inicial de dos a tres secciones
adicionales, reduciendo así eficazmente la población de microorganismos,
permitiendo su aislamiento. (Arévalo, s.f.)

​ n agar SIM
Bacteria ​Klebsiella e

Técnica de Punción:

Se observó, a las 24 horas de incubación en la presente técnica de inoculación, que

en los cuatros tubos se generó crecimiento y movimiento de la bacteria ​Klebsiella.​
Además se obtuvo crecimiento bacteriano en la superficie del medio.

Discusión:

El crecimiento y movimiento de la bacteria que se pueden ver se dan debido a que los
microorganismos se desarrollan a lo largo del canal en cual penetró la aguja,
indicando su comportamiento frente a los azúcares. (Auqui, 2014)
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E. coli​ en agar Simmons citrato

Técnica de Cola de Pez:

A las 24 horas de incubación, en los tubos A,B,C,D no se observó ningún tipo de

cambio por crecimiento de agentes microbianos. Ya que la E. coli no presenta
ninguna característica ya que no tienen la capacidad de moverse.

Discusión:

Al no obtener ningún crecimiento ni cambio de color en el Agar Simmon Citrato

asumimos que es un Citrato negativo donde ningún crecimiento será se visible; el
medio se mantendrá el color verde bosque profundo del agar inoculado. Sólo las
bacterias que pueden utilizar citrato como el único fuente de carbono y energía serán
capaces de crecer en el medio de citrato Simmons, por lo tanto un cultivo de prueba
de citrato-negativo será virtualmente indistinguible de una inclinación no inoculado.
(MacWilliam M, 2009)

E. coli​ en caldo nutritivo

Técnica de inoculación en medio lìquido:

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A comparación del tubo inicial a lo finales, si hubo crecimiento microbiano y eso lo

podemos notar en el cambio de turbidez, por la presencia de crecimiento microbiano
en los tubos A,B,C,D.

Discusión:

5. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

5.1. CONCLUSIONES:

Los microorganismos se cultivan en el laboratorio en materiales nutritivos que son

conocidos como medios de cultivo, cuyos componentes son muy variados. Una vez
con los cultivos ya preparados, debemos saber que técnica vamos a utilizar, ya que
estas pueden variar respecto a las características del microorganismo que se va a
tratar, como por ejemplo, pudimos notar en la Escherichia coli que no tuvo crecimiento.
Un cultivo de bacterias básicamente se realiza con el objetivo de aislarlas en el medio
para lograr un mejor estudio de ellos. En las placas que se dio lugar a la formación de
colonias, específicamente con Escherichia coli, se puede decir que el tamaño de las
colonias puede diferir de acuerdo a la forma en que se aplicó la técnica.

5.2. RECOMENDACIONES

Para el desarrollo de esta práctica se recomienda seguir todas las normas establecidas
en la guia de laboratorio, para evitar cualquier contaminación al realizar las diferentes
técnicas de cultivo, lo más importante fué esterilizar cada material antes y después de
ocuparlos, como también se recomienda trabajar cerca del mechero para evitar
cualquier tipo de contaminación, usar todo el tiempo guantes y mascarilla y desinfectar
muy bien toda el área de trabajo.

6. CUESTIONARIO DE INVESTIGACIÓN​:

​Completar la siguiente tabla

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INSTRUMENTO GRÁFICA TÉCNICA DE SIEMBRA

Técnica de extensión
ASA DE DIAGRALSKY en placa para el
recuento de colonias
viables.

Técnica de estriado en
ASA DE INOCULACIÓN placas de cultivo.

Técnica de punción o
AGUJA DE picadura.
INOCULACIÓN

HISOPO Técnica de estriado.

(López Teves & Torre, 2006)

​¿Porque se considera que un cultivo puro, supone condiciones no naturales?

Un cultivo puro supone condiciones no naturales ya que la fisiología de los
microorganismos en ambiente naturales, puede ser diferente a la que presenta en
condiciones de cultivos puros.
(Bsvcuba, 2013)

​Investigue la composición química de los medios: Agar Macconkey, TSI, SIM.

Explique qué tipos de medios son con base en composición y uso.

TSI.- ​es un medio que contiene glucosa, sacarosa, lactosa, hierro y un indicador que
es el rojo fenol, en este medio se siembra por picadura y estrías en superficie, estudia
los cambios en la superficie y profundidad, a lo largo del canal se desarrollan los
microorganismos y según lo hagan en la parte inferior o superior de tubo indicarán su
comportamiento frente a los azúcares.
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AGAR MACCONKEY.- ​es un medio selectivo diferencial utilizada para el aislamiento

de bacilos gram (-) fermentadores y no fermentadores de lactosa, composición digerido
pancreático de gelatina y case caseína lactosa, sales biliares, cloruro de sodio, agar,
rojo neutro, cristal.
SIM.- es un medio semisólido, destinado a verificar la movilidad: tripteina, peptona,
sulfato de hierro, amonio y agar.
(López Teves & Torre, 2006)

​Investigue la aplicación específica de las siguientes técnicas de inoculación.

TÉCNICA DE USO ESPECÍFICO.

SIEMBRA

Este método se realiza sobre la

ESTRIADO superficie de los medios
cultivos sólidos.
PLACAS
PETRI
Es una técnica que se aplica
HISOPADO en la realización de
antibiogramas.

Se realiza sobre un medio de

COLA DE PEZ cultivo sólido, la aguja penetra
perpendicularmente el cultivo.
TUBOS DE
ENSAYO
INOCULACIÓN Siembra en un medio líquido.
MEDIO LÍQUIDO

(Bsvcuba, 2013)
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7. BIBLIOGRAFÍA:

Arevalo, Y. (s.f.). Tecnicas de aislamiento, obtención de cultivos puros. Recuperado el 1 de

junio de 2016, de https://www.academia.edu/7767413/TECNICAS_DE_AISLAMIENTO

Auqui, J. (2014). Cultivo microbiologico. Recuperado el 1 de junio de 2016, de

https://www.academia.edu/9286004/INFORME_7_CULTIVO_DE_MICROORGANISMOS

Bsv cuba, (2009). Departamento de publicaciones electrónicas, Habana cuba cp. 10400

García, P., Salido, F. P., & del Barrio, M. T. F. (1993). Microbiología clínica práctica.

González Alfaro, J., González González, B., & Barrial González, R. T. (2004). Laboratorio de
microbiología. Instrumentación y principios básicos. Ciencias Médicas.

López Tevez & Torres, (2006). Estudio cuantitativo de bacterias. Microbiología general –
carrera farmacia, 3.

MacWilliams Maria P., (2009). Protocolo de prueba de citrato. Recuperado el 31 de junio del
2016, de
http://www.microbelibrary.org/component/resource/laboratory-test/3203-citrate-test-protocol

Pineda H. (s.f.). Técnicas de siembra. Recuperado el 29 de mayo de 2016, de

https://www.academia.edu/11620994/T%C3%A9cnicas_de_siembra

Universidad de la República Uruguay (Udelar). (s.f.). Medios de cultivo y métodos de siembra.

Recuperado el 29 de mayo del 2016, de
http://www.fvet.edu.uy/sites/default/files//microbiolog%C3%ADa/medios%20y%20siembra%20
%5BModo%20de%20compatibilidad%5D.pdf

Universidad Tecnólogica Nacional (Utn). 2009. Siembra y recuento de microorganismos.

Recuperado el 29 de mayo de 2016, de
https://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimica/5_anio/biotecnologia/practicoIII.pdf
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