Universidad de las Fuerzas Armadas - ESPE

Departamento de Ciencias de la Vida

Ingeniería en Biotecnología
Diseño de procesos
OPERACIONES BÁSICAS
INTEGRANTES:
Cesar Davalos
Paul Erazo
Gabriela Pazmiño
Paul Poaquiza
Jennifer Tapia
INTRODUCCIÓN
FILTRACIÓN
Consiste en la separación de una
mezcla sólido- líquido por un medio ●
filtrante

A medida que aumentan los sólidos

retenidos se produce una mayor
resistencia

Con los medios de cultivo la filtración no

es sencilla, debido al tamaño de las
células y la naturaleza del caldo
 Teoría de la filtración
A = Área del filtro
V= Volumen del filtrado
t= Tiempo
p= Presión
Determina la velocidad de filtración
u= viscosidad
M= Masa de la torta
𝛼= Resistencia media de la torta
r= Resistencia del filtro

𝛼’= Constante de morfología y tamaño

s= Compresibilidad de la torta (0 para
De forma empírica
incompresibles)

K= Factor de a forma de las partículas

Por propiedades medias de las a= superficie específica
partículas 𝜀 = Porosidad de la torta
⍴= Densidad
Si la caída de presión disminuye a la mitad, el área necesaria aumenta un 20% ya que a 5 psi la torta esta menos comprimida y
más porosa
CENTRIFUGACIÓN
CONCEPTO DE
ETAPA IDEAL
 No están
MEZCLADOR SEDIMENTADOR
en
equilibrio Cerca al
equilibrio
Se mezcla Separación por
vigorosamente gravedad
Líquido
ligero

Líquidos Cambio en la
LyC concentración
inmiscibles
propios

Líquido
pesado

Recipiente
FUERZA IMPULSORA
de mezcla
EXTRACCIÓN
LÍQUIDA EN DOS
FASES ACUOSAS
El producto se recupera de la
fase que se ha extraído
mediante precipitación o
cristalización
Coeficiente de reparto

Nos indica la relación de equilibrio que hay en el sistema

Donde

CAu es la concentración del Si K>1 el componente A se

componente A en la fase superior concentra en la fase superior

CAl es la concentración del Si K˂1 el componente A se

componente A en la fase inferior concentra en la fase inferior
Rendimiento de A en la fase superior Y

Donde

Vu es el volumen de la fase superior

Vl es el volumen de la fase inferior

V0 es el volumen inicial de la solución que contiene el producto

CA0 es la concentración inicial del producto en el líquido

Rendimiento Y en la fase inferior

Donde

Vu es el volumen de la fase superior

Vl es el volumen de la fase inferior

V0 es el volumen inicial de la solución que contiene el producto

CA0 es la concentración inicial del producto en el líquido

Rendimiento máximo posible para una etapa de extracción ideal
CROMATOGRAFÍA
 *Método de separación para resolver mezclas o aislar componentes.

Separación de solutos de Cromatograma

mezcla inyectada en columna Diagrama de picos de soluto a través del tiempo
Migración diferencial
Retardo selectivo de
moléculas de soluto en su
paso a través de lecho de
partículas de resina.

Fase móvil Fase estacionaria

Fluido que transporta Sustancia que se

los solutos en la encuentra dentro de
columna o el utilizado la columna y realiza la
para la elución separación
 Cromatografía de gases
- Método analítico
Separa componentes relativamente volátiles como alcoholes, cetonas, aldehídos y otros

Purificación
de
biomoléculas
a gran escala

● Aislamiento de productos
recombinantes de
organismos de ingeniería
genética
● Recuperación de productos
terapéuticos y farmacéuticos
de alta pureza

Cromatografía de Cromatografía
adsorción de reparto
● Moléculas biológicas ● Distribución de soluto
tienen varias tendencias entre dos solventes
para adsorción polar. inmiscibles entre sí.
● Adsorbentes: sílica gel, ● Fase estacionaria fijada y
alúmina, carbón activado. se circula sobre ella el
● Rendimiento de disolvente.
adsorbente depende de ● Fase estacionaria más
química de su superficie. polar (cromatografía en
● Elución depende de fase normal)
polaridad de la molécula. ● Fase estacionaria menos
● Existen escalas de polar (cromatografía en
polaridad de disolventes. fase reversa)
● Se evita ionización con
tampones acuosos.
Métodos cromatográficos
Cromatografía
de intercambio
iónico
● Atracción electrostática
soluto - componentes en
columna.
● Alta resolución de
macromoléculas y
fraccionamiento de
antibióticos.
● Rellenos: sílice, vidrio, etc
● Resinas: carboximetil +
agarosa, celulosa y
dextrano
● Elución por cambio de pH
o fuerza iónica
Cromatografía Cromatografía
de gel de afinidad
● Moléculas de solución ● Especificidad de enlace
atraviesan gel de de biomoléculas
determinada porosidad ● Purificación por afinidad
● Geles: dextranos selectiva
entrecruzados, agarosa, ● Relleno de columna:
poliacrilamida ligando, que se une con
● Velocidad de movimiento afinidad al soluto
depende de tamaño ● Elución; cambio de pH,
molecular fuerza iónica o uso de
● Partículas pequeñas buffers
tienen mayor retención ● Proteínas pueden
● Separación de proteínas y desadsorberse con
compuestos lipofílicos compuestos más afines
● A gran escala: elución que el ligando
descendente
Requisitos básicos de la fase estacionaria
 Cromatografía
líquida de alta
resolución (HPLC)

Separación
Cromatográfica

Cromatografía
líquida rápida de
proteínas (FPLC)
Migración Diferencial
Factor de capacidad Selectividad o retención relativa Volumen total

● k: Factor de capacidad ● Vt: Volumen total

● Ve: Volumen de eluyente necesario
para extraer soluto de columna en su
máxima concentración
● Vo: Volumen hueco, líquido que se
halla en la columna que no se
encuentra en el interior de las
partículas
● δ: relación de factores de capacidad
para dos solutos
● Vo: Volumen hueco fuera de las
partículas
● Vi: Volumen interno del líquido en
los poros de las partículas
● Vs: Volumen de gel

Habitualmente utilizadas en cromatografía de adsorción, de reparto, de

intercambio iónico y de afinidad
Volumen externo Vo Volumen de eluyente para solutos Volumen interno
parcialmente excluidos

● a: Masa de gel seco

● Volumen de eluyente necesario para
retirar un soluto completamente
excluido de la fase estacionaria
● Generalmente es equivalente a un
tercio de Vt
● Kp: Coeficiente de reparto del gel,
definido como la fracción de
volumen interno disponible para el
soluto - Para grandes moléculas que
no penetran el sólido Kp=0
● Wt: Valor de ganancia del agua,
volumen de agua tomado por masa
de gel seco
Si, como es habitual, el gel suministrado
es mojado e hinchado, se desconoce a y
Vi se calcula:

● ρg: densidad de gel húmedo

● ρw: densidad del agua
BIBLIOGRAFÍA

Doran, P. (1995). Principios de Ingeniería de

los Bioprocesos. Zaragoza: ACRIBIA, S.A.