BIOQUÍMICAUNIVERSIDAD POPULAR DEL CESAR

FACULTAD EN CIENCIAS BÁSICAS Y DE LA EDUCACIÓN

LICENCIATURA EN CIENCIAS NATURALES Y EDUCACIÓN AMBIENTAL

Docente: Martin Núñez

Presentado:

Luz Vanessa parejo

Rosiris Pérez
Yezmin Fernández
Luis Fernando Cardona

Valledupar - Cesar
2018
CATILLA DE LABORATORIOS DE BIOQUIMICA
 OBJETIVO
GENERAL

Desarrollar e implementar de manera experimental un aprendizaje

significativo, y evolutivo, para llegar a vincular a través de las
prácticas de laboratorios conceptos teóricos- prácticos, contemplando
las diferentes temáticas de interés bioquímico. analizando e
investigando los distintos métodos para determinar la solubilidad,
variaciones de PH y describiendo a través de técnicas de reacciones
donde interviene las moléculas de la vida como proteínas,
aminoácidos, lípidos y glúcidos, realizando técnicas biológicas, pero
enfatizándola en la bioquímica.

OBJETIVO
ESPECIFICO

Determinar la solubilidad de algunos solidos teniendo

en cuenta los factores que intervienen
Identificar el concepto de PH en soluciones básicas y acidas de uso
cotidiano
Determinar la solubilidad y desnaturalización de
proteínas con diferentes agentes físicos y bioquímicos
Identificar algunas características de los lípidos como solubilidad e
hidrolisis
Reconocer e identificar los glúcidos mediante los
diferentes tipos de reactivos (benedict, molisch Fehling
Ay B, troumer, almidón seliwanoff y prueba para
sacarosa).
Determinar la presencia del almidón el tubérculo de la
yuca y Observar las propiedades físicas y químicas que
presenta al momento de mezclarlo con los diferentes
reactivos suministrados por el docente.
Extraer DNA y RNA de tejidos animales y vegetales e identificarlos
Identificar la presencia de la enzima catalasa en tejidos animales y
vegetales.
 MARCO TEORICO
BIOQUÍMICA
Una solución es una mezcla homogénea de composición variable pero limitada por
la solubilidad. Se dice que es una mezcla porque tiene más de un componente
(soluto y solvente) que no reaccionan entre sí. La homogeneidad se debe a la
uniformidad en el sistema, es decir que presenta una sola fase, por ejemplo: un
volumen de aire representa un sistema de una sola fase que contiene más de un
componente (H2, N2, O2, Ar, Xe, etc.).
SOLUTOYDISOLVENTE
La sustancia que está presente en la mayor cantidad se denomina disolvente, que
se define como las sustancia en la cual se disuelve otra. Ésta última, que es la que
disuelve en la primera, se denomina soluto.

Soluto + Disolvente = Solución

Tipos de soluciones
según el estado físico:

soluciones sólidas Ejemplo

 Gas en solido H2 gaseoso en paladio
 Liquido en solido Empastes dentales (mercurio en plata)
 Solido en solido Bronce (zinc/cobre)

soluciones gaseosas Ejemplo

 Gas en gas Aire
 Solido en gas Polvo en aire
 Liquido en gas Vapor de agua en aire

Soluciones liquidas Ejemplo

 Gas en liquido CO2 en soluciones (Coca-Cola)
 Solido en liquido Azúcar en agua
 Liquido en liquido Alcohol en agua
PH BIOQUÍMICA
es una medida utilizada para la química para evaluar la acidez o alcalinidad de una
sustancia por lo general en su estado líquido. Se entiende por acidez la capacidad
de una sustancia para aportar una solución a los iones de hidrógeno, hidrogeniones
(H *) al medio. La alcalinidad o base aporta hidroxilo OH al medio. Por lo tanto, el
pH mide la concentración de iones de hidrógeno en una sustancia, en 1909, el
químico danés Sorensen.
Definió el potencial hidrógeno (pH) como el logaritmo negativo de la concentración
molar (más exactamente de la actividad molar) Delaware los iones hidrógeno. Esto
es: pH = -log [H+]. Desde entonces, el pH del término ha sido utilizado
universalmente por la facilidad de su uso, evitando así el manejo de cifras largas y
complejas. Por ejemplo, una concentración de [H+] = 1x10-8 M (0.00000001) es
simplemente un pH de 8 ya que: pH = - log [10-8]=8
 BIOQUÍMICA
LAS PROTEÍNAS
son biomoléculas de gran tamaño y peso molecular formadas por C, H, O, y N. Son
macromoléculas o polímeros de aminoácidos. Son las biomoléculas más
abundantes después del agua y desempeñan un gran de funciones, que las
caracterizan como componentes esenciales e indispensables para la vida.
Sus propiedades químicas y fisiológicas dependen no solo de su tamaño, formas y
propiedades de los aminoácidos que las componen. Por la estructura peptídica y la
presencia de determinados grupos las proteínas pueden reaccionar con una
variedad de agentes originándose productos coloreados. Estas reacciones son las
bases para la determinación cuantitativa y cualitativa de las proteínas.
los aminoácidos son moléculas orgánicas que presentan grupo amino (- NH2) y un
grupo ácido carboxílico (- COOH). En disolución los aminoácidos forman iones
dobles denominados (Zwitteriones) debido a sus grupos ácido y base; además, un
aminoácido, dependiendo del PH de la solución, puede comportarse como ácido o
como base por esta razón se les denomina anfótera.
Los aminoácidos constan de un C central; llamado carbono-α, unido a un grupo
amino o nitrogenado (-NH2) y a un grupo Carboxílico o ácido (-COOH) en el otro
extremo, y a R llamado resto, residuo o cadena lateral.
 BIOQUÍMICA
LOS LÍPIDOS
son un conjunto de moléculas orgánicas (la mayoría biomoléculas) compuestas
principalmente por carbono e hidrógeno y en menor medida oxígeno, aunque
también pueden contener fosforo, azufre y nitrógeno. Tienen como característica
principal ser hidrofóbica (insoluble en agua) y solubles en disolventes orgánicos
como la bencina, benceno y cloroformo. En el uso coloquial, a los lípidos se les
llama incorrectamente grasas, ya que las grasas son solo un tipo de lípidos
procedentes de animales.

Los lípidos cumplen funciones diversas en los organismos vivientes, entre ellas la
de reserva energética (como los triglicéridos), la estructural (como los fosfolípidos
de las bicapas) y la reguladora (como las hormonas esteroides).

Los lípidos son moléculas muy diversas; unos están formados por cadenas alifáticas
saturadas o insaturadas, en general lineales, pero algunos tienen anillos
(aromáticos). Algunos son flexibles, mientras que otros son rígidos o semiflexibles,
hasta alcanzar una total flexibilidad mecánica molecular; algunos comparten
carbonos libres y otros forman puentes de hidrogeno.

La mayoría de lípidos tienen algún tipo de carácter no polar, es decir, poseen una
gran parte apolar o hidrofóbico, lo que significa que no interactúa bien en solventes
polares como el agua, pero si con la gasolina, el éster y el cloroformo.
 BIOQUÍMICA

LOS GLÚCIDOS
son compuestos orgánicos de gran importancia biológica, ya que su función más
importante es la de ser una gran fuente de energía. También se los conoce con el
nombre de hidratos de carbono o azúcares.
Todas las células realizan una serie de actividades, las cuales no se realizarían si
no hubiese energía disponible en cantidades suficientes, así como un motor de un
automóvil necesita nafta para funcionar, una célula requiere de glúcidos. Son
compuestos formados por átomos de carbono, hidrógeno y oxígeno.
Los glúcidos pueden estar formados por una, dos o muchas moléculas iguales o
distintas. Los glúcidos formados por una sola molécula se denominan
monosacáridos, entre ellos podemos citar a la glucosa, la ribosa o la fructosa

Fig. 1: Monosacáridos. A, glucosa; B, fructosa.

EL ALMIDÓN
es el principal polisacárido de reserva de la mayoría de los vegetales, y la principal
fuente de calorías de la mayoría de la Humanidad. Es importante como
constituyente de los alimentos en los que está presente, tanto desde el punto de
vista nutricional como tecnológico.
Lo que llamamos almidón no es realmente un polisacárido, sino la mezcla de dos,
la amilosa y la amilopectina. Ambos están formados por unidades de glucosa, en el
caso de la amilosa unidas entre ellas por enlaces α 1-4 lo que da lugar a una cadena
lineal. En el caso de la amilopectina, aparecen ramificaciones debidas a enlaces α
1-6. Los almidones son mezclas de amilosa y de amilopectina. En general, los
almidones contienen entre el 20% y el 30% de amilosa, aunque existen
excepciones. En el maíz céreo, llamado así por el aspecto del interior del grano,
casi no existe amilosa, mientras que en las variedades amiláceas representa entre
el 50% y el 70%. En el caso de la patata, la presencia de grupos fosfato crea
repulsiones entre cargas negativas, lo que facilita la separación de las cadenas y su
interacción con el agua.
Los disacáridos y los polisacáridos deben ser hidrolizados hasta monosacáridos
para poder pasar la pared intestinal para llegar al torrente sanguíneo y poder
 BIOQUÍMICA

ingresar al interior de las células para su utilización. La hidrólisis de un enlace

glucosídico se lleva a cabo mediante la disociación de una molécula de agua del

medio. El hidrógeno del agua se une al oxígeno del extremo de una de las moléculas
de azúcar; el OH se une al carbono libre del otro residuo de azúcar. El resultado de
esta reacción, es la liberación de un monosacárido y el resto de la molécula que
puede ser un monosacárido si se trataba de un disacárido o bien del polisacárido
restante si se trataba de un polisacárido más complejo.

ÁCIDOS NUCLEÍCOS
Los ácidos nucleicos constituyen el material genético de los organismos y son
necesarios para el almacenamiento y la expresión de la información genética.
Existen dos tipos de ácidos nucleicos química y estructuralmente distintos: el ácido
desoxirribonucleico (ADN) y el ácido ribonucleico (ARN); ambos se encuentran en
todas las células procariotas, eucariotas y virus. El ADN funciona como el almacén
de la información genética y se localiza en los cromosomas del núcleo, las
mitocondrias y los cloroplastos de las células eucariotas.
En las células procariotas el ADN se encuentra en su único cromosoma y, de
manera extra cromosómica, en forma de plásmidos. El ARN interviene en la
transferencia de la información contenida en el ADN hacia los compartimientos
celulares. Se encuentra en el núcleo, el citoplasma, la matriz mitocondrial y el
estroma de cloroplastos de células eucariotas y en el citosol de células procariotas.
LAS ENZIMAS
son biomoléculas especializadas en la catálisis de las reacciones químicas que
tienen lugar en la célula. Son muy eficaces como catalizadores ya que son capaces
de aumentar la velocidad de las reacciones químicas mucho más que cualquier
catalizador artificial conocido, y además son altamente específicos ya que cada uno
de ellos induce la transformación de un sólo tipo de sustancia y no de otras que se
puedan encontrar en el medio de reacción.

FACTORES QUE AFECTAN A LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

Diferentes factores ambientales pueden afectar a la actividad enzimática.

Destacaremos dos: el pH y la temperatura.

EFECTO DEL pH: El pH es otro factor que influye en la actividad enzimática, debido
a que el pH influye en la ionización de los grupos funcionales de los aminoácidos
que forman la proteína enzimática. Cada enzima realiza su acción dentro de un
 BIOQUÍMICA

determinado intervalo de pH, dentro de este intervalo habrá un pH óptimo donde la

actividad enzimática será máxima. Por debajo del pH mínimo o por encima del pH

máximo el enzima se inactiva ya que se desnaturaliza. En la mayoría de las enzimas

el pH óptimo está próximo a la neutralidad, aunque hay excepciones.

La mayoría de los enzimas presentan un pH óptimo para el cual su actividad es

máxima; por encima o por debajo de ese pH la actividad disminuye bruscamente.

Este efecto se debe a que, al ser los enzimas de naturaleza proteica, al igual que
otras proteínas, se desnaturalizan y pierden su actividad si el pH varía más allá de
unos límites estrechos. De ahí la conocida importancia biológica de los sistemas
tampón.
 JUSTIFICACION
BIOQUÍMICA
La importancia de la práctica experimental radica principalmente en que brinda la
posibilidad de corroborar, en algunos casos, de manera sencilla y de forma
adecuada, muchos de los procesos bioquímicos básicos sobre los que se
fundamenta la vida, que se estudian en la teoría y además permite acceder al
aprendizaje de la bioquímica no desde lo abstracto de la ciencia sino desde una
perspectiva enfocada en algo real y cotidiano, permitiéndose desarrollar habilidades
analíticas y experimentales mediante la observación y el desarrollo de los
experimentos en el área de la bioquímica.

Al realizar las diferentes prácticas de laboratorio se desarrollaron temáticas como

solubilidad y PH que permitieron aterrizarlos al área de la bioquímica ya que como
organismos vivos debemos mantener un equilibrio, entre los amortiguadores que
poseemos se conocen algunos como los aminoácidos y las proteínas. Con el fin de
entender la relación entre la función de biomoléculas como las proteínas, lípidos y
carbohidratos, se realizaron distintas pruebas, para determinar algunas
características, reacciones, solubilidad y finalmente la fotometría, no sólo desde la
perspectiva biológica, sino también bioquímica.
BIOQUÍMICA PRACTICA N°1

Solubilidad
 OBJETIVO
BIOQUÍMICAGENERAL
MATERIALES
 Termómetro
Observar e identificar de manera  Pinzas
experimental la variación de la  Vasos de precipitados
solubilidad en algunos sólidos,  Embudo de vidrio
teniendo en cuenta los factores que  Tubos de ensayo
intervienen.  Papel de filtro
 Agitador de vidrio
 Tapones
OBJETIVOS ESPECÍFICOS REACTIVOS
 Determinar experimentalmente  Dicromato de potasio
la solubilidad de diferentes
 Cloroformo
sólidos
 Carbón en polvo
 Estudiar cómo afecta la
 Sulfato de cobre
temperatura a la solubilidad
 Acido benzoico
INTRODUCCIÓN  Sulfato de níquel
En esta práctica nuestro interés está  Yodo en cristales
centrado en la solubilidad de algunas
sustancias sólidas, No es nuestro
propósito, en consecuencia,
determinar las solubilidades absolutas
de dichos compuestos.
PROCEDIMIENTOS
 RESULTADO

BIOQUÍMICA

Ambos solutos se El yodo se disolvió de manera Se formó una disolución entre el

disolvieron en el agua, inmediata en el cloroformo, ya
pero el que lo hizo de que el yodo se disuelve en
manera más rápida fue solventes no oxigenados
el sulfato de níquel produciendo color rojo
púrpura.
carbono en polvo y el dicromato de
potasio, pero el ácido benzoico se
precipito en la superficie formando
unas capas ya que es poco soluble
en agua por esta constituido por
benceno el cual es insoluble en agua.

La sustancia se filtró Al filtrar se pudo observar

debido a que el carbón
en polvo compuesto de
gran tamaño en
comparación con las
demás sustancias.
que la solución está de
manera homogénea ya
que el ácido benzoico se
disolvió por la acción de la
temperatura.

DESCRIPCIÓN SOLUBLE INSOLUBLE

NiSO₄ (H₂ O)₆ + H2O si
CuSO4·5H2O) + H2O si
CuSO4·5H2O + H2O( agua destilada) si
CHCl3+ I si
H2O + I no
carbón en polvo+ H2O si
K2Cr2O7+ H2O si
C7H6O2+ H2O No
 BIOQUÍMICA

1. Para el procedimiento ¿Cuál sustancia se disolvió primero?

El sulfato de níquel, debido a que los sulfatos son sustancias iónicas, por lo
tanto, son altamente solubles en disolventes polares como el agua.

2. ¿En el procedimiento 2 que ocurrió y por qué?

Al agregar sulfato de cobre en el tubo de ensayo que contenía agua caliente
se pudo observar que este se disolvió más rápido por el efecto de la
temperatura, ya que esta causa que las piezas del soluto se separen y
vuelvan libremente a la interacción con el disolvente

3. En que solvente se disolvió más fácilmente el yodo ¿Por qué?

Se disolvió de manera más rápida en el tubo de ensayo que contenía
cloformo ya que este es poco polar.

4. Al mezclar los reactivos del procedimiento 4 y estando a temperatura

ambiente. ¿Qué sustancia se disolvió y cuáles son las sustancias que sufren
disolución?
La sustancia que se disolvió fue el carbón en polvo y el dicromato de potasio
a excepción del ácido benzoico formo de capas, a pesar de que el grupo de
ácido carboxílico es polar, la mayor parte de la molécula del ácido benzoico
es no polar.

5. Al filtrar la mezclar que reactivo quedo en el papel filtro y por qué. Cuando se
deja enfriar la mezcla que ocurre y por que
El carbón en polvo ya que es un compuesto de moléculas de gran tamaño y
cuando se dejó enfriar la mezcla estaba más compacta, ya que el ácido
benzoico se disuelve completamente por la acción de la temperatura.
6. Elabore un cuadro clasificatorio relacionando cada uno de los solutos
con sus componentes solventes e indicar si hubo o no disolución.
DESCRIPCIÓN SOLUBLE INSOLUBLE
NiSO₄ (H₂ O)₆ + H2O si
CuSO4·5H2O) + H2O si
CuSO4·5H2O + H2O( agua destilada) si
CHCl3+ I si
H2O + I no
carbón en polvo+ H2O si
K2Cr2O7+ H2O si
C7H6O2+ H2O No
BIOQUÍMICA

PRACTICA N°2

AGUA, PH Y
AMORTIGUADORES
 BIOQUÍMICA GENERAL.
OBJETIVO MATERIALES.
 Tubos de ensayo
 Determinar experimentalmente
 Papel tornasol rosado
el PH de soluciones acidas y
 Beaker
básicas de soluciones
acuosas.  Papel tornasol azul
 Probeta
OBJETIVOS ESPECÍFICOS  Pipeta
 Aprender el funcionamiento  Vaso de precipitado
peachímetro y el uso de los  PH-Metro
indicadores.  Ácido Clorhídrico
 Diferenciar entre unas  Ácido Acético
sustancias básicas y acidas.  Hidróxido de amonio
 Analizar las propiedades de  Hidróxido de sodio
soluciones ácidos y básicas.  H2O destilada

INTRODUCCIÓN. MATERIALES POR GRUPO

En este laboratorio pondremos en
práctica como determinar el PH y el  Gaseosa negra
POH en diferentes soluciones por  Leche
medio de indicadores universales (que
 Jugo de limón
varían reversiblemente de color en
 Saliva
función del PH del medio en que están
 Orina
disueltas) y el PH metro (el cual es un
sensor utilizado para la misma).
 BIOQUÍMICA
PROCEDIMIENTO

Se tomaron cuatro tubos Se repitió el

de ensayo, se depositó Se tomó un tubo que procedimiento anterior,
una tira de papel de contenía tornasol azul, se
adicionando a cada tubo
tornasol azul y en otros adicionaron 2ml de
de ensayo 2ml de
cuatro deposito una tira solución diluida de HCl y
solución diluida de cada
de papel tornasol rosado en otro tubo que contenía
uno de los compuestos
manteniéndola por 10 tornasol rosado se siguientes: ácido acético,
segundos agregaron 2ml HCl hidróxido de amonio e
diluido.
hidróxido de sodio.

Se tomaron 12beaker con Medir el PH de cada una Anotamos los resultados

sustancias de uso de las sustancias con el
cotidiano PH metro, teniendo en
cuenta los electrodos
deben enjuagarse con
agua destilada antes y
después de utilizarlos y
no se deben tocar con la
mano.
RESULTADO
 BIOQUÍMICA

SOLUCIÓN Nombre PH

COCA COLA 3.66

LIMON 3.14

VINAGRE 3.53
BIOQUÍMICA
ORINA 4.39

LECHE 5.08

SALIVA 5.32
 BIOQUÍMICA

BIOQUÍMICA

PRACTICA N°3

DETERMINACION DE
AMINOACIDOS Y PROTEINAS
 OBJETIVO GENERAL
BIOQUÍMICA
 Determinar la solubilidad y MATERIALES.
desnaturalización de las proteínas  Gradilla
con varios agentes físicos y  Trípode
químicos  Malla
OBJETIVO ESPECÍFICOS  Estufa
 Identificar y obtener proteínas y  Balanza
aminoácidos mediante  Pipetas
reacciones  Probetas
 Conocer las propiedades físicas y  Tubos de ensayo
química de los aminoácidos y  Agitador
proteínas  Beakers
 Conocer algunas propiedades de  Erlenmeyer
las proteínas  Embudo
INTRODUCCIÓN REACTIVOS.
Los aminoácidos son  Ácido clorhídrico
sustancias cristalinas, casi  Nítrico
siempre de sabor dulce; tienen  Pícrico
carácter ácido como propiedad  Tánico
básica y actividad óptica;  Fosfotunstico
químicamente son ácidos  Acético o triclocloroacetico
carbónicos con, por lo menos,  Nitrato de plata
un grupo amino por molécula,  Ácido nítrico
20 aminoácidos diferentes son  Alcohol etílico
los componentes esenciales de  Sulfato de cobre
las proteínas. Aparte de éstos,
 Cloruro mercúrico
se conocen otros que son
 Nitroprusiato de sodio
componentes de las paredes
 Hidróxido de sodio
celulares. Las plantas pueden
 Hidróxido de amonio
sintetizar todos los
aminoácidos, nuestro cuerpo  Cetona
solo sintetiza 16, aminoácidos,  Reactivos de millón
éstos, que el cuerpo sintetiza  Biuret
reciclando las células muertas  Glicina
a partir del conducto intestinal  Triptófano
 Huevo
 Cisteína
 PROCEDIMIENTO
EXPERIMENTO OBTENCION DE LA ALBUMINA
BIOQUÍMICA

Se batió la clara de Se Filtró la mezcla a

Se preparó una huevo por un tiempo través de una tela fina y
solución acuosa de corto y se mezcló luego se guardó el filtrado
albumina de huevo con cinco veces su para los experimentos
volumen de agua siguientes.

EXPERIMENTO “COAGULACION”

En 5 tubos de Tubo 2. 2ml de etanol

tubo 1 caliéntelo, Tubo 3. 1ml de solución
ensayo
agregar 1 o 2 gotas concentrada de NaOH
coloqu
de ácido acético Tubo 4. 1ml de HCL
e porciones
diluido concentrado
de
aproximadamente, Tubo 5. 1ml de HNO3
2ml de albumina
EXPERIMENTO “REACCION DE BIURET”

Enumerar 3 tubos de en el número 2 colocar en el número 3 colocar

ensayo, en el número 1ml de solución de 2ml de albumina de
1 colocar 2ml de agua cisteína u huevo, agregar a cada
destilada u tubo 2ml de reactivo
aminoácido de biureth, mezclar

EXPERIMENTO “REACCION XANTOPROTEICA”

Agregue a un tubo de
ensayo 4ml de
solución de albumina,
más 1 o 2ml de ácido
nítrico concentrado
observe, caliente por
10 minutos, enfrié y
agréguele 4 ml de
solución de NaOH al
36% (o NH4OH)
en el número 3 colocar
2ml de albumina de
huevo, agregar a
cada tubo 2ml de
reactivo de biureth,
mezclar

EXPERIMENTO “REACCIONES DE MILLON”

Agregue en un tubo de luego deje enfriar a en el número 3 colocar

ensayo 3 ml de albumina,
más 5 gotas de reactivo
de millón, caliente en un
balón de agua hirviendo
por 10 minutos
temperatura ambiente 2ml de albumina de
y agréguele 5 gotas de huevo, agregar a cada
nitrito de sodio tubo 2ml de reactivo
observe el color de biureth, mezclar
 EXPERIMENTO “DESNATURALIZACION”
BIOQUÍMICA
Colocar en 3 tubos de Al tubo N° 2 agregarle 2 Mida el PH en las 3
ensayos 2ml de clara de ml de HCl al 1% muestras por medio
huevo 4Al tubo N° 3 agregarle del papel de PH o un
2 ml de NaOH al 3% peachimetro
Al tubo N° 1 agregarle 2
ml de agua
la clara de huevo

EXPERIMENTO DE PRECIPITACION CON REACTIVOS DE ALCALOIDES

Prepare 3 tubos de el primer tubo añadir al segundo tubo

ensayo que contengan 2 gota a gota solución de añadir acido tánico y
o 3 ml de solución diluida ácido pícrico (exceso). al tercer tubo ácido
de albumina de huevo Acidificar la solución de fosfotunstico.
proteína con HCL

EXPERIMENTO “CISTEINA”

Disolver unos cuantos añadir 0.5 ml

cristales de cisteína, o de solución añadir 0.5 ml de
cistina o metionina fresca NH4OH
de
nitroprusiato de sodio
recientemente
preparado,
 EXPERIMENTO DE BIURET
BIOQUÍMICA
IMAGEN SUSTANCIAS OBSERVACIONES RESULTADO
La prueba de
Se disolvió completamente Biuret fue
formando una solución negativa ya que
AGUA homogénea, tuvo cambio esta prueba
DESTILADA de color a un azul claro y se detecta la
precipitaron burbujas en la presencia de
parte superior del tubo. polipéptidos y
proteínas.

Este aminoácido
Presento un cambio de al reaccionar con
color a un gris azul de NaOH y acetato
CISTEÍNA manera instantánea, una de plomo
parte de la cisteína se producen un
precipito al fondo del tubo precipitado café a
de ensayo y presento una negro, el cual es
textura espesa. sulfuro de plomo.
La prueba fue
Presento burbujas en la negativa, pero
ALBUMINA parte superior del tubo, se cuando el
DE HUEVO disolvió completamente y reactivo de Biuret
cambio de color a un azul se encuentra en
claro. presencia de
albumina cambia
a color violeta,
indicando la
presencia de
proteína tal ese el
caso de esta.
 BIOQUÍMICA EXPERIMENTO DE DESNATURALIZACIÓN

IMAGEN SUSTANCIA DESCRIPCIÓN RESULTADO

La albumina se
disolvió en agua ya
Clara de huevo Se disolvió que es una proteína
y completamente y en la soluble en ella.
H2O parte superior del tubo
tenía pequeñas
burbujas.

El ácido clorhídrico
Formo una solución aumenta la
Clara de huevo homogénea, con concentración de
y textura espesa y protones del medio,
HCl cambio su color a un disminuye el PH.
blanco intenso. El exceso de
protones cambia las
cargas de los
grupos ionizables
que permiten
mantener la
estructura terciaria
de la proteína, así
como también
afecta las uniones
puente de
hidrógeno de la
estructura
secundaria.
El NaOH afecta
moderadamente el
Burbujas en la parte PH de la albumina,
Clara de huevo superior del tubo y se la tendencia de los
y disolvió iones es a estar en
NaOH completamente. la forma menos
protonada posible.
 BIOQUÍMICA

 PAPEL UNIVERSAL
IMAGEN SOLUCIONES DESCRIPCION PH
Cambio de
Clara de huevo color a fucsia 3
y
HCl

Cambio de
Clara de huevo color a amarillo
y pálido
H2O 9

Clara de huevo
y 14
NaOH Cambio de
color a Negro
 BIOQUÍMICA
PHMETRO
IMAGEN DESCRIPCION PH

Clara de huevo 4.87

y
HCl

Clara de huevo 4.42

y
H2O

Clara de huevo 12
y
NaOH
REACCIONES DE MILLON
BIOQUÍMICA
IMAGEN SUSTANCIAS OBSERVACIONES RESULTADO
El ácido acético
convierte a la
albumina en un gel
sólido, funciona
como catalizador ya
que aumenta la
Coagulación inmediata temperatura de la
Albumina +calor +ácido hacia la parte media proteína en el en el
acético + cetona del tubo baño de maría.
Al aplicarle calor
supera las fuerzas
de repulsión y
atracción que
conforman las
estructuras
secundaria y
terciaria de la
proteína.
Coagulación parcial en Al añadir etanol y
parte media se formó cetona ocurre lo
Albumina + etanol un anillo en se apreció mismo que cuando
+cetona claramente un mezcla se fríe un huevo, las
heterogénea cadenas de
proteína se
desenrollan y se
forman enlaces
que unen unas
cadenas con otras.

Albumina + solución de No hubo coagulación

NaOH + cetona la cetona No ocurrió
quedó arriba reacciona.
BIOQUÍMICA

Albumina + HCl + cetona Se desnaturalizaron El ácido clorhídrico

las proteínas y se aumenta la
precipitaron al fondo concentración de
del tubo de ensayo, protones del medio,
hubo coagulación total disminuye el PH.
de la mezcla

Albumina+HNO3+cetona se forma un Algunos de sus

precipitado de color grupos carbonilos
blanco de las cadenas
laterales se
protonan y pierden
su carga iónica,
produciéndose así
cambios
conformacionales
que provocan su
desnaturalización
 BIOQUÍMICA

EXPERIMENTO DE PRECIPITACION CON REACTIVOS DE ALCALOIDES

IMAGEN SUSTANCIAS OBSERVACIONES RESULTADO
El ácido quedo en la Las aminas primarias,
parte superior del secundarias y
tubo, cambio su color terciarias reaccionan
Albumina y ácido a amarillo claro, la con el ácido pícrico en
pícrico albumina se precipito este
hacia abajo. caso reaccionara con
Precipitación total la parte aminada de
las proteínas y
aminoácidos
formando un
precipitado color
amarillo.

El ácido quedo en la afecta a la envoltura

parte superior del acuosa de las
tubo, cambio su color proteínas también la
a marrón. No se carga eléctrica de los
Albumina y ácido precipito grupos ácidos y
tánico básicos de las
cadenas laterales de
los aminoácidos. Esta
alteración de la carga
superficial de las
proteínas elimina las
interacciones
electrostáticas que
estabilizan la
estructura terciaria y
provoca su
precipitación.
La albumina se Disminuye el PH del
coagulo cambio su medio, cuando la
color a blancuzco y se proteína tiene cargas
Albumina y ácido precipito hacia abajo. positivas netas, estos
fosfotunstico Precipitación parcial cationes proteicos
forman complejo con
iones cargadas
negativamente para
forman proteínas –
tungstato y un
precipitado flucolento
espeso es formado.
 BIOQUÍMICA

CUESTIONARIO
1. Escriba la reacción para cada prueba realizada

 REACCION XANTOPROTEICA

 EXPERIMENTO DE BIURET

 REACCIONES DE MILLON
 BIOQUÍMICA

2. Cuáles son los principales componentes de las distintas fracciones

proteicas

 conalbúmina (13%)
 ovomucoide (11%)
 lisozima (3,5%)
 ovomucina (1,5%)
 flavoproteinas (0,8%)
 avidina (0,05%)

3. Los principales métodos empleados para la determinación de proteínas

totales son los siguientes:
Método del Biuret
En solución alcalina el Cu+2 reacciona con el enlace peptídico de las
Proteínas dando un color purpúreo que se cuantifica
Espectrofotométricamente (540nm). Como estándar se utiliza una solución
de albúmina.
Proteína + Cu+2 Complejo Cu-Proteína (púrpura)
Muestra: suero o plasma (heparina o EDTA). Separar el suero del coágulo o
el plasma de las células antes de 3h. Si el paciente está acostado durante la
Extracción el resultado será menor.
Método de Lowry
Dependen de la concentración de tirosina y triptófano de la muestra.
Consiste en dos reacciones:
2. Reacción de Folin: característica de los grupos –OH reductores de los
Aminoácidos tirosina y triptófano que, junto con los complejos Cu+2,
Reducen el reactivo de Folin generando un color azul.

4) estructura del complejo en la reacción Biuret

La reacción se basa en la formación de un compuesto de color violeta, debido a la
formación de un complejo de coordinación entre los iones Cu2+ y los pares de
electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos
presentando un máximo de absorción a 540 nm.
 BIOQUÍMICA

5) principales métodos de determinación de proteínas séricas

REACCION DEL MILLÓN

Se debe a la presencia del grupo hidroxifelino en la molécula proteica. Cualquier
compuesto fenólico que no esté sustituido en la posición 3,5 como la tirosina, el
fenol y el timol producen resultados positivos en esta reacción. De estos
compuestos, solo la tirosina está presente en las proteínas, de manera que solo las
proteínas que tienen este aminoácido ofrecen resultado positivo
REACCION BIURET
El nombre de la reacción procede del compuesto coloreado formado por la
condensación de 2 moléculas de urea con eliminación de amoniaco. Contiene
Cu2SO4 en solución acuosa alcalina, esta reacción provoca un cambio de coloración
dependiendo la naturaleza de la proteína; las proteínas y péptidos dan un color
rosado.
REACCION DE XANTOPROTEICA
Esta prueba caracteriza a los aminoácidos aromáticos (tirosina, fenilalanina,
triptófano. Esta reacción se debe la presencia de un grupo fenilo en la molécula
proteica. Los complejos de la molécula proteica que son de importancia en esta
reacción son la tirosina y el triptófano. La fenilalanina no reacciona en las
condiciones que se realiza en el laboratorio. Para esta prueba se produce la
nitración del anillo bencénico presente en los aminoácidos obteniéndose
nitrocompuestos de color amarillo, que se vuelven anaranjado en medio fuertemente
alcalino (formación de ácidopicrámico o trinitrofenol). Las proteínas que tienen en
su composición estos aminoácidos también darán la reacción. La positividad se
reconoce por la aparición de un color amarillo o verde debido a la formación de
nitrocompuestos.

Prueba de los grupos SH:

Es una prueba para identificar aminoácidos azufrados y las proteínas que los
contienen, se reconocen por la formación de una coloración negra o gris.
Prueba de Sakaguchi: Esta prueba es positiva para compuestos que contengan
el grupo guanidinio como la arginina ya que casi todas las proteínas poseen
 BIOQUÍMICA

ese aminoácido. El reactivo que se utiliza contiene α-naftol e hipoclorito sódico, en

medio alcalino. La aparición de una coloración roja es indicativa de una reacción
positiva. El desarrollo de un color rojo marca la reacción positiva y se debe a la
presencia del grupo guanidina, que caracteriza la arginina

ion mercurio en forma de óxidos amarillos. Además, proteínas como la ovoalbúmina

producen un precipitado blanco que progresivamente por acción del calor se torna
rojo; pero las peptonas dan solamente una solución de color rojo.

Reacción de Xantoproteica: Esta prueba caracteriza a los aminoácidos aromáticos

(tirosina, fenilalanina, triptófano. Esta reacción se debe la presencia de un grupo
fenilo en la molécula proteica. Los complejos de la molécula proteica que son de
importancia en esta reacción son la tirosina y el triptófano. La fenilalanina no
reacciona en las condiciones que se realiza en el laboratorio. Para esta prueba se
produce la nitración del anillo bencénico presente en los aminoácidos obteniéndose
nitrocompuestos de color amarillo, que se vuelven anaranjado en medio
fuertemente alcalino (formación de ácidopicrámico o trinitrofenol). No puede
realizarse esa reacción para identificar albúmina en orina, por el color anaranjado
dela reacción final. Las proteínas que tienen en su composición estos aminoácidos
también darán la reacción. La positividad se reconoce por la aparición de un color
amarillo o verde debido a la formación de nitrocompuestos.
Prueba de los grupos SH: Es una prueba para identificar aminoácidos azufrados y
las proteínas que los contienen, se reconocen por la formación de una coloración
negra o gris.
Prueba de Sakaguchi: Esta prueba es positiva para compuestos que contengan el
grupo guanidinio como la arginina ya que casi todas las proteínas poseen ese
aminoácido. El reactivo que se utiliza contiene α-naftol e hipoclorito sódico, en medio
alcalino. La aparición de una coloración roja es indicativa de una reacción positiva.
El desarrollo de un color rojo marca la reacción positiva y se debe a la presencia del
grupo guanidina, que caracteriza la arginina.
Prueba de Hopkins-Cole: Implica la reacción del grupo indol del triptófano con el
ácido glioxílico y las proteínas que lo contienen, en presencia de ácido sulfúrico
concentrado. La positividad se reconoce por la aparición de un anillo color violeta-
rojizo.
Prueba de Jaffé: Si acontece la aparición de una coloración roja, se tratará de una
prueba positiva para la creatinina. Puede ser leída a 520 nm, detectándose hasta 5
μg/mL.
Prueba de coagulación: Es una prueba para identificar: albúminas, globulinas,
glutelinas y prolaminas. La positividad se manifiesta por la formación de un coágulo.
No se conoce exactamente el mecanismo de reacción, se cree que ocurre cierta
deshidratación de la molécula proteica.
 BIOQUÍMICA

Prueba de Sulfato de amonio: Las proteínas, como otros coloides son precipitadas
por soluciones concentradas de sales de amonio [NaCl.

(NH4)2SO4 y NaSO4]. Aparentemente la precipitación se debe a la neutralización y

deshidratación de la molécula, seguida de agregación y precipitación.

Reacción de Ehrlich: La presencia de anillos aromáticos fenólicos o nitrogenados

en la cadena lateral de los Aminoácidos se puede identificar mediante la reacción
con ácido sulfanílico y nitrito de Sodio por formación de sales de Diazonio
fuertemente coloreadas permitiendo así detectar la presencia de Tirosina e Histidina
libres o formando péptidos y proteínas.

6) Clasificación de aminoácidos de acuerdo a la prueba realizada

7) que es cromatografía de intercambio iónico, de exclusión molecular, de

absorción, de partición y de afinidad

CROMATOGRAFIA DE INTERCAMBIO IONICO: Esta cromatografía es un

proceso que permite la separación de iones y moléculas polares basadas en las
propiedades de carga eléctrica de moléculas. La cromatografía de intercambio
iónico o cromatografía iónica (IC) es una cromatografía de líquidos en la que como
fase estacionaria se emplea una resina de intercambio iónico, de elevada masa
molecular y esencialmente insoluble.
Los procesos de intercambio iónico se basan en los equilibrios de intercambio iónico
entre los iones de una disolución y los iones del mismo signo que se encuentran en
la superficie de la resina.

CROMATOGRAFÍA DE EXCLUSIÓN MOLECULAR: es una de las técnicas más

sencillas de las empleadas en la separación de proteínas y ácidos nucleicos. a
cromatografía líquida de exclusión, SE-HPLC, es la técnica que mayor información
 BIOQUÍMICA

aporta sobre la composición del hidrolizado, ya que es el volumen molecular el

criterio de separación empleado, y no el estado de ionización, la carga o la
hidrofobicidad de los péptidos como en otras técnicas, que no obstante pueden ser
complementarias. También pusieron de manifiesto la ineficacia de los distintos
métodos en la separación de péptidos de peso molecular inferior a 1.000 Da.

CROMATOGRAFIA DE ABSORCION: En la cromatografía de adsorción o

cromatografía líquido-sólido, la fase estacionaria es un sólido, habitualmente sílice,
aunque en algunas ocasiones se emplea alúmina finamente dividida. Las
características de absorción en ambas columnas son similares y en ambas los
tiempos de retención se alargan a medida que la polaridad del analito aumenta. El
analito queda retenido en la fase estacionaria mediante fenómenos de adsorción.
El fundamento de la cromatografía de adsorción es similar al de la cromatografía de
reparto en fase normal (de hecho, el reparto muchas veces se debe a la adsorción).

En este caso, el índice de polaridad descrito para la cromatografía de reparto

también puede servir de orientación, sin embargo, en cromatografía de adsorción
es más conveniente aplicar la denominada fuerza eluyente (εº) de los disolventes,
que es la energía de adsorción por unidad de área. Los valores de εº de los
disolventes dependen del adsorbente empleado como fase estacionaria, y para la
sílice son 0’8 veces mayores que para la alúmina.

CROMATOGRAFIA DE PARTICION: La cromatografía de líquidos de alta eficacia

(HPLC) más empleada en la actualidad es la cromatografía de reparto, en la cual la
fase estacionaria es un líquido retenido sobre un soporte sólido y la separación se
debe a la diferente distribución del analito entre la fase móvil y la fase estacionaria:

Cromatografía líquido-líquido: la fase estacionaria líquida se retiene en las

partículas de relleno mediante adsorción física.
Cromatografía de fase unida químicamente: la fase estacionaria establece enlaces
con la superficie del soporte.
La primera resulta problemática en la elución en gradiente y por pérdida de fase
estacionaria, por lo que la cromatografía de fase unida químicamente es la más
utilizada.
Los soportes empleados suelen estar formados por partículas de sílice, resistentes,
porosas y con un diámetro de unos 3-5 μm. Su superficie está formada por grupos
silanol químicamente reactivos.

CROMATOGRAFIA DE AFINIDAD: Cromatografía por afinidad. Cuando la muestra

pasa por la columna, sólo son retenidas las moléculas que se unen de manera
selectiva al ligando por afinidad y las que no se unen avanzan con la fase móvil.
Después, los analitos retenidos pueden ser arrastrados cambiando las condiciones
de la fase móvil.
La cromatografía de afinidad se basa en la unión específica y reversible de una
 BIOQUÍMICA

proteína a un ligando unido a la matriz. El ligando puede unirse de manera directa

a la proteína de interés o a una etiqueta molecular que se encuentre ligada a la
proteína. La cromatografía de afinidad es, en general, la técnica de purificación más
robusta y típicamente se utiliza en los pasos tempranos del esquema de purificación.
La purificación por cromatografía de afinidad puede ser el único paso requerido para
lograr un grado de pureza adecuado, dependiendo de la aplicación que se le quiera
dar a la proteína.
8. cuáles son las explicaciones prácticas de las pruebas realizadas
Las diferentes pruebas realizadas nos sirvieron para detectar la presencia de
proteínas en la clara de huevo además de observar su comportamiento en los
diferentes reactivos, lo que más se pudo notar fue que las proteínas se
desnaturalizaban y de precipitaba en la mayoría de los reactivos.
 REACCION XANTOPROTEICA
se puede considerar como una sustitución electrofílica aromática de los
residuos de tirosina de las proteínas por el ácido nítrico dando un compuesto
coloreado amarillo a pH básico.

 REACCIONES DE BIURET
La reacción se basa en la formación de un compuesto de color violeta, debido
a la formación de un complejo de coordinación entre los iones Cu2+ y los
pares de electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte de los
enlaces peptídicos

 REACCIONES DE MILLON
Es específica para el grupo fenólico, por lo tanto, la dan positiva todas las
sustancias que poseen esta función, como la Tirosina y todas las proteínas que
contengan Tirosina. El primer paso de la reacción de Millón consiste en la
nitración del anillo fenólico de la Tirosina, por el ácido Nítrico del reactivo. La
Tirosina nitrada forma complejos con los iones Mercurioso Hg(I) y Mercúrico
Hg(II) del reactivo produciendo un precipitado rojo o una solución roja, ambos
resultados positivos.
 PRECIPITACION CON REACTIVOS DE ALCALOIDES
Afecta a la envoltura acuosa de las proteínas también la carga eléctrica de los
grupos ácidos y básicos de las cadenas laterales de los aminoácidos. Esta
alteración de la carga superficial de las proteínas elimina las interacciones
electrostáticas que estabilizan la estructura terciaria y provoca su precipitación.
 BIOQUÍMICA

PRACTICA N°4

DIFERENTES PROPIEDADES DE
LOS LIPIDOS
 BIOQUÍMICA

OBJETIVO GENERAL. El cuerpo humano necesita de las

 Indicar algunas de las grasas para poder realizar la síntesis
características principales de de ciertas hormonas como la
los lípidos a partir de testosterona.
materiales orgánicos.
MATERIALES Y REACTIVOS
OBJETIVO ESPECÍFICOS  Tubos de ensayo
 Explicar la formación de sales  Mortero
a través del proceso de  Mechero
saponificación de los lípidos.  Becker
 Determinar la solubilidad de  Gotero
los lípidos a partir de distintos  Cinta de enmascarar
disolventes.  Bisulfato de potasio.
 Observar la coloración de los  Agua destilada
lípidos por medio de colorantes  Agua de bromo
establecidos.  Acetona
INTRODUCCIÓN  Sudan III
Los lípidos son biomoléculas  Ácido clorhídrico
orgánicas formadas principalmente  Hidróxido de sodio
por, carbono e hidrógeno y  Alcohol
generalmente oxígeno.  Éter
 Acetona
Ellos están presentes en el tejido de
los animales como (reserva de  Ácido etanoico
energía) y las plantas.  Ácido oleico
 Aceite mineral
Las grasas o lípidos en el organismo  Aceite vegetal
humano sirven como depósitos de  Cloroformo
energía, cómo protección de los
órganos, aislamiento del frío,
transporte de vitaminas liposolubles
disueltas en las grasas y para aportar
ácidos grasos esenciales.
 BIOQUÍMICA

PROCEDIMIENTO

1
2

4
3

5
 BIOQUÍMICA
SAPONIFICACIÓN
e
a
RESULTADOS
El aceite es menos denso y
flota sobre el agua, las
moléculas de agua son muy
pequeña en comparación
con la del aceite que son
más grande, el aceite halla
más facilidad de mesclase
consigo mismas que con las
del agua y recíprocamente.
RESULTADO EMULSION RESULTADO
Ocurre una disociación El agua y el aceite forma una
de las grasas (Aceite de emulsión de tipo oleoacuosa, el
oliva) en un medio aceite es la fase dispersa y el
alcalino (NaOH), agua es la fase continua. El
separándose glicerina y aceite forma el anillo en la parte
ácidos grasos. Estos superior porque tiene menor
últimos se asocian densidad que el agua, no se
inmediatamente con los mezclan porque su
álcalis constituyendo las composición es diferente el
sales sódicas de los aceite está formado por
ácidos grasos el jabón. carbono e hidrogeno además
Esta reacción se esta es una molécula es aún
denomina también más grande que el agua que
desdoblamiento está conformada por oxigeno e
hidrolítico y es una hidrogeno siendo está más
reacción exotérmica pequeña, el agua es polar y el
aceite es apolar.
La lecitina es un emulsionante
compuesta por fosfolípidos con
el aceite de oliva forma una
emulsión muy estable, la
homogeneización produce una
pequeña gota, rodeadas por
una capa concéntrica de
fosfolípidos.
El aceite de oliva no se El ácido oleico es un No se mezclan por la
puede mezclar con el ácido graso por lo que cantidad de carbonos, si
agua ya que son son molécula anfipaticas, posee gran cantidad de
moléculas diferentes, es decir son bipolares, puentes hidrogeno es
además el color blanco que tienen una son posible que se una al
es producido al momento hidrófila, con afinidad por agua, y además de eso
de agitación que hace el agua, constituida por el debe tener pocos
que se vuelva turbio. grupo carboxilo. Carbonos para que sea
miscible en ella.
 BIOQUÍMICA
PRUEBA PARA LIPIDOS

PRUEBA PARA TINCION

INSTAURACIÓN

El olor que producía la mezcla se llama El sudan III es un colorante que se

acroleína es un líquido incoloro, o utiliza para detectar específicamente
amarillo, de olor desagradable. Se las grasas, porque es insoluble en
disuelve fácilmente en agua y se agua y en cambio es soluble en las
evapora rápidamente cuando se grasas. Al ser de color rojo, cuando
calienta. También se inflama se disuelve tiñe las grasas de color
fácilmente. Se pueden formar rojo anaranjado.
pequeñas cantidades de acroleína y
dispersarse por el aire cuando se
queman aceites.

REACCIONES
PRUEBA PARA INSTAURACIÓN

SAPONIFICACION
 BIOQUÍMICA
CUESTIONARIO
1. ¿Cómo se encuentran los fosfolípidos en la membrana?
los fosfolípidos tienden a organizarse con sus colas hidrofóbicas hacia el interior y
con sus cabezas hidrofílicas hacia fuera. Si los fosfolípidos tienen colas cortas,
pueden formar una micela (una esfera pequeña de una sola capa), mientras que, si
tienen colas más voluminosas, pueden formar un liposoma (una gota de membrana
bicapa con un hueco en su interior)
2. Si la extracción de colesterol no se realiza en condiciones Anhidras ¿Qué
Resultado Esperaría?
Las lipoproteínas se encargan de que el colesterol de difícil solubilidad en el agua,
pueda transportarse más fácilmente en la sangre.
3. ¿Porque la lecitina forma una emulsión en presencia de agua?
La lecitina debe tener la capacidad de integrarse en la estructura del agua, algo así
como infiltrarse, debe ser algo parecido a lo del jabón, que tiene una parte que atrae
al agua (hidrofilica) y otra que atrae a las grasas o aceites (hidrofóbica), y que puede
emulsionar a las grasas.
Concisamente, alguna parte de la molécula debe tener la capacidad de formar
puentes de hidrógeno con las moléculas de agua, lo que le permite emulsionar con
el agua.
4. ¿Qué son los jabones?
El jabón generalmente es el resultado de la reacción química entre un álcali
(generalmente hidróxido de sodio o de potasio) y algún ácido graso; esta reacción
se denomina saponificación.

los jabones se pueden obtener mediante la saponificación, en el proceso de

hidrólisis.
5. ¿Cuáles son las técnicas de análisis de colesterol y de triglicéridos?
Forma en que se realiza el análisis o prueba

La sangre se extrae de una vena, por lo general de la parte interior del codo o del
dorso de la mano. El sitio se limpia con un desinfectante (antiséptico). El médico
envuelve una banda elástica alrededor de la parte superior del brazo con el fin de
aplicar presión en el área y hacer que la vena se llene de sangre.
 BIOQUÍMICA
Luego, el médico introduce
suavemente una aguja en la vena y recoge la sangre en un frasco hermético o en
un tubo adherido a la aguja. La banda elástica se retira del brazo.
Una vez que se ha recogido la muestra de sangre, se retira la aguja y se cubre el
sitio de punción para detener cualquier sangrado.
En bebés o en niños pequeños, se puede utilizar un instrumento puntiagudo llamado
lanceta para punzar la piel y hacerla sangrar. La sangre se recoge en un tubo
pequeño de vidrio llamado pipeta, en un portaobjetos o en una tira reactiva.
Finalmente, se puede colocar un vendaje sobre el área si hay algún sangrado.
6. ¿Qué importancia tienen los diferentes aspectos de la emulsión a niveles
de los seres vivos?
La mayor parte de las grasas alimentarias se suministran en forma de
triacilglicéridos, que se deben hidrolizar para dar ácidos grasos y monoacilglicéridos
antes de ser absorbidos. En niños y en adultos, la digestión de las grasas se produce
de forma eficaz y casi completa en el intestino delgado. En los recién nacidos, la
secreción pancreática de lipasas es baja. En los bebés, la digestión de las grasas
mejora gracias a las lipasas segregadas por las glándulas de la lengua (lipasa de la
lengua) y una lipasa presente en la leche materna. El estómago interviene en el
proceso de digestión de las grasas debido a su acción agitadora, que ayuda a crear
emulsiones. Las grasas que entran en el intestino se mezclan con la bilis y
posteriormente se emulsionan. La emulsión es entonces tratada por las lipasas
segregadas por el páncreas.
7. Qué enzima logra en el aparato digestivo la hidrólisis de las grasas? En
el estómago la enzima lipasa gástrica y en el intestino delgado la lipasa pancreática-
colipasa.
8. ¿Cuál es la función estructural de la lipoproteína plasmática?
En los seres vivos son esenciales los fenómenos de transporte, bien para llevar una
molécula hidrofóbica a través de un medio acuoso (transporte de oxígeno o lípidos
a través de la sangre) o bien para transportar moléculas polares a través de barreras
hidrofóbicas (transporte a través de la membrana plasmática). Los transportadores
biológicos son siempre proteínas.

9. Indica lo que ocurre con la mezcla aceite-Sudán III y aceite-tinta y explica a

qué se debe la diferencia entre ambos resultados. Cuando
se mezcla el aceite con el Sudán III, todo el aceite se tiñe de rojo puesto que es un
colorante lipófilo (soluble en grasas) y debido a esa afinidad se utiliza para revelar
la presencia de grasas. Pero la tinta roja no es soluble en grasas, por esa razón, el
aceite no se tiñe de rojo con la tinta china roja puesto que no se mezclan, y la tinta
se deposita en el fondo.
 BIOQUÍMICA

PRACTICA N°5

IDENTIFICACIÓN DE
CARBOHIDRATOS POR
REACCIONES FÍSICAS Y
QUÍMICAS.
BIOQUÍMICA

INTRODUCCIÓN
OBJETIVO GENERAL
Los glúcidos, carbohidratos, hidratos
● Observar el comportamiento de de carbono o sacáridos son
los glúcidos frente a los biomoléculas compuestas por
diversos reactivos carbono, hidrógeno y oxígeno, cuyas
OBJETIVOS ESPECIFICOS principales funciones en los seres
● Identificar los glúcidos por la vivos son el brindar energía inmediata
actividad que estos presentan y estructural. La glucosa y el
ante ciertas sustancias glucógeno son las formas biológicas
químicas. primarias de almacenamiento y
● Identificar carbohidratos con consumo de energía; la celulosa
ayuda de la reacción de molich
cumple con una función estructural al
● Aprender el papel de la
formar parte de la pared de las células
reacción de benedit en la vegetales, mientras que la quitina es el
glucosa. principal constituyente del
● Como se realiza el proceso de
exoesqueleto de los artrópodos.
hidrólisis en la sacarosa.
MATERIALES Y REACTIVOS
● Tubos de ensayo ● Lactosa
● Beakers ● Fructosa
● Mechero de bunsen ● Sacarosa
● Pipetas ● Maltosa
● Espátula ● Galactosa
● Agitador de vidrio ● Almidón
● Trípode ● Miel de abeja
● Maya de asbesto ● Ácido sulfúrico
● Balanza ● Agua destilada
● Gradilla de madera ● 1-naftol
● Probeta de 100 ml ● Etanol
● Escobilla ● Hidróxido de sodio
● Papel de filtro ● Lugol
● HCl
● Reactivo de benedict
● Feling A y Feling B
 BIOQUÍMICA

REACCION DE MOLICH

Solución de glucosa, solución de Acto seguido vierta con cuidado

arabinosa, solución hasta 3 ml de H2SO4 haciéndolo
de resbalar con cuidado por las paredes
fructosa(mora), solución de miel de del tubo sin agitar.
abeja, solución de sacarosa, solución
de jugo de caña luego en orden se
adicionaron de 8-10 gotas de reactivo
de Molich a cada uno de los tubos
agite.
REACCION DE BENEDIT

Solución de glucosa, solución de jugo La solución de almidón se prepara

de uva, solución de fructosa, solución
de maltosa y solución almidón. Se le
adiciona a cada uno un ml del
reactivo de Benedit luego se llevan
cada solución a baño de María por 5
minutos.
con 10 gramos de almidón en 100 ml
en agua destilada compare y saque
conclusiones en los procesos de
experimentación.

REACCION DE FEHLING

Poner en los tubos 3ml de la solución Se calientan los tubos a la llama del
de glucosa, maltosa, lactosa, fructosa mechero hasta que hierva
o sacarosa.

Se añadió 1 ml de Fehling A y B.

HIDROLISIS DE LA SACAROSA

Tomar 3ml de solución sacarosa y Se neutralizo añadiendo 3ml de

añadir 10gotas de HCL diluido solución alcalina

Calentar a la llama del mechero Se Realizó la prueba de fehling

durante 5 minutos con cuidado

Se dejo enfriar
 BIOQUÍMICA

RESULTADO
REACCIÓN DE MOLICH REACCIÓN DE BENEDICT

el anillo color rojo violeta se forma La solución de Benedict es de color azul claro
porque el ácido sulfúrico porque contiene sulfato de cobre. Cuando se
mezcla y se calienta con un azúcar, como la
concentrado (H2SO4) permite que
glucosa, la fructosa, la maltosa las cual tienen
los glúcidos se deshidraten formando electrones disponibles para donar, el cobre acepta
compuestos furfúricos por tanto estos electrones y se reduce, con lo cual se vuelve
diremos que como en nuestro caso marrón anaranjado.
las hexosas dan HMF
(hidroximetilfurfural) REACCIÓN DE BENEDICT
REACCIÓN DE BENEDICT

El resultado fue positivo para la

glucosa, lactosa y maltosa, este
reactivo reacciona principalmente
con los aldehídos porque tienen un
grupo carbonilo más expuesto, que le
da el carácter reductor, y existe la
presencia del precipitado rojo ladrillo
(óxido cuproso).
En presencia de HCl y en calor, la
sacarosa se hidroliza, es decir,
incorpora una molécula de agua y se
descompone en los monosacáridos
que la forman, que sí son reductores.
 BIOQUÍMICA

MECANISMO DE REACCIÓN
1. REACCION DE MOLISH Y GLUCOSA

2. REACCIÓN BENEDICT Y GLUCOSA

3. REACCIÓN FEHLING Y GLUCOSA

+ H2SO4
4.HIDRÓLISIS DE GLUCOSA
 BIOQUÍMICA

CUESTIONARIO.
1.A qué se debe el color que dan los azucares reductores con el reactivo de
benedict.
RTA: La prueba de Benedict es otra de las reacciones de oxidación, que como
conocemos, nos ayuda al reconocimiento de azúcares reductores, es decir, aquellos
compuestos que presentan su OH anomérico libre, como por ejemplo la glucosa,
lactosa o maltosa o celobiosa, en la reacción de Benedict, se puede reducir el Cu2+
que presenta un color azul, en un medio alcalino, el ión cúprico (otorgado por el
sulfato cúprico) es capaz de reducirse por efecto del grupo aldehído del azúcar
(CHO) a su forma de Cu+. Este nuevo ion se observa como un precipitado rojo
ladrillo correspondiente al óxido cuproso (Cu2O), que precipita de la solución
alcalina con un color rojo-naranja, a este precipitado se lo considera como la
evidencia de que existe un azúcar reductor.
2. ¿De qué depende las diferentes coloraciones que se dan en la reacción de
benedict?
RTA: depende del Cu2+ que da un color azul si no hay presencia de azúcar reductor,
el ion cúprico (otorgado por el sulfato cúprico) es capaz de reducirse por efecto del
grupo aldehído del azúcar (CHO) a su forma de Cu+. Este nuevo ion se observa
como un precipitado rojo ladrillo correspondiente al óxido cuproso (Cu2O), que
precipita de la solución alcalina con un color rojo-naranja.
3.Que es un azúcar reductor y un no reductor
RTA: azúcar reductor: Un azucares reductores es cualquier azúcar que es capaz de
actuar como un agente reductor porque tiene un grupo aldehído libre o un grupo
cetona libre. Todos los monosacáridos son azúcares reductores, junto con algunos
disacáridos, oligosacáridos y polisacáridos. Los monosacáridos se pueden dividir
en dos grupos: las aldosas, que tienen un grupo aldehído, y las cetosis, que tienen
un grupo cetona. Las cetosis deben primero tautomerizar a las aldosas antes de
que puedan actuar como azúcares reductores. Los monosacáridos comunes de la
dieta galactosa, glucosa y fructosa son todos azúcares reductores.
Azúcar no reductor: Los azúcares No Reductores son aquellos que se unen por
enlaces glucosídicos de tipo Alfa o Beta, cuando 2 monosacáridos iguales o
diferentes se unen forman un Disacárido, los Disacáridos por condensación liberan
una molécula de agua y son azúcares no reductores ya que el grupo Oxidrilo ( OH
) de una hexosa se combina con el grupo Aldehído ( CHO ) de otra hexosa liberando
1 molécula de H20, el licor de Feeling no tiene efecto sobre ellos lo cual los
 BIOQUÍMICA

determina como azúcares no reductores, por ej. la Sacarosa ( glucosa + fructosa )

Maltosa ( 2 unidades de alfa glucosa).
4. A qué se debe que la mayoría de los carbohidratos utilizados en la práctica
de la reacción de molich dan positivas.
RTA: Este ensayo es un ensayo para reconocimiento general de carbohidratos en
el que los polisacáridos y disacáridos se hidrolizan con ácido sulfúrico concentrado
hasta monosacáridos y se convierten en derivados del furfural o 5-hidroximetil
furfural los cuales reaccionan con α-naftol formando un color púrpura violeta.
5.Que papel cumple el ácido sulfúrico en la reacción.
deshidrata los azucares formando compuestos furfúricos por ejemplo las hexosas
hidroximetil furfural. Los compuestos furfúricos reaccionan positivamente con el
reactivo de Molish que contiene alfa naftol.
6.Que función cumple el afta-naftol en la reacción
la función que cumple es que se utiliza como reactivo de una solución.
 BIOQUÍMICA

PRACTICA N°6

HIDROLISIS DE
ALMIDON POR ACCION DE
ACIDOS
 BIOQUÍMICA

OBJETIVO GENERAL.  MATERIALES Y REACTIVOS

Demostrar la acción de los ácidos y
reactivos en el almidón
• Vaso precipitado
OBJETIVO ESPECÍFICOS • Solución de almidón
-Identificar la acción del yodo y e al 0.01%
fehling en el almidón de yuca y el • Termómetro H2SO4
almidón de laboratorio concentrado
- Hidrolizar la celulosa por medio de • Balanza
HCl y H2SO4 • Gradilla de
concentrado
• Algodón
INTRODUCCIÓN. • Baño María
• Almidón de
almidón es la sustancia con la que las laboratorio
plantas almacenan su alimento en (sedimento)
raíces (yuca), tubérculos (patata), • HCL concentrado
frutas y semillas (cereales). Pero, no • Reactivo de lugol
sólo es una importante reserva para • Reactivo de Benedict
las plantas, también para los seres • Agua destilada
humanos tiene una alta importancia • Almidón de yuca
energética, proporciona gran parte de
la energía que consumimos los
humanos por vía de los alimentos.
 BIOQUÍMICA

PROCEDIMIENTOS

Se tomó un trozo de El sedimento que se

Luego se lavó el filtrado
yuca se rayó y se logró retener en el
dos veces con agua y
mezcló con 100 ml de colador los examinamos
disolvimos en 2ml de
agua se agito y con un antes y después de
agua el sedimento del
colador filtramos en un agregarles una gota de
filtrado.
vaso precipitado. Lugol.

REACCIÓN DE YODO

En 3 tubos de ensayo
En el numero 3 un mililitro de Luego calentamos los
numerados vertimos 1 solución de almidón aislado tubos directamente al
ml de agua destilada en el laboratorio. A cada uno fuego. Se observó. Se
con el número 1, en el de los tubos le adicionamos dejó enfriar y
numero 2 un mililitro de de 2 a 3 gotas de reactivo de
nuevamente se
solución de almidón al lugol la observamos y
observa.
0.01 M comparamos.

HIDROLISIS

En el otro de 10ml de Luego la calentamos

Se tomaron 2 tubos de
solución de almidón por 10 minutos (Saque
ensayo limpios y se
aislado en el laboratorio a por alícuotas) luego
vierte en un tubo 10ml
uno de ellos le hicimos la prueba de
de solución de almidón
agregamos 1ml de HCl fehling A y B y lugol.
al 0.1%

En el tubo número 2
agregamos HCL y lo
calentamos y luego le
hicimos la prueba con
fehling
 BIOQUÍMICA

RESULTADOS
REACCIÓN DE YODO
IMAGEN SUSTANCIAS OBSERVACIONES RESULTADOS
 Almidón Al agregar lugol a los Esta reacción es el
de yuca dos tubos que contenían
resultado de la
 Almidón dos clases de almidones
cambiaron su coloración formación de cadenas
de
de un blanco a un azul
laboratorio de poli yoduro a partir
intenso.
 agua Al agregar al agua de la reacción del
destilada destilada yodo se
almidón con el yodo
percibió un cambio de
coloración a un presente en la solución
amarilloso.
de un reactivo llamado
Luego de flamear los
tubos se formó un lugol. La amilosa, el
precipitado cristalino en
componente del
el fondo.
almidón de cadena
lineal, forma hélices
donde se juntan las
moléculas de yodo,
formando un color azul
oscuro negro.

Este complejo que se forma es sensible a la temperatura, ya que, si se calienta el

tubo, el color desaparece esto se debe a que en las espiras del almidón se produce
una modificación y el yodo se libera.
Cuando el tubo está en una temperatura baja las espiras se reorganizan y se vuelve
a ver el color azul negro y al unirse dentro de estas cadenas provoca un efecto de
color de los enlaces en el rango del espectro de la luz de tonos naranjas, que
reflejados a nuestros ojos lo percibimos como color azul - negro, este resultado
también se debe a la formación de cadenas de poli yoduro a partir de la reacción
del almidón con el yodo presente en la solución de un reactivo llamado Lugol
 BIOQUÍMICA

HIDROLISIS
IMAGEN SUSTANCIAS OBSERVACIONES RESULTADOS
Almidón de Los tubos de El ácido en presencia de
laboratorio ensayos con los calor produce una
Almidón de diferentes hidrólisis total del almidón
yuca almidones en y forma glucosa maltosa e
HCl presencia de HCl y isomaltosa.
Benedict calor cambiaron de Se produce un
lugol color a un tono rompimiento total de los
rojizo claro, en enlaces que mantienen
presencia de lugol y unido a los monómeros
de benedict del almidón y se forma
resultaron positivo glucosa, maltosa,
a diferencia de las isomaltosa.
muestras que no se EL color rojo se debido
sometieron al calor que indico que el ácido
que dieron clorhídrico hidrolizó el
negativa. almidón de la solución y
produjo grandes
cantidades de azúcares
simples.
 BIOQUÍMICA

MECANISMO DE REACCIÓN

 HIDROLISIS
 BIOQUÍMICA

CUESTIONARIO

1. Como actúa la amilasa sobre el almidón

Es hidrolizar los enlaces glucosúricos del tipo alfa 1,4 de la fracción amilasa de la
molécula de almidón, la cual actúa desdoblando el almidón hasta alfa dextrinas, y
luego esta maltosa (aunque predominan las alfa dextrinas), en cierto punto del
hidrólisis, se producen eritrodextrinas (llamadas así porque se tiñen de rojo si se
usa lugol)
Se produce principalmente en el páncreas y en el caso del hombre y del cerdo se
produce en cantidad mucho menor en las glándulas salivales; fuera del credo, el
resto de los animales domésticos, únicamente producen amilasa de origen
pancreático.
La enzima amilasa degrada el almidón para así formar azucares más simples como
la glucosa, es decir, de moléculas complejas pasa a moléculas simples. Las
moléculas de glucosa atraviesan la pared intestinal y posteriormente llegan a la
sangre.

2.Como está constituido químicamente el almidón.

Químicamente podemos decir, que el almidón es un polisacárido de glucosa con
dos fracciones, por un lado, la amilasa que constituye un 20% y la amilopectina que
conforma el 80% restante. La amilasa es una cadena de tipo lineal de glucosas con
uniones alfa de tipo 1→ 4. La amilopectina tiene una estructura en forma ramificada
que se encuentra constituida por glucosas con uniones alfa 1→ 4 que se encuentran
unidas entre sí por puentes alfa 1→6. Las ramificaciones que tiene la amilopectina
conforman de entre un 5 y un 10 %. A través de hidrólisis, el almidón da glucosa, y
seguidamente por acción de enzimas (la enzima amilasa concretamente), da
maltosa, el cual es un disacárido de la glucosa que, a su vez, por la acción que
ejerce la maltasa, termina produciendo también la glucosa.
El almidón es un polisacárido formado por la polimerización de miles de monómeros
de glucosa que forman largas cadenas. El almidón está realmente formado por una
mezcla de dos sustancias, amilasa y amilo pectina.

3. que es la amilasa desde el punto de vista químico

La amilasa, es un enzima hidrolasa (reacción acido-base entre una sustancia,
muchas veces sal y agua), producida en las glándulas salivales y en el páncreas.
Una enzima es una proteína que se encarga de catalizar de manera específica las
diferentes reacciones bioquímicas que desarrolla el metabolismo. En el caso de la
amilasa, cataliza una reacción de hidrólisis que, en la digestión del almidón, da lugar
a azúcares simples.
 BIOQUÍMICA

La amilasa, o más propiamente dicho, las amilasas, porque existe más de una
isoforma, son enzimas hidrolasas, que catalizan la hidrólisis de ciertos polisacáridos,
concretamente amilopectina, amilosa, glucógeno y sus productos parcialmente
hidrolizados.
La amilasa es un enzima que tiene la función de digerir el glicógeno y el almidón
para formar azúcares simples, se produce principalmente en las glándulas salivares
y en el páncreas. Es una biomolécula.

4. Cuál es el papel q desempeña el almidón en los animales

Los carbohidratos son nutrientes esenciales, el almidón es un carbohidrato que
proporciona energía a los animales para sus actividades locomotrices.
 BIOQUÍMICA

PRACTICA N°7

INDENTIFICACION DE LAS
PROPIEDADES FISICAS Y
QUIMICAS DE ACIDOS
NUCLEICOS
 BIOQUÍMICA
OBJETIVOS GENERAL
Extraer DNA y RNA de tejidos
animales y vegetales e identificarlos.
OBJETIVOS ESPECÍFICOS
• Utilizar un método sencillo para
poder extraer el ADN del hígado del
pollo.
• Explicar el procedimiento de
extracción de ADN y su utilidad en
biología.
• Observar la estructura fibrilar del
ADN.
• Identificar la extracción de ácidos
nucleicos.
INTRODUCCIÓN
El ADN es una molécula formadas por
dos cadenas de polinucleotidos unidas
por puentes de hidrógenos. Los
nucleótidos que presenta son: la
timina, adenina, guanina y la citosina;
las cuales forman los genes, que de
acuerdo a las secuencias de orden en
que se encuentran, determinan las
características biológicas de todo ser
vivo. Además, esta esta molécula e
vida está constituido de una azúcar
desoxirribosa y un grupo fosfato.
MATERIALES Y REACTIVOS
 Hígado de pollo
 Cloruro de Sodio 2M
 SDS Detergente
 Arena
 Tela para filtrar
 Probeta
 Varilla de vidrio
 Mortero
 Vaso de precipitación
 pipeta
 BIOQUÍMICA
Colocamos en un mortero una
porción del hígado lo
trituramos en un mortero. Le
agregamos arena para que al
triturar se rompan las
membranas y queden los
núcleos sueltos hasta alcanzar
una homogenización.
Medimos el volumen filtrado
con una probeta.
Añadimos un volumen de
cloruro de Sodio (NaCl 2M)
igual al filtrado y se produce
un pequeño estallido de los
núcleos dejando libres las
fibras cromatinas.
EXTRACION DE ADN A PARTIR DE TEJIDO VEGETAL
Coja una cebolla grande y
píquela finamente. Ponga los
pedazos en una cacerola.
Mezcle 10 cucharadas de lava
vajilla con una cucharada de
sal y añada agua hasta obtener
0.75 litros.
Solubilidad haga la prueba de
solubilidad con alcohol, agua
friaa y caliente y acido diluido.
Observe si hay coagulación por
calentamiento, observe cómo
se comporta la solución
calentada al enfriarse.
PROCEDIMIENTOS
Sele adiciona 50ml de H2O
remover hasta que quede una
solución completa en forma de
papilla o puré.
Luego se adiciona 1ml de
solución de detergente SDS.
Añada una cuarta parte de
esta mezcla a la cebolla y
cuécela al baño de maría
durante 5 minutos.
Licue, esta mezcla a alta
velocidad durante 5 segundos.
Cuele la mezcla y añada unas
cuantas gotas de zumo de piña
natural al líquido ya colado,
PRUEBA 1
caliente una porción de
precipitado con 10 ml de H2SO4
al 10%
haga la prueba de molisch con
una parte de precipitado.
para precipitar las bases
purinicas compruebe que el pH
sea 7 si es acido neutralice con
amoniaco
Tomamos un beaker y
colocamos una tela fija sobre
esto para proceder a filtrar
varias veces (2 veces) con el
objeto de separar los restos de
los tejidos que quedaron por
romper.
Añadimos con una pipeta
50ml de alcohol al 96%,
dejando resbalar este por las
paredes del beaker y se
formen 2 capas. En la
interface precipita el ADN
para que obtengan mejores
resultados.
Viértalo en un vaso largo y
helado (probeta) y termine
añadiendo un tipo de
alcohol muy frio por los
laterales de manera que
flote sobre la mezcla.
agregue unas gotas de AgNO3 al 2%
mezclándola bien.
Precipitación de las bases purinicas:
Utilizando nitrato de plata en medio
neutro se puede conseguir la unión
de la plata (Ag) en forma iónica s la
base nitrogenada la que se precipita.
Luego de separarla de poli
nucleótido (RNA).
 BIOQUÍMICA
para demostrar la presencia
de fosforo otra porción de la

una gota de HNO3 aparezca el precipitado.

concentrado y de 2-5 gotas de
una solución de molibdato de
amonio al 10%.

PRESENCIA DE FOSFORO:

la presencia del fosforo en el El molibdato se une al fosforo

RNA se lleva a cabo utilizando formando en
como reactivo indicador el insoluble alto
molibdato de amonio. molecular
 BIOQUÍMICA

ANALISIS DE RESULTADOS

IMAGEN SUSTANCIAS OBSERVACÓN RESULTADOS

Hígado + sal Al agregar sal se la sal permite que el
observó un ADN se vuelva insoluble
pequeño y que las cadenas de ADN
burbujeo no sean cortadas, con el
fin de
separar las células
Hígado + fab se formó una , el detergente captura
mezcla los lípidos y las
heterogénea, proteínas, además en
espesa y se este proceso la
produjo un membrana plasmática y
agrietamiento. nuclear son destruidas

Hígado + se precipito la El alcohol es menos

Alcohol sustancia, está se denso que el agua por lo
separó en dos tanto se situó en la capa
capas y se superior haciendo que el
observó el ADN se precipitara, la
desprendimiento parte acuosa que se
de una mota ubicó en la parte inferior
blanca. contenía proteínas,
lípidos y otros
componentes celulares.
El ADN se observó en
forma de una mota
blanca y filamentosa.
 BIOQUÍMICA

Célula animal
IMAGEN SUSTANCIAS OBSERVACÓN
*Fibra *Agua fría+ fibra: se coagula, la fibra
*Agua fría sube a la parte superior del tubo
*Agua caliente *Agua caliente + fibra: la fibra queda en
*Alcohol la mitad del tubo de ensayo.
*Ácido acético *Alcohol + fibra: la fibra se precipito
*H2SO4 *Ácido acético + fibra:
*Reactivo de Benedict La fibra se precipito
*Moletato de Amonio *H2SO4 + fibra: cambio de color a negro
*Reactivo de Benedict+ fibra: la fibra
tomo el color del reactivo de color azul
*Moletato de Amonio+ fibra: parte de
la fibra se precipito y la otra parte de la
fibra subió a la boca del tubo

El ácido sulfúrico: hidroliza las uniones fosfodiester y N-glicosídicas, liberando

ribosa, bases púricas,
pirimidínicas y ácido fosfórico.
La pentosa en medio ácido se deshidrata originando furfural que reacciona con el
orcinol
dando un producto verde que demuestra la presencia de DNA y RNA.
El ácido acético: el Ácidos nucleicos precipita; obedeciendo a la reasociación
inespecífica de las largas cadenas de ADN simple cadena, que ocurre en múltiples
sitios formando una masa insoluble. Parte del ARN precipita. También precipitan
algunas proteínas debido a que la reacción se realiza en presencia de SDS y alta
fuerza iónica.
El alcohol: es menos denso que el agua por lo tanto se situó en la capa superior
haciendo que el ADN se precipitara, la parte acuosa que se ubicó en la parte inferior
contenía proteínas, lípidos y otros componentes celulares. El ADN se observó en
forma de una mota blanca y filamentosa
Moletato de Amonio
El grupo fosfato se identifica por la reacción para fósforo inorgánico, en medio ácido,
con el molibdato, da fosfomolibdato, color amarillo.
Agua caliente: Este paso se utiliza para liberar el DNA de sus barreras protectoras.
La incubación se utiliza para acelerar el proceso de rotura de las membranas y para
ayudar a disolver la bicapa de fosfolípidos mediante la desnaturalización de las
proteínas
 BIOQUÍMICA

de membrana y rotura de los enlaces que mantienen los fosfolípidos unidos. El calor
“ablanda” la membrana.
Agua fría: El agua fría ayuda a mantener el DNA intacto durante el proceso de
extracción. El enfriamiento de la solución ayuda a prevenir la desnaturalización que
podría destruir el DNA si se expusiera al calor de manera prolongada (protege el
DNA de enzimas que pueden destruirlo como las DNAasas ya que la refrigeración
ralentiza las reacciones enzimáticas).

IMAGEN SUSTANCIAS + ∆ OBSERVACÓN

*Fibra *Agua fría+ fibra: la fibra se precipito
*Agua fría *Agua caliente + fibra: la fibra se precipito
*Agua caliente *Alcohol + fibra: la fibra descendió al
*Alcohol fondo del tubo de ensayo
*Ácido acético *Ácido acético + fibra:
Se disolvió completamente

La estructura helicoidal del Ácidos nucleicos se mantiene gracias a interacciones no

covalentes. La energía libre de las interacciones no covalentes que mantienen la
estructura helicoidal del ADN no es muy superior a la energía de los movimientos
térmicos a temperatura ambiente, por lo que es posible desestabilizar la estructura
tridimensional del mediante un simple aumento de la temperatura.
Cuando se calienta de doble hebra (forma nativa) se rompen las fuerzas de unión
entre las dos hebras y acaban por separarse. Por tanto, el DNA desnaturalizado es
de una sola hebra. La transición entre el estado nativo y el desnaturalizado se
conoce como desnaturalización. En determinadas condiciones, una disolución de
DNA monocatenario.
Reactivo de benedict: si se calienta resultara positiva ya que contiene ribosa ARN
ósea desoxirribosa para el ADN, esta azúcar de cinco carbonos es de carácter
reductor.
 BIOQUÍMICA

Célula Vegetal
IMAGEN SUSTANCIAS OBSERVACÓN RESULTADOS
Cebolla + sal La mezcla se La sal en disolución actúa
homogenizo y se disminuyendo la solubilidad de
colocó más rígida. las proteínas, lo que hace que
precipiten y se separen más
fácilmente del ADN. La sal
también sirve para neutralizar
la carga negativa de los fosfato
Cebolla + fab se formó una El detergente ayuda a romper
mezcla la bicapa de fosfolípidos de las
heterogénea, membranas plasmáticas y la
luego de 10 envoltura nuclear.
minutos

Cebolla + se dividió en dos El alcohol es menos denso que

Alcohol capas y al cabo de el agua por lo tanto se situó en
un tiempo ocurrió la capa superior haciendo que
un el ADN se precipitara, la parte
desprendimiento acuosa que se ubicó en la parte
de motas blancas inferior contenía proteínas,
en la superficie lípidos y otros componentes
del tubo. celulares. El ADN se observó en
forma de una mota blanca y
filamentosa.

Extracto de piña: los ácidos nucleicos están rodeadas de proteínas del tipo
histonas, y para obtener un extracto más puro de ARN es necesario eliminarlas.
Para ello hay que utilizar enzimas proteolíticos. El zumo de piña contiene
bromelaína, una enzima capaz de hidrolizar las proteínas y por tanto capaz de
separar el ARN de las histonas. Este proceso ayuda a que el ARN se desempaquete
y es más fácil su extracción.
 BIOQUÍMICA

IMAGEN SUSTANCIAS OBSERVACÓN

*Fibra *Agua fría+ fibra: ocurrió un leve burbujeo en la
*Agua fría parte superior del tubo, no eran solubles
*Agua caliente *Agua caliente + fibra: burbujeo en la parte del
*Alcohol tubo, soluble
*Ácido acético *Alcohol + fibra: al agregar alcohol ocurrió un
*H2SO4 burbujeo, el ADN se precipito, insoluble
*Reactivo de *Ácido acético + fibra: el ADN se precipito
Benedict *H2SO4 + fibra: la fibra ascendió a la parte
*Moletato de superior del tubo de manera lenta
Amonio *Reactivo de Benedict+ fibra: la fibra tomo la
coloración del reactivo, soluble
*Moletato de Amonio+ fibra: insoluble, hay poca
cantidad de fibras suspendidas en la parte
superior del tubo

El ácido sulfúrico: hidroliza las uniones fosfodiester y N-glicosídicas, liberando

ribosa, bases púricas, pirimidínicas y ácido fosfórico. La pentosa en medio ácido se
deshidrata originando furfural que reacciona con el orcinol dando un producto verde
que demuestra la presencia de DNA y RNA.
El ácido acético: el Ácidos nucleicos precipita; obedeciendo a la reasociación
inespecífica de las largas cadenas de ADN simple cadena, que ocurre en múltiples
sitios formando una masa insoluble. Parte del ARN precipita. También precipitan
algunas proteínas debido a que la reacción se realiza en presencia de SDS y alta
fuerza iónica.
El alcohol: es menos denso que el agua por lo tanto se situó en la capa superior
haciendo que el ADN se precipitara, la parte acuosa que se ubicó en la parte inferior
 BIOQUÍMICA

contenía proteínas, lípidos y otros componentes celulares. El ADN se observó en

forma de una mota blanca y filamentosa
Moletato de Amonio
El grupo fosfato se identifica por la reacción para fósforo inorgánico, en medio ácido,
con el molibdato, da fosfomolibdato, color amarillo.
Agua caliente: Este paso se utiliza para liberar el DNA de sus barreras protectoras.
La incubación se utiliza para acelerar el proceso de rotura de las membranas y para
ayudar a disolver la bicapa de fosfolípidos mediante la desnaturalización de las
proteínas
de membrana y rotura de los enlaces que mantienen los fosfolípidos unidos. El calor
“ablanda” la membrana.
Agua fría: El agua fría ayuda a mantener el DNA intacto durante el proceso de
extracción. El enfriamiento de la solución ayuda a prevenir la desnaturalización que
podría destruir el DNA si se expusiera al calor de manera prolongada (protege el
DNA de enzimas que pueden destruirlo como las DNAasas ya que la refrigeración
ralentiza las reacciones enzimáticas).
Reactivo de benedict: si se calienta resultara positiva ya que contiene ribosa ARN
ósea desoxirribosa para el ADN, esta azúcar de cinco carbonos es de carácter
reductor.
Nota: Los ácidos nucleicos de los animales son más fáciles de extraer porque a
diferencia de las plantas no tiene pared celular.
 BIOQUÍMICA

IMAGEN SUSTANCIAS + ∆ OBSERVACÓN

*Fibra *Agua fría+ fibra: insoluble, se
*Agua fría precipito
*Agua caliente *Agua caliente + fibra: insoluble, se
*Alcohol precipito
*Ácido acético *Alcohol + fibra: se suspendió la fibra al
fondo del tubo de ensayo
*Ácido acético + fibra: se precipito la
fibra

La estructura helicoidal del Ácidos nucleicos se mantiene gracias a interacciones no

covalentes. La energía libre de las interacciones no covalentes que mantienen la
estructura helicoidal del ADN no es muy superior a la energía de los movimientos
térmicos a temperatura ambiente, por lo que es posible desestabilizar la estructura
tridimensional del mediante un simple aumento de la temperatura.
Cuando se calienta de doble hebra (forma nativa) se rompen las fuerzas de unión
entre las dos hebras y acaban por separarse. Por tanto, el DNA desnaturalizado es
de una sola hebra. La transición entre el estado nativo y el desnaturalizado se
conoce como desnaturalización. En determinadas condiciones, una disolución de
DNA monocatenario.
 BIOQUÍMICA

CUESTIONARIO.

1. Cuál es el papel biológico de los ácidos nucleicos.

Es participar en los mecanismos moleculares mediante los cuales la información
genética de los organismos se almacena y se transcribe y responsables de la
síntesis de proteínas.
Entre las principales funciones de estos ácidos tenemos:
- Duplicación del ADN
- Expresión del mensaje genético:
- Transcripción del ADN para formar ARNm y otros
- Traducción, en los ribosomas, del mensaje contenido en el ARNm a proteínas.
2. como se realiza la separación de nucleótidos del ARN por cromatografía de
intercambio iónico Es el método más utilizado para la separación de ácidos nucleicos.
El mecanismo básico es el intercambio reversible de los iones en solución con los grupos
funcionales unidos covalentemente a una fase estacionaria insoluble llamada resina. Por
ejemplo, un ácido nucleico con carga negativa a pH 7,0 se unirá a un intercambiador iónico
con grupos cargados positivamente, pero eludirá de la columna al cambiar el pH del tampón
(tampón de elución) ya que los iones del tampón de elución interaccionan con los grupos
cargados del ácido nucleico o del intercambiador iónico, respectivamente; primero eludirán
de la columna las moléculas cargadas positivamente que no se unen a la fase estacionaria
y posteriormente, al añadir el tampón de elución, eludirán las moléculas con poca carga
negativa neta y luego las de mayor carga negativa neta.
Una modificación de este método es la extracción en fase sólida, en la que se utiliza una
matriz intercambiadora de aniones empaquetada en columnas de polipropileno. La unión
se produce bajo condiciones de baja salinidad y durante los pasos de lavado y elución se
va incrementando la concentración de sales en los tampones correspondientes. Las
impurezas se eliminan debido a su diferente capacidad de unión y se obtienen una rápida
y eficiente purificación de los ácidos nucleicos
 BIOQUÍMICA

3. Explique el mecanismo de síntesis de proteínas

Las proteínas, por su tamaño, no pueden atravesar la membrana plasmática de la
célula, por eso es que existe en su interior un mecanismo que las construye
(síntesis) según las necesidades que tenga en ese momento la célula.

La síntesis de proteínas consta en realidad de dos etapas: la primera etapa

(transcripción) ocurre dentro del núcleo de las células eucariotas, aquí la secuencia
de nucleótidos que denominamos gen (segmento de ADN que determina una
proteína) se transcribe en una molécula de ARN. Posteriormente, en la segunda
etapa (traducción - síntesis de proteína propiamente dicha) el ARN pasa del núcleo
al citoplasma donde es traducida por los ribosomas que arman una proteína.

Este proceso es de fundamental importancia ya que básicamente todos los

caracteres que la célula presenta (fenotipo) está regulado por la suma de sus
actividades enzimáticas (ver enzimas). En pocas palabras, todo lo que la célula es
y puede realizar depende de la acción enzimática específica. Como las enzimas son
proteínas, la morfología y funcionamiento celular dependen de qué tipo de proteínas
la célula pueda armar. En el transcurso de la evolución, todos los organismos se
han asegurado que la información correspondiente para sintetizar sus enzimas
específicas se halle presente en sus células y en su descendencia. Químicamente
esa información reside en el ADN y gracias a la replicación, la transmisión está
garantizada.
4. Cual es papel que realiza el SDS en esta experiencia
 BIOQUÍMICA

Es una técnica ampliamente utilizada en bioquímica, genética, biología molecular

y ciencia forense para separar las proteínas de acuerdo a su movilidad
electroforética (en función de la longitud de la cadena poli peptídica, masa
molecular, modificaciones postraduccionales y otros factores). Gracias al SDS las
proteínas se desnaturalizan, perdiendo su conformación tridimensional. De este modo se
obtiene un fraccionamiento que obedece a: la diferencia de peso; la longitud de la cadena
(tamaño); y la forma de la proteína. Es el método de electroforesis empleado con mayor
profusión para analizar proteínas.

5. Como se realiza la absorción ultravioleta de los ácidos nucleicos

Los ácidos nucleicos absorben luz ultravioleta, con un máximo de absorción a 260
nm, por las bases, que son aromáticas. De esta manera se puede medir la
concentración.
Método espectrofotométrico: la cuantificación por este método se basa en la
absorbancia de los ácidos nucleicos en la región UV del espectro, por lo que la
medición a 260 nm permite determinar la concentración de ácidos nucleicos en una
muestra. La relación de absorbancias a 260 y 280 nm es usado como un parámetro
de pureza del ADN y ARN y se le conoce como densidad óptica O.D. y se basa en
el hecho de que los aminoácidos aromáticos como triptófano, tirosina y fenilalanina,
que se encuentran en todas las proteínas absorben fuertemente radiación UV a 280
nm. De manera que para que una muestra sea aceptada como “pura “la relación de
A260/A280 debe ser igual o mayor de 1,8 en el caso del ADN y de 2,0 para el ARN.
Si hay contaminación con proteínas o fenol u otras soluciones empleadas durante
la ex-tracción, el valor de la proporción es menor a 1.8 y no es posible cuantificar de
manera precisa el ADN. Se toma como referencia que una O.D. medida a 260 nm,
corresponde aproximadamente a:
1) 50 μ g/mL de ADN de doble cadena,
2) 40 μ g/mL de ARN o de ADN de cadena sencilla
3) 20 μ g/mL cuando se trata de oligonucleótidos.
BIOQUÍMICA

PRACTICA N°8

ACTIVIDAD ENZIMATICA
BIOQUÍMICA

OBJETIVO INTRODUCCIÓN.
GENERAL. Las enzimas son proteínas
 Identificar la altamente especializadas
presencia de la que tienen como propiedad
enzima de la actuar como catalizadores
catalasa en en las reacciones
tejidos biológicas, esta acción de
catalizador ayuda a
vegetales.
incrementar la velocidad de
una reacción.
OBJETIVO
ESPECÍFICOS La catálisis o regulación de
la velocidad de las
reacciones químicas que se
• Demostrar la lleva a cabo en los seres
actividad de una vivos, esto es muy
enzima (catalasa) importante ya que
presente en la papa cualquiera de las
• Observar la numerosas sustancias
acción de un orgánicas especializadas
inhibidor sobre la compuestas por polímeros
actividad catalítica de de aminoácidos, que actúan
una enzima como catalizadores en el
metabolismo de los seres
vivos.

MATERIALES Y REACTIVOS
 Gradilla
 Tubos de ensayo
 Mechero
 Pipetas
 Agua oxigenada
 Ácido clorhídrico
 Baño María
 Agua oxigenada
 Papa rayada, cocida y cruda
 BIOQUÍMICA

PROCEDIMIENTOS

RECONOCIMIENTO DE LA CATALASA En el segundo tubo se

introduce la misma
1. 1. Rotular 4 tubos de • En el primer tubo se
porción del trozo de papa
ensayo y agregar lo introduce un trozo pequeño
cruda, también a
siguiente de papa cruda a una
temperatura normal pero
temperatura normal, a esto
previamente triturada, a
se le agrega 2 ml de agua
esto se le agrega 2 ml de
oxigenada. Se anotan las
agua oxigenada. Se
observaciones
anotan las observaciones

• En el tercer tubo se • En el cuarto tubo se 2. Rotular 3 tubos

introduce la misma introduce la misma de ensayo y agregar
porción del trozo de papa, porción del trozo de papa, en el primer tubo de
pero previamente ensayo papa cruda
pero previamente hervida, rallada, en el segundo
luego se añade 2 ml de mantenido en ácido tubo una cucharada de
agua oxigenada. Se clorhídrico, durante unos azúcar y en tercer tubo
anotan las observaciones 10 minutos, luego se agregar una cucharada
añade 2 ml de agua de sal, luego añadir en
oxigenada. cada tubo 2ml de agua
oxigenada.
 RESULTADOS
PARTE # 1

 TUBO 1: se observó que a los segundos de estar el agua oxigenada en

contacto con la papa ocurrió una reacción positiva, y de este modo se
deprendió oxígeno y agua. La reacción se mantuvo durante unos minutos
debido a que la papa estaba totalmente compacta.
 TUBO 2: la reacción de la actividad enzimática fue de menor a mayor, es
decir, la reacción al principio fue bastante lenta y a medida que se iban
pasando los segundos fue mucho más rápida, por lo tanto hay un
desprendimiento de oxígeno y agua y también se observó que los trozos de
papa se fueron hacia la superficie del tubo, como si la densidad disminuyera
a medida que iba pasando el tiempo en segundos.
 TUBO 3: no se observó ninguna reacción por que la papa esta
desnaturalizada, debido a que esta pierde la actividad enzimática.
 TUBO 4: no se observó ninguna reacción por que el ácido clorhídrico
hidroliza la actividad enzimática.

PARTE # 2
 TUBO 1: el agua oxigenada reacciona con la papa rallada y esta es muy
rápida la papa se sube hasta la superficie del tubo de ensayo.
 Tubo 2: las al no reacciona con el agua oxigenada debido a sus
propiedades.
 Tubo 3: en el azúcar hay una reacción demasiado lenta y notamos la
formación de burbujas, pero de una manera muy lenta
EVIDENCIAS
 PREGUNTAS DE PROFUNDIZACION O PARAMETRO DE
EVALUACION

1. ¿Cuál es la importancia medica de las enzimas?

Como lo indica su nombre, las enzimas digestivas son importantes para una
óptima digestión y absorción de nutrientes. Pero esos no son todas sus
funciones y beneficios. Las enzimas realmente son necesarias para la mayoría
de las funciones celulares y procesos biológicos. Las enzimas--proteínas
compuestas de aminoácidos--son producidas por su cuerpo para catalizar
funciones que normalmente no se producirían a la temperatura corporal, lo que
las hace vitales para una buena salud y longevidad La ciencia ha identificado
más de 3 000 enzimas diferentes, aunque todavía no hemos investigado
profundamente. Algunos creen que podemos tener entre 50 000 y 70 000
enzimas en nuestros cuerpos. Cada órgano tiene su propio conjunto de
enzimas, y cada enzima tiene una función diferente. En esencia, actúan como
una llave maestra para abrir cualquier cerradura específica. En esta analogía,
las cerraduras son reacciones bioquímicas.

1. ¿Qué función cumplen las vitaminas hidrosolubles en las reacciones

catalizadas por enzimas?
Las vitaminas son nutrientes necesarias para el buen
funcionamiento celular del organismo y, a diferencia de algunos
minerales, actúan en dosis muy pequeñas. Como nuestro cuerpo no puede
fabricarlas por sí mismo lo nutritivo de los alimentos no se podría
aprovechar ya que activan la oxidación de la comida, las
operaciones metabólicas y facilitan la utilización y liberación de la energía
proporcionada a través de los alimentos. Cada célula del cuerpo tiene la
función de transformar los aminoácidos sustancias químicas
orgánicas, los minerales y los oligoelementos $sustancia
indispensable para el organismo vivo en proteínas, hormonas y
enzimas de las cuales se desprenden las reacciones químicas
algunas vitaminas forman parte de esas enzimas por lo que resultan
indispensables para nuestro cuerpo. De las (13) vitaminas diferentes que se
conocen actualmente, podemos diferenciar dos grupos distintos por un lado
las vitaminas hidrosolubles como la vitamina C y el grupo de las B, estas se
disuelven en el agua y ya que el organismo no puede almacenarlas, es
necesario un aporte diario o controlado debido a que el exceso es
eliminado por el sudor y la orina. Otro grupo de vitaminas es el de las
vitaminas liposolubles que se disuelven en grasas como la vitamina A, D, E
y K estas se almacenan en los tejidos adiposos y en el hígado. a diferencia
de las vitaminas hidrosolubles, el exceso de su consumo puede ser muy
perjudicial para nuestra salud ya que nuestro cuerpo sí que almacena su
exceso.
 BIOQUÍMICA

CONCLUSIÓN
Con la realización de las diferentes prácticas de laboratorios se determinaron los
diferentes factores que interviene en las moléculas de la vida, tales como sus
reacciones, propiedades físicas y químicas, a continuación, se nombraran algunos
aspectos importantes y relevantes de cada laboratorio que se realizó. se comprobó
que algunas sustancias no se disolvieron en otras por que no compartían
características entre sí; la acción de la temperatura también se evidencio, ya que
hubo solutos que se disolvieron a diferentes temperaturas. Además, se determinó
que el pH es el indicador de la acidez o basicidad de una sustancia, es posible a
través de cálculos encontrar la veracidad de la acidez o basicidad de las soluciones.
De los lípidos se pueden obtener sustancias orgánicas necesarias en la industria,
se identificaron las clases de lípidos y las reacciones de estos. Otra molécula
importante son los glúcidos compuestos de suma importancia biología ya que sirve
de fuente de energía, gracias a los diferentes reactivos se identificaron logrando así
tener conocimiento de la composición de los diferentes elementos que conforman
los reactivos. Cuando se experimentó con el almidón, determinamos su función, se
reconoció a través del reactivo de Lugol y además se identificaron los componentes
del reactivo. Por otra parte se puede decir que para que el ADN e hiciera visible
influyeron factores como la temperatura, el uso de sustancias acidas… etc. En
la extracción del ADN animal se puso de manifiesto su estructura fibrilar y el grado
de arrollamiento, que permite el empaquetamiento en el núcleo celular de las largas
cadenas de esta molécula. En caso de que el ADN de la Muestra Vegetal no se
pueda apreciar muy claramente. Tenemos que agitar el tubo un poco para poderlo
apreciar el ADN. También puede haber complicaciones con la forma de poner el
alcohol de manera que cayera por las paredes del tubo de ensayo. Con esto
podemos saber cómo es el procedimiento del extracto del ADN, así como si
estructura de una forma fácil y sencilla. De manera que al realizar el experimento
de la reacción enzimática se determinó que la temperatura es uno de los factores
que influye lo que se evidencia con la producción de burbujas otro aspecto
importante de esta práctica para que la catalasa funcione correctamente debe tener
un pH neutro y temperatura ambiente.
 BIOQUÍMICA

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