UNIVERSIDAD CESAR VALLEJO

ESCUELA DE INGENIERIA
AGROINDUSTRIAL

ACIDOS NUCLEICOS

Pedro Lezama
pblezama@ucvvirtual.edu.pe

Pedro Lezama
 NUCLEÓTIDOS
Son las unidades monoméricas de los ácidos
nucleicos

Cada nucleótido posee los siguientes

componentes elementales:
• Una base nitrogenada
• Un azúcar (pentosa)
• Un fosfato

Cuando la molécula no tiene el grupo fosfato se

denomina nucleósido

NUCLEÓTIDO = NUCLEÓSIDO + GRUPO FOSFATO

Pedro Lezama
 AZÚCAR DE 5 C (PENTOSA)
• RIBOSA
ENLACE GLICOSÍDICO • DESOXIRRIBOSA
ENLACE TIPO ÉSTER

NUCLEÓSIDO

NUCLEÓTIDO
BASE NITROGENADA
• PÚRICA
Î ADENINA
Î GUANINA

• PIRIMIDÍNICAS
Î TIMINA
Î CITOSINA
Î URACILO

GRUPO FOSFATO
Pedro Lezama
 Funciones de los NUCLEÓTIDOS

1. Constituyentes de los ácidos nucleicos

2. Compuestos ricos en energía que dirigen los

procesos metabólicos (fundamentalmente la
biosíntesis) en todas las células

3. Señales químicas capaces de responden a

estímulos químicos en los sistemas celulares
(estímulos extracelulares de tipo hormonal y de otros
tipos)

4. Componentes estructurales de cofactores

enzimáticos e intermedios metabólicos
Pedro Lezama
 TIPOS DE AZÚCAR

5’ 5’

4’ 1’ 4’ 1’
2’ 2’
3’ 3’

RIBOSA DESOXIRRIBOSA

(ARN) (ADN)

Pedro Lezama
BASES NITROGENADAS

Pedro Lezama
RESUMEN
NH2
Enlace éster
N
O N
-
O P O CH2 N
O N
O- H H
Enlace β-glicosídico
H
OH OH

Pentosa Base

Fosfato Nucleósido

Nucleótido
Pedro Lezama
 Glucosa-6-P
SINTESIS DE PURINAS

Via pentosa fosfato

ATP AMP

Ribosa-5P 5-fosforibosilpirofosfato (PRPP)

PRPP sintetasa Gln
PRPP
Amino acidos: amidotransferasa
Gly + Gln + Asp Glu
inosin
5-fosfo-β-ribosilamina
monophosphate
(IMP) Cofactores:
N10-formyl THF

AMP GMP

ADP GDP

ATP GTP Pedro Lezama

 NUCLEOTIDOS NUCLEOTIDOS
DE GUANINA DE ADENINA

Adenosina
Guanosina

Inosina

Guanina Hipoxantina

xantina
Xantina oxidasa
DEGRADACION xantina
oxidasa
DE PURINAS
Acido Urico

Pedro Lezama
 ⊕ ATP, PRPP
carbamoil fosfato
sintetasa II carbamil
Glutamina + fosfato
2ATP + CO2
aspartato
Glu + Pi
+ 2 ADP

Glu + Pi Gln +
+ ADP ATP +2 ADP +2 ATP

CTP UTP UMP OMP

„ BIOSINTESIS DE PIRIMIDINAS
Pedro Lezama
Estructura del DNA
„ Formado por largas cadenas de
polinucleotidos

„ Las cadenas son mantenidas

juntas por enlaces de Hidrógeno
entre las bases.

„ Cada cadena de DNA es polarizada

con un extremo 3’ y el otro extremo
como 5’.

„ Las dos cadenas de DNA forman

una doble hélice por las
interacciones de los pares de
bases complementarias.

Pedro Lezama
 Estructura del RNA

„ Muchos, pero no todos, los RNAs son cadenas simples

„ La estructura es determinada por complementariedad
(apareamiento de bases)

Pedro Lezama
Pedro Lezama
Pedro Lezama
Replicación

Pedro Lezama
TRANSCRIPCION
9 Iniciación: unión del RNA pol a un sitio promotor e inicio de la síntesis de la cadena.
9 Elongación: alargamiento de la cadena de RNA
9 Terminación: finaliza la síntesis y se libera la molécula de RNA completa

Pedro Lezama
REPLICACION TRANSCRIPCION

Pedro Lezama
 Traducción
Iniciación Elongación Terminación

Codón de inicio Codón de

terminación
ETAPAS
• Activación de los aminoácidos
• Iniciación
• Elongación
• Terminación
• Modificaciones postraduccionales
Pedro Lezama
 INTERRRLEACION TRANSCRIPCION Y TRADUCCION

Pedro Lezama
 CODIGO GENETICO
• Conjunto de correlaciones entre cada triplete de bases del RNAm
(codón) y el correspondiente aminoácido de la proteína.

CARACTERISTICAS DEL CODIGO GENETICO:

a. Casi universal. En todos los organismos estudiados (eucariotas,
procariotas), incluso virus se observa la misma correspondencia
entre tripletes y aminoácidos. Diferente en mitocondrias.
b. Degenerado. Muchos aminoácidos tienen más de un codón. Los
diferentes codones para un aminoácido dado se denominan codones
sinónimos.
c. No es ambiguo: cada triplete codifica un solo aminoácido
d. Incluye un codón de “arranque” (iniciador) AUG, que especifica
metionina; y tres codones que constituyen señales de “stop” –UAA,
UAG y UGA- que no especifican aminoácidos, sino ponen fin a la
traducción en el extremo de las cadenas de RNAm.

Pedro Lezama
 CODIGO GENETICO
Segunda base

U C A G

U UUU Fenil- UCU UAU

Tirosina
UGU
Cisteina
U
UUC alanina UCC Serina UAC UGC C
UCA Codon stop
A
UUA Leucina UAA Codon stop UGA
UCG G
UUG UAG codon stop UGG Triftópfano

CCU CGU
C CUU CAU Histidina U
primera base

CUC CCC CAC CGC C

Tercera base
Leucina Prolina Arginina
CUA CCA CAA CGA A
Glutamina G
CUG CCG CAG CGG
AUU ACU AAU AGU U
AUC Asparragina AGC Serina C
A Isoleucina ACC AAC
Treonina
AUA ACA AGA A
AAA G
AUG Metionina ACG Lisina AGG Arginina
AAG
codon inicio
GUU GCU GAU ácido GGU U
G GUC GCC GAC aspártico GGC C
Valina Alanina Glicina
GUA GCA GAA GGA A
ácido G
GUG GCG GAG GGG
Glutámico

Pedro Lezama
 APLICACIONES DEL
CONOCIMIENTO DE LOS
ACIDOS NUCLEICOS

Pedro Lezama
CLONACION

Obtención de organismos genéticamente idénticos

En el campo de la Ingeniería genética consiste

en aislar y multiplicar un gen, o un fragmento
de ADN

En Animales superiores consiste en obtener un

individuo a partir de una célula o de un núcleo
de otro individuo
Pedro Lezama
 INGENIERIA GENETICA
Conjunto de técnicas originadas de la Biología molecular
que permiten manipular el genoma de un ser vivo
cromosoma
gen

Homo sapiens

Escherichia coli

Mediante la ingeniería genética se pueden introducir

genes en el genoma de un individuo que carece de ellos
Pedro Lezama
TECNOLOGIA DEL DNA RECOMBINANTE
INGENIERIA GENETICA
Aislamiento y manipulación de
fragmentos de ADN de un organismo
para introducirlo en otro (ADN
recombinante)

„ ENZIMAS DE RESTRICCION
„ (Tijeras moleculares)

Nathans D., Arber W., y Smith H. (premio Nobel de Fisiología

y Medicina en 1978 por el descubrimiento de las enzimas de
restricción y su aplicación en Genética Molecular)

Pedro Lezama
TECNOLOGIA DEL DNA RECOMBINANTE
INGENIERIA GENETICA
Molécula A Molécula B

Digestión de ambas moléculas con la

misma enzima de restricción, BamHI

Extremos
cohesivos

Mezclar

Tratar con ADN-ligasa

ADN recombinante

Pedro Lezama
 REACCION EN CADENA DE LA
POLIMERASA (PCR)
En 1983 Kary Mullis da a conocer esta técnica y en 1993 recibió el Premio Nobel de Química por este descubrimiento

Es un proceso cíclico
(cada ciclo consta de 3 pasos)

94ºC desnaturalización (separación

de las dos hebras de ADN)

50ºC Anillamiento de "cebadores"

72ºC copia de cada una de las

hebras de ADN por la ADN
polimerasa

35 ciclos 236= 68 billones de copias

Pedro Lezama
SEPARACION DE CADENAS DE DNA

ELECTROFORESIS

Pedro Lezama
 INSERCION DE LOS FRAGMENTOS DE
1
DNA

VECTORES DE CLONACION
Plásmido
(PLASMIDOS)

gen de resistencia
a la ampicilina
2 3

Extremos cohesivos

Pedro Lezama Molécula de ADN recombinante

 INTRODUCCION DEL VECTOR
Plásmido
„ Obtención del clon celular

Pedro Lezama
 Inserción de los fragmentos de
1 DNA

(Vectores de clonación)

2 3

Pedro Lezama
 „ GENOTECAS
„ Bibliotecas genomicas)

Genoma de hongos: 44 millones bp

Huesped: Escherichia coli
Vector: Bacteriófagos
capacidad: 20 mil bp

Genoma humano: 3000 millones bp

Huesped: Saccharomyces cerevisiae
Vector: YAC (cromosoma artificial de
levadura)
MegaYAC (capacidad: 1 millón bp)
Pedro Lezama
SECUENCIACION AUTOMATICA

ACTTTGTCCACGGCCTAAGCGTTTTTTGCCC
Secuenciación AGTGACTTTGTCCAAC
GTCCAACAGTTACCAAGTGACTTTGTCCAC TTTTGCCC
de genomas AGTGACTTTGTCCA ACGGCCTAAGCGTTTTTTTT
Pedro Lezama
ALINEAMIENTO DE TODAS LAS SECUENCIAS Y RECONSTRUCCIÓN DEL CROMOSOMA
APLICACIONES DE LA SECUENCIACION DE DNA

•Detección de mutaciones
Método de diagnóstico rutinario (relación entre enfermedad y mutación puntual)

•Secuenciación de ADNs fósiles

Posibilidad de aislar secuencias de ADN a partir de unas pocas copias (la mayoría están
dañadas o degradadas)

•Diagnóstico de enfermedades genéticas

Diagnóstico prenatal / Diagnóstico preimplantación de enfermedades hereditarias o
determinación del sexo del feto previamente a su implantación en procesos de
fecundación in vitro

•Identificación de especies y control de cruces entre animales o

plantas
Para descubrir fraudes comerciales, tales como vender carne de una especie más barata
a los precios de otra más cara, o el comercio ilegal de especies en peligro

•Secuenciación de genoma
Conocimiento básico y aplicado de diferentes organismos (incluido el genoma humano)

Pedro Lezama
16 de Febrero de 2001
Celera Genomics

Proyecto genoma humano

La secuencia del genoma es un atajo valioso: ayuda a los
científicos a encontrar los genes más fácil y rápidamente
y sienta las bases para averiguar la función de los genes
identificados

Beneficios médicos tras el conocimiento de la

estructura de cada gen humano

1. Diagnóstico en individuos con riesgo de ser

portadores del gen de alguna enfermedad

2. Marco de trabajo para el desarrollo de

nuevas terapias, además de nuevas
estrategias para la terapia génica

15 de Febrero de 2001
Consorcio público internacional
Pedro Lezama
 Aplicaciones de la Ingenieria genetica
Obtención de proteínas de interés médico, agroindustrial, comercial
(insulina, hormona del crecimiento, factores de coagulación)

Pedro Lezama
 Aplicaciones de la Ingenieria genetica
Obtención de vacunas recombinantes
(aternativa al uso de organismos patógenos inactivos)

Extracción del ADN

del virus

Integración del
plásmido híbrido
en el núcleo de una
ADN célula de levadura

plásmido
bacteriano

La levadura fabrica las

proteínas víricas
con poder inmunológico

Pedro Lezama
Inyección de proteínas
víricas en un chimpancé
 Aplicaciones de la Ingenieria genetica
Mediante ingeniería genética
se construye una sonda de
Diagnóstico de enfermedades de origen genético ADN, marcada (marcaje
fluorescente), con la
secuencia complementaria del
ADN enfermo
ADN sano

ADN enfermo
ADN complementario
del ADN enfermo
Conocimiento previo de
la secuencia de ADN DIAGNÓSTICO
enfermo

Si aparecen bandas
fluorescentes
demuestra que la
persona presenta la
Biochip anomalía
Microarray
DNAchip ¿Hibridación? Renaturalización Desnatura ADN de la
Pedro del
¿No hibridación? Lezama
ADN con la lización persona que se
sonda del ADN quiere
fluorescente diagnosticar
 Aplicaciones de la Ingenieria genetica
Plantas transgénicas Agrobacterium tumefaciens es patógena de plantas.Produce tumores

Agrobacterium
núcleo
Plásmido Ti
inductor de tumores cromosoma
contiene oncogenes
Transgénesis= introducción de
(genes onc)
ADN extraño en un genoma, de
modo que se mantenga estable de
forma hereditaria y afecte a
todas las células en los organismos
cromosoma
multicelulares.
célula
Ingeniero vegetal
genético
natural tras
tumores
sutitución de
genes onc por Proliferación de
genes de hormonas
interés crecimiento. Se
forman tumores en
las zonas de la
Pedro Lezama lesión
Aplicaciones de la Ingenieria genetica
•Resistencia a herbicidas, insectos y enfermedades microbianas
El maíz transgénico de Novartis es resistente al herbicida Basta y también es
resistente al gusano barrenador europeo (contiene el Gen de resistencia a la
toxina Bt de Bacillus thuringiensis) produce su propio insecticida

Problemas:La toxina Bt en las plantas transgénicas tiene propiedades

sustancialmente diferentes a la toxina Bt en su forma natural.
La toxina puede ser transmitida a través de la cadena alimenticia, un
efecto que nunca ha sido observado en la toxina Bt en su forma natural.
Larvas de especies de insectos predadores benéficos (larvas verdes de
crisopa) murieron cuando fueron alimentadas con el gusano barrenador
europeo

Gold rice de Monsanto con color amarillo por los altos niveles de vitamina A

Mejora de la calidad de los productos agrícolas

Producción de aceites modificados

•Síntesis de productos de interés comercial

Anticuerpos animales, interferón, e incluso elementos de un poliéster destinado a la
fabricación de plásticos biodegradables
Pedro Lezama
 Aplicaciones de la Ingenieria genetica
Transgénesis en animales (por microinyección de zigotos)

Secuencia promotora para

la síntesis de una proteína
Gen humano de la leche

Gen híbrido

humano rata

Ovulos de cerda
fecundados

Desarrollo de una cerda transgénica

Pedro Lezama
 Aplicaciones de la Ingenieria genetica
Clonación de animales
(TRANSFERENCIA NUCLEAR DE CÉLULAS EMBRIONARIAS)

Pedro Lezama
 Clonación reproductiva
Clonación de animales
(TRANSFERENCIA DEL NÚCLEO DE UNA CELULA SOMATICA: CÉLULA DIFERENCIADA)

Pedro Lezama
Clonacion
de Dolly

Pedro Lezama
Clonación de terneros (EE UU) para producir anticuerpos humanos

efe- Washington - agosto 2002

Terneros clonados y manipulados genéticamente (fábrica de anticuerpos humanos)

genes para anticuerpos células dérmicas clonación

humanos recombinantes

Objetivo: Tratamiento de enfermedades inmunológicas

Futuro: Tratamiento de una amplia gama de enfermedades ocasionadas por

bacterias y virus, como hepatitis, ántrax (utilizada como arma biológica)

Pedro Lezama
 Clonación de cerdos destinados a trasplantar sus órganos a
humanos

La empresa escocesa PPL

Therapeutics logra retirar de
los cerditos el gen que provoca
el rechazo en transplantes a
humanos "alfa 1,3 galactosil
transferasa"

Paso importante en favor del xenotrasplante

(transferencia de células u órganos de una especie a otra)

Ayudará a superar la escasez de órganos humanos para hacer

trasplantes de todo tipo
Pedro Lezama
Ejemplo y probabilidades
de clonacion

“Prometea”
Primer caballo clonado
(Italia)

Pedro Lezama
Un laboratorio de Texas clona al primer animal doméstico
"Copycat" es el primer gatito nacido mediante clonación"

El experimento abre las puertas de la clonación masiva de

animales domésticos, un fin sin explorar cuya sola
posibilidad había desencadenado ya el almacenamiento
de células de mascotas por parte de sus ricos propietarios

febrero 2002 Universidad College Station (Texas)

El sexto día
El ataque
de los clones
Pedro Lezama
Clonacion terapeutica CREACIÓN DE UN EMBRIÓN ARTIFICIAL
(con células adultas)

-embrión somático-

OBJETIVO ÚLTIMO: TRATAMIENTO de ENFERMEDADES OBJETIVO ÚLTIMO: AUTOTRASPLANTES

(no hay rechazo)
1 Cultivo de blastocisto

Fecundación

2 Eliminación de la capa externa

Embrión temprano

3 Adición de sustancias Fusión de célula somática

que disgregan la masa y ovulo enucleado
celular interna

En caso de existir deficiencias a nivel

genético se puede hacer terápia génica
6 Adición de factores de a nivel de células madre
4 Transferencia de los agregados diferenciación
celulares a un nuevo pozo seleccionados

7 Administración de
células diferenciadas a
tejidos dañados
5 Formación de células
diferenciadas a tejidos
dañados

Pedro Lezama
 Clonacion terapeutica
Las células madre abren la posibilidad a un nuevo mundo en
las terapias de los trasplantes

Calificada como una técnica "ineficaz e imperfecta" por científicos

como Iam Wilmut, "padre" de la oveja Dolly, la clonación ha encontrado
en las células "madre" su primera razón de ser.

Retos técnicos
1. Las células embrionarias de ratón originan teratomas y
teratocarcinomas en animales adultos

2. Conocimiento de las señales implicadas en el desarrollo y

diferenciación

3. Asegurar la salud a largo plazo de las células a transplantar

(edad biológica de las células)
Pedro Lezama