1.

-Describa que es un espectrofotómetro y para que sirve

Es un instrumento usado en la física óptica que sirve para medir, en función de la

longitud de onda, la relación entre valores de una misma magnitud fotométrica
relativos a dos haces de radiaciones

Este instrumento tiene la capacidad de proyectar un haz de luz monocromática a

través de una muestra y medir la cantidad de luz que es absorbida por dicha
muestra. Esto le permite al operador realizar dos funciones:

2.-Mencione que es espectro de absorción y las diferentes longitudes de

onda del espectro

Un espectro de absorción es una representación gráfica de la absorbancia de un

analito (o de otra magnitud equivalente) en función de la longitud de onda de la
radiación, l, (o de otro parámetro relacionado con la energía de la radiación
utilizada).

Banda Longitud de onda (m)

Rayos gamma < 10 pm
Rayos X < 10 nm
Ultravioleta extremo < 200 nm
Ultravioleta cercano < 380 nm
Luz Visible < 780 nm
Infrarrojo cercano < 2,5 µm
Infrarrojo medio < 50 µm
Infrarrojo
< 1 mm
lejano/submilimétrico

3.-Defina, con sus propias palabras, que es una curva patrón

Es la formas de expresar los resultados en forma cuantitativa mediante la

elaboración de esta misma dando una recta cuya ecuación es y =mx + b cuando
donde la abcisa (x) = [mg de la proteína] y la ordena (y) la absorbancia de cada
uno de las concentraciones
4.- Explique cuales son las ventajas o desventajas de emplear los reactivos
de Biuret para cuantificar proteínas.

VENTAJAS:
 Rápido (se puede completar en menos de 30 minutos)
 Es el método más simple de análisis de proteínas
 No es frecuente encontrar derivaciones de color
 Pocas substancias no proteicas interfieren con la reacción de Biuret.
 No detecta N2 de fuentes no protéicas o no peptídicas.

DESVENTAJAS:
 Requiere de al menos 2 a 4 mg de proteína por prueba
 Las concentraciones altas de sales de amonio interfieren con la reacción
 Puede ocurrir opalescencia en la solución final si están presentes altas
concentraciones de lípidos o carbohidratos
 Debe estandarizarse el color mediante cantidades de proteína conocidas

Se ha encontrado poca aplicación en análisis de alimentos debido a la presencia

de interferentes como azúcares reductores que reducen el ion cúprico en medio
alcalino produciendo resultados insatisfactorios

5.-Mencione cual es la razón de que en el método de Biuret, la absorbancia

de la proteína se lea a una longitud de onda de 540 nm.

Es para detectar el ion Cu2+

Está hecho de hidróxido potásico (KOH) y sulfato cúprico (CuSO4), junto con
tartrato de sodio y potasio (KNaC4O6·4H2O). El reactivo, de color azul, cambia a
violeta en presencia de proteínas, y vira a rosa cuando se combina con
polipéptidos de cadena corta. El Hidróxido de Potasio no participa en la reacción,
pero proporciona el medio alcalino necesario para que tenga lugar.

Se usa normalmente en el ensayo de Biuret, un método calorimétrico que permite

determinar la concentración de proteínas de una muestra .

6.-Explique si una curva patrón puede ser empleada para cuantificar

sustancias diferentes a las proteínas y cual seria la diferencia con estas.

Si se puede hacer la curva patrón con la cuantificación de una sustancia que no

sea proteína ya que la cuantificación de una sustancia va a ser la abcisa y la
ordenada al origen va a ser el numero o cantidad utilizada en esta y otros
reactivos logrando la cuantificación de producto esas sustancias
7.-¿Cuál es la finalidad de emplear un tubo como “blanco”?. Mencione si
siempre se utiliza agua como blanco.

Es una forma de calibrar el aparato; es una muestra a medir la cual no contiene

nada de la sustancia que se busca cuantificar y sirve para ajustar el aparato a cero
(0) de la escala.

8.-Realice una curva patrón con los datos de absorbancia y proteína

obtenidos de una determinada hipotética.

Se realizo con una solución de estándar de albúmina (10 mg/ml).

Los valores de absorbancia referidos se determinaron por duplicado.

Proteína (ml) 0.1 0.2 0.4 0.8 1.0

Absorbancia 0.054 0.102 0.210 0.440 0.498
a 0.060 0.098 0.207 0.420 0.488
540 nm.

9.-Con los datos obtenidos en el ejemplo anterior, determine la ecuación de

la recta que representa a la curva patrón.
10.-Basándose en la curva patrón y la ecuación de la recta, determine la
cantidad de proteína en mg/ml de las siguientes muestras, cuyos valores de
absorbancia se indican.

Muestra Absorbancia a Alícuota

540 nm
A 0.33 0.5 ml
B 0.44 1 ml de una dilución 1:10
C 0.22 0.1 ml

11.-Elabore una lista de cinco compuestos que se podrían cuantificar

empleando una curva patrón y mencione que importancia tiene determinar la
cantidad de dichos compuestos.

COMPUESTOS
Caseína
Albúmina
Ferritina
Hemoglobina
Tubulina

Ya que si no se determina bien la cantidad correcta de dichos compuestos esto se

va a notar cuando se vaya a ser la curva de patrón ya que no va salir recta a un
que se intente normalizar por el método de regresión lineal de mínimos cuadrados
BIBLIOGRAFIA:

Day, R.A. Jr., Underwood, A.L. 1989. Química analítica cuantitativa, 5ª ed., Prentice-Hall
Hispanoamérica, México.

Mathews C.K., Van Holde K.E. Ahern K.G. 2003. Bioquimica. Addison –Wesley, España.

Donald West, James Holler. Fundamentos de Química Analítica. 4ª. edición, Reverte,
Barcelona, 1997.

Harris, D.C. 1992. Análisis químico cuantitativo. Grupo Editorial Ibero- América, México
INTEGRANTES DEL EQUIPO No. 2:

Crescencio Tovar Nancy Karina

Pichardo Sánchez m. Alejandra
Trejo López m. Teresa
Candía Berneo Daniela
Valdez Hernández Mireya
Pantiga Trejo Maria del pilar

TRABAJO:
Cuestionario previo de la practica No. 7
“Cuantificación de proteínas, método de Biuret”

GRUPO:
BB52

PROF.:
Fernando Díaz de León Sánchez

MATERIA:
Bioquímica 1
Procedimiento experimental:
Determinación de la concentración de proteína en una muestra de leche.

Tubos 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Calentar el agua del baño de BSA 10 mg/ml (ml) 0.0 0.1 0.2 0.4 0.8 1.0
temperatura regulada al inicio de Caseína (ml) 0.25 0.5
la práctica. Mientras se alcanza Sobrenadante (ml) 0.25 0.5
una temperatura de 50-55 ºC Lache diluida (ml) 0.25 0.5
realiza los siguientes pasos. NaCl 0.9 % (ml) 3.0 2.9 2.8 2.6 2.2 2.0 2.75 2.5 2.75 2.5 2.75 2.5
Reac. De Biuret (ml) 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0

Numerar los tubos y un duplicado de

ellos de acuerdo con la tabla que se
presenta a continuación. Mantener el Colocar los volúmenes indicados
de la solución patrón de proteína
orden de los reactivos como se indica En los tubos del siete al doce colocar la sustancia del (BSA) en los tubos del dos al
en la tabla. muestra problema. Si se hará la cuantificación de la seis.
caseína, obtenida en la práctica anterior proceder a
pulverizarla en un mortero y preparar una solución al
1% en agua. Para hacer fácil la solubilidad agregar
unas gotas de NaOH al 10%, si la proteína a
Para determinar la proteína en el cuantificar esta en solución tomar una alícuota de 0.25
sobrenadante de la practica 6 se y 0.5 ml para realizar la determinación.
recomienda diluir con agua 1:10 y
1:20 respectivamente y tomar una
alícuota de 0.25 y 0.5 ml, tubos del
nueve al doce.

Una vez incubados por 10minutos enfriar los

Agregar 3.0 ml del reactivo de Biuret y tubos en el chorro de agua de la llave y leer
mezclar después calentar la mezcla en el espectrofotómetro a una longitud de
colocando los tubos en un baño maría a onda de 540 nm utilizar el tubo numero uno
Se debe mantener el orden de adición de los 50 °C durante 10 minutos. como blanco.
reactivos y manejar los tubos
progresivamente junto con su duplicado y
completar el volumen a 3.0 ml con NaCl al 0.9
%

Interpolar cada uno de los datos de absorbancia
de las muestras problema y realizar los cálculos
necesarios para reportar la cantidad de proteína
en mg/ml que tiene cada muestra o bien la
cantidad total de proteína en una muestra dada.
Con los datos obtenidos para la curva patrón
elaborar una tabla de concentración y
absorbancia así como una grafica que
relacione la cantidad de proteína (mg) y los
valores de absorbancia a 540 nm.

Diagrama de flujo de la practica No.6 “Cuantificación de proteínas, método de Biuret”

Nancy Karina Crescencio Tovar 208223345 EQUIPO no. 2 Grupo: BB52