UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS INFORME DE

LABORATORIO DE
Facultad de Ciencias básicas e ingenierías BIOQUIMICA
Departamento de Química Practica N°5

AMINOACIDOS: CURVAS DE TITULACIÓN Y SEPARACIÓN

POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA
A. Fragua Cruz1, A. González Hernandez2
1. Cod:117004120, Ing. Agroindustrial: andres.fragua@unillanos.edu.co
2. Cod: 117004124, Ing. Agroindustrial: angie.gonzalez.hernandez@unillanos.edu.co

Facultad de Ciencias Agropecuarias y Recursos Naturales.

Ingeniería Agroindustrial
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Resumen
En el presente informe se comprobó el carácter anfoterico de algunos aminoácidos, como la Glicina,
Arginina y Metionina; además de muestra problema, y se determinó mediante una curva de titulación,
lo valores de pK de los grupos ionizables y se halló el punto isoeléctrico de los aminoácidos. También
se separó e identifico una mezcla de aminoácidos utilizando el método de cromatografía en capa fina.
Palabras Clave: Aminoácidos, Anfoterico, Titulación, Cromatografía.

1. Introducción
Las proteínas constituyen el grupo de compuestos más abundante en los seres vivos; en algunos casos
representan hasta 50% del peso total seco. Esta abundancia se debe a que desempeñan diversas
funciones.
Las proteínas son macromoléculas de elevado peso molecular, porque su estructura consta de cadenas
de aminoácidos unidos por enlaces peptídicos entre el grupo alfa carboxilo de un aminoácido y el
grupo alfa amino de otro. Aunque en la naturaleza existen más de 300 aminoácidos, las proteínas sólo
utilizan 20, de diferente tamaño, forma, carga, capacidad de formar puentes de hidrógeno o enlaces
disulfuro y reactividad química. (Rodwell, Bende, Botham, Kennelly, & Weil, 2010)
A varios aminoácidos se les denomina esenciales, porque el organismo carece de la capacidad de
sintetizarlos y, por tanto, es necesario ingerirlos en la dieta. Los aminoácidos no esenciales son los
que el cuerpo humano sí puede sintetizar. (Stryer, Berg, & Tymoczko, 2009)
Los métodos de cromatografía en capa fina y de electroforesis son adecuados para determinar la
cantidad absoluta y relativa de los diferentes aminoácidos en una muestra (análisis cualitativo); sin
embargo, para los análisis cuantitativos es necesaria la cromatografía de líquidos de alta presión
(HPLC). Electroforesis. Se trata de un proceso en que algunas biomoléculas con carga (como
proteínas, polinucleótidos, biopolímeros) se separan a partir de su distinta velocidad de migración en
un campo eléctrico. Por lo general, los aminoácidos no se presentan en forma aislada; de modo que
es necesario separarlos antes de poder cuantificarlos. (Enríquez, Alvarado, Díaz, & Chávez, 2014)
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2. METODOLOGÍA
2.1 TITULACON DE UN AMINOÁCIDO
En este laboratorio se realizará la titulación del aminoácido prolina, primero calibrar el potenciómetro
siguiendo las instrucciones del equipo. Luego, titular 50 ml del aminoácido con HCl 0,19 M, en un
vaso de precipitado de 100 ml adicionando 1 ml y medir el pH después de cada adición hasta alcanzar
un pH de 1,5 y titular otros 50 ml de este, esta vez con NaOH 0,2M hasta alcanzar un pH de 12,5.
2.2 SEPARACIÓN POR CROMATOGRAFÍA
2.2.1 PREPARACIÓN DE LA CROMATOGRAFÍA
Adicionar un volumen suficiente de la mezcla de solventes para que la altura del líquido sea alrededor
de 0,5 cm en una cámara para cromatografía y ciérrela. Mantener la cámara sin perturbaciones por
aproximadamente 20 minutos para saturar la atmosfera dentro de la cámara con el solvente.
Tomar la placa son precaución de no tocar la silica, con un lápiz trazar una línea recta a lo ancho de
la placa aproximadamente a 1,5 cm del borde inferior de la misma. Usar la punta del capilar para
sembrar diminutas gotas de cada muestra de los diferentes aminoácidos, teniendo en cuenta de utilizar
un capilar diferente para cada muestra. Posicionar cada siembre a 1,0 cm de distancia entre los
mismos. Posteriormente en otra placa y con el mismo procedimiento realizar la siembre de la muestra
desconocida.
Las muestras por sembrar son un aminoácido polar, un aminoácido con polaridad intermedia, un
aminoácido apolar y una mezcla de aminoácidos desconocida.
2.2.2 DESARROLLO DE LA CROMATOGRAFÍA
Poner la placa en la cámara e inclinarla contra la pared interna del frasco. Cerrar la cámara y no
perturbar mientras el solvente asciende. Retirar la placa cuando el liquido este aproximadamente a 1
cm del borde superior de la placa y marcar rápidamente con el lápiz la línea final alcanzada por el
líquido después del ascenso. Dejar secar la placa a temperatura ambiente y luego atomizar con la
solución de ninhidrina. Por último, calentar la placa en el horno a 105°C durante 5 minutos.
3. RESULTADOS
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5.5 cm distancia
recorrida por a
fase móvil
Metionina (2.0 cm
distancia recorrida
por el soluto)

Arginina (1,2 cm Glicina (1.0 cm

distancia recorrida distancia recorrida
por el soluto) por el soluto)

(1.5 cm distancia
recorrida por el
soluto)

Figura N°1. Muestra problema Figura N°2. Muestras de Aminoácidos

𝟏, 𝟐 𝒄𝒎
𝑹𝑭 (𝐴𝑟𝑔𝑖𝑛𝑖𝑛𝑎) = = 𝟎, 𝟐𝟏𝒄𝒎 El factor de retardo (RF) de un determinado analito se
𝟓, 𝟓 𝒄𝒎 define como la relación entre la velocidad de
𝟐, 𝟎𝒄𝒎 desplazamiento del soluto y la velocidad de
𝑹𝑭(𝑀𝑒𝑡𝑖𝑜𝑛𝑖𝑛𝑎) = = 𝟎, 𝟑𝟔𝒄𝒎 desplazamiento de la fase móvil. En un determinado
𝟓, 𝟓𝒄𝒎
instante, el factor de retardo puede definirse como una
𝟏, 𝟎𝒄𝒎 relación de distancias
𝑹𝑭(𝐺𝑙𝑖𝑐𝑖𝑛𝑎) = = 𝟎, 𝟏𝟖𝒄𝒎
𝟓, 𝟓𝒄𝒎
𝟏, 𝟓𝒄𝒎 𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜
𝑹𝑭(𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎) = = 𝟎, 𝟐𝟕𝒄𝒎 𝑹𝑭 =
𝟓, 𝟓𝒄𝒎 𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑙𝑎 𝑓𝑎𝑠𝑒 𝑚𝑜𝑣𝑖𝑙
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ph
14

12
pKa=10,64
10

8
pI= 6,295
6

2
pKa=1,95
0
0 10 20 30 40 50 60 70

Punto isolectrico El punto isoeléctrico es el valor de pH en el que la carga neta del

𝑝𝐾𝑎1 + 𝑝𝐾𝑎2 aminoácido es cero. Se calcula matemáticamente como la semisuma de
𝑝𝐼 = los pKas entre los que está comprendido el ión híbrido (forma del
2
aminoácido con carga neta cero).
1,95 + 10,64
𝑝𝐼 =
2
𝑝𝐼 = 6,295

Bibliografía
Enríquez, S. S., Alvarado, L. J., Díaz, C. M., & Chávez, P. H. (2014). Manual de prácticas de
laboratorio de bioquímica. México D.C: Editorial McGRAW-HILL INTERAMERICANA
EDITORES, S.A. de C.V.
Rodwell, V., Bende, D., Botham, K., Kennelly, P., & Weil, A. (2010). BioQuímica Ilustrada, 30e.
México, D.F.: Editorial Interamericana editores, S.A. de C.V.
Stryer, L., Berg, J., & Tymoczko, J. (2009). BioQuímica con Aplicaciones. 7e. Barcelona, España :
Editorial Reverte .