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subspicatus
Resumen
Las microalgas se consideran una de las materias primas más prometedoras para el desarrollo de
alto valor productos para la industria farmacéutica, nutracéutica y cosmética, además de ser fuentes
potenciales de proteínas, vitaminas y minerales para consumo humano. Por lo tanto, la presente
investigación se centra en la extracción de compuestos antioxidantes y antimicrobianos de
Scenedesmus subspicatus utilizando solventes de diferentes polaridades. Se utilizaron diferentes
solventes como etanol, metanol, butanol, acetona, dimetilsulfóxido y agua. para extraer compuestos
de la microalga verde S. subspicatus y luego se examinaron para detectar fitoquímicos, actividad
antioxidante y propiedades antimicrobianas. Enfriamiento de radicales libres in vitro y total La
actividad antioxidante de los extractos se investigó con 1,1-difenil-2-picrilhidrazilo y se comparó
con catequin y ácido gálico como controles positivos. La actividad antimicrobiana se evaluó en
bacterias gramnegativas y grampositivas. Los extractos acuosos y el dimetilsulfóxido presentaron
un mejor rendimiento en fitoquímicos. análisis. Este resultado mostró consistencia en las pruebas
secuenciales. La actividad antioxidante también fue mejor usando los dos solventes citados
anteriormente. Los extractos acetona, agua y dimetilsulfóxido mostraron capacidad para inhibir la
crecimiento de Bacillus subtilis. Sin embargo, solo el dimetilsulfóxido inhibió el crecimiento de
Klebsiella pneumoniae. y Escherichia coli. El uso del extracto acuoso, comprobada su efectividad,
es un protocolo económico y evita El uso de sustancias tóxicas.
INTRODUCCIÓN
Las microalgas son consideradas una de las más prometedoras.Materias primas para el desarrollo de
productos de alto valor para productos farmacéuticos, nutracéuticos y cosméticos. Industrias, así
como una fuente potencial de proteínas, vitaminas y minerales para el consumo humano (Ananthi et
al., 2010; Koller et al., 2014)
Entre las diversas clases de ocurrencia natural antioxidantes, compuestos fenólicos como fenoles
simples, ácidos fenólicos (derivados del ácido benzoico y ácido cinámico), cumarinas, flavonoides
y otros han recibido mucha atención (Li et al., 2007; López et al., 2011). Actualmente existe un
interés mundial en Encontrar antioxidantes naturales, nuevos y seguros para prevenir deterioro
oxidativo de los alimentos y minimizar la oxidación daño a las células vivas (Abe et al., 2005;
Guedes et al., 2011a; Wang et al., 2010). Microorganismos capaces de compuestos productores de
antioxidantes, con gran potencial de la agricultura, y sin contraindicaciones, pueden contribuir
significativamente para combatir las enfermedades mencionadas anteriormente. Condiciones de
crecimiento de microalgas optimizadas durante la producción probablemente dará como resultado
una biomasa final con mayores cantidades de compuestos y una posterior extracto con mayor
rendimiento y actividad. Por tanto, es necesario no solo seleccionar los mejores pasos durante el
proceso de crecimiento, pero también el impacto de tales procesos en la definición global de una
producción sostenible. Aspectos relacionados con el extracto como rendimiento, calidad, y la
bioactividad debe considerarse, no obstante Otros factores como la sostenibilidad, la contaminación
ambiental, los residuos, la rentabilidad, etc., también deberían contribuir a la selección final de los
más apropiados. proceso de extracción (fluidos sub y supercríticos tales como CO2, etanol, agua y
combinaciones). El desarrollo de tales procesos es una apuesta que se está convirtiendo cada día
más y más urgente en nuestra sociedad (Cheng et al., 2011; Feller et al., 2018).
Hay una necesidad continua de descubrir diferentes compuestos antimicrobianos con nuevos
mecanismos de acción debida a la resistencia a los antibióticos resultante de la genética mutaciones
(Bhagavathy et al., 2011). Se ha demostrado que los componentes activos de diferentes algas
mantienen actividad antibacteriana contra bacterias Gram-positivas y Gramnegativas (Borowitzka,
1992) incluyendo especies del género Scenedesmus (Habibi et al., 2018).
Scenedesmus es un alga verde de agua dulce rica en lípidos, proteínas y luteína (Michalak y
Chojnacka, 2014). Esta especie puede tener un alto potencial para industrial explotación
considerando su rápido crecimiento. Este género puede alterar su morfología en presencia de su
depredadores, formando colonias protectoras en lugar de células individuales El uso de compuestos,
como el CO2 supercrítico (ScCO2), se ha informado como un enfoque interesante para la
extracción de lípidos de Scenedesmus sp. (Taher et al., 2014) y otras microalgas (Solana et al.,
2014). Sus baja polaridad, sin embargo, causó la extracción de un bajo cantidad de luteína
(Abrahamsson et al., 2012). Esto implica que algunos componentes bioactivos naturales, que a
menudo son relativamente polar, no se puede extraer. Está comprobado que el La concentración de
estos carotenoides está relacionada con la actividad antioxidante observada (Guedes et al., 2011a).
MATERIALES Y MÉTODOS
Producción de microalgas
La microalga verde S. subspicatus utilizada en este estudio se obtuvo del laboratorio de producción
de alimentos vivos, ubicado en la Universidad Federal Rural de Pernambuco, Brasil. Los inóculos
de microalgas se cultivaron en cultivos semicontinuos, en interiores y exteriores. El interior los
cultivos se cultivaron con agua dulce autoclavada y Medio Provasoli en botellas de 2 L burbujeadas
con aire, incubadas en una habitación con temperatura controlada (24 ° C). los Las botellas se
irradiaron con tubos fluorescentes diurnos. (intensidad de luz, 54 mmol m2s1) durante 72 h. El al
aire libre
El cultivo estaba compuesto por recipientes de fibra de vidrio de 10, 100 y 500 L con agua dulce y
fertilizante NPK (20:10:20), aireación constante y un fotoperíodo natural (12:12) bajo una
intensidad de luz de aproximadamente 1350 mmol m2 s 1
Examen fitoquímico
Contenido fenólico total (TPC). El TPC en los extractos. se determinó de acuerdo con el método
descrito por Julkunen – Titto (1985) con algunas modificaciones. Una alícuota (50 ml) de cada
extracto o solución estándar fue mezclado con 1 ml de H2O y 500 ml de Folin– Reactivo de fenol
de Ciocalteu, luego 2.5 mL de Na2CO3 al 20% La solución se añadió a la mezcla, seguido de
incubación a temperatura ambiente (22ºC) en la oscuridad durante 45 minutos. La absorbancia
contra un blanco se midió a 735 nm. (Espectrofotómetro de microplacas Bio-RAD xMarkTM,
ESTADOS UNIDOS). Se usó ácido gálico para preparar una curva estándar (0.025–0.6 mg mL1)
Los resultados se expresaron en mg. Equivalentes de ácido gálico (GAE) extracto de g1 (dw).
Contenido total de flavonoides (TFC). El TFC se determinó de acuerdo con el método de Zhishen et
al. (1999) Una alícuota (250 ml) de cada extracto o estándar la solución se mezcló con 1,25 ml de
H2O y 75 ml de Solución de NaNO2 al 5% durante 6 minutos, luego 150 ml de 10% Se añadió
solución de AlCl3 H2O. Después de 5 min, 0.5 mL de Se añadió solución de NaOH 1 M y luego el
total el volumen se completó hasta 2,5 ml con H2O. Siguiendo la mezcla completa de la solución, la
absorbancia contra un blanco se determinó a 510 nm. (þ) - Catechin se utilizó para construir el
estándar curva (0.05–0.5 mg mL1) Los resultados fueron expresados como mg de equivalentes de
catequina (CE) g1 extraído (dw). Taninos condensados totales (TCT). Los TCT se determinaron de
acuerdo con el método de Julkunen – Titto (1985) Una alícuota (50 ml) de cada extracto o estándar
la solución se mezcló con 1,5 ml de vanillina al 4% (preparada con MeOH) y luego se
administraron 750 ml de HCl adicional. La solución bien mezclada se incubó a temperatura
ambiente (22 ° C) en la oscuridad durante 20 min. La absorbancia contra el blanco se leyó a 500
nm. La (þ) -catequina se usó para hacer la curva estándar (0–1 mg mL1) Los resultados se
expresaron en mg de equivalentes de catequina (CE) g1 extraídos (dw).
Actividad antioxidante
El espectrofotómetro SmartSpec 3000 (Bio-RAD). Una alícuota (20 ml) de acetona, butanol,
DMSO, etanol, metanol y agua se mezclaron por separado con Solución radical DPPH metanólica
90 mM para una final volumen de 1 ml. Se usó metanol puro como negativo controlar. Soluciones
de (þ) -catequina, ascorbato y Se usaron pirocatequina en metanol como controles positivos.
Actividad antibacterial
Análisis estadístico
Evaluar la significancia estadística de los datos. obtenido en los análisis, la prueba ANOVA
unidireccional (p <0,05) se aplicó. Analizar la relación. entre la actividad antioxidante y TPC o
TFC, se evaluaron los análisis de regresión, seguidos de la correlación de Pearson. Todos los
análisis se realizaron con Statistica versión de software 6.1 (StatSoft Inc., 2001)
RESULTADOS
Cribado fitoquímico
El análisis fitoquímico de la biomasa seca de S. subspicatus obtenido por floculación mostró mayor
niveles de fenoles totales y flavonoides totales usando agua como solvente, con 1.8 y 0.9 mg mL1 ,
respectivamente. Los solvente DMSO fue responsable del doble de la cantidad de los taninos
condensados extraídos (0.2 mg mL1) cuando en comparación con el agua (0.1 mg mL1), con el
segundo mejor resultar en la cantidad total de fenoles y flavonoides (significativamente diferente en
p = 0.042, ANOVA unidireccional). La acetona, butanol, etanol y metanol expresados extracciones
significativamente menores en las cantidades totales de fenoles y flavonoides. Es de destacar que
los dos los solventes mencionados anteriormente fueron los únicos capaces de extraer taninos
condensados (Figura 2).
Los disolventes analizados se utilizaron para preparar extractos. con cantidades considerables de
TPC. Se observó una diferencia significativa al analizar las cantidades de cada TPC fitoquímico
separado (p = 0.040, unidireccional ANOVA). Sin embargo, al analizar el compilado datos de los
dos mejores solventes, agua y DMSO, no Se encontraron diferencias significativas (p = 0.374,
unidireccional ANOVA).
Propiedades antioxidantes
Todos los extractos evaluados mostraron posibles actividades antioxidantes contra DPPH,
sin embargo, los resultados son inferiores a la catequina, uno de los tratamientos de control
utilizados. A través de todos los solventes utilizados, los extractos mostraron potencial
antioxidante en los primeros 5 min. Se puede observar que las extracciones obtenidas con
acetona (15,2%) y butanol (19,7%) presentaron las actividades antioxidantes más bajas.
Esto concuerda con los resultados informados anteriormente sobre el comportamiento
hidrofílico de los compuestos extraídos (Figura 3).
En relación con la eficiencia de extracción del compuesto, los extractos con cataquina y
agua como solventes mostraron un porcentaje de inhibición (PI) de 49.6% y 36.7%,
respectivamente, expresando los mejores valores (significativamente diferentes a p <0.005,
ANOVA unidireccional; Figura 3 ) El uso de agua fue mayor que el ácido gálico (28,7%),
lo que demuestra que este extracto es un inhibidor potencial de la oxidación celular por los
radicales libres.
De acuerdo con Aligiannis et al. (2001), los materiales vegetales que muestran valores de
concentración inhibitoria mínima (MIC) de hasta 0.5 mg mL1 se consideran inhibidores
fuertes, entre 0.6 y 1.5 mg mL1 son inhibidores moderados, y valores superiores a 1.6 mg
mL1 son inhibidores débiles. En el presente estudio, los valores de MIC de los extractos de
S. subspicatus fueron más satisfactorios utilizando DMSO. Ninguno de los extractos mostró
valores de MIC iguales o menores a 0.5 mg mL1 (Tabla 2).
DISCUSIÓN
Fitoquímicos
Según Lo´pez et al. (2011) la cantidad de fenoles totales extraídos del Stypocaulon
scoparium varió de 1.23 a 3.28 mg de GA g1 equivalente de polvo de algas secas, mientras
que en la presente investigación TPC varió de 0.09 a 1.80 mg de GA g1 equivalente de
polvo de algas secas. El rendimiento de la extracción química está directamente relacionado
con la polaridad, el pH, el tiempo de extracción, la temperatura y la velocidad de flujo
(Feller et al., 2018). Bajo la misma temperatura y tiempo, la polaridad del solvente y las
propiedades químicas de la muestra son los dos factores más importantes (Lo´pez et al.,
2011). El uso de agua en el proceso de extracción de los compuestos demostró ser
beneficioso tanto ambiental como económicamente. No habría producción nociva de aguas
residuales, y los costos se reducirían drásticamente al tener un precio considerablemente
más bajo en comparación con los otros solventes utilizados en este estudio.
Otras microalgas ya se han utilizado en estudios similares. Dantas y col. (2015) usando las
algas verdes Chlorella vulgaris también mostró resultados satisfactorios usando agua como
solvente en la extracción de fenoles y flavonoides, alrededor de 3.45 y 1.50 mg mL1,
respectivamente. Las microalgas mencionadas anteriormente también son clorofáceas, de
tamaño similar a S. subspicatus. Las microalgas utilizadas en el presente estudio pueden
tener la capacidad de formar colonias, lo que puede haber obstaculizado el proceso de
extracción y puede ser uno de los factores que interfieren con el rendimiento de la
extracción.
Antioxidante
La variación en los IP relacionados con el origen de las cepas, sus líneas genéticas y / o
posibles adaptaciones, así como las condiciones de cultivo. El resultado encontrado en el
extracto acuoso resultó satisfactorio porque además de reducir los costos de procesamiento,
también dio como resultado un producto sin los residuos potencialmente tóxicos
encontrados en otros solventes.
Antibacteriano
Se produjeron inhibiciones en bacterias gramnegativas, P. mirabilis, E. coli y K.
pneumoniae, y gram-positivas, B. subtilis. En este contexto, no es posible afirmar que la
actividad antimicrobiana de S. subspicatus está vinculada a la estructura de la pared celular.
K. pneumoniae puede causar neumonía, aunque se asocia más comúnmente con infecciones
nosocomiales, particularmente en pacientes inmunológicamente deprimidos (Bratu et al.,
2005). La capacidad inhibitoria de esta bacteria hace que S. subspicatus sea una fuente
potencial de tratamiento nutracéutico. Para esto, es importante señalar que aún se necesitan
varias pruebas para hacer factibles las licencias y ofrecer esta microalga como tratamiento
para las enfermedades causadas por esta bacteria.
Uma y col. (2011) mostraron que el extracto de DMSO tuvo los resultados más bajos en
actividades antibacterianas en comparación con acetona, etanol y metanol. En el estudio
mencionado, se evaluaron las microalgas Desmococcus olivaceous, Chlorococcum
humicola y C. vulgaris. Posiblemente estas características están relacionadas con las
diferencias en las composiciones fitoquímicas de estas microalgas. Las diferencias
bioquímicas influirán en la composición final de los extractos.
Corroborando con Desbois et al. (2008), Ghasemi et al. (2004), y Habibi et al. (2018), los
extractos analizados en la segunda etapa mostraron actividades antibacterianas claras contra
B. subtilis. Esta propiedad puede estar vinculada a compuestos que pueden estar presentes
en especies del género Scenedesmus, ya que en los estudios mencionados anteriormente la
especie utilizada fue S. dimorphus.
CONCLUSIONES