INGENIERIA DE ALIMENTOS

FACULTAD DE CIENCIAS AGROINDUSTRIALES

UNIVERSIDAD DEL QUINDÌO

CUANTIFICACIÓN DE PROTEINAS. METODO DE

BRADFORD
Natalia Hernández Sánchez, Andrés Forigua Marín
Carlos Esteban Villa Pérez, Karen Dahiana González Arango, Alejandra Ladino
Ramírez.

I. RESUMEN

El proposíto de la práctica se radicó en la determinación del porcentaje de proteinas

en una muestra de avena líquida de marca alpina a través del método de bratford el
cual se basa en la unión de un reactivo colorante Comassie Blue G-250 a las
proteinas con lo cual se observó en la realización de la práctica como Las proteínas
se unen a la forma azul para formar un complejo proteína-colorante. En la práctica
se tuvo como eje central el procedimiento con el reactivo azul de comassie
preparado, la preparación de la muestra y la preparación de la curva estandar, por lo
tanto al finzalizar la práctica con ayuda de un espectofotómetro se realizó la curva
estandar, Se calcularon las concentraciones de proteínas de las muestras y se
leyó a 595 nm la absorbancia del blanco y de la muestra problema la cual fue la
avena líquida comercial alpina.

ABSTRACT

The purpose of the practice lies in the determination of the percentage of proteins in
a sample of liquid oats of the alpine brand through the bratford method which is
based on the union of a Comassie Blue G-250 coloring reagent to the proteins with
which it was observed in the performance of the practice as the proteins bind to the
blue form to form a protein-dye complex In practice the central axis was the
procedure with the blue comassie reagent prepared, the preparation of the sample
and the preparation of the standard curve, therefore when the practice was finished
with the help of a spectrophotometer, the standard curve was made, The protein
concentrations of the samples were calculated and the absorbance of the blank and
of the test sample, which was commercial alpine liquid oats, was read at 595 nm.

II. INTRODUCCIÓN
Cuando se quiere conocer la actividad específica de una enzima o el contenido proteico de
un alimento, es necesario conocer cuantitativamente la concentración de proteínas. Se han
desarrollado diferentes métodos que se basan en la formación de complejos entre las
proteínas y reactivos específicos.

Bradford es una de los métodos más populares para la determinación de la concentración de

proteínas. Se basa en la formación de un complejo entre el colorante azul brillante de
Coomassie G-250 y las proteínas en solución. El método de Bradford cuantifica la unión
entre un colorante y una proteína, y compara su señal con soluciones patrón de la misma.
Está basado en el cambio de color del colorante azul brillante de Coomasie en respuesta a
proteínas, este compuesto inter acciona con aminoácidos básicos (especialmente arginina) y
aromáticos. Esta unión con los colorantes con las proteínas provoca un cambio en el
máximo de absorción de colorante desde 465 595 nm. por lo tanto, este método se basa en
la propiedad del azul brillante de Coomasie G-250 de presentarse en dos formas con colores
diferentes, rojo y azul. (M oore Langley, 2005)

III. OBJETIVO
OBJETIVO GENERAL

 Determinar la concentración de proteínas en una muestra seca de un alimento, por el

método de Bradford.

IV. MATERIALES
MATERIALES CANTIDAD

Tubos de ensayo tapa rosca 10

Gradilla 1

Micropipetas 3

Puntos para Micropipetas 3

Varillas de vidrio 30 cm 2

Papel filtro 1

Equipo para filtrar al vacío 1

Frasco ámbar para almacenar 1

REACTIVOS

Reactivo de Bradford : Azul de Coomassie 6-250

,100 mg – Etanol: 95% -Ácido fosfórico: 85% -
Agua destilada 1 tarro

Solución de cloruro de sodio Nocl, a 0,15 M y pH

6,5

Solución de BSA de 10 mg de BSA en 10 ml de

Nacl

Triton x -100

Polivinipirrolidona

Muestra problema

V. METODOLOGÍA

1. Preparacion del reactivo azul coomasie

2. preparación de muestra para cuantificar proteínas
3. preparación de la curva estándar.

VI. RESULTADOS
 Imagen 1. Resultado de la muestra de avena comercial en el espectrofotómetro UV.
(Tomada por: Andres Forigua)

VII. DISCUSION
Debido al método aplicado para determinación de proteína en la muestra de avena
comercial (método de Bradford) y la revisión de la solución en el espectrofotómetro no se
hace necesario realizar cálculos como si fuese en el método de Kjeldahl, ya que el equipo
suministra los datos necesarios, en referencia con el blanco obtenemos una concentración
de proteína de 2.02800 mcg/mL y una absorbancia de 0.16381 a 595 nm.

Importante a resaltar, el método se basa en que el Azul Brillante de Coomasie G-250

reactivo que cambia de rojo a azul, al unirse a residuos aromáticos y arginina en las
proteínas, El complejo proteína-colorante tiene un coeficiente de extinción elevado, lo que
le confiere gran sensibilidad presentando cambio de 495nm a 595 nm.

Entre las ventajas de este método se encuentran su compatibilidad con agentes reductores
utilizados para estabilizar las proteínas en solución, los cuales no son compatibles con el
ensayo de Lowry y en algún grado con el ensayo de BCA, y la posibilidad de medir
proteínas de alto peso molecular ya que el colorante no se une a péptidos de bajo peso
molecular (Olson B, 2007).
 Imagen 2. Estructura reactivo Coomasie Brilliant Blue G-250 (utilizado en el
método de Bradford)

VIII. CONCLUSIONES:

 Se logró determinar la concentración de proteínas de una muestra (avena), por el

método de Bradford.
 Se pusieron en práctica los conocimientos adquiridos en clase experimentalmente
mediante el método de Bradford y podemos concluir que la muestra utilizada
(avena) tiene una concentración de proteína de 2.02800 mcg/mL y una absorbancia
de 0.16381 a 595 nm.

IX. BIBLIOGRAFIA

 M oore J., R, Langley.2008Bioquimica para dumies. Wiley Publishing, inc.

indianapolis, Indiana.
 Bradford, M. M. (1976) Anal. Biochem. Cap 72, Pag. 248
 Olson B, Markwell J. Assays for determination of protein concentration. Curr
Protoc Protein Sci. 2007;0:Unit 3.4. disponible en:
http://www.labome.es/method/Protein-Quantitation.html#ref4