I.

INTRODUCCIÓN
Las proteínas son elementos vitales para los organismos, encontrándose en plantas y animales
en una proporción elevada. Hay una gran variedad de proteínas y cada una desempeña una
función biológica específica que puede ser de reserva, de sostén, transporte, estructural, etc.
Químicamente las proteínas están constituidas por combinaciones complejas de carbono,
hidrogeno, oxigeno, nitrógeno y otros elementos en menor proporción como son azufre cobre
y fosforo, debido al gran tamaño de sus moléculas, forman con el agua soluciones coloidales que
pueden precipitar, formándose coágulos al ser calentadas a temperaturas superiores a 70ºC o
al ser tratadas con soluciones salinas, ácidos, alcohol, etc. La coagulación de las proteínas es un
proceso irreversible y se debe a su desnaturalización por los agentes indicados, que al actuar
sobre la proteína la desorganizan, por destrucción de sus estructuras secundaria y terciaria. Esto
trae como consecuencia la pérdida de la actividad biológica. Este método es utilizado para
demostrar la presencia de proteínas: albúminas, globulinas, glutelinas y prolaminas etc. La
positividad se manifiesta por la formación de un coágulo, no se conoce exactamente el
mecanismo de reacción, se cree que ocurre cierta deshidratación de la molécula proteica, es por
ello que la formación de este solido fácilmente observable, está asociada a la disminución de
solubilidad de la proteína. También se puede identificar proteínas mediante el uso de sustancias
que al ponerse en contacto con ellas, producen una coloración específica, tal es el caso de la
Reacción de Biuret

II. OBJETIVO
 Demostrar la separación de las proteínas
 Determinar el punto isoeléctrico

III. MATERIALES
 Dos vasos de precipitados de 100 mL.
 Dos vidrios de reloj pequeños.
 La clara de un huevo.
 Sangre
 Pipetas
 Baño Maria
 CH3COOH 0,178N
 CH3COONO O,1 N +CASEINA
 Acido tricolor acético 1o %
 Nitrato de Ag

 Urea 3M
 Peroxido
 Agua destilada
 9 Tubos de ensayo
 Gradilla
IV. PROCEDIMIENTO

1.Dialisis

-Hecha la clara del huevo en el interior del tubo de ensayo y someterlo al baño maría tapa
el tubo y espera a medida que pasa el tiempo observa lo que sucede en el tubo de ensayo.

Ovoalbúmina +ClNa
 H2O destilada

5 ml 5ml
3 gotas

Claro

Nitrato de plata Tricloacetato

(Identifica cloruros) (Identifica proteínas)

2.Punto Isoelectrico

H2O destilada 5ml a cada tubo

5 ml 5ml 5ml 5ml 5ml 5ml 5ml 5ml

Acetato de sodio
O,1 N +caseína 0,5%

3.Agentes desnaturalizantes
Los agentes que provocan la desnaturalización proteica se llaman agentes
desnaturalizantes. Se distinguen agentes físicos (calor) y químicos (detergentes,
disolventes orgánicos, pH, fuerza iónica).

H2O2
Gotas de catalasa 0,1 ml 0,1 ml

Sangre
homogenizada
fresca

Sangre homogenizada cocida UREA 8M SDS O,1 ml

V. RESULTADOS
a) Diálisis
Las cadenas de proteínas que hay en la clara de huevo se encuentran enrolladas adoptando
una forma esférica. Se denominan proteínas globulares. Al estar en contacto con un
reactivo como el alcohol que tiene un ph de aproximadamente 6. Este cambio de
estructura da a la clara de huevo la consistencia y color que se observa en un huevo
cocinado, pero al inicio es lento observándose primero una caita de color blanco al nivel
del contacto.
B) Punto isoeléctrico

caseína: En nueve tubos de

ensayo limpios y secos adicione
exactamente los volúmenes de
los reactivos según la siguiente
tabla:

Tubo N° 1 2 3 4 5 6 7 8 9

PH 3.55 3.85 4.15 4.45 4.76 5.06 5.36 5.66 5.96

- - - - - - -
- - Mas -
insoluble
- - - - - - - -
Relación sal/ac 5/80 5/40 5/20 5/10 5/5 5/2.5 5/1.25 5/0.625 5/0.3125
Temperatura: entre más alta sea la temperatura, mayor será la velocidad de diálisis. A
temperaturas elevadas, la viscosidad del solvente es menor y la velocidad de difusión
aumenta.
En el cuadro se puede determinar que hay una mayor insolubilidad en el tubo de ensayo
5
 c)Agentes desnaturalizantes

1 2 3 4
Tiempo 0,1 s x 0,5s x

VI. DISCUSION DE RESULTADOS

El pH isoeléctrico se determinó de acuerdo al valor en el cual el precipitado presentó mayor
contenido de proteína, y se refiere al pH donde la proteína no tiene carga eléctrica y es incapaz
de desplazarse en un campo eléctrico, por lo que no existe repulsión electrostática entre las
moléculas de proteína vecinas y tienden a precipitar. Las cadenas de proteínas que hay en la
clara de huevo, denominadas proteínas globulares, se encuentran enrolladas adoptando
una forma esférica. Al añadir etanol ocurre lo mismo que cuando se fríe o cuece un huevo,
las cadenas de proteína se desenrollan y se forman enlaces que unen unas cadenas con
otras. Este cambio de estructura da a la clara de huevo la consistencia y color que se
observa en un huevo cocinado.
La diálisis se emplea rutinariamente para cambiar el disolvente en el que se encuentran
disueltas las macromoléculas. Una disolución macromolecular se introduce en el saco de
diálisis, que se sumerge en un volumen relativamente grande de disolvente nuevo. Las
moléculas pequeñas pasan a través de la membrana al fluido externo hasta que se alcanza
el equilibrio, las macromoléculas permanecerán en el interior de saco de diálisis. El
proceso puede repetirse varias veces a fin de sustituir completamente un sistema
disolvente por otro.
La desnaturalización de proteínas es consecuencia de algún factor externo como acidez
del medio, temperatura, etc. Es importante saber que la desnaturalización de una proteína
no afecta a lo que se conoce cómo estructura primaria, esto es, la secuencia de
aminoácidos base de la proteína.
Hay casos excepcionalmente raros en los que una proteína desnaturalizada no pierde su
función biológica

VII. CONCLUSIONES

 Pudimos comprobar que los tubos 5 fue el único que alcanzo a presentar
un cambio y determinar su punto isoeléctrico porque existe una
concentración de iones de hidrogeno o un pH en el cual, la proteína no
tiene ninguna carga eléctrica y como no hay carga entonces esta no
interactúa con el medio y se vuelve insoluble.
 Las proteínas que hay en la clara de huevo (ovoalbúmina) se encuentran
enrolladas adaptando una forma esférica Esto implica que las proteínas, al ser
moléculas mucho más grandes, no pudieron atravesar la membrana
semipermeable, por lo que quedaron contenidas dentro del dializador.
Mientras los cloruros, que son iones pequeños en relación con las moléculas
de ovoalbúmina, si pudieron atravesar la membrana semipermeable.
VIII. BIBLIOGRAFIA
 Rothstein, F. (1994). Differential precipitation of proteins. En: Harrison, R., ed. Protein
purification process engineering. New York, R.G. Harrison, p. 115-208.
 L. seed oil with a high content of free fatty acids, Biores. Tech., 1716-1721, 2007. [12]
Pedraza Sánchez, E. A., and Cayón Salinas, D. G., Caracterización morfofisiológica de
Jatropha curcas L. variedad Brasil cultivada en dos zonas de Colombia, Acta Agron., 30-
36, 2010.
 Bioquímica Voet 3ra edición.

 Técnicas membranarias de filtración de líquidos Christian Guizard

 ↑ Parry, Robert W. (1973). Química: fundamentos experimentales. Reverte.
p. 703. ISBN 978-8-42917-466-3.
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