1.01641.

0001 Técnica
Tinción en la cubeta de tinción
Desparafinar de forma habitual los preparados histológicos y rehidratar en serie
Microscopía descendente de alcohol.
Los portaobjetos deberían ser escurridos bien por goteo después de los diferentes
pasos de tinción, de esta manera se podrá evitar el innecesario arrastre de solu-
Kit de tinción Rojo Congo ciones.
Para conseguir un óptimo resultado de tinción, deberían respetarse los períodos
kit para identificación de amiloide según Highman indicados.

Portaobjetos con preparado histológico

Agua destilada 1 minuto
Producto sanitario para diagnóstico in vitro
Solución de hematoxilina modificada según Gill II 5 minutos
o
Solución de hematoxilina modificada según Gill III
El presente “Kit de tinción Rojo Congo - kit para identificación de amiloide según
Highman” es utilizado para el diagnóstico celular en la medicina humana y se Agua corriente del grifo 5 minutos
emplea en el examen histológico de muestras de origen humano. Se trata de
un kit de tinción listo para el uso que , junto con otros materiales de diagnóstico Reactivo 1 (solución de Rojo Congo) 10 minutos
in vitro pertenecientes a nuestra cartera, hace evaluables determinadas para el Agua corriente del grifo 5 minutos
diagnóstico estructuras de destino (mediante fijación, inclusión, tinción, contra-
tinción, montaje) en material de examen histológico, como pueden ser cortes Reactivo 2 (solución de KOH) 30 - 40 segundos
histológicos p. ej. del riñon, del intestino o del hígado.
Agua corriente del grifo 5 minutos
El presente Kit de tinción de Rojo Congo - kit para identificación de amiloide se- Etanol 96 % 30 segundos
gún Highman contiene todos los reactivos necesarios para la tinción de amiloide
en tejidos histológicos. Etanol 96 % 30 segundos
Etanol 100 % 1 minuto
Principio
Etanol 100 % 1 minuto
El amiloide es una estructura compuesta de fibrillas proteicas (Ø 8 - 15 nm cada
una), homogénea y teñible de forma eosinófila que se deposita entre las células Xileno o Neo-Clear® 5 minutos
p. ej. en caso de amiloidosis. Todos los depósitos de amiloide contienen fibrillas
proteicas parecidas que son resistentes a los mecanismos de defensa del orga- Xileno o Neo-Clear® 5 minutos
nismo y que no pueden ser eliminadas. Montar con Neo-Mount® los preparados humedecidos con Neo-Clear®, o
La tinción de Rojo Congo se realiza sobre la base de enlaces por puente de los preparados humedecidos con xileno con p. ej. Entellan® Nuevo y cubre-
hidrógeno con el componente de carbohidrato del sustrato. El Rojo Congo es objetos.
un colorante aniónico y puede depositarse en fibrillas de amiloide, las cuales
presentarán en este caso un destacado dicroísmo bajo luz polarizada. Al trasluz, Los preparados histológicos pueden ser montados y almacenados con medios
el tejido teñido con Rojo Congo aparece en color naranja-rojo, mientras que si de montaje anhidros (p. ej. Neo-Mount®, Entellan®, DPX nuevo o Entellan® Nuevo)
se mira bajo luz polarizada, los depósitos de amiloide se presentan en forma de y cubreobjetos después de la deshidratación (series de alcohol ascendentes) y
doble refracción de color verde intenso sobre fondo oscuro. Hay otros materiales la clarificación con xileno o Neo-Clear®.
que también se tiñen con Rojo Congo, como p. ej. el colágeno, pero que, sin
embargo, no son visibles bajo luz polarizada. Para el análisis de preparados teñidos con un aumento microscópico >40x se
recomienda el uso de aceite de inmersión.
La tinción puede ser técnicamente difícil si se utilizan cortes de parafina dema-
siado finos (<5 µm) o si el tejido ha sido sometido a una sobretinción excesiva.
Resultado
Material de las muestras Núcleos celulares azul oscuro
Como material de partida se emplean cortes de tejido fijado en formalina e Amiloide
incluido en parafina (cortes parafínicos de 5 - 6 µm de espesor). al trasluz rosa a rojo
bajo luz polarizada metacromasia verde

Reactivos Tejido conjuntivo, colágeno rojo claro

Art. 1.01641.0001
Kit de tinción Rojo Congo
kit para identificación de amiloide según Highman
Componentes del envase:
El kit de tinción contiene
Reactivo 1: Kit de tinción Rojo Congo Solución de Rojo Congo 100 ml
Reactivo 2: Kit de tinción Rojo Congo Solución de KOH 2x 100 ml
Necesario además:
Art. 105174 Hematoxilina en solución modificada según Gill III 500 ml, 1 l, 2,5 l
para microscopía
Art. 105175 Hematoxilina en solución modificada según Gill II 500 ml, 2,5 l
para microscopía
Preparación de las muestras
La toma de muestra debe ser realizada por personal especializado.
Todas las muestras deben tratarse de acuerdo con el estado de la tecnología.
Todas las muestras deben estar rotuladas inequívocamente.
Deben usarse instrumentos adecuados para la toma de muestras y en la prepa-
ración, y deben seguirse las instrucciones del fabricante para la aplicación / el
empleo.
Desparafinar de forma típica los cortes y rehidratar.
Localización de errores
Tinción demasiado débil de las fibrillas de amiloide
La tinción puede ser técnicamente difícil sobre todo si se utilizan cortes de
parafina demasiado finos <5 µm, porque en este caso ya no quedará suficiente
amiloide para que se deposite el Rojo Congo. Esta circunstancia podrá causar
resultados erróneamente negativos. Por esto, siempre se deberían teñir cortes
de parafina >5 µm.
En caso de realizarse durante la deshidratación una incubación demasiado
intensa con etanol, el colorante Rojo Congo podrá ser eliminado del tejido por
efectos de lavado, dándose lugar a una descoloración de los preparados.
Los tiempos de deshidratación indicados en el protocolo deberían ser res-
petados con exactitud para evitar de esta manera resultados erróneamente
negativos.
Notas técnicas
El microscopio usado debería corresponder a los requisitos de un laboratorio de
diagnóstico médico y disponer de un dispositivo de polarización.
Si se utilizan histoprocesadores o aparatos automáticos de tinción, deberán te-
nerse en cuenta las instrucciones de operación del fabricante, tanto del aparato
como del software.
Eliminar el aceite de inmersión en exceso antes de archivar.

Preparación del reactivo Diagnóstico

Los reactivos del Tb-color Kit de tinción Rojo Congo - kit para identificación de
amiloide según Highman utilizados para los procesos de tinción están listos para
el uso, la dilución de las soluciones no es necesaria y empeora el resultado de la
tinción así como la estabilidad.
El Reactivo 2 (solución de KOH) puede continuar empleándose y suministro bue-
nos resultados aunque muestre color rosa.
La solución de KOH ya utilizada también podrá ser devuelta al frasco di polietilene.
Los diagnósticos deberán ser establecidos solamente por personas autorizadas
y cualificadas.
Deberán emplearse terminologías vigentes.
Deberán elegirse y realizarse ensayos ulteriores según métodos reconocidos.
Cada aplicación debería implicar controles adecuados (p. ej. ISOSLIDE® Rojo
Congo, art. 1.02561.0001) para descartar resultados erróneos.
Para reconocer la amiloide con seguridad, para confirmar el hallazgo al trasluz
debería seguir siempre la inspección del material bajo luz polarizada.
Almacenamiento
Guardar el Kit de tinción Rojo Congo - kit para identificación de amiloide según
Highman de +15 °C a +25 °C.
Estabilidad
El Kit de tinción Rojo Congo - kit para identificación de amiloide según Highman
puede usarse hasta la fecha de caducidad indicada.
Después de abrir el frasco por primera vez, el contenido almacenado entre +15 °C
y +25 °C es utilizable hasta la fecha de caducidad indicada.
El Reactivo 2 (solución de KOH) puede continuar empleándose y suministro bue-
nos resultados aunque muestre color rosa.
La solución de KOH ya utilizada también podrá ser devuelta al frasco di polietilene.
Los frascos deben mantenerse siempre bien cerrados para evitar de esta manera
que se evapore el alcohol y que, debido a ello, aumente la concentración del
colorante.
Capacidad
El envase es suficiente para hasta 50 aplicaciones.
Notas sobre el empleo
Solamente para uso profesional.
Para evitar errores, la aplicación debería ser realizada por personal especializado.
Deben cumplirse las directivas nacionales sobre seguridad en el trabajo y ase-
guramiento de la calidad.
Deben emplearse microscopios equipados de acuerdo con el estándar.
Protección contra infecciones
Debe observarse a toda costa una protección eficaz contra infecciones de acuer-
do con las directivas de laboratorio.
Indicaciones para la eliminación de residuos
El envase debe ser eliminado de acuerdo con las directivas válidas de elimina-
ción de residuos.
Las soluciones usadas y las soluciones caducadas deben eliminarse como
desecho peligroso, debiéndose cumplir las directivas locales de eliminación de
residuos. Podrá pedirse información sobre los procedimientos de eliminación
bajo el Quick Link “Hints for Disposal of Microscopy Products” en
www.microscopy-products.com. Dentro de la UE tiene validez el REGLAMENTO
(CE) Nº 1272/2008 sobre la clasificación, el etiquetado y el envasado de sustan-
cias y mezclas, por el que se modifican y derogan las Directivas 67/548/CEE y
1999/45/CE y se modifica el Reglamento (CE) Nº 1907/2006.
Reactivos auxiliares
Art. 100496 Formaldehído en solución 4%, tamponado, 350 ml y 700 ml
pH 6,9 (aprox. 10% de formalina en solución) (en frasco de
para histología cuello ancho),
5 l, 10 l,
10 l Titripac®
Art. 100579 DPX nuevo 500 ml
medio de montaje anhidro
para microscopía
Art. 100869 Entellan® nuevo para montadores de 500 ml
cubreobjetos para microscopía
Art. 100974 Etanol desnaturalizado con aprox. 1 l, 2,5 l
1 % de metiletilcetona
para análisis EMSURE ®
Clasificación de substancias peligrosas
Art. 1.01641.0001
Tener en cuenta la clasificación de substancias peligrosas en la etiqueta y las
indicaciones en la ficha de datos de seguridad.
La ficha de seguridad está disponible en el sitio web y a solicitud.
Componentes principales de los productos
Art. 1.01641.0001
Reactivo 1
C.I. 22120 10 g/l
C2H5OH 390 g/l
1 l = 0,93 kg
Reactivo 2
KOH 5,69 g/l
C2H5OH 749 g/l
1 l = 0,84 kg
Otros productos de IVD
Art. 100362 Kit de plateado según von Kossa 1 set
para la detección de microcalcificaciones
Art. 100485 Kit de tinción de Masson-Goldner 1 unit
para visualizar tejido conectivo con coloración
tricrómica
Art. 101646 Kit de tinción PAS 2x 500 ml
para detección de aldehídos y mucosustancias
Art. 102472 ISOSLIDE® Warthin-Starry Preparados de 25 tests
control
con tejido de referencia para la detección de
Helicobacter pylori y Spirochaetes en tejido
histológico
Art. 102560 ISOSLIDE® AFB Preparados de control 25 tests
con tejido de referencia para la detección de
micobaterias en tejido histológico
Literatura
1. Romeis - Mikroskopische Technik, Editors: Mulisch, Maria, Welsch, Ulrich,
2015, Springer-Verlag Berlin Heidelberg
2. Theory and Practice of Histological Techniques, John D Bancroft and Marilyn
Gamble, 6th Edition
3. Conn’s Biological Stains: A Handbook of Dyes, Stains and Fluorochromes for
Use in Biology and Medicine, 10th Edition, (ed. Horobin, R.W. and Kiernan,
J.A). Bios, 2002

Art. 102561 ISOSLIDE® Rojo Congo Preparados de control 25 tests

con tejido de referencia para la detección de
estructuras amiloides en tejido histológico
Art. 103699 Aceite de inmersión según ISO 8036 frasco gotero de
para microscopía 100 ml
Art. 104699 Aceite de inmersión frasco gotero de
para microscopía 100 ml, 100 ml,
500 ml
Art. 105174 Hematoxilina en solución modificada según 500 ml, 1 l, 2,5 l
Gill III para microscopía
Art. 105175 Hematoxilina en solución modificada según 500 ml, 2,5 l
Gill II para microscopía
Art. 107961 Entellan® Nuevo 100 ml, 500 ml,
medio de montaje rápido 1l
para microscopía
Consult instructions Manufacturer Catalog number Batch code
Art. 108298 Xileno (mezcla de isómeros) 4l for use
para histología
Art. 109016 Neo-Mount® frasco gotero de
medio de montaje anhidro 100 ml, 500 ml
para microscopía
Caution, consult Use by Temperature
Art. 109843 Neo-Clear® (sustituto de xileno) 5l
accompanying documents YYYY-MM-DD limitation
para microscopía
Art. 111609 Histosec® pastillas 1 kg, 10 kg (4x
punto de solidificación 56-58°C 2,5 kg), 25 kg Status: 2018-10-29
medio de inclusión para histología
Art. 115161 Histosec® pastillas (sin DMSO) 10 kg (4x 2,5 kg), Merck KGaA, 64271 Darmstadt, Germany
punto de solidificación 56-58°C, 25 kg Tel. +49(0)6151 72-2440
medio de inclusión para histología www.microscopy-products.com

EMD Millipore Corporation, 290 Concord Road, Billerica,

MA 01821, USA, Tel. +1-978-715-4321