Tinción de Gram

Antecedentes
Descrita y desarrollada por Christian Gram en
1884.
• Esta tinción es la más importante en
microbiología, pues permite diferenciar
a las bacterias en base a su :
Afinidad tintorial: GRAM POSITIVAS y
GRAM NEGATIVAS .
Morfología: COCÁCEAS, BACILOS,
COCOBACILOS, VIBRIOS, ESPIRILOS,
ESPIROQUETAS visualizar su
Agrupación: CADENAS, TETRADAS,
RACIMOS.
 Fundamento
El cristal violeta es un colorante que penetra la
pared celular de bacterias Gram positivas y
negativa.
Posteriormente se agrega el lugol que es
mordiente y se forma un complejo con el cristal
violeta.
Durante el proceso de decoloración con alcohol-
acetona, la gruesa pared de los Gram positivos
impide la salida del colorante manteniendo la
coloración violeta.
 Fundamento
 En cambio, por el alto contenido lipídico de la pared de los
Gram negativos, el alcohol-acetona genera poros , por los
cuales, escapa el cristal violeta, la bacteria se decolora y tiñe
de color rojo con el colorante de contraste.
 Paso N° 1
Preparar el frotis bacteriano:
 Paso N°2
Teñir con cristal violeta 1 minuto
 Paso N°3
Lavar con abundante agua el exceso de
colorante
 Paso N°4
Cubrir con lugol 1 min
 Paso N°5
Lavar con agua el exceso de Lugol
 Paso N°6
Decolorar con alcohol-acetona
aproximadamente 30 seg
 Paso N°7 y N°8
Lavar con abundante agua para eliminar el
resto de decolorante.
Teñir con Safranina 1 min.
 Paso N°9 y 10
Lavar con abundante agua para eliminar el
colorante de contraste.
Secar la preparación.
 Paso N° 11
 Observar al microscopio, con objetivo de inmersión (100X)
Resumen de los pasos de
la Tinción de Gram
 Factores que considerar en la tinción
de Gram
• –No se debe sobrepasar los tiempos de tinción y
decoloración.
–Los cultivos viejos hacen que las bacterias Gram
positivas se tiñan parcial o totalmente de color
rosa.
–Hay que tomar en cuenta que el agua usada en
el frotis se encuentre en el rango de Ph 7-7.8 ya
que:
*Los Gram positivos pueden hacerse
gramnegativos al aumentar la acidez.
*Los gramnegativos pueden hacerse Gram
positivos al aumentar la alcalinidad.