CICLO DE KREBS

En las células aerobias distintas vías catabólicas convergen en el ciclo de Krebs. El ciclo de Krebs (de los ácidos tricarboxílicos o del ácido
cítrico) es una vía metabólica presente en todas las células aerobias, es decir, las que utilizan oxígeno como aceptor final de electrones
en la respiración celular. En los organismos aerobios las rutas metabólicas responsables de la degradación de los glúcidos, ácidos grasos
y aminoácidos convergen en el ciclo de Krebs, que a su vez aporta poder reductor a la cadena respiratoria y libera CO2.
 REACCIONES

Reacción 1: Citrato sintasa (De oxalacetato a citrato)

En el primer paso del ciclo del ácido cítrico, el acetil-CoA se une con una molécula de cuatro carbonos, oxalacetato, y libera el grupo CoA a
la vez que forma una molécula de seis carbonos llamada citrato.
La CoA transfiere un grupo acetilo de 2C para el Oxalacetato de 4C. Esto forma la molécula de citrato de 6 C
Sub-Reacción 1.1: el ácido cítrico pierde agua y forma el aconitato.

Reacción 2: Aconitasa (De citrato a isocitrato)

En el segundo paso, el citrato se convierte en su isómero isocitrato. En realidad, este es un proceso de dos pasos en el que primero se retira
una molécula de agua que luego se vuelve a añadir; por eso, a veces describen al ciclo del ácido cítrico como una vía de nueve pasos en lugar
de los ocho.
El aconitato recoge el agua y con esto El citrato se reorganiza para formar isocitrato de 6C.

Reacción 3: Isocitrato deshidrogenasa (De isocitrato a oxoglutarato)

La enzima deshidrogenasa mitocondrial depende de la presencia de NAD+ y de Mn2+ o Mg2+. Primero es catalizada la oxidación del isocitrato
a oxalsuccinato, lo que produce una molécula de NADH a partir de un NAD+.
Sub-Reacción 3.1:
Después se produce una descarboxilación , es decir, la salida de una molécula de CO2, que conduce a la formación de alfa- cetoglutarato de
5C, caracterizado por dos carboxilos en las extremidades y una cetona en posición alfa con respecto de uno de los dos grupos carboxilo.

Reacción 4: alfa- cetoglutarato deshidrogenasa (De oxoglutarato a Succinil- CoA)

Después de la conversión del isocitrato en alfa- cetogluarato se produce una segunda reacción de descarboxilación oxidativa (consiste en la
unión de una CoA con el alfa- cetoglutarato), que lleva a la formación de succinil CoA.

5- succinil- CoA sintetasa (De succinil- CoA a succinato)

La CoA se retira del succinil CoA lo que produce al succinato.
La CoA, de la succinil-CoA se sustituye con un grupo fosfato que luego es transferido a ADP para obtener ATP. En algunas células se utiliza
GDP (guanidín difosfato) en lugar de ADP, con lo que se obtiene GTP (guanidín trifosfato) como producto. La molécula de cuatro carbonos
producida en este paso se llama succinato.
6- enzima succinato deshidrogenasa (de succinato a fumarato)
Mediante la oxidación del succinato al encontrarse con una molécula de FAD se forma el fumarato y un nuevo compuesto que es el FADH2.
En esta reacción se transfieren dos átomos de hidrógeno (junto con sus electrones) a FAD para formar FADH2. La enzima que realiza este
paso se encuentra incrustada en la membrana interna de la mitocondria, por lo que el FADH2 puede transferir sus electrones directamente
a la cadena de transporte de electrones.
7- Enzima fumarasa (De fumarato a L- malato)
El fumarato Reacciona con el agua mediante la enzima Fumarasa formando el malato.
En el séptimo paso se le añade agua a la molécula de cuatro carbonos fumarato, con lo que se convierte en otra molécula de cuatro carbonos
llamada malato.
8-Enzima Malato deshidrogenasa (De malato a oxalacetato)
En esta última reacción el malato se oxida al encontrarse con un NAD+ formando el oxalocetato y un NADH+.
En el último paso del ciclo del ácido cítrico, se regenera el oxalacetato (el compuesto inicial de cuatro carbonos) mediante la oxidación del
malato. En el proceso, otra molécula de NAD se reduce a NADH.
Productos del Ciclo de Krebs:
Por cada molécula de piruvato se producen: 1 ATP, 3 NADH, 1 FADH2 y 2 CO2 (el CO2 es expulsado por los pulmones al respirar).

Pero esto cambia ya que teniendo en cuenta que en el proceso de la glucolisis se producen 2 moléculas de piruvato por molécula de glucosa.
Por lo que el ciclo de Krebs produce por cada molécula de glucosa: 2 ATP, 6 NADH, 2 FADH Y 4 CO2.

Bioquímica II

Materia de segundo curso do Grao en Bioloxía da USC (Universidade de Santiago de Compostela). Año 2012/2013. Profesor: Jaime José
Gómez Márquez

Exame Inicio Curso

Anexo I. Exame inicio curso

1) Definición vitamina.
Moléculas orgánicas necesarias en pequeñas cantidades en la dieta de algunos animales.

2) Definición hormona.
 Sustancias o compuestos sintetizados en pequeñas cantidades por un tejido endocrino que se transportan por la sangre a otros tejidos en
donde actúan como mensajera para regular algunas de las funciones de ese tejido u órgano.

3) Definición gen.
Segmento del DNA (o de un cromosoma) que codifica para una o varias proteínas o un RNA. Es una unidad de transcripción.

4) Definición alosterismo.
Proteína a la cual la unión de un ligando afecta a las propiedades de unión de otro sitio de la proteína. Afecta a esa unión porque cambia la
estructura o forma. (Alo=otro; stereo=forma)

5) Función NADH, AMPC, glucógeno, ARNt y FAD.

-NADH (dinucleótido de nicotinamida y adenina) es la forma reducida. Es una coenzima cuya función es el intercambio de electrones e
hidrogeniones en la producción de energía.
-AMPC (adenosín monofosfato cíclico) es un nucleótido que funciona como segundo mensajero de algunas hormonas que no entran en la
célula (suele estar relacionado con la activación de proteínas quinasas)
-glucógeno es un polisacárido de reserva energética (almacenamiento) formado por cadenas remificadas de glucosa. Es insoluble en agua.
Abunda en el hígado.
-ARNt es un tipo de ácido nucleico encargado de transportar los aa a los ribosomas para incorporarlos a las futuras prots durante el
proceso de síntesis proteica.
-FAD (flavín adenín dinucleótido) es la forma oxidada. Es un coenzima que interviene como dador o aceptor de electrones y protones
(poder reductor) en reacciones metabólicas redox.

6) Diferencia entre desnaturalización y degradación del DNA.

La desnaturalización del DNA es la pérdida de la estructura secundaria del ADN y por lo tanto de su función mientras que la degradación es
la rotura de la cadena en ácidos nucleicos.

7) ¿Qué es una aloenzima y una isoenzima?

Las alozimas son formas alternativas de una enzima codificadas por diferentes alelos de un mismo locus genético mientras que isozima
serían todas las enzimas con una misma actividad en un mismo organismo con independencia de su origen.

8) ¿Qué ocurre si aumenta o disminuye la KM?

La Constante de Michaelis-Menten (KM) es la concentración de sustrato a la cual la mitad de los centros activos están ocupados, es decir,
es la concentración de S a la que V es ½ de Vmáx. Es una medida de la afinidad por el sustrato.
>> Cuanto menor es KM, mayor es la afinidad del enzima por S.
>> Cuanto mayor es KM, menor es la afinidad del enzima por S.

9) ¿El colesterol es una grasa?

No. Es un esteroide.

10) Definición intrón.

Es una región del ADN que debe ser eliminada de la transcripción primaria de ARN que, a diferencia de los exones, no son regiones que
codifiquen para una proteína.

11) ¿Las sales biliares derivan del colesterol?

Sí

Exame Inicio Curso

Tema 24. Metabolismo de nucleótidos.

Tema 23. Fijación de nitrógeno e incorporación en compuestos orgánicos.

Tema 22. Metabolismo del amonio. Ciclo de la urea.

1

Tema 21. Metabolismo de aa

Tema 20. Metabolismo de aa y proteínas.

Tema 19. Metabolismo del colesterol.

Tema 18. Metabolismo de lípidos complejos. Esfingolípidos, terpenos y esteroides.

Tema 17. Metabolismo de triacilglicéridos y su regulación.

Tema 16. Síntesis de ácidos grasos y derivados. Regulación del metabolismo de ácidos grasos.

Tema 15. Degradación de ácidos grasos. La β-oxidación. Metabolismo de cuerpos cetónicos.

Tema 14. Metabolismo de lípidos. Digestión y transporte de lípidos en sangre.

Tema 13. Biosíntesis de carbohidratos en las células vegetales.

Tema 12. Fotorrespiración. Plantas C4. Ciclo del Glioxilato.

Tema 11. Fotosíntesis. Transporte electrónico, fotofosforilación oxidativa y ciclo de Calvin.

Tema 10. Metabolismo del glucógeno y otros polisacáridos.

Tema 9. La ruta de las pentosas fosfato (PPP).

Tema 8. Gluconeogénesis y su regulación.

Tema 7. Fosforilación oxidativa. Especies reactivas del oxígeno y sistemas antioxidantes.

Tema 6. Transporte electrónico en mitocondrias y bacterias

Tema 5. El ciclo de Krebs y su regulación. Naturaleza anfibólica del ciclo del ácido cítrico.

Tema 4. Orígenes metabólicos del Acetil-CoA. Regulación del complejo de la Piruvato deshidrogenasa.

Tema 3. Glucólisis y su regulación. Fermentaciones. Incorporación de otros monosacáridos a la ruta glucolítica. Metabolismo del etanol.

Tema 2. Metabolismo de carbohidratos. Panorámica general y su digestión.

Tema 1. Introducción al metabolismo. Conceptos fundamentales y panorámica general.

Contenido.

Tema 1. Introducción al metabolismo. Conceptos fundamentales y panorámica general.

 Tema 1: Introducción al metabolismo.
Conceptos fundamentales y panorámica general.

> ¿Qué es el metabolismo?

Conjunto de reacciones químicas que ocurren en las células de los seres vivos (en las células, en los tejidos, en los órganos…). Este conjunto
de reacciones lleva a cabo procesos que nos permiten responder a dos preguntas:
- ¿Cómo obtienen las células la energía y el poder reductor a partir de su entorno para sus procesos vitales?
- ¿Cómo sintetizan las células los compuestos fundamentales de sus macromoléculas y cómo se sintetizan posteriormente las propias
macromolélulas?

El metabolismo es universal, todos los seres vivos comparten muchas de las principales rutas metabólicas, al igual que el código genético lo
cual es una prueba irrefutable de que poseemos un antecesor común. Hasta los organismos más sencillos como Escherichia coli posee más
de un millar de reacciones químicas.
> Los seres vivos requieren energía.
Todos los seres vivos requieren para su metabolismo una fuente de energía y una fuente de Carbono.
Los sv necesitan un suministro continuo de energía libre para tres fines principales:
1) Realización de trabajo mecánico en la contracción muscular y otros movimientos celulares.
2) Transporte activo de iones y moléculas.
3) Síntesis de macromoléculas y otras biomoléculas a partir de precursores sencillos.
La E libre que se utiliza y que mantiene a un organismo lejos del estado de equilibrio se extrae del entorno.
La primera ley de la termodinámica establece que la energía ni se crea ni se destruye por lo que la cantidad de energía en el universo
permanece constante. No obstante, los distintos tipos de energía se pueden transformar los unos en los otros.
Los organismos vivos se pueden dividir en dos grandes grupos según la forma química a través de la que obtienen carbono del medio:

 § AUTÓTROFOS. Fabrican la materia orgánica a partir de moléculas inorgánicas. Utilizan dióxido de carbono (CO2) de la
atmosfera como única fuente de carbono a partir de la cual construyen todas sus moléculas carbonadas. Plantas superiores,
algas verdes y algunas bacterias. Las cianobacterias pueden utilizar el N2 atmosférico para generar sus compuestos
nitrogenados. Según la forma en que obtienen energía diferenciamos:

- Quimioautótrofos.
- Fotoautótrofos.

 §HETERÓTROFOS. Producen moléculas inorgánicas a partir de materia orgánica. Animales, hongos y varios grupos de
bacterias.

- Quimioheterótrofos
- Fotoheterótrofos

> Anabolismo & Catabolismo

El metabolismo se puede definir también como la suma del catabolismo y del anabolismo. El anabolismo consiste en la biosíntesis de
moléculas, requiere energía, consta
CATABOLISMO ANABOLISMO
-Proceso degradativo -Proceso de síntesis
-Exergónico (libera energía) ATP -Endergónico (requiere energía)
-Oxidación de moléculas  Energía química  -Reducción de moléculas
-Rutas convergentes NADPH -Rutas divergentes
-Requiere poder reductor

> Bioenergética
Es la parte de la biología muy relacionada con la física, que se encarga del estudio de los procesos de absorción, transformación y entrega
de energía en los sistemas biológicos.
Los cambios en la energía libre de Gibbs ΔG nos dan una cuantificación de la factibilidad energética de una reacción química y pueden
proveer de una predicción de si la reacción podrá suceder o no. Como una característica general de La Bioenergética, esta solo se interesa
por los estados energéticos inicial y final de los componentes de una reacción química, los tiempos necesarios para que el cambio químico
se lleve a cabo en general se desprecian. Un objetivo general de la Bioenergética, es predecir si ciertos procesos son posibles o no; en
general, la cinética cuantifica qué tan rápido ocurre la reacción química.
Los seres vivos son sistemas termodinámicamente abiertos y cumplen las leyes de la termodinámica.
En conclusión, los seres vivos no pueden encontrarse en equilibrio, son sistemas abiertos y han de desarrollar trabajo.
Energía libre (G): energía que puede realizar un trabajo
Variación de Energía libre (ΔG):

Reacciones químicas:
· Reacciones exergónicas: espontáneas, ΔG < 0, liberan energía. Catabolismo.
· Reacciones endergónicas: no espontáneas, absorben ΔG. Anabolismo.

ΔGº: situación del sistema aislado.

 ΔG = 0  Equilibrio. No lo encontramos en los seres vivos.
ΔG próximo a 0  Reacción reversible, próxima al
equilibrio
ΔG alejado de 0  Reacción irreversible, alejada del
elquilibrio

Reacciones acopladas: reacciones que no son espontáneas y necesitarían aporte de Energía pero que ocurren porque se acoplan a una
reacción que es espontánea, es decir, termodinámicamente favorable. Ej: reacción de la glucosa.

> ATP
Es la moneda energética de las células (trabajo mecánico, transporte activo, reacciones bioquímicas).
Existen tres formas de generar ATP:
- Fotosíntesis o fosforilación ligada al flujo de electrones.
- Cadena respiratoria mitocondrial o fosforilación oxidativa ligada al transporte electrónico (añadir P proveniente de las reacciones de oxidación
biológica)
- Fosforilación a nivel de sustrato: M~P + ADP  ATP + M (añadir P inorgánico)

El ATP cuando se hidroliza tiene una ΔG < 0 por lo que esta molécula tiene tendencia a hidrolizarse:
ATP  ADP + Pi + E
El potencial de transferencia de grupos fosfato se define como “-ΔGº” y mide la tendencia a transferir un grupo fosfato a otra molécula. El
ATP ocupa una posición intermedia.

> Tipos de rutas metabólicas.

 ► ANABÓLICAS.- divergen del ciclo de Krebs.

 ► CATABÓLICAS.- convergen al ciclo de Krebs.
 ► ANFIBÓLICAS.- participan en anabolismo y catabolismo. Ej: ciclo de Krebbs

Las reacciones metabólicas están catalizadas por enzimas o por complejos multienzimáticos. Se organizan en rutas metabólicas (RM) con
un sustrato/s inicial y producto/s final y entre ambos están los metabolitos intermediarios. Las RM se organizan en mapas metabólicos.

> Reacciones y Rutas Metabólicas.

1.La mayoría están próximas al equilibrio, es decir, son reversibles.
2.Las reacciones próximas al equilibrio comparten las reacciones rutas anabólicas y catabólicas.
3.Hay al menos una reacción de “no-equilibrio” que marca la direccionabilidad de la ruta.
4.Las enzimas que catalizan las reacciones de “no-equilibrio” son los puntos de control.
5.Las RM están reguladas a diferentes niveles: interno, extracelular e intracelular.
6.En las células eucariotas hay rutas metabólicas que están compartimentalizadas.

Recordemos que la capacidad de un compuesto a ceder el P se llama POTENCIAL DE TRANSFERENCIA DE GRUPOS P. Cuantitativamente es el
valor de “-ΔGº”.

> Tipos de reacciones químicas.

Sólo hay 6 tipos para miles de reacciones metabólicas:

 1) Oxidación-reducción. Transferencia de e-. Obtención de la mayor parte de la Energía de la célula ya que la mayor parte de E
de los procesos biológicos procede de la oxidación de sustancias orgánicas reducidas. Formas de transferencia de e-:

- Directamente como e-: Fe2+ + Cu2+  Fe3+ + Cu+

- En forma de átomos de H: FAD + AH2  FADH2 + A
- En forma de ión hidruro [:H- ]:
NAD(P)+ + H+ + 2e-  NAD(P)H
AH2 + NAD(P)+  A + NAD(P^)H + H+
- Combinación directa con el Osígeno: R-CH3 + ½ O2  R-CH2-OH
Oxidación Reducción
Pérdida e- Ganacia e-
Ganancia O Pérdida O
Pérdida H Ganancia H
Liberación E Captación E
Exergónica Endergónica

 2) De ligación que requieren ATP. Reacción de la Piruvato carboxilasa.

 3) Isomerización. Reorganización intramolecular de los átomos.
 4) Transferencia de grupo. Transfieren un grupo (fosforilo, acilo, …) de una molécula a otra. Ej: Fosforilación de la glucosa.
 5) Hidrólisis. Roturas de enlaces mediante la adicción de H2O.
 6) Formación o rotura C-C. Reacción de la aldolasa (glucolisis).
 > Transportadores activados en el metabolismo.
Carrier Grupo transportado
ATP Fosfato
NAD, NADPH, FADH2, FMNH2 Electrones
CoA, Lipoamida Acilo
Pirofosfato de tiamida Aldehido
Biotina CO2
Tetrahidrofosfato 1Carbono
SAM Metilo

> Regulación del metabolismo.

El metabolismo se regula modelando la actividad de las enzimas y la accesibilidad de los sustratos.
Niveles de regulación del metabolismo:
๏ Cantidad de enzima, balance entre:
- Nivel de transcripción (velocidad de síntesis)
- Nivel de degradación (velocidad de degradación)  vida enzima
๏ Actividad de enzima
- Concentración de S/P
- Regulación alostérica (enzima reguladora)
- Conversión covalente reversible (enzima reguladora). Casi siempre es la fosforilación, a veces activa o inhibe el enzima)
๏ Control de señales extracelulares
- Hormonas, neurotransmisores, factores de crecimiento, citoquinas
- Coordinación a nivel fisiológico
- Integración de procesos metabólicos
๏ Accesibilidad de S
- Compartimentación intracelular. Separadas pero no aisladas

Tema 2. Metabolismo de carbohidratos. Panorámica general y su digestión.

Tema 2: Metabolismo de carbohidratos.

Panorámica general y su digestión.

> Panorámica general.

La gluconeogénesis y la glucolisis son las rutas de la glucosa. La ruta de las pentosas fosfato produce ribosas y NADPH. La gluconeogénesis
fabrica glucosa a partir de compuestos no carbonados. La fermentación desintegra el piruvato en lactato o etanol. Otros azúcares también
se integran en la ruta glucolítica.
Glucólisis (vía metabólica encargada de oxidar la glucosa en dos moléculas de piruvato en el citosol)
Gluconeogénesis (ruta metabólica anabólica que permite la biosíntesis de glucosa a partir de precursores no glucídicos)
GLUCOSA
Degradación de disacáridos
Ruta de las pentosas
Fotosíntesis (Ciclo de Calvin)

> Digestión de carbohidratos.

Muchos alimentos que tomamos diariamente (leche, azúcar, frutas, verduras, miel, pasta…) son muy ricos en carbohidratos. Como
consecuencia de una dieta rica en carbohidratos se producen muchos AcetilCoA que deben ser derivados a otras rutas metabólicas,
fundamentalmente a la de ácidos grasos y por eso engordamos.
La digestión convierte estos carbohidratos en compuestos utilizables por el metabolismo. El aparato digestivo lleva a cabo la digestión que
comienza en la boca y en la digestión intervienen una serie de glándulas (salivares, hígado, páncreas…) que segregan enzimas (amilasa
salivar, amilasa pancreática, dextrinasa, disacaridásidas…).
La digestión de los carbohidratos comienza en la boca con la acción de la amilasa salivar que rompe los enlaces α(14).
La siguiente fase consiste en formar monosacáridos mediante la amilasa pancreática que trabaja junto con α-dextrinasa, glucosidasa y
disacaridasa en el intestino delgado.
La absorción intestinal de la glucosa y galactosa tiene lugar por transporte activo mientras que el de la fructosa por difusión facilitada.

La entrada de GLUCOSA se considera transporte activo porque para mantener el gradiente de Na+ está ligado a una bomba Na+/K+ que
consume ATP ya que se absorbe por transporte simporte ligado a Na+. La glucosa entra a favor de gradiente pero para compensar la
concentración de Na+, éste sale por la bomba Na+/K+. Así, de manera indirecta, el transporte de glucosa gasta ATP.
La glucosa se cotransporta con Na+ a través de la membrana plasmática apical al interior del enterocito. Se desplaza a través de la célula a
la membrana basal, donde pasa a la sangre vía GLUT2, un transportador pasivo simple de la glucosa. La Na+/K+ ATPasa continúa bombeando
Na+ hacia el exterior para mantener el gradiente de Na+ que impulsa la captación de glucosa.
La energía de este proceso proviene de dos fuentes:

 La mayor concentración de Na+ fuera (potencial químico).

 El potencial transmembrana que es negativo en el interior y facilita la entrada de Na+ (potencial eléctrico).

Los enterocitos (células epiteliales que revisten el intestino), necesitan traer la glucosa aprovechable de la digestión dentro del cuerpo y
deben prevenir el flujo inverso de la glucosa del cuerpo al intestino.
Se necesita un mecanismo que asegure que la glucosa también fluya dentro de las células intestinales y obtener el transporte dentro de la
corriente sanguínea, no importa cuál sea la concentración de glucosa en el intestino. Si esto no sucediera y las células intestinales usaran los
portadores de difusión facilitada para la glucosa, inmediatamente después de comer dulces u otro alimento rico en azúcar, la concentración
de glucosa en los intestinos sería muy alta, y la glucosa fluiría cuesta abajo del intestino al resto del cuerpo. Pero una hora después, cuando
los intestinos se vaciaran y la concentración de glucosa fuera más baja que la de la sangre y los tejidos, los portadores de difusión facilitada
permitirían a la glucosa en la sangre y tejidos fluir cuesta abajo dentro del intestino. Esto rápidamente agotaría en poco tiempo las reservas
de energía.
Debido a que esta situación sería biológicamente un despilfarro y probablemente letal, es que vale la pena el costo de energía adicional del
transporte activo, para asegurar el transporte de la glucosa en un proceso de un solo sentido.
Por contraste, los eritrocitos (glóbulos rojos) y la mayoría de los tejidos del cuerpo humano mueven la glucosa por portadores de difusión y
no por transporte activo. La difusión facilitada tiene sentid en este contexto, debido a que el medio es diferente para los glóbulos rojos y el
intestino.
Mientras que los intestinos experimentan una constante fluctuación de la concentración de glucosa, la cual puede ser alta o baja que la
concentración de glucosa dentro de las células intestinales; la concentración en la sangre es cuidadosamente regulada, por lo que es
normalmente alta en las concentraciones intercelulares. La glucosa es transportada a través de la membrana de los eritrocitos por un
uniportador, un tipo de proteína de difusión facilitada. Tan pronto como la glucosa ingresa en la célula, se convierte en otras sustancias
necesarias para la producción de energía de la célula o biosíntesis, por lo que la concentración intracelular de glucosa permanece más bajo
que el nivel de glucosa de 5mM que mantiene la sangre. En esta situación, la difusión sola asegura el constante flujo de glucosa dentro del
eritrocito, por lo que sería un desperdicio e innecesario para los eritrocitos, el uso de trasporte activo para la glucosa.

> GLUT
La glucosa pasa a la sangre y llega a los tejidos dónde se capta a través de GLUT. Dentro de esa familia de prots hay 5clases:

 - GLUT 1 y GLUT 3: captación basal de la glucosa.

 - GLUT 2 está presente en el hígado y en las células βpancreáticas. Es muy importante porque la glucosa es almacenada en el
hígado en forma de glucógeno. En el páncreas su importancia está relacionada con la insulina.
 - GLUT 4 se encuentra en los músculos y células adiposas. El musculo capta la glucosa en grasa. Actividad incrementada por la
insulina.
 - GLUT 5 está en el intestino delgado, implicada en el transporte de fructosa.

¿Podría GLUT expulsar la glucosa de la célula? Sí porque depende de la concentración. En general esto no ocurre porque las células fosforilan
la glucosa para que no pueda salir.
Cinética:
La cinética de transporte de glucosa a los eritrocitos es de Michaelis-Menten.

En el genoma humano existen 12 genes que codifican GLUT. Se diferencian en su localización y su función. El GLUT1 es ubiquo (presente en
casi todos los tejidos) pero el GLUT2 está en el hígado y saca el exceso de glucosa de la sangre. Todos hacen lo mismo pero no son iguales.

> Relación entre GLUT, insulina y diabetes.

En condiciones normales los transportadores de glucosa de un adipocito o un miocito están en vesículas. La entrada de glucosa en el
organismo segrega insulina y provoca que las vesículas vayan a la membrana plasmática y se incremente la captación de glucosa.

Tema 3. Glucólisis y su regulación. Fermentaciones. Incorporación de otros monosacáridos a la ruta glucolítica. Metabolismo del etanol.

Tema 3: Glucólisis y su regulación. Fermentaciones.

Incorporación de otros monosacáridos a la ruta glucolítica. Metabolismo del etanol.

> Glucólisis.
La glucólisis es la conversión de glucosa en piruvato en el citosol que incluye dicho conjunto de reacciones. Su nombre significa “romper el
dulce”. Las características de esta ruta son:
- Tiene lugar en el citosol.
- Es universal (animales, plantas y microorganismos).
- Tiene un papel central en el metabolismo energético, está interconectada y es la ruta metabólica mejor conocida.
- Sirve principalmente para producir energía en forma de ATP (es la ruta principal).
Los virus no la realizan porque no son células (curiosidad: nº mínimo de genes de un virus = 3).
> Destinos metabólicos de la glucosa en la célula.
> Breve historia de la glucolisis.
Hans e Ednerr Buchner (1897) conservaron estratos de levaduras libres en células con sacarosa. La sacarosa fermentó a etanol. Se obtiene
la conclusión de que “no son necesarias células vivas para llevar a cabo la fermentación” acabando así con el dogma vitalista. Además
también supone el reconocimiento de la ciencia bioquímica. Hacia 1940 ya estaba aclarada toda la vía glucolítica.

> Fases de la glucolisis.

La glucólisis se puede dividir en dos fases:
Fase I: Inversión energética o preparatoria. Gasta ATP. Desde la glucosa hasta las 2 triosas fosfato.
Fase II: Rentabilidad energética. Se obtiene ATP y NADH. Desde gliceroaldehido 3P hasta piruvato.

Fase I: Inversión energética o preparatoria.

 Reacción de la hexoquinasa (Transferencia de fosforilos):
Glucosa + ATP  Glusosa-6P + ADP [Enzima: hexoquinasa]
En el primer paso de la glucólisis, la glucosa se activa para reacciones posteriores mediante la fosforilación en el C-6; el ATP es el dador de
electrones. Las funciones de la fosforilación es impedir que la glucosa salga de la célula y que se active para las siguientes reacciones.
Esta reacción que es irreversible en condiciones intracelulares está catalizada por la hexoquinasa[1] (HK). Reacción de no-equilibrio así que
es un punto de control.
Existen 4 isozimas (dos o más enzimas que catalizan la misma reacción pero que están codificados por genes distintos) de la hexoquinasa.
Uno de los isozimas presente en los hepatocitos es la isoquinasa 4 o glucoquinasa (GK).
La elevada KM de la GK permite su regulación directa por el nivel de glucosa sanguínea porque cuando la [glucosa] aumenta en la sangre
después de una comida, el exceso es transportado a los hepatocitos en donde la GK la convierte en glucosa-6P. Esto es así porque la cinética
de la GK es sigmoidea por lo que tarda en saturase, es decir, continúa su actividad a medida que la [glucosa] aumenta. En cambio cuando la
[glucosa] en sangre es baja, la GK no la fosforila porque abandona la célula antes (gluconeogénesis).
Destacar además que la GK es específica de la glucosa encontrándose sólo en las células del hígado y en las células ß-pancreáticas mientras
que la HK también cataliza otras hexosas.

 Reacción de la fosfoglucosa isomerasa:

Glucosa-6P  Fructosa-6P [Enzima: fosfoglucosa isomerasa]
Conversión de la glucosa-6P que es una aldosa en fructosa-6P que es una cetosa. Es una isomerización reversible, transcurre fácilmente en
cualquiera de las dos direcciones.

 Reacción de la fosfofructoquinasa-1 (PFK o PFK-1):

Fructosa-6P + ATP  Fructosa-1,6P + ADP [Enzima: PFK]
Es la segunda de las dos reacciones activadoras de la glucólisis, se transfiere un grupo fosforilo desde el ATP a la fructosa-6P para dar la
fructosa 1,6-bifosfato. La reacción de la PFK-1 es prácticamente irreversible en condiciones celulares y es el principal punto de control de la
glucolisis. Es una reacción de no-equilibrio.
La PFK-1 está sujeta a una compleja regulación alostérica; su actividad aumenta siempre que se agota el suministro de ATP en las células o
cuando existe un exceso de productos de rotura del ATP (ADP o AMP). El enzima es inhibido siempre que la célula tenga mucho ATP y
disponga de un buen suministro de otros combustibles como ácidos grasos.
Reacciones de la Aldolasa & Triosa fosfato isomerasa:
Ambas reacciones están próximas al equilibrio por lo que funcionan en base a las concentraciones de sustratos/productos.

La aldolasa cataliza una condensación aldólica reversible: la Fructosa-1,6P se rompe dando lugar a dos triosas fosfato diferentes, el
Gliceroaldehido-3P (aldosa), la Dihidroxiacetona fosfato (cetosa).

La triosa fosfato isomerasa cataliza la conversión rápida y reversible de la dihidroxiacetona fosfato (DHAP) en gliceroaldehido-3P ya que
es el único que puede ser degradado por los siguientes pasos de la glucolisis.

Fase II: Rentabilidad energética (x2)

 Reacción de la Gliceroaldehido-3P (G3PDH o GAPDH):
G3PDH + Pi + NAD+  1,3-Bifosfoglicerato + NADH + H+
Es una reacción de óxido-reducción en la que se transfieren e- en forma de ión hidruro. Es la primera de las dos reacciones conservadoras
de energía de la glucólisis que conduce en último término a la formación de ATP. Ocurre en dos etapas. Es una reacción próxima al equilibrio
(reversible).
La cantidad de NAD+ en una célula es muy inferior a la cantidad de glucosa metabolizada. La glucólisis se detendría si el NADH formado en
este paso no se reoxidara y reciclara continuamente.

 Reacción de la fosfoglicerato quinasa:

1,3-Bifosfoglicerato + ADP  3-Fosfoglicerato + ATP
Reacción de transferencia del grupo fosforilo de alta energía desde el grupo carboxilo del 1,3-bifosfoglicerato al ADP.
El resultado final de la reacción anterior y esta acopladas, ambas reversibles en condiciones celulares, es decir, próximas al equilibrio, es
que la energía liberada en la oxidación se conserva mediante la formación acoplada de ATP.
La formación de ATP por transferencia del grupo fosforilo a partir de un sustrato tal como el 1,3-bifosfoglicerato se conoce como
fosforilación a nivel de sustrato para distinguir el mecanismo de la fosforilación ligada a la respiración. Implica enzimas solubles e
intermediarios químicos con alto potencial de transferencia de grupos P mientras que la de la respiración implica enzimas de membrana y
un gradiente transmembrana de protones.

Reacciones de la fosfoglicerato mutasa (PGM) y de la enolasa:

La PGM cataliza un desplazamiento reversible del grupo fosforilo entre el C-2 y el C-3 del glicerato mientras que la enolasa promueve la
eliminación reversible de una molécula de agua (deshidratación) dando fosfoenolpiruvato (PEP). Al igual que en la reacción el PEP es un
compuesto con potencial elevado de transferencia del grupo fosforilo.

 Reacción de la Piruvato quinasa (PK):

El último paso de la glucolisis consiste en la transferencia del grupo fosforilo desde el fosfoenolpiruvato al ADP catalizada por la PK. Es una
reacción alejada del equilibrio por lo que es otro punto de control.

En la glucólisis hay 3 puntos de control: HK, FGK-1 y PK.

 > Bioenergética de la glucolisis. (ΔGº y ΔG)
ΔG es negativa en todas las reacciones y las reacciones de no-equilibrio (puntos de control) son las más negativas.
ΔGº global = -73.3 kJ/mol (condiciones estándar: pH, Tª,…)
ΔGglobal = -96.2 kJ/mol = -23 kcal/mol (tiene en cuenta la [ ] de P y S en la célula, es el valor real, importante desde pto de vista bq)

> Balance global de la glucosisis: ganancia neta de ATP.

Balance total
1Glucosa + 2ATP + 2NAD+ + 4ADP + 2Pi  2Piruvato + 2ADP + 2NADH + 2H+ + 4ATP + 2H2O
Balance neto
1Glucosa + 2NAD+ + 2ADP + 2Pi  2Piruvato + 2NADH + 2H+ + 2ATP + 2H2O

> Resumen.

> Integración de otros monosacáridos a la glucólisis: galactosa, manosa y fructosa.

La MANOSA se fosforila a manosa-6P (M6P) por la HK y después la fosfomanosa isomerasa la transforma en fructosa-6P (F6P) que es un
intermediario de la glucólisis. A continuación puede seguir dos caminos para integrarse en la glucólisis:

 - Fosforilándose a fructosa-6P (F6P) gracias a la HK y consumiendo ATP Glucólisis!

 - Transformándose en fructosa-1P (F1P) gracias a la fructoquinasa y consumiendo ATP. Ésta se rompe en dos triosas gracias a
la fructosa-1-fosfoaldolasa que son una dihidroxiacetonafosfato (DHAP) y un gliceroaldehido que gracias a la trioquinasa se
transforma en gliceroaldehido-3P (G3P) Glucólisis!

La principal fuente de GALACTASA es la lactosa:

Lactosa  D-glucosa + D-galactosa (Enzima: lactasa)
En el intestino la lactosa se convierte en galactosa y glucosa. Tiene un metabolismo un poco complicado. Primero la galactosa se fosforila a
galactosa-1P que reacciona con la UDP-glucosa para dar UDP-galactosa que se convierte en UDP-glucosa gracias a la UDP-glucoepimerasa;
y glucosa-1P (G1P) que se convierte en G6P gracias a la fosfoglucomutasa (PGM)  Glucólisis!
Existen varias patologías asociadas al metabolismo de la lactosa:
Intolerancia a la lactosa debido a la deficiencia de lactasa.
Galactosemias debidas a la deficiencia en enzimas que metabolizan la galactosa. Son mucho más graves que la anterior y la más común es la
deficiencia en galactosa-1P uridiltransferasa.

> Destino del piruvato.

 El piruvato puede seguir 2 caminos, fermentación o oxidación completa o respiración, dependiendo de la presencia de O2, es decir,
dependiendo de las condiciones aeróbicas o anaeróbicas.

> Fermentación.
La fermentación es una degradación anaeróbica productora de energía de una molécula orgánica (generalmente glucosa) sin oxidación neta
de la misma, es decir, degradación anaeróbica de la glucosa. Tiene dos finalidades: obtener energía y reoxidar el NADH citosólico para
evitar que se detenga la glucólisis. Puede ser de dos tipos:
Fermentación láctica.
Productora de ácido láctico o lactato mediante una reacción próxima al equilibrio catalizada por la lactato deshidrogenasa (LDH). Además
se regenera el NAD+. Ocurre en las células animales y en las bacterias del ácido láctico. El lactato no se acumula en las células por mucho
tiempo así que debe reciclarse, desaparece transformándose por un lado en piruvato y en otro precursor gluconeogénico (síntesis de
glucosa a partir de moléculas no carbohidratadas).

Fermentación alcohólica.
Conversión de la glucosa en etanol, en dos pasos:
- descarboxilación mediante piruvato descarboxilasa
- deshidrogenación por la alcohol deshidrogenasa.
También se regenera el NAD+ para que la glucólisis no pare. Ocurre en levaduras y otros microorganismos.
El destino del etanol es el ciclo de Krebbs (CO2 + H2O + ATP). El exceso de etanol causa problemas muy serios.

> Efecto Pasteur (1857).

Es la inhibición de la glucólisis por la respiración (presencia O2) o la inhibición aeróbica de la glucólisis. Las levaduras consumen mucha más
glucosa creciendo en condiciones anaeróbicas ya que en condiciones aeróbicas se consigue una mayor productividad gastando menos
glucosa. Louis Pasteur la descubrió al estudiar la fermentación en las levaduras. El principal responsable de este efecto es la inhibición de la
fosfofructoquinasa por el citrato y el ATP.
Condiciones aerobias  34, 36 o 38ATP
1 GLUCOSA 
Condiciones anaeróbicas  2ATP

> Reacción de la G3PDH.

Si no se repone el NAD+ se detiene la reacción de la Gliceroaldehido-3P deshidrogenasa (G3PDH) y se para la glucólisis. En condiciones
aerobias reoxidamos el NADH citosólico (NADH  NAD+) mediante un complejo sistema de lanzaderas. Existen porque el NADH no puede
atravesar la membrana mitocondrial y entregar los e- directamente al osígeno (aceptor final de electrones). Hay dos tipos de lanzaderas:
a)Lanzadera Maltato-Aspartato.

En corazón e hígado los electrones del NADH citosólico entran en las mitocondrias por medio de esta lanzadera en la que intervienen 2
transportadores de membrana y 4 enzimas. Los e- se transfieren desde el NADH del citosol al oxalacetato que se convierte en malato, el cual
atraviesa la membrana mitocondrial interna para posteriormente reoxidarse por el NAD+ de la matriz para generar NADH en una reacción
catalizada por la malato deshidrogenasa (enzima del ciclo del ácido cítrico). El oxalacetato resultante no puede atravesar directamente la
membrana mitocondrial interna, de modo que se necesita de una reacción de transaminación para formar aspartato que sí puede ser
transportado hacia el lado citosólico. El glutamato mitocondrial aporta el grupo amino y se forma aspartato y α-cetoglutarato. En el
citoplasma el aspartato pierde el grupo amino y origina oxalacetato.

b) Lanzadera Glicerol-3P.
 Los electrones del NADH pueden introducirse en la cadena transportadora de electrones mitocondrial una vez que han sido utilizados para
reducir la dihidroxiacetona-P a glicerol-3P (G3P) que se reoxida al transferir sus electrones al grupo prostético FAD (flavín adenín
dinucleótido, redox) ligado covalentemente al enzima glicerol-3P deshidrogenasa unida a la membrana. Posteriormente, la transferencia de
los electrones a Q para formar QH2 permite que estos electrones se introduzcan en la cadena transportadora de electrones.

Desde el punto de vista energético es mejor la lanzadera malato-aspartato porque:

- Por cada NADH  formamos 3ATP
- Por cada FADH2  formamos 2ATP
La lanzadera malato-aspartato es fácilmente reversible. En consecuencia, el NADH puede introducirse en las mitocondrias por la lanzadera
de malato-aspartato únicamente cuando el cociente NADH/NAD+ es mayor en el citosol que en la matriz mitocondrial

> Metabolismo del etanol en el Homo sapiens.

La absorción del etanol ocurre en la mucosa gastrointestinal (aprox. intestino delgado 80% y estómago 20%) mientras que sólo se produce
la excreción del 5-10% a través de los pulmones y riñones, es decir, entre el 90-95% del alcohol ingerido no es excretado y debe ser
metabolizado.
El control de alcoholemia mide el control en sangre (BAC=blood alcohol contento r blood alcohol concentration) y depende de factores
ambientales y genéticos.
Metabolismo del Etanol:
Etanol  Acetaldehido  Acetato  Acetil-CoA CICLO DE KREBS
Hay 3 formas de metabolizar el etanol, es decir, hay 3 reacciones oxidativas del metabolismo del etanol en el hígado (también puede
metabolizarse en otros tejidos como el cerebro):
1. Catalizada por la alcohol deshidrogenasa en el hígado. (ADH)
CH3CH2OH (etanol) + NAD+ CH3CHO (acetaldehído) + NADH + H+
2. El sistema MEOS. (CYP2E1)
CH3CH2OH (etanol) + NADPH + O2 CH3CHO (acetaldehído) + NADP+ + 2H2O2
3. Catalizada por la catalasa.

CH3CH2OH (etanol) + H2O2 CH3CHO (acetaldehído) + 2H2O

CH3CH2OH (etanol) + NAD+ + H2O CH3COO- (acetato) + NADH + 2H+ (Enzima: ALDH2)

(sale del hígado, va a la sangre que lo lleva al cerebro y músculos)

CH3COO- (acetato) + CoA~SH + ATP CH3CO-S-CoA (acetil CoA) + AMP + PPi (Acteil-CoA sintetasa)

Las 4 enzimas implicadas son las siguientes:

ADH (alcohol deshidrogenasa): citosólica, principal implicada en la eliminación del etanol en condiciones normales.
CYP2E1 (citocromo P450): está en los microsomas[1] (MEOS=sistema microsimal oxidante) activada a concentraciones de etanol elevadas y
durante el consumo crónico.
Catalasa: peroxixomas.
ALDH2 (aldehído deshidrogenasa): mitocondrias.

Isozimas & Alozimas de ADH. En el genoma humano hay 7 genes (por lo tanto, 7 isozimas) localizados en un cromosoma que están muy
próximos. 4:7 isozimas
ADH es un dímero que puede ser un homómero o un heterodímero. Los alozimas son las variantes alélicas de un mismo gen. Se diferencian
en la KM (unas muy bajas y otras muy altas) y en la distribución en los tejidos.

> Destino del acetato generado del etanol.

KB (cuerpos cetónicos) FFA (ácidos grasos libres) algunos aa colesterol


Acetil-CoA El Acetil-CoA no se puede almacenar y si
 hay mucho se satura el ciclo de Krebs.
Ciclo de Krebs El que sobra se recicla en KB, FFA,
 aa…

CO2 + H2O + Energía

> Efectos del etanol.

Directos: producidos por interacción.
Indirectos:
- Hipoxia en el hígado
- Generación de compuestos peligrosos para las células: acetaldehído, aductos y especies reactivas de O2 (ROS). Se producen daños en
lípidos, DNA y prots.
- Cambios/aleteración en la ratio NADH/NAD+ en el citosol que afectan a muchas reacciones:
Ratio NADH/NAD+ normal 1000
oxidación etanol
Ratio NADH/NAD+ alterada 100
NAD+ + reactante reducido NADH + reactante oxidado + H+

La acción de la ADH y CYP2-1 contribuye a un incremento de la cantidad de acetaldehído que provoca la formación de aductos con DNA y
prots. El metabolismo del etanol dependiente de CYP2E1 conduce a un aumento del estrés oxidativo hepático debido a la generación de
ROS. Ataque hígado, cáncer hepático…
Como consecuencia de todo esto se produce un daño en los tejidos, enfermedades y problemas de índole social y familiar.
Efectos patológicos del consumo de alcohol:
Disfunción neuronal
Alteración del comportamiento
Disfunción gonadal (por síntesis de testosterona). Impotencia, atrofia testicular, ginecomastia, esterilidad y cambios en la distribución
del pelo por la modificación hormonal de los esteroides. Reducción de la secreción de testosterona debido a una alteración en la ratio
NADH/NAD+.
[Efectos sobre el hígado] Hígado graso (acumulación de triglicéridos, descenso de la cantidad de RER, parón mitocondrial que produce
daños celulares e incluso la muerte celular), hepatitis (respuesta inmune, infiltración y activación de linfocitos y macrófagos) y cirrosis
hepática (formación de tejido fibroso, reducción del hígado funcional, ralentización del ciclo de la urea y de la eliminación del amonio y
retención de nitrógeno. Coma hepático).
Hipoglucemia (porque inhibe la gluconeogénesis)
Tolerancia y dependencia.
Daño fetal.
Riesgo cancerígeno (estómago, boca, hígado…).
Interferencia en el metabolismo de medicamentos.
Además afecta a la termorregulación corporal y crea sensación de calor. El mito del “perro de San Bernardo” por el cual se le da whiskey a
alguien en la nieve es un grave error. Debe dársele una bebida caliente y azúcar.

> Glucólisis & Cáncer.

La célula cancerosa consume más glucosa que una célula normal ya que al vivir en condiciones hipóxicas (no llega la red de capilares
provocando un suministro limitado de O2) predomina la glucólisis anaeróbica que produce 2ATP en vez de la respiración que produce 30ATP,
es decir, por varios motivos está favorecida la fermentación en las células tumorales.
Cuando las células tumorales tienen hipoxia responden produciendo el factor HIF-1 (Hypoxia-inducible factor) que es un factor de
transcripción inducible por la hipoxia que activa la transcripción de genes que codifican:
- enzimas glucolíticos
- GLUT 1 y 3
- proteínas implicadas en la angiogénesis (formación de vasos)
- proteínas implicadas en la metástasis

HIF-1 es una proteína con 2 subunidades (α y β). En normoxia la subunidad α es degradada por el proteosoma (complejo multiprotico que
degrada otras proteínas) y queda la subunidad β inactiva mientras que en hipoxia α no se degrada y HIF-1 es activo activando, así, ciertos
genes.
FACTOR DE TRANSCRIPCIÓN.
Son proteínas que intervienen en la regulación de la transcripción (activándola o reprimiéndola). Se unen a secuencias de DNA específicas o
a la RNA polimerasa.

Efectos del HIF-1 sobre el metabolismo de la glucosa:

Mutación de p53  defectos en el transporte electrónico mitocondrial.
Inhibidores de las enzimas glucolíticas y de la ruta de las pentosas como agentes para emplear en quimioterapia.
En los tumores hay una sobreproducción de los transportadores de glucosa y de la mayoría de enzimas glucolíticos. Los compuestos que
inhiben la hexoquinasa, la G6PDH o la transcetolasa bloquean la producción de ATP por la glucólisis, privando así de Energía a la célula
cancerosa y matándola.

Una célula cancerosa proliferando también podría producir HIF-1. El balance en que la quimioterapia mata células enfermas y sanas es
importante. Además es importante bloquear la ruta de las pentosas para impedir el crecimiento de la célula tumoral.

> Tomografía de emisión de positrones (PET).

La detección de tejido canceroso se puede hacer mediante tomografía de emisión de positrones (PET) que se basa en la alta velocidad de
la glucólisis en las células cancerosas. El tratamiento consiste en que se des da un análogo radioactivo de la glucosa que es sustrato de la
isoquinasa y se acumula por lo que hay más radioactividad en ese punto. La desintegración del 18F emite positrones que detecta el aparato.
Escán CT antes de ingerir el análogo.
Escán PET después de ingerir 18F (FdG).
Señal fuerte en el cerebro porque es el mayor consumidor de glucosa y en la vejiga porque se elimina. Sabiendo esto se superponen el CT y
el PET y si aparece una señal elevada en una zona es un indicativo para estudiar el cáncer en dicha zona.

Glucólisis y cáncer: EL EFECTO WARBURG (proliferación celular)

En principio es una paradoja. Los organismos unicelulares o microorganismos con abundante glucosa la fermentan convirtiéndola en
biomasa y etanol mientras proliferan. Los organismos multicelulares cuando proliferan convierten la glucosa en lactato y biomasa, es decir,
al igual que los microorganismos no oxidan, fermentan la glucosa. En cambio, una célula diferenciada que no crece (quiescencia) oxida a
ATP, CO2 y H2O.

En oncología, la denominación de efecto Warburg hace referencia al hecho de que la mayor parte de las células cancerosas producen energía
principalmente en el citosol, por un proceso de glicólisis anaeróbica, es decir, gracias altas tasas de glicólisis seguidas por un proceso de
fermentación láctica; en vez de producir energía por la vía de oxidación aeróbica del piruvato en las mitocondrias como es lo habitual en la
mayor parte de las células normales. Este último proceso hace uso del oxígeno como aceptor final de electrones en la cadena respiratoria. Las
células malignas tienen, típicamente, unas tasas de consumo de glucosa unas 200 veces mayores que las de las células normales que les
dieron origen; y esto ocurre aún con un aporte pleno de oxígeno.

Efecto Warburg. A pesar de que la respiración es mucho más ventajosa para producir ATP, las células proliferantes normales y cancerosas
no oxidan la glucosa.

Las células cancerosas convierten la glucosa disponible a lactato con independencia de la disponibilidad de O2, es decir, prefieren la
fermentación a la respiración.
 Cuando una célula prolifera necesitan fabricar los componentes necesarios para vivir (nucleótidos para replicar el DNA) precisa que no se
consuman los intermediarios.
La ruta de las pentosas fosfato (PPP) fabrica: NADPH y ribose-5P (necesaria en la síntesis de lípidos y ácidos nucleicos). No está
completamente explicado todavía.

> Regulación de la glucólisis.

La glucólisis se regula en base a:
necesidades energéticas de la célula (demanda ATP).
aporte de precursores para otras rutas metabólicas.

Se realiza a varios niveles:

1) [S] & [P] en reacciones de casi-equilibrio.
2) Modulación alostérica: permite un control inmediato del flujo a través de la vía.
3) Unión a proteínas moduladas
4) Conversión molecular covalente reversible que es un control más lento y está desencadenado por hormonas que provocan que las
enzimas se fosforilen/defosforilen.
5) A nivel transcripcional.

La velocidad se regula a nivel de 3 reacciones alejadas del equilibrio (puntos de control):

a. Control de la HK.
G + ATP G6P + ADP
La HK se puede regular tanto en su cantidad como en su actividad:
Control de la cantidad a largo plazo: hormonal
Control de la actividad a corto plazo: alosterismo, modificación covalente…

El control de la HK se realiza en forma de isoenzimas: 4 importantes

HK I, II y III: en todo el organismo
Elevada afinidad por la glucosa, baja Km (0.1mM).
No son específicas para la glucosa, sino que pueden fosforilar a otros monosacáridos (galactosa, fructosa, manosa…)
Son alostéricas y tienen como inhibidor importante su propio producto: glucosa-6-fosfato (G6P)

HQ IV o glucoquinasa: específica del hígado

Baja afinidad por la glucosa. Su KM es elevada (10mM) por lo que responde a cambios de [G] en sangre.
Totalmente específica para la glucosa por eso se la denomina también glucoquinasa
No alostérica, sin embargo aumenta su cantidad en presencia de insulina (después de comer, especialmente si la dieta es rica en hidratos de
carbono porque lleva la glucosa al hígado). Control de su cantidad por hormonas inducibles por insulina.

La proteína reguladora arrastra a la HK-IV al núcleo cuando la [F6P] y la libera al citosol cuando [G]. La HK-IV está secuestrada en el núcleo
por una proteína reguladora. Además de regulación alostérica por la Fructosa-6P, la HK-IV también es regulada a nivel de la transcripción:
mucha [G] en sangre o poco [ATP] activan la transcripción del gen que codifica para la HK-IV (por ejemplo, HIF-1)

b. Control de la PFK-1.
Principal punto de control de la glucólisis. Control coordinado con la gluconeogénesis. Es la enzima reguladora de la glucolisis más importante
por ser la primera específica para la glucosa. Es alostérica.
- Inhibidores alostéricos (-):
Desde el punto de vista energético: ATP; si hay mucho ATP no hay glucolisis, la enzima se inhibe.
Desde el punto de vista metabólico (glucolisis = metabolismo para otras vías), sus sustratos oxidables son:
Citrato (Ciclo de Krebs)
 Ácidos grasos (especialmente de cadena larga, 16-18 átomos de carbono); indicadores de que el organismo se encuentra abastecido de
energía y de que por tanto no requiere la glucolisis.
- Activadores (+):
· ADP, AMP; lógicamente ya que al producirse a partir de ATP serán opuestos
· Fructosa-2,6-bisfosfato; activador más potente
Control de PFK-1 por los niveles de ATP/AMP.
Si hay mucho [ATP] tenemos una cinética sigmoidal mientras que si hay poco [ATP] pasa a ser casi hiperbólica. Inhibir no quiere decir que
no funcione, sino que va mas lento. Por lo tanto, la actividad de la PFK-1 aumenta cuando la relación ATP/AMP disminuye ([ATP] o [AMP]).
En períodos de demanda intensa de ATP, la célula disminuye [ADP], al mismo tiempo que adquiere ATP, mediante la reacción de la adenilato
quinasa:
2 ADP <--> ATP + AMP ΔG’º = 0
Cuando algún proceso (ej: contracción muscular) consume ATP, el AMP se producen con la hidrólisis del ATP de la reacción de la adenilato
quinasa. Simultáneamente se consume ATP y se aumenta el AMP lo que activa la PFK-1.
Control de PFK-1 por niveles de citrato.
Niveles elevados de citrato son indicativos de que se van a producir grandes cantidades de ATP porque el ciclo de Krebs está “alimentado”.
Si hay muchos citratos no necesitamos activar la glucólisis porque hay mucho ATP y la abundancia de ATP inhibe las enzimas que degradan
el ácido cítrico (para que el que se necesita piruvato), por lo que su concentración aumenta y se inhibe la glucólisis.
Control de PFK-1 por la fructosa-2,6-bifosfato.
La Fructosa-2,6BP, a pequeñas cantidades, activa fuertemente a la PFK-1. Es un mecanismo en el que se encuentra implicada una regulación
hormonal a través de segundos mensajeros, y también implica una modulación covalente.
La F6P en la glucólisis se transforma en F1,6BP; pero para que esto ocurra de manera más favorable, una pequeña parte de la F6P se
transforma en F2,6BP, que activa fuertemente a la transformación anterior, es decir, activa a la PFK-1. Concretamente, la F2,6BP incrementa
la afinidad de la PFK-1 por la F6P cambiando la cinética de una sigmoidal a una hiperbólica:
La reacción de F6P a F2,6BP está catalizada por la PFK-2, la cual puede estar activa o inactiva. Este enzima presenta en su forma activa un
centro activo con un grupo OH de una Serina, el cual se puede fosforilar obteniendo PFK-2P, que no es más que la forma inactiva. Esto
quiere decir que la fosforilación de la PFK-2 inactiva la glucólisis.
La fosforilación de este enzima está catalizada por la proteín Kinasa A (PKA), la cual está activada por segundos mensajeros, por el c-AMP,
y por tanto por hormonas.
El c-AMP activa a la Kinasa A que fosforila a la PFK-2, la cual no lleva a cabo la transformación hacia FBP, y por tanto inhibe la glucólisis.
Por otro lado, la PFK-2 es un enzima bifuncional. En su estructura encontramos claramente dos dominios (región con actividad det):
- un dominio Kinasa (PFK-2) añade P
- un dominio Fosfatasa (FBPasa-2) elimina P
El mismo enzima fabrica y degrada a la F2,6BP.
Presenta actividad PFK-2, y también actividad contraria, una actividad fosfatasa, una actividad fructosa-2,6-bisfosfato fosfatasa. Ambos
dominios nunca están activadas a la vez, sino que están alternados, uno si y el otro no. Cuando el dominio kinasa presenta un grupo OH de
una Serina libre, este dominio kinasa está activado y el dominio fosfatasa inactivado.
La fosforilación de ese grupo OH llevada a cabo por la proteín kinasa A, da lugar a la pérdida de la actividad kinasa y a la adquisición de la
actividad del dominio fosfatasa, es decir, no solamente se inactiva la kinasa, sino que se activa la fosfatasa que cataliza la degradación de la
F2,6BP que había a F6P, inactivando, podríamos decir, aún más la glucólisis.
El enzima es regulado por conversión molecular covalente reversible:
fosforilación/defosforilación controlado por dos hormonas:
► El glucagón es un factor hiperglucemiante pancreático producido cuando hay poca [G] en sangre.
poca[glucosa]sangre produce [glucagón] activación segundos mensajeros (c-AMP) activación PKA
fosforilación de PFK-2 (inhibida) actividad fosfatasa [F2,6BP] actividad PFK-1
Resultados:
Inactivación de la glucólisis.
Activación de la gluconeogénesis.
► La insulina se produce cuando hay mucha [G] en sangre.
mucha [glucosa]sangre aumenta [insulina] defosforilación de PFK-2 (activa) actividad quinasa [F2,6BP] aumenta
la actividad PFK-1
La insulina se une a los receptores de las membranas celulares, lo que hace que la glucosa entre en las células, activándose así la síntesis de
glucógeno y la ruta de síntesis de ácidos grasos. Por lo general es una hormona anabolizante (favorece el anabolismo).
Resultados:
Inactivación de la gluconeogénesis.
Activación de la glucólisis.
La F2,6BP permite el control simultáneo de dos enzimas claves, la PFK-1 y la FBPasa para el control concertado de la glucólisis y la
gluconeogénesis.

c. Control de la PK
 Fosfoenolpiruvato (PEP) + ADP Piruvato + ATP
Fosforilación a nivel de sustrato porque PEP tiene gran potencial de transferencia de P. Se regula de dos formas:
A nivel alostérico mediante Fructosa-1,6BP
Conversión molecular covalente por fosforilación/defosforilación (la PK desfosforilada es más activa que la fosforilada).
La PK tiene 2 isozimas[3]:
L (hígado = liver), regulada alostéricamente y por conversión molecular covalente reversible (fosforilación/desfosforilación) a través del
glucagón.
M (cerebro y músculo), regulada sólo alostéricamente, en caso de hipoglucemia se favorece el consumo de glucosa por esta enzima.
Si hay poca [Glucosa], el cuerpo produce glucagón y se activa la PKA que fosforila la PK. Esto detiene la glucólisis y libera glucógeno del
hígado a la sangre.
Ente los inhibidores de la PK encontramos:
[ATP]
Acetil-CoA
Ácidos grasos de cadena larga (si tengo mucho sustrato de ácidos grasos ahorramos glucosa para no malgastarla).
Además, un aumento de Acetil-CoA, provoca también una mayor actividad del ciclo de krebs, y por tanto un aumento de concentración del
citrato, que inhibe la glucólisis a nivel de la PFK-1.

También se encuentra inhibida por Alanina, ya que su estructura está relacionada con el propio pirúvico, que por transaminación con
glutamato da lugar a la alanina. La alanina inhibe a la PK porque si tengo mucha alanina se convierte en piruvato ciclo de Krebs … por
lo que no necesito gastar ATP.

La única activación la produce un aumento de concentración de FBP, ya que entre el segundo punto de control y el tercero, todas las
reacciones intermedias son reversibles, por lo que cuando llegan a PEP pueden volver a FBP, el cual activa a la piruvato kinasa para evitar
un estancamiento y poder consumir el PEP.

> Señalización celular.

Principios de la transducción de señales. Inicialmente se recibe una señal del entorno, tal como una hormona, que interacciona con un
componente celular, normalmente un receptor de la superficie celular. La información que porta la señal recibida se transforma en otros
compuestos químicos, se transduce. Con frecuencia la señal se amplifica antes de provocar una respuesta. La retroalimentación de las vías
regula por completo el proceso de señalización.

Cuatro características de los sistemas de transducción de señal.

a) Especificidad.
b) Amplificación. Partiendo de pocas hormonas dentro de la célula se amplifica la señal:

Hormona 2 Enzimas 4 Enzimas …

c) Desensibilización/adaptación. La respuesta debe ser corta. Se activa un sistema que a la vez que se produce la respuesta se inhibe la
señal.
d) Integración. Respuesta armónica.

6 Tipos generales de transductores de señal.

 Receptor acoplado a proteína G. La proteína G es heteromérica. GTPasa tiene capacidad para hidrolizar el ATP.
 Receptor tirosín quinasa. Proteínas que fosforilan residuos de tirosina. Para fosforilar una proteína esa prot debe tener –OH.
 Receptor guanilil ciclasa.
 Receptor de adhesión (integrina).
 Canales iónicos. Como es movimiento de e- tiene que ver con el potencial de membrana (ej: liberación de insulina).

Hay otros ligandos que entran en la célula y allí se unen a su receptor. Sólo pueden atravesar la membrana las hormonas lipídicas. Las que
son proteicas no pueden, ejemplos:
Adrenalina = Epinefrina
Glucagón & Insulina
Noradrenalina

Sistemas de señalización de la adenilato ciclasa (síntesis de cAMP).

La adrenalina y el glucagón son señales para la degradación del glucógeno.
La actividad muscular o preparación inmediata llevan a una liberación de adrenalina (epinefrina) que estimula la ruptura de glucógeno en
el músculo y en el hígado. El hígado es más sensible al glucagón secretado por el páncreas.
Las moléculas señal (glucagón & adrenalina) se unen a receptores específicos de la membrana plasmática y esto activa a la subunidad ß de
la proteína G mediante un cambio estructural.

La forma unida GTP de la subunidad α activa a la adenilato ciclasa (proteína transmembranal) que cataliza la formación del segundo
mensajero AMPc.
El AMPc activa a la PKA (proteína quinasa A) que activa a la fosforilasa quinasa que, a su vez, activa a la glucógeno fosforilasa.
Es una señal breve ya que es hormonal. La fosfoadenilasa elimina el estímulo (AMPc).
AMPLIFICACIÓN. La insulina no está mediada por AMPc pero el glucagón sí.

> Insulina & Glucagón.

Son dos hormonas proteicas que no entran en la célula (sólo entran las hormonas esteroideas) cuya secreción pancreática depende de la
[Glucosa] en sangre.
mucha [Glucosa] en sangre secreción insulina
poca [Glucosa] en sangre secreción glucagón
La insulina se produce en las células ß del pácreas (islotes de Langerhans) y afecta a muchos tejidos (hígado, tej adiposo, SNC, músculo,
corazón y vasos sanguíneos).

Dianas y acciones de la insulina.

Tiene acciones contrapuestas:

INSULIN
STOP GO
Proteólisis Glucólisis
Lipólisis Lipogénesis + glucosa uptake in muscle
Gluconeogénesis Síntesis de glucógeno
Ketogénesis[4] Síntesis de proteínas
Captación de determinados iones
Síntesis de la insulina.
Se sintetiza en forma de pre-pro-insulina (polipéptido). Tiene un péptido terminal que es una señal que sirve para introducir la proteína en
el RER. Una proteasa elimina el péptido señal.
Dentro del RER sufre la oxidación (formación de 3 puentes disulfuro[5], 2 intercatenarios y 1 intracatenario).
Después pasa al AG y se elimina el péptido C y se libera. La molécula queda como insulina madura con dos cadenas a y b. Está codificada
por un gen.

Actúa a través de unos receptores especiales, los tirosinaquinasas (Tyr-K), y a través de ellos tiene múltiples efectos. Su efecto en el
metabolismo del glucógeno que se produce en hígado es el siguiente:

 Activa a la PP1, con lo que asegura que todas las enzimas estén defosforiladas y por tanto las “degradadoras” de glucógeno
estarán inactivas, mientras que la “sintetizadora” de glucógeno, la glucogenosintasa, estará activa en su forma “defosfo”. Así la
degradación de glucógeno o glucogenólisis estará inactiva y la síntesis de glucógeno o glucogenogénesis activa.
 Activa la FOSFODIESTERASA, que degrada el AMPc. Aunque los receptores no estén r/c el AMPc y la PKA, al disminuir los niveles
de AMPc, hace un efecto contrario al del glucagón y adrenalina: inactiva a la PKA con lo que aseguramos que las enzimas
“degradantes” permanezcan defosforiladas y por tanto inactivas.
 Además, la insulina a través de un mecanismo complejo asegura que la glucógeno-sintasa-quinasa esté inactiva para que no
actúe, ya que activa su fosforilación.

En conclusión, al contrario que el glucagón o la adrenalina, la insulina va a asegurar que todas las enzimas estén defosforiladas y por tanto
las enzimas catalizadoras de la degradación del glucógeno que son activas en su forma “fosfo” (glucógeno-fosforilasa y glucógeno-fosforilasa-
quinasa), estarán inactivas; y la enzima catalizadora de la síntesis de glucógeno que es activa en su forma “defosfo” (glucógeno-sintasa),
estará activa efecto final: se potencia la glucogenogénesis o síntesis de glucógeno, por lo que disminuye el nivel de glucosa en sangre.
> Diabetes.
La diabetes mellitus tipo 1 o también conocida como diabetes juvenil o diabetes mellitus insulino dependiente, es una enfermedad
metabólica autoinmune caracterizada por una destrucción selectiva de las células beta del páncreas causando una deficiencia absoluta
de insulina. La deficiencia de insulina provoca un incremento de la glucosa en sangre y orina.
Los síntomas clásicos son la poliuria, polidipsia (sed), polifagia y pérdida de peso. Otros síntomas son el cansancio, la pérdida repentina de
peso, la mala cicatrización de las heridas, problemas sexuales, visión nublosa e infecciones vaginales.
Glucólisis y diabetes tipo I. Efecto sobre el metabolismo de azúcares y grasas en el adipocito.
La cetogénesis se produce en el hígado y la cetoacidosis en la sangre.
Como no capta glucosa el adipocito moviliza los triacilglicéridos degradándolos con la triacilglicerollipasa a glicerol y ácidos grasos. El cerebro
no puede usar ácidos grasos, emplea los cuerpos cetónicos que no los fabrica el.
Ácidos grasos Hígado Acetil-CoA cuerpos cetónicos
Los cuerpos cetónicos son combustible para el cerebro (positivo) pero también bajan el pH de la sangre que si no se contrarresta rápido con
los sistemas tampón se puede llegar a producir la muerte porque altera procesos de transferencia que hay en la sangre (negativo).

Los cuerpos cetónicos son:

Acetoacetato (puede ser metabolizado).
Dihidroxihidrato (puede ser metabolizado).
Acetona (se expulsa por los pulmones, por eso el aliento de los diabéticos huele a acetona).

[1] Quinasa: enzima que cataliza la transferencia del grupo fosforilo terminal del ATP a algún nucleófilo aceptor, en el caso de la hexoquinasa
el aceptor es una hexosa. Tipo transferasa.
[1] Microsoma: porciones de orgánulos como las membranas mitocondriales, las del aparato de Golgi y del citoplasma entre otros. Contienen
las enzimas del citocromo (CYP) P450 de la célula implicadas en el metabolismo oxidativo.
[2] Protoncogen: genes cuyos productos promueven el crecimiento y la división de la célula. Codifican factores de transcripción que
estimulan la expresión de otros genes, moléculas de transducción de señales que estimulan la división celular y reguladores del ciclo
celular que hacen que la célula progrese a través de este ciclo.
Oncogen: gen anormal o activado que procede de la mutación de un alelo de un gen normal llamado protooncogén.
[3] Isozima: enzimas diferentes que regulan la misma reacción.
Alozima: variantes alélicas de un gen que codifican para enzimas.
[4] Ketogénesis: síntesis de cuerpos cetónicos
[5] Puente disulfuro: enlace entre dos grupos tioles de los aa sulfurados de la proteína (sólo son aa sulfurados la Cisteína y la Met)
[6] Mitógeno: factores que actúan en el ciclo celular estimulando la división celular
[7] Autoinmune: Producimos Ac contra nosotros mismos, es decir, no reconocemos nuestro propio cuerpo. Lupus, reumatitis…

Tema 4. Orígenes metabólicos del Acetil-CoA. Regulación del complejo de la Piruvato deshidrogenasa.

Tema 4: Orígenes metabólicos del Acetil-CoA.

Regulación del complejo de la Piruvato deshidrogenasa.

> Etapas en la respiración celular.

El piruvato procedente de la glucosa y otros azúcares a través de la vía glucolítica
se oxida para dar lugar a acetil-CoA y CO2 a consecuencia de la acción sobre él de
una agrupación de 3 enzimas del complejo de la piruvato deshidrogenasa (PDH).

La reacción global catalizada por la PDH es una descarboxilación oxidativa, un

proceso de oxidación irreversible en el que el piruvato pierde un grupo carboxilo en
forma de molécula de CO2 y los dos carbonos restantes se transforman en el grupo
acetilo del acetil-CoA. El NADH formado en esta reacción libera un ión hidruro (:H-) a
la cadena respiratoria, que transporta los dos e- hasta el oxígeno o, en los
microorganismos anaerobios, hasta un aceptor de e- alternativo (nitrato o sulfato).
Genera en última instancia 2.5 moléculas de ATP por cada par de e-.

> Acetil-CoA.
Es una forma de acetato activado. Transportador de grupos acetilo.

CoA: ADP modificado, vitamina B5 (ácido pantoténico), ß-mercaptoetilamina (-SH) + Grupo acetilo

> Destinos metabólicos del Acetil-CoA.

Movilizamos los ácidos grasos  llegan al hígado  ß-oxidación  Acetil-CoA
El Acetil-CoA tiene su origen en los azúcares, proteínas cuando se degradan a aa, y en los triglicéridos. Tiene varias salidas posibles: ciclo de
Krebs, síntesis de grasas, síntesis colesterol, fosfolípidos, eicosanoides, cuerpos cetónicos… Pero el Acetil-CoA no se puede almacenar.

> Descarboxilación oxidativa del piruvato.

Tiene lugar en la mitocondria. El complejo PDH cataliza la descarboxilación oxidativa del piruvato.
ΔGº es negativa  IRREVERSIBLE
Por eso no podemos fabricar azúcares a partir de grasas.

> Complejo PDH.

Está formado por 3 enzimas:
GRUPO
ENZIMA ABREVIATURA PROSTÉTICO REACCIÓN CATALIZADA
Componente piruvato deshidrogenasa E1 TPP Descarboxilación oxidativa del piruvato
Dihidrolipoilo transacetilasa E2 Lipoamida Transferencia del grupo acetilo al CoA
Dihidrolipoilo deshidrogenasa E3 FAD Regeneración de la forma oxidada de la lipoamida
 E1 = Piruvato deshidrogenasa
3 enzimas E2 = Dihidrolipoil transacetilasa
E3 = Dihidrolipoil deshidrogenasa
+
TPP
3 CoE grupo prostético Lipoamida
FAD
5 coenzimas
+
2 CoE no grupo prostético CoA~SH
(cofactores solubles) NAD+

Es tan grande que se puede visualizar por ME como una partícula grande dentro de las mitocondrias.

Reacciones del complejo PDH.

1ª reacción que cataliza el complejo PDH: Piruvato  CO2 (descarboxilación del piruvato para formar hidroxietil-TPP).
2ª reacción: transferencia del grupo al ácido lipoico (catalizada por PDH) La rama dihidrolipoilo se sitúa en el centro activo de E1.
3ª reacción: transferencia del grupo de 2C al grupo dihidrolipolio para formar el complejo acetil-dihidrolipoilo. Nos queda el enzima (ác
lipoico) en formar reducida. Catalizado por E1
4ª reacción: catalizada por E2 la transferencia del residuo acetilo al CoA para formar acetil-CoA. La rama disulfhidril-lipoilo se desplaza al
centro activo de la E3.
5ª reacción: oxidación del ácido dihidrolipoico y transferencia de los hidrógenos al FAD.
6ª reacción: transferencia de protones y e- al NAD+ para generar NADH+H+.

Regulación del complejo PDH.

1) Inhibición por producto ([ATP]/[ADP], [NADH]/[NAD+] y [acetil-CoA]/[CoA])
2) Modificación covalente reversible (fosforilación/desfosforilación) de la enzima E1, catalizada por la PDK y por la FDP.
Piruvato + CoA + NAD+  Acetil-CoA + NADH + CO2
La inactivación es llevada a cabo por una Proteina-Kinasa (PDH-Kinasa o PDK) Mg+2-ATP dependiente, unida al complejo PDH. Esta
Kinasa actúa fosforilando tres restos de Serina de las subunidades "alfa" del Enzima 1 del complejo PDH.
La activación del complejo PDH es llevada a cabo por una Fosfoproteína-fosfatasa (PDH-Fosfatasa o PDP) que induce desfosforilación de los
restos de serina fosforilados de las subunidades "alfa" del complejo PDH, conduciendo a la forma activa del complejo PDH.
La kinasa y la fosfatasa están a su vez reguladas a diferentes sniveles (alostérico, hormonal).

¿Por qué no podemos los seres humanos convertir el acetil-CoA en azúcares?

Los vertebrados no pueden convertir acetil-CoA en azúcares pero las plantas y microorganismos sí (ciclo glioxilato). Un azúcar lo podemos
convertir en una grasa pero una grasa en azúcar no porque la PDH es irreversible.

Tema 5. El ciclo de Krebs y su regulación. Naturaleza anfibólica del ciclo del ácido cítrico.

Tema 5: El CICLO de KREBS y su regulación.

Naturaleza anfibólica del ciclo de Krebs.

> Ciclo de Krebs.

El ciclo del ácido cítrico o ciclo de Krebs o ciclo de los ácidos tricarboxílicos (TCA) es el último paso del catabolismo oxidativo de la glucosa
(las 2 moléculas de Acetil-CoA resultantes de la descarboxilación oxidativa de la glucólisis aerobia ingresan en él) y en general de todos los
principios inmediatos. Es una vía final común para la oxidación de las moléculas energéticas.
- Es una ruta cíclica.
- A diferencia de la glucólisis transcurre con intermediarios libres no fosforilados (en la glucólisis sus intermediarios no se podían mover
porque estaban fosforilados).
- Es intramitocondrial (todas las enzimas están en el interior de la mitocondria, a diferencia de la glucólisis anaerobia, que se sucedía en el
citosol).
- Totalmente dependiente de oxígeno.
- Muchas de sus reacciones necesitan también magnesio (presente en todo el metabolismo).
Consiste en resumen en la conversión del Acetil-CoA (oxidación) hasta 2 moléculas de CO2.
Su finalidad principal es producir energía (vía catabólica), pero también, aporta metabolitos para otras rutas metabólicas de una manera
mucho más llamativa que otra vía catabólica, por tanto también es una vía anabólica. De aquí que se le conozca como una vía anfibólica (vía
que posee principalmente una función catabólica pero también anabólica, aunque sea en un segundo plano).

Se oxidan unidades de 2C y se generan 4CO2, 3NADH (6e-), 1FADH2 y 1GTP.

> Reacciones.
Consta de 8 reacciones.
 Formación de citrato:
Oxalacetato + Acetil-CoA  citrato [Enzima: citrato sintasa]
Partimos de oxalacetato que reacciona con Acetil-CoA de forma irreversible, formando citrato (que da nombre al ciclo) y liberando el CoA
 1ª reacción irreversible del ciclo.
La enzima que cataliza la reacción: citrato sintasa (no gasta ATP)  1ª enzima irreversible. Es un punto de control.
El CoA liberado en esta reacción se recicla para participar en la descarboxilación oxidativa de otra molécula de piruvato a cargo del complejo
PDH.

 Formación de isocitrato vía cis-aconitato:

Citrato  Cis-aconitato  Isocitrato [Enzima: aconitato hidratasa]
Las siguientes 2 reacciones se producen en su conjunto la isomerización del citrato a isocitrato y estarán catalizadas por la misma enzima,
produciéndose ambas de manera sucesiva:
El citrato pierde 1 molécula de H2O dando lugar a un ácido intermediario de poca importancia, el cisaconitato.
El cis-aconitato reincorpora la molécula de H2O en una posición distinta a la original, dando lugar al isocitrato.
La enzima que cataliza ambas reacciones (de isomerización): aconitasa hidratasa.

 Oxidación del isocitrato a α-cetoglutarato y CO2:

Isocitrato  α-cetoglutarato [Enzima: isocitrato deshidrogranasa]
Las siguientes 2 reacciones están destinadas a la oxidación y descarboxilación del isocitrato para obtener α-cetoglutarato y estarán
catalizadas por la misma enzima, aunque no se producen a la vez:
El isocitrato se oxida a oxal-succinato (intermediario poco importante), empleando como CoE al NAD+, que se reduce a NADH + H+.
El oxal-succinato se descarboxila, perdiendo la 1ª molécula de CO2 y dando lugar al α-cetoglutarato  2ª reacción irreversible (punto de
control).
La enzima que cataliza ambas reacciones: isocitrato deshidrogenasa (DH)  2ª enzima irreversible

 Oxidación del α-cetoglutarato a succinil-CoA y CO2:

El α-cetoglutarato se descarboxila a succinil CoA (similar a la descarboxilación oxidativa del piruvato), reduciéndose una molécula de NAD+
y liberándose la 2ª molécula de CO2  3ª reacción irreversible (punto de control).
La enzima que cataliza la reacción:
 complejo multienzimático α-cetoglutarato-deshidrogenasa  3ª enzima irreversible

A partir de aquí el resto de reacciones van a cerrar el ciclo porque ya hemos perdido las 2 moléculas de CO2, es decir, ya hemos
descarboxilado.
 Conversión de succinil-CoA en succinato:
El succinil CoA es un compuesto rico energéticamente, por lo que se rompe el enlace que une el succinato con la CoA, liberándose CoA-SH
y formándose GTP y dando lugar a succinato. Cuando hacemos el cálculo del balance este GTP se contabiliza como si fuera un ATP porque
la nucleósido difósforo quinasa lo transforma en ATP (fosforilación a nivel de sustrato).
La enzima que cataliza la reacción: succinil CoA sintetasa.
Antes de este paso podíamos distinguir los carbonos procedentes del Acetil-CoA –hasta el succinil CoA incluido– pero a partir de éste paso
ya no nos es posible hacerlo.
 Oxidación del succinato a fumarato:
El succinato da lugar al fumarato por deshidrogenación, empleando como CoE al FAD que se reduce a FADH2.
La enzima que cataliza la reacción: succinato deshidrogenasa. Única enzima no soluble, ligada a la membrana. Forma parte de la cadena
respiratoria.
Es una reacción próxima al equilibrio.
 Hidratación del fumarato a malato:
El fumarato da lugar al malato mediante la incorporación de 1 molécula de H2O. La enzima que cataliza la reacción: fumarasa.
 Oxidación del malato a oxalacetato:
La última reacción: el malato da lugar al compuesto inicial del ciclo, el oxalacetato, por oxidación y empleando la CoE NAD+ que se reduce a
NADH + H+.
La enzima que cataliza la reacción: malato deshidrogenasa

> Tipos de reacciones.

Tipo de reacción Enzima

1 Condensación Citrato sintasa
2 Deshidratación e hidratación Aconitasa
3 Descarboxilación oxidativa Isocitrato deshidrogenasa
4 Descarboxilación oxidativa Complejo α-cetoglutarato DH
5 Fosforilación a nivel de substrato Succinil-CoA sintetasa
6 Oxidación Succinato deshidrogenasa
7 Hidratación Fumarasa
8 Oxidación Malato deshidrogenasa

> Funciones.
Principal función del Ciclo: producir energía (GTP = ATP) combinado con la cadena respiratoria
Función secundaria: producir metabolitos secundarios para otras vías

> Balance.
Material: 1Acetil-CoA  2CO2 (Todo lo demás se recicla)
Energético:

 Por fosforilación a nivel de sustrato: 1GTP/ATP

Por fosforilación oxidativa: 3NADH + 3H+ y 1FADH2
REACCIÓN GLOBAL:
Acetil-CoA + 3NAD+ + FAD + GDP + Pi + 2H2O  2CO2 + 3NADH+H+ + FADH2 + GTP + CoA

> Variación ΔGº y ΔG.

La ΔGº de la reacción de malato a oxalacetato es muy positiva (+29.7) por lo que tiene tendencia a ir hacia la formación de malato. Esto no
es así porque la célula está consumiendo el oxalacetato, obteniendo una concentración lo suficientemente baja como para vencer a la
tendencia de una ΔGº tan positiva.
Las ΔGº de las reacciones punto de control son muy negativas y las del resto 0 (equilibrio).
¿Es lo mismo una sintetasa que una sintasa?
Ej: citrato sintasa y succinil-CoA sintetasa. La diferencia es sencilla: la sintetasa usa un nucleósido trifosfato de alta energía como el ATP o el
GTP mientras que la sintasa no lo usa.

> Regulación de la velocidad del flujo del ciclo de Krebs.

 El Ciclo de Krebs estará regulado en base a sus 2 funciones (producción de energía y de metabolitos para otras vías), es decir, cuando haga
falta energía o metabolitos se producirá.
Hay que tener en cuenta que el Ciclo es totalmente dependiente del O2 (totalmente aerobio). Aunque no veamos al O2 en el Ciclo, éste
depende totalmente de él, porque si no tenemos un nivel adecuado de NAD y FAD, y por tanto un buen funcionamiento de la cadena
respiratoria, el Ciclo no se podrá producir.
¿Por qué el O2 es importante para el Ciclo de Krebs? Porque el oxígeno permite la regeneración de las CoE de poder reductor mediante
fosforilación oxidativa.

Por tanto, tendrá 3 puntos de control: CS, IDH, α-CDH

Factores de regulación:
- Disponibilidad de sustratos (oxalacetato – acetil-CoA)
- La inhibición de los productos acumulados porque la mayoría son reacciones próximas al equilibrio
- La retroinhibición alostérica de las enzimas reguladoras (CS, IDH, α-CDH: puntos de regulación alostérica)
El NADH inhibe el ciclo de Krebs. Entre los activadores tenemos el Ca2+ y el ATP.
El Ca2+ también es un regulador en vertebrados porque es una señal para la contracción muscular, la cual requiere un gasto de energía. Esta
energía proviene del ATP por el que si hay contracción muscular, la célula activa el ciclo de Krebs.
¿Cómo afectaría a la velocidad de flujo del ciclo de Krebs una ratio NADH/NAD+ alta?
Inhibe las 3 enzimas y además afectaría al equilibrio de oxalacetato-malato tirando hacia el malato por lo que el ciclo de Krebs no tendría
oxalacetato. Se reduciría la velocidad.
Es una ruta anfibólica: anabólica y catabólica. Por ejemplo, el oxalacetato se origina a partir de algunos aa y se puede usar para otras síntesis.
Es también un precursor gluconeogénico. El fumarato se obtiene de algunos aa. El succinil-CoA es el precursor de la síntesis de porfirinas y
se obtiene de la isoleucina, metionina y valina, además de ácidos grasos de cadena impar. El α-cetoglutarato y el fumarato son también
precursores de aa. Citrato es importante en la síntesis de ácidos grasos y colesterol.

> Reacciones anapleróticas.

Reponen los intermediarios del ciclo de Krebs y sobre todo reponen el Oxaa (oxalacetato) que es más importante por ser el primero y el
último.
Piruvato carboxilasa, fosfoenol piruvato carboxilasa, fosfoenol piruvato carboxikinasa, enzima málico

> El ciclo del GLIOXILATO.

Variante del ciclo de Krebs que excluye las descarboxilaciones y permite la síntesis de succinato a partir de acetato (acetil-CoA).
Ocurre en plantas, ciertos invertebrados, hongos y determinados microorganismos (levaduras, bacterias).

Balance:
2Acetil-CoA (2C+2C) + NAD+ + 2H2O

Succinato (4C) + 2CoA + NADH+H+

2 enzimas nuevas: Isocitrato liasa & malato sintasa

No hay descarboxilaciones.

> Regulación coordinada de los ciclos de Krebs y del glioxilato.

El isocitrato es el metabolito clave en la regulación coordinada de ambos ciclos:
La inhibición de la IDH desvía el isocitrato hacia el ciclo del glioxilato y la biosíntesis de glucosa.
 [1] Reacción anaplerótica: reacciones que reponen los intermediarios del ciclo de Krebs.

Tema 6. Transporte electrónico en mitocondrias y bacterias

Tema 6: Transporte electrónico en mitocondrias (TEM) y bacterias

Las mitocondrias son las factorías de energía de la célula.
Fuel + O2 combustión  ATP + calor
El destino final de los e- es el oxígeno para dar H2O.

> Transporte electrónico mitocondrial vs transporte electrónico cloroplasmático.

Transporte electrónico mitocondrial transporte electrónico cloroplasmático
Mitocondria Cloroplasto
Dador de e-: NADH & FADH2 Aceptor e-: NADP+
Se forma H2O y ATP Se forma NADPH, ATP y O2
Tiene lugar tanto en luz como en oscuridad Tiene lugar en presencia de luz

> Las reacciones de transferencia de e- son reacciones redox.

Reductor (cede e-) + oxidante (acepta e-)  oxidante (acepta e-) + reductor (cede e-)
Son la principal fuente de energía metabólica en los seres vivos. Las reacciones redox se descomponen en dos semirreacciones.
Ej: Fe2+ + Cu 2+  Fe3+ + Cu+ En esta reacción redox (direccionada hacia la derecha) el Fe2+ actúa como reductor porque cede e- al Cu2+ que
es el oxidante porque capta e- y se reduce.
> Potencial redox. (Eº’)
Mide la afinidad de los e- por una sustancia o potencial de transferencia electrónico. Se toma como referencia el H:
H+ + e-  ½ H2 Eº’ = 0V

 Cuanto más negativo sea Eº’ menor afinidad por los e- y por ello más reductor (cede e-).
 Cuanto más positivo sea Eº’ mayor afinidad por los e- y por ello más oxidante (acepta e-).
Los electrones fluyen desde el reductor hasta el oxidante.
El E (potencial de reducción real) viene dado por la ecuación de Nerst que tiene en cuenta las concentraciones a diferencia del Eº’.

> Transporte electrónico mitocondrial (TEM).

Los electrones fluyen desde el reductor (NADH / FADH2 < Eº’) hasta el oxidante (O2 > Eº’)
ΔGº del TEM: NADH + H+ + ½ O2  NAD+ + H2O
Semirreacciones:
½ O2 + 2e- + 2H+  H2O Eº’ = +0.82V
NAD+ + 2e- + H+  NADH Eº’= -0.32V
ΔEº’ = 1.14V

> Complejos de la cadena respiratoria (TEM) y fuente de energía.

El NADH tiene 3 orígenes:
- Ciclo de Krebs (3NADH) al complejo I.
- Glucólisis en condiciones aerobias con las lanzaderas:
Malato aspartato al complejo I
GlicerolP al complejo II
- Enzima nucleótido nicotinamida transhidrogenasa
 Los electrones de alta energía en forma de NADH y FADH2 se generan en el ciclo del ácido cítrico. Estos electrones fluyen a través de la
cadena respiratoria, que potencia el bombeo de protones y produce la reducción de O2.

COMPLEJO I – NADH-Q oxidorreductasa – NADH deshidrogenasa

COMPLEJO II – succinato-Q oxidorreductasa – succinato deshidrogenasa
COMPLEJO III – Q-citocromo C – oxidorreductasa – Ubiquinona
COMPLEJO IV – citocromo C oxidasa
Sólo los complejos I, III y IV bombean protones, el II no contribuye. Hay 2 elementos móviles que se mueven en el espacio intermembrana:
el coenzima Q y el citocromo c (CytC).

COMPLEJO I – NADH-Q oxidorreductasa – NADH deshidrogenasa

Es una reacción de transferencia acoplada electrón-protón a través de la NADH-Q oxirreductasa. Los electrones fluyen en el complejo I desde
el NADH a través del FMN y una serie de complejos hierro-azufre hasta la ubiquinona. El flujo electrónico produce el bombeo de cuatro
protones y la toma de dos protones de la matriz mitocondrial.
FMN & Centros FeS
FMN: Flavín mononucleótido (es un grupo prostético). CoE deriva de la rivoflavina (vitamina B2 que tiene función de coenzima).
Centros Ferrosulfurados: complejos de Fe y S que son grupos prostéticos. El Fe se une a Cys que aportan S. Tipos de complejos Fe-S:
Fe-S
2Fe-2S
4Fe-4S
Balance:
NADH + Q (ubiquinona) + 5H+matriz mitocondrial  NAD+ + QH2 (ubiquinol) + 4H+espacio intermembrana
ΔEº’ = 0.36V  ΔGº = -0.69 KJ/mol  Se genera energía libre suficiente para la síntesis de ATP.

COMPLEJO II – succinato-Q oxidorreductasa – succinato deshidrogenasa

Es el único enzima del ciclo de Krebs ligado a membrana. Aunque más pequeño y más sencillo que el complejo I, tiene 5 grupos prostéticos
de dos tipos y cuatro subunidades proteicas diferentes. Contiene un grupo hemo y un sitio de unión para la ubiquinona que es el aceptor
final de e- en la reacción catalizada por el complejo II.
El grupo hemo b del complejo II no se encuentra, aparentemente en la ruta directa de transferencia electrónica, en su lugar podría servir
para reducir la frecuencia con la que los electrones se pierden fuera del sistema, desplazándose del succinato al oxígeno molecular para
producir especies reactivas de oxígeno (ROS), peróxido de hidrógeno y el radical superóxido.
FADH2 + Q  FAD + QH2
ΔEº’= 0.031V & ΔGº’ = -2.7KJ/mol  Energía libre suficiente para la síntesis de ATP
Otras deshidrogenasas que ceden sus e- al coQ sin pasar por el complejo II:
̶ Acil-CoA DH (β-oxidación)
̶ Glicerol 3P DH (lanzadera G3P & hidrólisis de los TAG = triacilglicéridos)

El coenzima Q (CoQ o Q)
El CoQ acepta los e- procedentes de los complejos I y II y se reduce a QH2.

COMPLEJO III – Q-citocromo C – oxidorreductasa – Ubiquinona

Transfiere los electrones desde el QH2 hasta el cyt c.
QH2 + 2Cit coxidados + 2H+matriz mitocondrial  Q + 2Cit creducidos + 4H+espacio intermembrana
 ΔEº’= 0.190V & ΔGº’ = -36.7KJ/mol
 Energía libre suficiente para la síntesis de ATP
Trasnportadores de electrones:
̶ Citocromo b con sus 2 hemos bH y bL[1]
̶ Proteína Fe-S con 2 centros de Rieske[2] tipo 2Fe-2S (ISP)
̶ Citocromo c1
̶ El complejo III es un dímero
̶ Qp y QN son lugares de unión para la ubiquinona.
̶ La interfase entre los monómeros forma 2 cavernas por donde se mueve el CoQ e intermediarios
¿Qué es un citocromo? Proteína que transporta electrones y tiene como grupo prostético un grupo hemo.
¿Cómo pasan los e- desde el QH2 hasta el Cit c? El ciclo Q es el mecanismo que explica el paso de H+ y e- a través del CIII.
Balance del ciclo Q:
̶ Balance ciclo 1:
QH2 + cit c1 (ox)  Q- + cit c1 (red) + 2H+ (espacio intermembrana)
̶ Balance ciclo 2:
QH2 + Q- + cit c1 (ox) + 2H+ (matriz)  QH2 + Q + cit c1 (red) + 2H+ (espacio intermembrana)
Ecuación neta del ciclo Q:
QH2 + 2cit c1 (ox) + 2H+N (matriz)  Q + 2cit c1 (red) + 4H+P (espacio intermembrana)

COMPLEJO IV – citocromo C oxidasa

Transfiere los electrones desde el cit c hasta el O2. Cataliza la reducción de O2 a H2O.
4cit cred + 8H+matriz mitocondrial + O2  4cit cox + 2H2O + 4H+espacio intermembrana
La necesidad de O2 para esta reacción es lo que nos hace dependientes de oxígeno a los organismos aeróbicos.
El citocromo C oxidasa tiene 13 subunidades y 4 centros redox:

 Citocromo a (hemo a)
 Citocromo a3 (hemo a3)
 2 centros de Cu:
Con 2 iones Cu (CuA / CuA )
Con 1 ion Cu (CuB)

 CuB y hemo a3 forman un centro Fe-Cu

ΔEº’= 0.58V & ΔGº’ = -112KJ/mol  Energía libre suficiente para la síntesis de ATP

> Inhibitor of Electronic Transport & Reactive Oxygen Species.

Los inhibidores son sustancias que bloquean la cadena respiratoria porque se unen a components a diferentes niveles (a diferentes
complejos).
¡El bloqueo de la cadena respiratoria tiene un efecto letal!

¿Por qué es tan peligroso el bloqueo de la cadena respiratoria?

No hay reoxidación de los coenzimas: se detiene el metabolismo.
No hay gradiente protónico: no hay síntesis suficiente de ATP y se detienen procesos anabólicos y de transporte activo.

¿Cuál de los 3 inhibidores serísa menos letal?

La menos letal sería la de protenona (primera) porque el bloqueo ahí permite que llegue electrons de FAD, solo bloquean el NADH.
La intoxicación por cianuro es uno de los venenos más potentes que existen y además es de efecto rápido. Puede entrar por diversas vías
(contacto con piel, tragándolo, inhalando en forma de vapor por incendios, accidentes industrials, operaciones militares). La antimicina se
emplea en las cromatografías de columna para evitar que crezcan bacterias.
La rotenona es un compuesto inodoro, incoloro. Se encuentra en las semillas de muchas raíces de la familia de las fabáceas. Se usa como
herbicida, pesticida (escarabajos, gusanos) y piscidida de amplio espectro y para el control de plagas y sarna en humanos. Los indios
amazónicos la usaban para pescar peces porque se absorve mal a través del epitelio intestinal.
> Ruta respiratoria alternativa en plantas.
Existe, además de la convencional, una vía respiratoria alternativa que no genera gradiente protónico y la energía del transporte se disipa
en forma de calor.
Generación de olores en las plantas: el calor producido en la cadena respiratoria alternativa (termogénesis) ayuda a derretir el hielo o a la
evaporación de sustancias olorosas para atraer insectos polinizadores.

> ROS.
¡La reducción del O2 no está exento de riesgos!
¡La reducción parcial del O2 genera radicales reactivos!
Los ROS son derivados tóxicos del O molecular. Se forman por la reducción parcial del O. Son muy peligrosos.
En general son cuatro:
Anión superóxido O
Peróxido O2-
Peróxido de hidrógeno H2O2
Radical Hidroxilo OH-
Se producen por:
· fallos en la cadena respiratoria
· luz UV
· radioactividad
· contaminación atmosférica o fumar
· proceso inflamatorio
Dismutación: una reacción en la que un único reactivo O2- se convierte en 2 productos distintos
Dianas sobre las que inciden los ROS:

 Centros Fe-S
 DNA
 Grupos SH
 Proteínas
 Lípidos
ROS effects: apoptosis, necrosis, muerte…

[1] Respiración: proceso generador de ATP en el que un compuesto inorgánico (como el oxígeno molecular) actúa como aceptor final de
electrones. El dador electrónico puede ser o bien un compuesto orgánico o uno inorgánico.

Tema 7. Fosforilación oxidativa. Especies reactivas del oxígeno y sistemas antioxidantes.

Tema 7: Fosforilación oxidativa.

Especies reactivas del oxígeno y sistemas antioxidantes.

> Definición.
La fosforilación oxidativa es la síntesis de ATP acoplada a un gradiente de protones generado en el transporte electrónico y, por lo tanto, el
acoplamiento de un proceso exergónico (respiración) a un proceso endergónico (síntesis ATP).
El complejo V o ATP sintasa o F1F0 ATPasa o ATPasa mitocondrial es la enzima que fabrica ATP. Además también realiza el proceso contrario,
la hidrólisis de ATP, cuando no hay suficiente ADP + Pi.
> ¿Cómo se acopla?
Se postularon varias hipótesis.
La primera hipótesis sobre la síntesis de ATP fue que el transporte electrónico generaría un compuesto con alto potencial de transferencia
del grupo fosfato como en la glucólisis.
La segunda hipótesis decía que se introducía un cambio conformacional en una proteína con capacidad para sintetizar ATP.
No se encontraron estos compuestos.
La tercera hipótesis fue que la síntesis de ATP y el transporte electrónico se acoplan mediante la formación de un gradiente protónico a
través de la membrana mitocondrial interna. Es la hipótesis quimiosmótica.
> Hipótesis quimiosmótica.
La Hipótesis Quimiosmótica de Mitchell (1961) explica la síntesis de ATP acoplada al gradiente protónico generado por el TEM.
Evidencias & Observaciones.
1) Fosforilación oxidativa requiere de una mmi intacta.
2) La mmi es impermeable a iones como H+, OH-, K+, Cl-.
3) El TEM promueve el transporte de H+ al espacio intermembrana o fuera de las mitocondrias intactas, creando un gradiente electrónico
medible a través de la mmi.
4) Los compuestos que aumentan la permeabilidad de la mmi a los H+ disipan el gradiente electroquímico inhibiendo la síntesis de ATP: se
desacopla el TEM de la fosforilación oxidativa.
Demostración Hipótesis Quimiosmótica.
La bacteriorodopsina es una bomba dependiente de la luz que se encuentra en las halobacterias. En un lado de esta vesícula pusieron una
ATP sintasa mitocondrial purificada del hígado de buey. Cuando se iluminaba, la bacteriorodopsina bombeaba protones y pasado un tiempo
sintetizaba ATP. Conclusión: en la fuerza protón-motriz está contenida la energía necesaria para fabricar ATP.
> Fuerza protón-motriz.
El gradiente protónico genera la fuerza responsable de la síntesis de ATP. El movimiento de H+ genera un doble gradiente: de pH y de carga
eléctrica. ¿Cuál es la energía libre inherente al gradiente de pH (químico) y al de carga (eléctrico)?
Fuerza protón-motriz (Δp) = gradiente químico (ΔpH) + gradiente eléctrico (ΔΨ)

> La ATP sintasa o ATPASA-F1F0.

La ATP sintasa es una macromolécula que está situada en la mmi y tiene dos partes con diferentes funciones:
F0: canal protónico
F1: actividad catalítica.
Puede catalizar la reacción en ambas direcciones:
ADP + Pi + n(H+)espacio intermembrana  ATP + H2O + n(H+)matriz mitocondrial
F0 y F1 están conectados mediante un tallo central y una columna externa. La unidad móvil o rotor está formada por el anillo c más el tallo γ
ε y la estacionaria por el resto.
F1: formada por 5 tipos de cadenas polipeptídicas
α3 une NT (nucleótidos)
β3 une NT & sintetiza ATP
γ parte del tallo central (rota)
ε parte del tallo central (rota)
δ parte de la columna externa

F0:
Anillo c: conducto protónico que toma parte del rotor junto con γ & ε
Subunidad a & 2 subunidades b: forman parte de la columna externa
> Mecanismos de síntesis de ATP por la ATP sintasa.
Inicialmente se creyó que el gradiente de H+ sería necesario para la síntesis de ATP por la ATP sintasa pero el complejo enzima-ATP se forma
sin necesidad de la fuerza protón-motriz, es decir, en la superficie de la enzima la reacción:
Enz-ATP  Enz (ADP + Pi) La ΔGº es muy próxima a 0.
El gradiente de protones es necesario para que el ATP abandone el centro catalítico.
Mecanismo catalítico de la F1.
La subunidad F1 es capaz de sintetizar ATP en ausencia de gradiente protónico.
Mecanismo de síntesis de ATP.
El gradiente protónico no es necesario para sintetizar ATP sino para que el ATP abandone el entro catalítico de la ATP sintasa.
 La subunidad β puede unir ADP y Pi para formar y liberar ATP y en cada paso va variando su conformación. La subunidad β puede tener las
siguientes conformaciones:
L (loose): une ADP + Pi
T (tight): une ADP + Pi y forma ATP
O (open): permite liberar al nucleótido
El cambio de una conformación a otra está mediado por la rotación de γ (LTOLT…), es decir, la interconversión de las 3 formas se
realiza gracias a la rotación de la subunidad γ que es asimétrica.
Catálisis rotacional: modelo de cambio de la unión de la ATP sintasa
Los cambios conformacionales están impulsados por el paso de protones a través de la F1. Las alteraciones progresivas de las formas de los
centros activos (subunidades β) están promovidas por el movimiento de la subunidad γ impulsado por el flujo protónico.
La ATP sintasa es el motor molecular más pequeño del mundo.
La demostración de la rotación se llevó a cabo mediante la adición y posterior hidrólisis del ATP que promueve la rotación unidireccional del
filamento de actina en sentido contrario a las agujas del reloj (saltos de 120º).
Los transportadores mitocondriales son necesarios para meter ADP+Pi en la mitocondria porque no está permitido el paso libre a través de
la membrana, en este caso se llama translocasa. Cuando está abierto al citoplasma coge ADP se da la vuelta y lo suelta, al quedar libre el
lugar de unión, coge ATP se da la vuelta y lo suelta en el citosol. Hay dos sistemas de transporte del Pi:
̶ Simporte ligado a H+
̶ Antiporte ligado a OH-

> Regulación de la fosforilación oxidativa.

La fosforilación oxidativa se regula en base a las necesidades energéticas celulares, es decir, por los niveles de [ATP] / [ADP] [P]. Un aumento
de ADP estimula la formación de ATP, además si la célula no precisa ATP se ralentizan los procesos metabólicos.
El gradiente protónico se utiliza también en la síntesis de NADPH de la fotosíntesis, en la producción de calor, en el potencial eléctrico que
controla muchos procesos celulares, en el transporte activo y en la rotación flagelar.
> Estequiometría de la síntesis de AMP.
NADPH + 11H+mmi + ½ O2  NAD+ + 10H+espacio intermembrana + H2O
> Balance de la oxidación completa de la glucosa a CO2 y H2O.
C6H12O6 + 6O2  6CO2 + 6H2O
Debemos tener en cuenta:
la estequiometria NADH/ATP & FADH2/ATP
la lanzadera empleada para reoxidar el NADH
Balances tradicionales: 1NADH = 3ATP; 1FADH2 = 2ATP
Lanzadera malato-aspartato: 38ATP
Lanzadera glicerol3P: 36ATP

Balances actuales: 1NADH = 2.5ATP; 1FADH2 = 1.5ATP

Lanzadera malato-aspartato: 32ATP
Lanzadera glicerol3P: 30ATP

> Desacoplantes del transporte electrónico y la fosforilación oxidativa.

Los inhibidores bloquean el transporte a diferentes niveles o complejos de la cadena de TEM. De la misma manera también existen
inhibidores de la ATP sintasa, como el DCCD oligomicina. Muchos de ellos están presentes en hongos y otros microorganismos.
Los desacoplantes son agentes que evitan que el flujo de electrones genere un gradiente protónico y ello produce los siguientes efectos:
̶ No hay síntesis de ATP.
̶ La energía se disipa como calor.
̶ Incremento del consumo de O2.
̶ Incremento de la oxidación de NADH.
Hay dos tipos:

a. Desacoplantes ionóforos, como el 2,4-DNP (dinitrofenol), son moléculas transportadoras de protones situadas en el lado de la
matriz y que cogen los protones difundiéndolos hacia el otro lado de la membrana, evitando así el que se forme el gradiente.
b. Proteínas que forman parte de la mmi. Son canales a través de los cuales se cuelan los protones, como no pueden volver a través
del mismo canal se forma un gradiente. Estas proteínas son las UCP (uncoupling protein) y en concreto la UCP-1 o termogenina.
Algunos doctores recetaron desacoplantes como adelgazantes pero, pese a tener buenos resultados, su consumo conducía a la muerte. Esto
es debido a que el organismo si no tiene ATP moviliza las reservas energéticas contenidas en las grasas. Con esto no se forma ATP y muchos
procesos imprescindibles para la vida no tienen lugar.

> La termogénesis.
Desacoplar el TEM produce calor: si la energía no se emplea para fabricar ATP, se transforma en calor y esta transformación tiene lugar en
el tejido adiposo pardo o BAT; es el proceso de la termogénesis.
Los bebés acabados de nacer presentan BAT en la espalda y pecho para producir calor y poder sobrevivir. El BAT es un tejido muy rico en
mitocondrias cuyos citocromos le dan color pardo.
Lo que desencadena este proceso es una respuesta hormonal a través de la noradrenalina la cual interactúa con su receptor. Esto activa la
adenilatociclasa que provoca la fabricación de AMPc que activa la PKA que fosforila la triacilgliceroldolipasa que moviliza las reservas de
grasa. Forma ácidos grasos que son sustrato de la cadena respiratoria transformándose en acetil-CoA. Además abren un canal, la
termogenina, por el que los protones se cuelan a la matriz mitocontrial disipándose el gradiente y parando la síntesis de ATP.
La termogénesis está muy relacionada con la hibernación. En los 7 meses que hiberna un oso pardo, este conserva su temperatura corporal
entre los 32-35ºC. Esto lo consigue mediante la oxidación de la grasa parda y obtiene energía para otras reacciones. La oxidación de las
grasas también repone el agua perdida en la respiración. El glicerol que proviene de la degradación de las grasas es un precursor
gluconeogénico por el que se forma glucosa para abastecer al cerebro. La urea es reciclada para formar aa y prots.

Tema 8. Gluconeogénesis y su regulación.

Tema 8: Gluconeogénesis y su regulación.

> Definición.
Es la síntesis de glucosa a partir de precursores no carbohidratos, es decir, síntesis de azúcares a partir de no azúcares. Los principales
precursores son lactato, aminoácidos, oxalacetato y glicerol.

No se puede formar glucosa a partir de ácidos grasos porque se convierten en Acetil-CoA y los carbonos se pierden en forma de CO2.

Ocurre en animales, plantas, hongos y microorganismos; es una ruta universal. La gluconeogénesis es la principal fuente de glucosa en ayuno
para evitar un shock hipoglucémico. En humanos esta ruta tiene lugar mayoritariamente en el hígado pero también en los riñones. Comparte
reacciones con la glucólisis con la excepción de las catalizadas por HK, PFK y PK (reacciones de no equilibrio). Como todo proceso anabólico
requiere un aporte de energía.
 > Reacciones de la gluconeogénesis.
 Conversión de piruvato en fosfoenolpiruvato: piruvato carboxilasa & PEPCK
Necesitamos dos enzimas para pasar de piruvato a fosfoenolpiruvato (2 de las reacciones anapleróticas que reponen los intermediarios del
ciclo de Krebs), estas dos reacciones son exergónicas:
̶ Fosfoenolpiruvatocarboxilasa (necesita biotina). Ocurre en la mitocondria.
̶ Fosfoenolpiruvatocarboxiquinasa (PEPCK). Ocurre en el citosol.
¡RECUERDA! Para formar glucosa me hacen falta 2 piruvatos.

> Rutas alternativas desde el piruvato a fosfoenolpiruvato.

En función del precursor gluconeogénico (lactato o piruvato) predomina una ruta u otra. La importancia de las rutas está determinada por
la disponibilidad de lactato y las necesidades citosólicas de NADH en la gluconeogénesis.
El PEP sale de la mitocondria a través de transportadores.

> Balance de la conversión de piruvato en PEP:

Piruvato + ATP + GTP  PEP + ADP + GDP + Pi

 Conversión de fructosa 1,6-bifosfato en fructosa 6P: fructosa bifosfatasa

La FBPasa-1 promueve la hidrólisis prácticamente irreversible del fosfato en C-1, en este casos no la transferencia de grupo fosforilo al ADP.
Fructosa 1,6-bifosfato + H2O  fructosa 6P + Pi
  Conversión de glucosa 6P en glucosa: glucosa 6-fosfatasa
Se necesitan 5 proteínas para transformar la G6P citosólica en glucosa libre. Varias proteínas del RE (retículo endoplasmático) juegan su
papel en la generación de glucosa; T1 transporta la G6P al lumen del RE, mientras que T2 y T3 transportan Pi y glucosa de vuelta al citoplasma.
La G6P se estabiliza gracias a una proteína que une Ca2+.
La G6Pasa está sólo en las células del hígado, riñón e intestino delgado. ¿Qué implicaciones tiene el hecho de que la G6Pasa esté sólo
en esos órganos?
Que sólo en estos órganos se va a liberar glucosa al torrente sanguíneo, por lo tanto, no van a consumir la glucosa generada por
gluconeogénesis. En los demás se va a consumir en algún paso anterior ya que al no tener esta enzima y fosforilar la glucosa según entra
se aseguran de que no pueda “escapar”.

> Balance de la gluconeogénesis.

2Piruvato + 2ATP + 2CO2 + 2GTP + 2H2O + 2ATP + 2NADH + 2H+ + 2H2O


Glucosa + 2ADP + 2Pi + 2GDP + 2CO2 + 2ADP + 2Pi + 2NAD+ + 2Pi

2Piruvato + 4ATP + 2GTP + 4H2O + 2NADH + 2H+  Glucosa + 4ADP + 2GDP + 6Pi + 2NAD+

La gluconeogénesis no es el proceso inverso de la glucólisis ya que la célula tiene que gastar 6 enlaces fosfato ricos en energía, por lo tanto
es caro energéticamente fabricar glucosa a partir de compuestos no carbohidratados.

> Regulación coordinada de glucólisis & gluconeogénesis.

Para evitar trabajo innecesario es necesaria la regulación coordinada. La glucólisis y la gluconeogénesis comparten 7 enzimas que catalizan
las reacciones reversibles de las rutas. En los tres pasos restantes, las reacciones directa e inversa están catalizadas por enzimas diferentes,
siendo éstos los puntos de regulación de las dos rutas.
1. Nivel celular: necesidades energéticas.
Se trata de una regulación alostérica:
AMP, ADP, ATP, citrato[1], acetil-CoA
La gluconeogénesis se regula a nivel de la PK, de la PEP carboxikinasa y de la fructosa 1,6biPasa mientras que la glucólisis dependía
fundamentalmente de la necesidad energética, si hay mucho ATP se ralentiza la ruta a nivel de la PFK y si hay mucho AMP se acelera.

2. Nivel fisiológico: niveles de glucosa en sangre. Se trata de una regulación hormonal (insulina & glucagón) que se realiza a nivel:
a) Alostérico
b) Conversión Molecular Covalente (CMC)
c) Transcripción
a) Alostérico (mediante metabolitos).
Regulación glucólisis:

o La hexoquinasa IV (glucoquinasa) tiene propiedades cinéticas relacionadas con su papel especial en el hígado: libera glucosa a la
sangre cuando la glucosa sanguínea es baja y capta y metaboliza la glucosa cuando la glucosa sanguínea es elevada.
o La PFK-1 se inhibe alostéricamente por el ATP y el citrato. En la mayoría de los tejidos de mamífero, hígado incluido, la PFK-1 se
activa alostéricamente por la fructosa 2,6biP.
o La piruvato quinasa se inhibe alostéricamente por el ATP y el isozima hepático es también inhibido por fosforilación dependiente
de cAMP.
Regulación gluconeogénesis:
Está regulada a nivel de la piruvato carboxilasa & fosfoenolpiruvatocarboxiquinasa (que es activada por acetil-CoA) y de la FBPasa-1 (que
es inhibida por la fructosa 2,6biP y por el AMP).

Regulación coordinada:
~El acetil-CoA (originado en la glucólisis y en la β-oxidación) coordina los 2 metabolismos:
̶ Activa piruvato carboxilasa (activa la gluconeogénesis)
̶ Inhibe la PDH (inhibe la glucólisis)
~Para limitar el ciclado inútil entre la glucólisis y la gluconeogénesis, las dos rutas están bajo control alostérico recíproco que se consigue
mayoritariamente por los efectos opuestos de la fructosa 2,6biP sobre la PFK-1 y la FBPasa-1.
La regulación de la F2,6biP en hígado como respuesta a las variantes de la [glucosa] en sangre:
- PFK-2: fabrica la F2,6biP
- FBPasa-2: elimina la F2,6biP
Los niveles de glucosa en sangre regulan esta enzima que regula la glucólisis/gluconeogénesis.
~La xiulosa 5P o Xu 5P (intermediario de la ruta de las PPP) activa la fosfoproteína fosfatasa PP2A, que defosforila varias proteínas diana,
entre ellas PFK-2 / FBPasa-2, inclinando el equilibrio hacia la captación de glucosa, síntesis de glucógeno y síntesis de lípidos en el hígado.
 El glucagón o la adrenalina [cAMP] + fosforilar enzima bifuncional PFK-2/FBPasa-2 [fructosa 2,6biP]
La insulina  activa una prot fosfatasa que defosforila enzima bifuncional PFK-2/FBPasa-2 [fructosa 2,6biP]
El nivel de fructosa 2,6bP es alto en el estado alimentado y bajo en ayuno. Durante el ayuno la inhibición de la PK por fosforilación es otro
control importante.
F2,6biPasa  estimula la glucólisis & inhibe la gluconeogénesis

c) Transcripcional (genes implicados en la ruta). Actúan en el núcleo regulando la expresión de genes específicos que codifican enzimas de
las rutas glucolítica y gluconeogénica. La insulina y glucagón actúan de manera antagonista en la activación de estos factores de
transcripción, con lo que activan e inhiben gran número de genes. La insulina está regulada a nivel de la transcripción por más de 150
genes.
Regulación del factor de transcripción ChREBP (Carbohydrate Response Element Binding Protein). Activa la transcripción de genes implicados
en el metabolismo de glúcidos y grasas y así coordina la síntesis de algunos enzimas implicados en la síntesis de glúcidos y grasas.
Se expresa en hígado, tejido adiposo y riñón.
Genes activados por ChREBP:
- Piruvato kinasa
- Ácido graso sintasa
- Acetil-CoA carboxilasa
La xilulosa 5P regula a 2 niveles.
Regulación del factor de transcripción FOXO1. FOXO1 estimula la transcripción de los genes que codifican para PEPCK y G6Pasa (enzimas
gluconeogénicos). La insulina inactiva a FOXO1 por lo que impide la gluconeogénesis:
Insulina  fosforilación FOXO1  ubiquitina  proteasoma  no transcripción de los genes

> Gluconeogénesis: interacciones fisiológicas.

En los seres humanos los órganos gluconeogénicos son el hígado y los riñones. Las células inmunes producen lactato, aspartato y glutamato
que van al hígado para la gluconeogénesis. También interviene el tejido adiposo que produce glicerol mediante degradación de grasas.

Ciclo de Cori.
Relaciona la glucólisis, gluconeogénesis y el metabolismo del glucógeno con el metabolismo del músculo y el hígado. El lactato sale a la sangre
en dirección al hígado donde se transforma en glucosa y vuelve a la sangre en dirección al músculo. Cori fue la primera mujer en recibir el
premio Nobel de Medicina y Fisiología.
El lactato que se forma por la actividad muscular se convierte en glucosa en el hígado. Este ciclo desplaza al hígado parte de la carga
metabólica del músculo activo.

Gluconeogénesis desde glicerol:

El glicerol proviene de la hidrólisis de triacilglicéridos de los adipocitos que llegan al hígado dónde se transforma en glucosa mediante la
siguiente vía:
 Gluconeogénesis desde alanina y otros aa:
Sistema de transporte del nitrógeno desde el músculo hasta el hígado. La alanina proviene de la transaminación del piruvato con glutamato
lo que forma alanina y α-cetoglutarato. Cuando la alanina llega al hígado participa en una reacción semejante pero en sentido contrario
produciendo piruvato y glutamato. El piruvato ya puede entrar en la ruta gluconeogénica.
Durante un sprint las células musculares transforman el glucógeno en glucosa y la consumen inmediatamente, produciendo piruvato y
lactato (porque no hay O2 suficiente). El lactato también va al hígado dónde se transforma en piruvato para transformarse en glucosa como
la hace el glicerol, glucógeno y aa.
El músculo cardiaco necesita un aporte continuo de glucosa y la consume siempre en condiciones aerobias.

> Ciclos de sustrato o ciclos fútiles.

Son reacciones que suponen aparentemente un gasto inútil de ATP.
Interconversión del reactante y producto de 2 enzimas, una de ellas cataliza la reacción en una dirección mientras que el segundo enzima
cataliza la reacción opuesta. Ejemplo de un ciclo aparentemente fútil:
Se defosforila/hidroliza el ATP sin trabajo metabólico aunque ambas reacciones no son plenamente activas al misma tiempo gracias a la
coordinación de glucólisis/gluconeogénesis. Gracias a la actividad alostérica de los enzimas en la célula en la práctica este ciclo no puede
ocurrir.

Funciones de los ciclos de sustrato:

̶ Generar energía en forma de calor debido a la hidrólisis del ATP (ejemplo: el abejorro mantiene la Tª para poder volar).
̶ Amplificar las señales metabólicas que es la función más importante.

[1] El citrato es un indicador para la formación de ATP porque indica la presencia de mucho sustrato para el ciclo de Krebs.

Tema 9. La ruta de las pentosas fosfato (PPP).

Tema 9: La ruta de las pentosas fosfato (PPP).

La ruta de las pentosas fosfato, del fosfogluconato o de las hexosas fosfato ocurre en el citoplasma. Es fuente de NADPH y ribosa5P para
biosíntesis de ácidos nucleicos. Tiene una fase oxidativa (generación de NADPH) y otra no oxidativa (interconversión no oxidativa de
azúcares).

> Fase oxidativa de la RPF.

 Se pasa de una hexosa a una pentosa. Consiste en dos oxidaciones que convierten la glucosa 6P en ribulosa 5P y reducen el NADP+ a NADPH.
La principal y primera enzima es la G6PDH o G6PD (glucosa 6P deshidrogenasa).
La segunda enzima es la fosfoglucolactonasa que forma el 6-fosfogluconato que es un metabolito exclusivo de esta ruta y por eso da nombre
a la misma.
La tercera enzima y última de esta fase es la 6-fosfogluconato deshidrogenasa que forma la ribulosa5P.
> Balance de la fase oxidativa.
Glucosa6P + 2NADP+ + H2O  Ribulosa5P + 2NADPH + 2H+ + CO2

> Fase no oxidativa.

Comprende pasos que convierten pentosas fosfato en glucosa6P, la cual inicia el ciclo de nuevo. En esta rama existen 4 tipos de reacciones:
Fosfopentosa isomerasa: convierte una cetosa (ribulosa) en aldosa (ribosa).
Fosfopentosa epimerasa: epimeriza[1] el C3 (convierte ribulosa en xilulosa).
Transaldolasa: transfiere unidades de 3C.
Transcetolasa: transfiere unidades de 2C.
En esta fase se utilizan 3 ribulosas5P para formar 2 fructosas6P y un gliceroaldehido3P.
Todas las reacciones de la rama no oxidativa pueden ocurrir en sentido contrario ya que son próximas al equilibrio.
> Balance de la fase no oxidativa.
3Ribulosa5P (3x5C)  2Fructosa6P (2x6C) + gliceroaldehido3P (3C)
> Balance global.
3Glucosa6P + 6NADP+ + 3H2O  3Ribulosa5P + 6NADPH + 6H+ + 3CO2

> Relación de la ruta PPP con otros procesos metabólicos.

Procesos que requieren NADPH:
· Síntesis
· Detoxificación

> Regulación de la ruta PPP.

La entrada de glucosa6P en la ruta de las pentosas fosfato (RPF) es controlada por la concentración celular de NADPH que es un fuerte
inhibidor de la G6PDH. Como el NADPH es utilizado en varias rutas metabólicas la inhibición se suaviza y la enzima se acelera para producir
más NADPH.
La síntesis de G6PDH se induce por el incremento de la ratio insulina/glucagón después de una comida con alto contenido en carbohidratos.
Esto es fundamental para la síntesis de ácidos grasos.

> Funcionamiento de la RPF en 4 situaciones metabólicas.

1) Variaciones del flujo de la RPF (supuesto 1): las necesidades de NADPH y ribosa5P son iguales.
La reacción predominante en estas condiciones es la formación de dos NADPH y una ribosa5P a partir de la glucosa 6P utilizando la fase
oxidativa de la vía de las PPP.

2) Variaciones del flujo de la RPF (supuesto 2): la célula necesita más ribosa5P que NADPH.
Las células en división rápida necesitan ribosa5P para la síntesis de nucleótidos precursores del DNA.
La glucosa6P se convierte en F6P y G3P por la glucólisis y estos dos intermediarios se convierten en ribosa5P por las reacciones de la fase no
oxidativa.

3) Variaciones del flujo de la RPF (supuesto 3): se requiere mucho más NADPH que ribosa5P.
El tejido adiposo requiere un elevado nivel de NADPH para la síntesis de ácidos grasos. La glucosa6P se oxida completamente a CO2
generando NADPH.
Se emplea la gluconeogénesis para que vuelva a repetirse la fase oxidativa.

4) Variaciones del flujo de la RPF (supuesto 4): se requiere NADPH y ATP pero no se necesita ribosa5P.
G6P se convierte en ribulosa5P que se convierte en F6P y G3P (fase no oxidativa) que siguen a la glucólisis hasta piruvato en lugar de revertir
a G6P. Se generan simultáneamente ATP, NADPH y 5/6 C de la glucosa6P aparecen en el piruvato.

> El glutatión.
Es un tripéptido formado por glutamato, cisteína y glicina que combate el estrés oxidativo que se produce en las células al combatir los ROS
por lo que es muy importante en el estrés oxidativo mitocondrial. Es muy importante en los glóbulos rojos. Existe en dos formas:
- GSH: reducido
- GSSH: oxidado
Cuando se forman ROS como H2O2 son eliminados por la glutatión peroxidasa. El GSH cede su H al H2O2 resultando GSSH y dos moléculas de
agua. El glutatión reductasa pasa GSSH a GSH con aporte de NADPH y para regenerar el NADPH se emplea la ruta de las pentosas fosfato.

> Deficiencia en G6PDH o G6PD.

La deficiencia en G6PDH es el defecto enzimático hereditario más común en nuestra especie. Se calcula que está presente en más de 400
millones de personas en todo el mundo. Es un desorden genético ligado al cromosoma X que provoca una anemia hemolítica (glóbulos
rojos se destruyen) como respuesta a una infección o al consumo de determinados alimentos (habas) o medicamentos que generan ROS y
producen daño celular en los hematíes.
Las moléculas de Hb no pueden permanecer en estado reducido y se entrelazan unas con otras formando corpúsculos de Heinz en las
membranas lesionadas se deforman y la célula acaba lisiándose. Primaquina (fármaco antipalúdico) & divicina (compuesto de las habas).
¿Por qué la deficiencia en G6PD afecta especialmente a los glóbulos rojos?
Los glóbulos rojos tienen mitocondrias por lo que la única fuente de G6PDH es la ruta de las PPP, las que tienen mitocondrias son el sistema
de la reacción de la nicotinamida nucleótido transhidrogenasa que mantiene el glutatión reducido:
NADH + NADP+  NAD+ + NADPH
El favismo es una enfermedad producida por el consumo de habas. La mayor parte de la población con mutaciones en el gen de la G6PDH
es asintomática hasta que come habas o sustancias antipalúdicas porque tienen una sustancia que se llama divacina y provoca la formación
de ROS e la incapacidad de reducir el GSSH a GSH.

> Malaria & deficiencia en G6PDH.

El paludismo o malaria es producida por Plasmodium falciparum y tiene una fase del ciclo en los glóbulos rojos. Este plasmodio es sensible
al estrés oxidativo y requiere GSH en su ciclo. Esto explica por qué hay una frecuencia tan elevada del gen de la G6PDH mutado en ciertas
poblaciones en dónde la malaria es endémica. El mosquito vector de la enfermedad muere en el norte.

[1] Epímero: estereoisómero del que cambia la configuración de 1C asimétrico.

Tema 10. Metabolismo del glucógeno y otros polisacáridos.

Tema 10: Metabolismo del glucógeno y otros polisacáridos.

> Estructura del glucógeno.

El glucógeno es un polisacárido de reserva animal formado por uniones de glucosa α(1,4) con ramificaciones α(1,6). Es una molécula muy
ramificada para permitir una rápida movilización de la glucosa.
Existe en el hígado y en el músculo y la diferencia entre ambos está en su uso:
- en el hígado se emplea para generar glucosa que es liberada a la sangre
- en el músculo se emplea para generar glucosa que es consumida localmente
> Digestión del glucógeno.
La digestión del glucógeno es llevada a cabo por las amilasas. Como estas no pueden digerir los enlaces α(1,6) , cuando llega a estos puntos
actúa la enzima desramificante que convierte las ramificaciones en polisacáridos lineales de glucosa. Tiene por tanto una actividad
α(1,6)glicosidasa.

> Metabolismo del glucógeno.

> Glucogenolisis.
El glucógeno se degrada gracias a 3 enzimas: glucógeno fosforilasa, enzima desramificante, la cual produce G1P que se transforma en G6P
por la fosfoglucomutasa (PGM).
La enzima desramificante es bifuncional con 2 actividades:
Transferasa: traslada un bloque de 3 residuos de una rama a otra.
α-1,6-glucosidasa: hidroliza el enlace α1,6 y vuelve a ser sustrato de glucógeno fosforilasa

La primera reacción es catalizada por la glucógeno fosforilasa que rompe enlaces α1,4 a partir de los extremos no reductores del glucógeno.
Libera unidades de G1P hasta el punto en el que la enzima no puede continuar (a 4 restos de la ramificación). Aquí actúa la enzima
desramificante (bifuncional) que transfiere 3 glucosas a una cadena lineal y libera el cuarto residuo (α1,6 glucosidasa).
La reacción que convierte la G1P en G6P es catalizada por la fosfoglucomutasa y es una reacción próxima al equilibrio. En el hígado esta
G6P pasa a ser glucose por la G6Pasa en la luz del retículo. Estaa glucose sale a la sangre y una parte puede ir a la RPF mientras que en el
músculo dará piruvato.

> Destino de la G6P.

La G6P procedente del glucógeno puede:

1. Utilizarse como combustible para el metabolismo aerobio o anaerobio como sucede, por ejemplo, en el músculo.
2. Convertirse en glucosa libre en el hígado y seguidamente liberarse a la sangre.
3. Procesarse por la vía de las pentosas fosfato para producir NADPH o ribosa en diversos tejidos.
> Glucogenosíntesis o glucógenogénesis.
En la síntesis de glucógeno la glucosa se transporta unida a UDP en una reacción catalizada por la UDP-glucosa pirofosfatasa:
UDP + G1P  PPi + UDP-glucosa
Esta reacción está desplazada hacia la derecha porque el PPi se hidroliza muy rápido a dos fosfatos.
En la síntesis de glucógeno actúan la glucógeno sintasa que es la que libera unidades de glucosa, y también es necesaria la enzima
ramificante.
La glucogenina es una proteina dimérica con actividad glucosiltransferasa con capacidad de fabricar el cebador para la síntesis de glucógeno.
> Coste de la incorporación de 1G6P al glucógeno: balance.
Suma: G6P + ATP + Glucógenon + H2O  Glucógenon+1 + ADP + 2Pi
ENTRADAS SALIDAS
G6P UDP-G G1P UDP
G1P Glucógenon UDP-G Glucógenon+1
UTP UDP PPi UTP
PPi ATP 2Pi ADP
 H2O

Se gasta un ATP para incorporar una G6P y se obtienen 31 ATP en su degradación completa a CO 2 y H2O lo que supone una gran eficiencia
de almacenamiento de glucógeno.
> Regulación del metabolismo del glucógeno.
Las enzimas reguladoras son la glucógeno fosforilasa (GF) y la glucógeno sintasa (GS). La glucogenogénesis y la glucogenolisis están
reguladas coordinadamente.
¡RECUERDA! Formación del AMPC
La hormona interactúa con el receptor de la familia 7TM el cual está unido a una proteína G que une GTP o GDP. Produce un
intercambio de GDP por GTP. Esta proteína G interactúa con la enzima adenilatociclasa la cual convierte el ATP en AMPc que
activa la PKA (proteína kinasa A). Los estímulos duran poco y una de las formas de eliminar el estímulo es la destrucción del
AMPc por la poliesterasa.
Hay tres niveles de regulación:
Regulación alostérica a través de efectores alostéricos que reflejan el estado energético de la célula.
Activador: AMP
Inhibidor: ATP y G6P
Regulación por conversión molecular covalente.
Regulación hormonal en respuesta a necesidades fisiológicas (ayuno o estrés/ejercicio).
Glucagón, adrenalina, insulina
> Glucógeno fosforilasa (GF).
Regulación alostérica GF.
La glucógeno fosforilasa (GF) se comporta acorde al modelo concertado de MWC de interacciones alostéricas:
estado R (activado)  estado T (inactivado)
Modelo de MWC (Monod, Wyman & Changeux).
La alostería (de griego allos: otro y stereós: forma) es un modo de regulación de las enzimas por el que la unión de una
molécula en una ubicación (sitio alostérico) modifica las condiciones de unión de otra molécula, en otra ubicación distante
(sitio catalítico) de la enzima.
La unión de la molecula induce un cambio de conformación espacial de la proteína enzimática, de tal modo que se modifica
la ubicación del enlace de por lo menos uno de los reactivos implicados en el proceso de catálisis. En el modelo de MWC las
enzimas alostéricas deben presentar varias propiedades:
̶ Son multiméricas, cada monómero fija una molécula de ligando.
̶ Poseen al menos un eje de simetría.
̶ Existen bajo dos conformaciones diferentes: una llamada T (tensa), que por convenio designa la forma de menor afinidad por
el sustrato, y la otra R (relajada), con mayor afinidad por elsustrato.
̶ En una misma molécula de proteína, todas las subunidades adoptan la misma configuración, R o T (transición concertada).
Dicho de otro modo, no existe híbrido R/T en el modelo MWC.

La GF existe en 2 formas: GFa (generalmente activa)  GFb (generalmente inactiva)

El paso de GFb a GFa se hace por fosforilación y el contrario por defosforilación. Ambas formas existen en equilibrio entre dos estados. Los
efectores alostéricos alteran el equilibrio entre ambos estados. Reguladores alostéricos:
ATP y G6P inactivan. Son efectores heterotrópicos[1] negativos ya que favorecen el estado T (niveles altos de ATP o G6P indican un estado
energético alto).
AMP activa. Es un efector heterotrópico positivo porque cuando las reservas energéticas son bajas y hay [AMP] se activa la degradación
del glucógeno.
La conversión de la GFb a GFa (forma más activa) está desencadenada por adrenalina o epinefrina (secretada por las glándulas adrenalinas
y actúan en músculos e hígado) y glucagón (secretada por el páncreas y actúa en hígado y adiposo).

Regulación de la GF por conversión molecular covalente:

· Fosforilación: GFK
Estructura: (αβγδ)4
> Subunidad γ: actividad catalítica
> Subunidad α & β: función reguladora (fosforilación)
> Subunidad δ: interviene en la unión de Ca2+ (calmodulina)
Doble control:
Se activa por fosforilación (PKA)
Se activa por un aumento de los niveles de Ca2+.
La GFK alcanza su máxima actividad cuando se activa por fossforilación y unión de Ca2+.

· Defosforilación: PP1 (fosfoproteín fosfatasa)

Después de una comida o del cese de ejercicio, finaliza el estímulo hormonal, no se forma AMPc, inactivación de la proteína G y se degrada
el existente por la fosfodiesterasa y se activa la PP1.
PP1 invierte el efecto de la cascada de fosforilaciones: desactiva glucogenolisis & activa glucogenosintesis.
Durante el ejercicio o el ayuno se debe inhibir la actividad PP1 para que se puedan movilizar las reservas de glucógeno.
> Glucógeno sintasa (GS).
La GS cataliza la reacción: UDP-G + Glucógenon  UDP + Glucógenon+1
Está regulada a tres niveles:

1. Regulación hormonal: PKA a través del AMPc

2. PP1
3. Glucógeno sintasa kinasa 3 (GSK3) influída por la insulina
La insulina estimula la síntesis de glucógeno actuando sobre GSK3 y PP1.
La GS tiene dos formas: GSa (activa)  GSb (inactiva) y el paso de una forma a otra es por fosforilación/defosforilación. La fosforilación la
realiza la GSK3 y la defosforilación la PP1. La GS puede ser fosforilada por al menos 11 kinasas diferentes siendo la principal GSK3.
GSa + 3ATP + GSK3  GSb + 3ADP + PP1

Este ciclo está regulado por insulina, glucagón, epinefrina…

Para que GSK3 fosforile tiene que fosforilarse por la CK2 (caseín kinasa 2) y el aa que se fosforila es la serina. La insulina inactiva a GSK3
promoviendo la síntesis de glucógeno. A la vez actúa sobre la PP1 activándola. El glucagón y la adrenalina tienen el efecto contrario. G6P y
glucosa son reguladores alostéricos de PP1 ya que si en la célula entra mucha glucosa quiere decir que hay mucho sustrato para fabricar
glucógeno lo que ayuda a la glucogenogénesis.
La insulina es una hormona proteica que no entra en la célula. Su receptor tiene actividad tirosín kinasa en su parte citoplasmática: fosforila
restos de tirosina. Fosforila los IRS (Sustratos Receptores de Insulina) que activan las PK que fosforilan a la GSK3 que defosforila la GS.
La PK se llama PI-3K y convierte el PIP2 en PIP3 (fosfatidil inositol fosfato) que es el segundo mensajero que activa a la PDK1 que activa la PKB
que fosforila la GSK3.

> Metabolismo del glucógeno: respuesta al ayuno y/o ejercicio.

En ayuno el glucógeno estimula la glucogenolisis hepática cuando hay poca glucosa. Las glucosas que se obtienen del glucógeno son liberadas
a la sangre. En el hígado también se activa la gluconeogénesiss. La adrenalina estimula la degradación de glucógeno en el hígado ante una
situación de estrés.
-El glucagón estimula la glucogenolisis hepática cuando la glucemia es baja.
-La adrenalina estimula la degradación de glucógeno en músculo e hígado ante una situación de estrés.
El glucógeno no puede salir del músculo porque no se puede defosforilar (ciclo de Cori) ya que no existe la G6Pasa.
La PKA también inhibe a la glucógeno sintasa, a la vez que activa la degradación se inhibe la síntesis.

> Enfermedades hereditarias relacionadas con el almacenamiento del glucógeno.

Enfermedad de von Gierke, causada por una deficiencia en G6Pasa, fue la primera demostración de una enfermedad congénita de
deficiencia en un enzima hepático. El hígado está dilatado y presentan hipoglucemia pronunciada entre comidas ya que se moviliza el
glucógeno pero la glucosa no puede salir a la sangre. Esto provoca una elevada [lactato] en sangre. Estos pacientes presentan una mayor
dependencia del metabolismo graso.
Enfermedad de McArdle, es un defecto genético en la enzima glucógeno fosforilasa muscular[2]. Presentan dolor muscular y fatiga en los
primeros minutes de ejercicio ya que no movilizan glucógeno ni glucose para generar ATP en el momento del sprint. Al pasar el tiempo los
músculos se irrigan de sangre por lo que en condiciones aerobias pueden hacer ejercicio de forma normal.
Enfermedad de Pompe, causada por un defecto genético en α-glucosidasa (GAA) que es un enzima lisosómico o maltasa ácida. Captan
glucógeno que en condiciones normales es degradado por la GAA ya que degrada el glucógeno ingerido por los lisosomas. En los enfermos
se acumula glucógeno en los lisosomas, los cuales revientan y matan a la célula por autodigestión. Esto es muy frecuente en tejido cardiaco
y respiratorio. Es una herencia recesiva autosómica. No pueden degradar glucógeno en la vía lisosomal; se está probando una terapia de
reemplazo de la enzima.

[1] Heterotrópico: efecto de un ligando sobre otro distinto. Tienen otros sitios específicos distintos para unir ligandos distintos llamados
moduladores o efectores.
[2] Afecta a la enzima muscular y no a la enzima hepática porque son isozimas.

Tema 11. Fotosíntesis. Transporte electrónico, fotofosforilación oxidativa y ciclo de Calvin.

Tema 11: Fotosíntesis.

Transporte electrónico, fotofosforilación oxidativa y ciclo de Calvin

> Definición.
Es la utilización de la energía luminosa para producir carbohidratos y O2 a partir de CO2 y H2O.
 A) FASE LUMINOSA DE LA FOTOSÍNTESIS.
Las reacciones de la fase luminosa generan NADPH y ATP ricos en energía a expensas de la energía solar. Estos productos se utilizan en las
reacciones de asimilación de carbono, que tienen lugar con luz o en la oscuridad, para reducir CO2 y formar triosas y otros compuestos más
complejos (tales como la glucosa) derivados de las triosas.

Energía luminosa  O2 + NADPH + ATP

> Espectro de radiación electromagnético.

La luz visible es radiación electromagnética de una longitud de onda de entre 400 y 700nm. La energía de un fotón individual (un cuanto de
luz) es mayor en el extremo violeta del espectro que en el rojo; longitudes de onda menores (y de mayor frecuencia) corresponden a una
mayor energía.
Cuando se absorbe un fotón se eleva un e- a un nivel energético superior en la molécula que lo absorbe (cromóforo). Esto sucede según un
proceso de todo o nada; para ser absorbido, el fotón ha de contener una cantidad de energía (un cuanto) que iguale exactamente la energía
de la transición electrónica.
Una molécula que ha absorbido un fotón se encuentra en un estado excitado que, en general, es inestable. Los e- elevados a orbitales de
energía superior habitualmente se vuelven rápidamente a sus orbitales normales de menor energía; la molécula excitada vuelve (decae) al
estado basal estable, liberando el cuanto absorbido en forma de luz o calor o utilizándolo para realizar trabajo químico.
La luz emitida durante el decaimiento de las moléculas excitadas (fluorescencia) es siempre de una longitud de onda superior (menor
energía) que la de la luz absorbida. Un modo alternativo de decaimiento importante en la fotosíntesis implica la transferencia directa de la
energía de excitación de una molécula excitada a una molécula vecina.

> Clorofilas.
Son los principales pigmentos que absorben luz en las membranas de los tilacoides. Son verdes con estructuras policíclicas plantas que se
parecen a la protoporfirina de la hemoglobina excepto en que la posición central está ocupada por Mg2+ en lugar de Fe2+. Todas las clorofilas
tienen una cadena lateral larga de fitol, esterificado a un grupo carboxilo sustituyente del anillo IV.

Los cloroplastos contienen tanto clorofila a como b. Aunque las dos son verdes, sus espectros de absorción son diferentes y se
complementan sus gamas de absorción de la luz en la región visible. La mayoría de las plantas contiene el doble de clorofila a que b. Los
pigmentos de las algas y de las bacterias fotosintéticas contienen clorofilas que sólo difieren ligeramente de los pigmentos de las plantas.

> Centro de reacción fotosintético.

Las clorofilas están invariablemente asociadas a proteínas de unión específicas, formando los complejos de captación de luz (LHC, light-
harvesting complexes), en los que las moléculas de clorofila están en posiciones fijas en relación con ellas mismas, con otros complejos
proteicos y con la membrana.
La energía de los fotones es captada por los pigmentos fotosintéticos (LHC) y migran por las moléculas del complejo sistema hasta alcanzar
el centro de reacción.

> Transferencia de energía por resonancia.

La molécula que ha absorbido un cuanto de luz (fotón) puede volver a su estado original liberando luz (fluorescencia) o calor, o convertirse
en un excitón y transferir energía a otra molécula hasta que el excitón alcanza el centro de reacción de otra clorofila.

> Fase luminosa.

Se transforma energía luminosa en energía química. Se forma ATP, NADPH y O2.
Actúan dos centros de reacción en tándem: el fotosistema II y el fotosistema I.

> Cooperación de PSI y PSII: el esquema en Z.

Tiene dos rutas: cíclica y no cíclica.
Para elevar un electrón se requiere un fotón. Se transfiere un electrón desde el H2O al NADP+ por cada 2 fotones absorbidos.
 Balance del flujo de e- no cíclico: 2H2O + 2NADP+ + 8fotones  O2 + 2NADPH + 2H+
Balance del flujo de e- cíclico: no se produce O2 ni poder reductor, sólo se produce ATP.

> El fotosistema II (PSII).

Transfiere electrones desde el H2O a la plastoquinona (PQ  PQH2) y genera un gradiente protónico. El PSII tiene dos proteínas
transmembrana: D1 y D2.
Reacción global del PSII:
Se encuentra el complejo que tiene la capacidad de romper la molécula de H2O: the oxygen-envolving complex (OEC) or Water Splitting
Enzyme of PSII
Flujo de los electrones a través del PSII: la absorción de la luz induce la trnasferencia electrónica desde el P 680 hacia la plastoquinona
intercambiable por una vía de transferecia de electrones. La carga positiva de P680 queda neutralizada por el flujo electronic desde las
moléculas de agua unidas al centro de manganeso.
Contribución al gradient protónico:
- La reducción de la plastoquinona
- La rotura de la molécula de H2O

El citocromo bf es la conexión entre PSII con PSI. Este complejo cataliza la transferencia de electrones del plastoquinol (QH 2) a la
plastocianina (PC) una proteína del lumen tilacoidal pequeña y soluble que contiene cobre. Reacción global:
PQH2 + 2PC (Cu2+)  PQ + 2PC (Cu+) + 2H+en el lumen tilacoidal
> El fotosistema I (PSI).
El PSI, un complejo transmembrana constituido por 14 cadenas polipeptídicas, múltiples proteínas asociadas y cofactores, cataliza la etapa
final de las reacciones de la fase luminosa.
PC (Cu+) + Fdox  PC (Cu2+) + Fdred
La cooperación entre el PSI y el PSII genera el flujo electrónico desde el H2O al NADP+. Esta vía de flujo electrónico se denomina esquema
en Z de la fotosíntesis ya que el diagrama redox se parece a la letra Z.
La ferredoxina-NADP+ reductasa es una flavoproteína[1] que convierte el NADP+ en NADPH. Aunque la ferredoxina es reducida es un
potente reductor que porta un electrón, en cambio el NADPH es un reductor con dos electrones que se utiliza ampliamente en los
procesos biosintéticos.
Síntesis de NADPH: 2Fdred + 2H+ + NADP+  2Fdox + NADPH + H+
> Síntesis de ATP por fotofosforilación no cíclica.
> Balance global de la fotofosforilación no cíclica.
2H2O + 2NADP+ + 8fotones + 3ATP + 3Pi  O2 + 2NADPH + 2H+ + 3ATP

> El fotosistema I (PSI).

La planta si tiene suficiente poder reductor hace la fotofosforilación cíclica para producir ATP ya que el O2 es residual.

B) FASE OSCURA DE LA FOTOSÍNTESIS. (fijación de CO2 = ciclo de Calvin)

> Definición.
Las reacciones de la fase luminosa transforman la energía de la luz en ATP y poder reductor para la biosíntesis. Las reacciones de la fase
oscura, que forman el ciclo de Calvin, reducen los átomos de carbono totalmente oxidados (CO2) a un estado más reducido (hexosa).
 Además de ATP las reacciones de la fase oscura precisan de poder reductor en forma de NADPH[2].
> Ciclo de Calvin: reducción fotosintética del C
a) Fase 1: fijación del CO2 sobre la ribulosa 1,5-biP
b) Fase 2: reducción del 3-fosfoglicerato
c) Fase 3: regeneración de la ribulosa 1,5-biP
Se fijan 3CO2 para la síntesis neta de una molécula de gliceroaldehido 3P.

a) Fase 1: fijación del CO2 sobre la ribulosa 1,5-biP

La enzima fijadora del CO2 es la rubisco (ribulosa 1,5-biP carboxilasa/oxigenasa).
3-fosfolicerato  1,3-bifosfoglicerato  gliceroaldehido 3P

b) Fase 2: reducción del 3-fosfoglicerato

Empleamos el NADPH de la fase luminosa. El 3-fosfolglicerato que se ha formado en el primer paso se convierte en gliceroaldehido 3P en
dos pasos que son, básicamente, el inverso de los pasos correspondientes de la glucólisis, con una excepción: el cofactor nucleotídico para
la reducción es el NADPH y no el NADH.
El estroma del cloroplasto contiene todos los enzimas glucolíticos con la excepción de la fosfoglicerato mutasa. Los enzimas del estroma son
isozimas citosólicos; ambos catalizan las mismas reacciones pero son el producto de diferentes genes.

Destinos del gliceroaldehido 3P (G3P):

El G3P, además de servir para:
• La producción de energía por oxidación vía glicolisis. (fuente energía)
• Obtención de almidón en el interior del cloroplasto y celulosa en la pared celular.
• Producción de sacarosa en el citosol.
• Regeneración de la ribulosa 1,5-biP.

c) Fase 3: regeneración de la ribulosa 1,5-biP

Los materiales de partida son el gliceroaldehido 3P y la dihidroxiacetonaP. Las actividades catalíticas son:
Transcetolasa
Transaldolasa
Epinerasa
Isomerasa
Fosfatasa
Kinasa

> Estequiometría del Ciclo de Calvin.

“Síntesis de una molécula de Gliceroaldehido 3P (3C)”
Se requieren 3 vueltas del ciclo de Calvin para fijar 2CO2 (3C). Por cada 3 moléculas fijadas de CO2 se produce una molécula de gliceroaldehido
3P. Convertir una molécula de 3-fosfoglicerato en una molécula de gliceroaldehido 3P gasta 1ATP y 1NADPH. Por cada CO2 necesito una
ribulosa-1,5-biP, por lo tanto, necesito 3 ribulosas-1,5biP. Se gastan 3ATP en la regeneración de la ribulosa-1,5biP.
3CO2 + 3H2O + 9ATP + 6NADPH + 6H+  Gliceroaldehido3P + 6Pi + 9ADP + 6NADP+

> Balance de la síntesis de glucosa.

6CO2 + 6H2O + 18ATP + 12NADPH + 12H+  C6H12O6 + 18Pi + 18ADP + 12NADP+
 > Regulación del Ciclo de Calvin.
De dos formas:
La rubisco se activa mediante los cambios en las concentraciones de protones e ion magnesio inducidos por la luz.
Las reacciones de la fase luminosa de la fotosíntesis transfieren electrones desde el interior del tilacoide al estroma y en este proceso se
traspasan protones desde el estroma hacia el interior del tilacoide. Como consecuencia, las concentraciones de NADPH, ferredoxina reducida
y Mg2+ en el estroma son mayores con la luz que en la oscuridad, en tanto que la concentración de H+ es menor en la oscuridad. Cada uno
de estos cambios en las concentraciones colabora en el acoplamiento de las reacciones del ciclo de Calvin con las reacciones de la fase
luminosa.
La luz hace el pH del estroma más alcalino y favorece un aumento en [Mg 2+] en el estroma porque en la fase luminosa se produce un
gradiente protónico. Estos cambios activan la RUBISCO y otras enzimas de la fase oscura armonizando ambas partes.

La tiorredoxina desempeña un papel clave en la regulación del ciclo de Calvin.

Las reacciones debidas a la luz conducen a la transferencia de electrones desde el agua a la ferredoxina y, ocasionalmente, al NADPH. Los
enzimas del ciclo de Calvin están regulados por la ferredoxina reducida y el NADPH. Enzimas activados por la luz mediante tioredoxina que
reduce otros 4enzimas que las activa.
La forma reducida de la tiorredoxina (enzima) activa muchos enzimas biosintéticos al reducir los puentes disulfuro que controlan la actividad
de dichos enzimas y, mediante el mismo mecanismo, inhibe enzimas degradativos.
En los cloroplastos la ferredoxina reduce a la tiorredoxina en una reacción catalizada por la ferredoxina-tiorredoxina reductasa. La actividad
de las reacciones de la fase luminosa y la fase oscura de la fotosíntesis está coordinada mediante la transferencia de electrones entre la
ferredoxina reducida a la tiorredoxina y luego a los componentes enzimáticos que contienen puentes disulfuro reguladores.

> Síntesis de sacarosa y almidón.

La síntesis de sacarosa en el citosol y la síntesis de almidón en el cloroplasto son las rutas principales de recolección del exceso de triosas
fosfato de la fotosíntesis.
La síntesis de sacarosa libera 4moléculas de Pi de las 4triosas fosfato requeridas para producir sacarosa.
Antiporte Pi-triosa-P de la membrana interna del cloroplasto.

[1] Flavoproteína: proteínas que contienen un nucleótido derivado de la vitamina B2: la flavín adenín dinucleótido (FAD) o flavín
mononucleótido (FMN)
[2] La diferencia entre el NADPH y el NADH reside en el grupo foforilo del 2’ hidroxilo de una de las unidades de ribosa pero en biosíntesis
existe una diferencia fundamental: el NADH se oxida en la cadena respiratoria para generar ATP, en tanto que el NADPH sirve como reductor
en los procesos de biosíntesis.

Tema 12. Fotorrespiración. Plantas C4. Ciclo del Glioxilato.

Tema 12: Fotorrespiración.

Plantas C4. Ciclo del Glioxilato.

> Fotorrespiración.
La fotorrespiración (metabolismo del fosfoglicolato) es un proceso mediante el cual las plantas iluminadas consumen oxígeno y desprenden
CO2.
Posiblemente se trate de un mecanismo de protección del aparato fotosintético frente a la fotoxidación en condiciones de alta iluminación,
bajas concentraciones de CO2 y elevadas de O2. En estas condiciones la actividad oxigenasa de la rubisco se hace efectiva (fotorrespiración).
Es la actividad oxigenasa de la rubisco. Es un proceso impulsado por la luz que consume O2 y libera CO2.
> Actividades de la RUBISCO:
CARBOXILASA: sigue el Ciclo de Calvin.
OXIGENASA: produce la fotorrespiración.
Se llama fotorrespiración porque es impulsado por la luz y consume O2 generando CO2. Parece no productivo para la planta.
La Rubisco es una enzima que surgió muy pronto en la evolución, cuando la atmósfera era rica en CO2 y pobre en O2, lo contrario de lo que
ocurre ahora. La enzima no ha sido pues diseñada para operar en las condiciones actuales. La Fotorrespiración llegó a ser importante hace
60 millones de años cuando la concentración de CO2 cayó a los niveles actuales. Se piensa que la versión C4 de la fase oscura surgió como
respuesta evolutiva a la presión ambiental (elevadas concentraciones de O2) hace 30 millones de años o incluso más recientemente (7
millones de años). Desde entonces el enzima, debido quizás a su importancia, ha cambiado muy poco a lo largo del tiempo.
El fosfoglicolato se desfoforila en el cloroplasto y es transportado a los peroxisomas. Es oxidado para generar glioxilato y peróxido de
hidrógeno. El H2O2 (tóxico) se degrada y el glioxilato se amida para producir glicina. La Glicina entra las mitocondrias donde 2 moléculas se
convierten en serina, CO2 ↑ y NH3 ↑. La serina retorna al peroxisoma en donde se transforma en glicerato, que se transporta al cloroplasto
donde es transformado en 3PG con consumo de ATP.
Proceso con pérdidas:
• Se pierde Ribulosa 1,5BP en el ciclo de Calvin
• Se invierte la fijación de CO2: se consume O2 y se libera CO2
• Sólo una parte del carbono vuelve al cloroplasto
• Se gasta ATP
Una (posible) explicación: La fotosíntesis en condiciones de bajo CO2 y mucha luz en donde se consume el CO2 conduciría a la producción de
especies oxigenadas muy reactivas, (O2-) que puede producir daño celular. La fotorrespiración disminuye la concentración de O2 e inhibe las
reacciones luminosas.

> Plantas C4.

Algunas plantas han establecido una ruta fotosintética que ayuda a conservar el CO2 liberado por la fotorrespiración que implica la
incorporación de CO2 a un intermediario de 4 carbonos (oxalacetato). Está presente en varias especies cultivadas (maíz, caña de azúcar) y
en plantas tropicales expuestas a luz intensa y altas temperaturas. Se da en células especializadas expuestas al CO2.
La fosfoenolpiruvato carboxilasa es capaz, en condiciones de alta O2 y baja CO2 de seguir bombeando CO2 hacia las células que hacen la
fotosíntesis (C3). Cuando se da la fotorrespiración el CO2 que se libera puede recuperarse en las células mesófilas circundantes (C4) y
devolverse al ciclo de Calvin. Se consumen 2 ATP por cada CO2 fijado.
Para evitar la fotorrespiración fijan el CO2 en forma de Oxaa sobre fosfoenolpiruvato carboxilato (PEP). Emplean el enzima málico.

> Plantas CAM.

CAM (Crasulácea acid metabolism): adaptación metabólica de las plantas del género Crassulacea (plantas suculentas) a las condiciones de
sequedad y calor. En las plantas CAM los estomas de las hojas están cerrados durante el día, para prevenir la pérdida de agua cuando las
temperaturas son muy elevadas. Por ello el CO2 o puede ser absorbido durante el día, y por tanto ser utilizado en las síntesis de glucosa.
Durante la noche, a temperaturas más bajas los estomas se abren y el CO2 es fijado por la ruta C4 y almacenado como malato en vacuolas.
Durante el día el malato es descarboxilado y el CO2 queda disponible para el ciclo de Calvin.
Tema 13. Biosíntesis de carbohidratos en las células vegetales.

Tema 13: Biosíntesis de carbohidratos en las células vegetales.

> Carbohidratos: almidón y sacarosa.

La almidón sintasa de los cloroplastos y amiloplastos cataliza la adición de residuos de glucosa, donados por la ADP-glucosa, al extremo
reductor de una molécula de almidón mediante unmecanismo de inserción en dos pasos. Un segundo enzima introduce las ramas de la
amilopectina.
La sacarosa se sintetiza en el cisol en dos pasos a partir de UDP-glucosa y fructosa 1P.
La distribución de las triosas fosfato entre la síntesis de sacarosa y la de almidón está regulada por la F23BP (fructosa 2,6biP), un efector
alostérico de los enzimas que determinan el nivel de fructosa 6P. La concentración de F26BP varía inversamente con la velocidad de
fotosíntesis y el F26BP inhibe la síntesis de fructosa 6P, el precursor de la sacarosa.
Tema 14. Metabolismo de lípidos. Digestión y transporte de lípidos en sangre.

Tema 14: Metabolismo de lípidos.

Digestión y transporte de lípidos en sangre.

> Panorámica general.

 > Los ácidos y las sales biliares.
Son moléculas anfipáticas y actúan como detergentes emulsionando los lípidos en el intestino, haciéndolos accesibles a las lipasas.
· Los ácidos biliares derivan del colesterol. Son muy abundantes en la bilis. Los más característicos son el ácido cólico, el quenodesoxicólico
y el litocólico. Con frecuencia, el ácido cólico aparece conjugado con los aa glicina y taurina formando los ácidos taurocólico y glicocólico.
· Las sales biliares son las sales sódicas o potásicas de los ácidos taurocólicos y glicocólicos.
Todas proceden del colesterol, en última instancia del acetil-CoA.
> Quilomicrón.
Un quilomicrón es un agregado lipoproteico que se forma en el epitelio intestinal. La superficie está constituida por una capa de fossfolípidos,
con los grupos de cabeza encarados hacia la fase acuosa. Los TAG secuestrados en el interior. Varias apolipoproteínas que sobresalen de la
superficie actúan como señales para la absorción y metabolismo del contenido de los quilomicrones.

> Vías del transporte de lípidos en sangre.

a) VÍA EXÓGENA DEL TRANSPORTE DE LÍPIDOS EN SANGRE. (lípidos procedentes de la dieta)
Sobre los quilomicrones actúan las lipoproteín lipasas de las paredes de los capilares que hidrolizan y los lípidos son captados por las células.
Músculo  catalizar Adipocito  almacenar
Los remanentes de quilomicrones son retirados por el hígado.
b) VÍA ENDÓGENA DEL TRANSPORTE DE LÍPIDOS EN SANGRE.

> Lipoproteínas.
Cada lipoproteína tiene una función específica que depende de tres factores:
Lugar de síntesis
Composición lipídica
Contenido en apoproteínas
Varían en función de: %contenido lípidos y %contenido apoproteínas
 > Estructura de la LDL.
Éster de colesterol
Fosfolípido
Colesterol no esterificado
Apoproteínas B-100
El más hidrofóbico es el éster de colesterol porque tiene el OH estefificado con 1 ácido graso y en el centro están los más hidrofóbicos.

> Funciones del colesterol.

1. Precursor de algunas vitaminas liposolubles.
2. Componente estructural de la membrana plasmática.
3. Precursor de las hormonas esteroideas.
4. Precursor de las sales biliares.

> Acciones para reducir los niveles de colesterol.

1) Inhibir la circulación enterohepática (secuestradores de ácidos biliares: resinas con carga +)
En el hígado se fabrican las sales biliares a partir del colesterol  almacén en vesícula (prescindible)  intestino.
Cuando acaba la digestión, las sales biliares vuelven al hígado porque se reciclan (por eso “entero”) y el 5% se elimina con las heces. Si las
secuestran y se pierden por las heces el hígado debe fabricar más gastando colesterol para ello, concretamente LDL.

2) Inhibir la absorción del colesterol (bloqueo del transporte de membrana)

Hay ciertos productos que tienen esteroles vegetales (danacol, benecol…) que impiden la absorción del colesterol proveniente de la dieta.

3) Inhibir la síntesis endógena del colesterol (estatinas: inhiben la Hmg-CoA reductasa)

Tema 15. Degradación de ácidos grasos. La β-oxidación. Metabolismo de cuerpos cetónicos.

Tema 15: Degradación de ácidos grasos. La β-oxidación.

Metabolismo de cuerpos cetónicos.

> Localización intracelular de las principales rutas del metabolismo de lípidos.

> Orígenes AG.

 Exógeno:
TAG presentes en alimentos. Degradación en el intestino.
Endógeno:
TAG presentes en el tejido adiposo (reserva).
Síntesis a partir de Acetil-CoA

> Movilización de los TAG del tejido adiposo.

Se regula con dos hormonas: adrenalina (estrés) & glucagón (ayuno).
Perilipinas: familia de proteínas que recubren las gotículas lipídicas impidiendo la miovilización inoportuna de las reservas de TAG, es decir,
que no se degradan los TAG cuando no es necesario.
> Fases de la oxidación completa de AG.

1. β-oxidación: AG  Acetil-CoA
2. Ciclo de Krebs
3. Cadena respiratoria

> β-oxidación.
1) Activación de los AG: formación del acetil-CoA graso. Tiene lugar en el citosol. La enzima es la acetil-CoA sintetasa o AG tioquinasa. La
situación de casi equilibrio desaparece por la hidrólisis del PPi:
2) Transporte al interior de la mitocondria.
Con carnitina (AG de cadena larga)
Sin transportador (AG cadena corta ≤ 12C)
3) Reacciones de la β-oxidación. Formación del Acetil-CoA o propionil-CoA.
> Balance.
R-COO- + CoA + ATP  RCO~SCoA + AMP + 2Pi
La activación de un AG consume 2 enlaces fosfato ricos en energía: cuando se rompe el ATP y cuando se rompe el PPi.
> Transporte interior mitocondrial por carnitina.
Enzima: carnitina acetil transferasa I (mme) y la II (isozimas)
Acetil-CoA graso citosólico  matriz mitocondrial
El proceso de entrada del acil-CoA a la mitocondria es el paso limitante en la β-oxidación y es un punto de control. La carnitina es un alcohol
zwitteriónico[1] y le llaman la molécula devora-grasa.

> Degradación mitocondrial de los AG: β-oxidación.

Se llama β-oxidación porque se rompe en el C3 (β). También se llama hélice de Lynen.

 AG saturados[2] (cadena par e impar).

 AG insaturados (mono y poliinsaturados)
En la β-oxidación ocurre la eliminación oxidativa de unidades sucesivas de 2C en forma de acetil-CoA, generándose NADH & FADH2. Ocurre
en 4 pasos generales que se repiten:
1.- Oxidación: acetil-CoA deshidrogenasa
2.- Hidratación: enoil-CoA hidratasa
3.- Oxidación: L-3-hidroxiacil-CoA deshidrogenasa
4.- Tiolisis: β-cetoacil-CoA tiolasa o acil-CoA acetiltransferasa o β-cetotiolasa

> β-oxidación: AG saturado / cadena par.

Acaban en la cadena respiratoria porque transfieren los electrones al ETF (electron trasnferente flavoproteína) que reduce al QH2 que cede
electrones al complejo III.
Balance de la oxidación del Palmitoil CoA (16C  7vueltas):
1Acetil-CoA  10ATP
1NADH  2.5ATP 108ATP
1FADH2  1.5ATP
Pero la activación de palmitato a palmitoil-CoA consume dos enlaces ricos en energía equivalentes a 2ATP.
Balance final de la oxidación completa: 106ATP

> β-oxidación: AG saturado / cadena impar.

AG de cadena impar  penúltima vuelta 5AG 
2C (Acetil-CoA) + 3C (Propionil-CoA)
El propionil-CoA sufre una carboxilación para acabar dando succinil-CoA que ingresa en el ciclo de Krebs.

> β-oxidación: AG insaturados.

Se necesitan hasta 2 enzimas adicionales (isomerasa y reductasa) por la presencia de los dobles enlaces cis.
Monoinsaturado: enoil-CoA isomerasa (conversión de un enlace cis en trans)
Poliinsaturado: 2,4-dienoil-CoA reductasa + enoil-CoA isomerasa
El compuesto cis-Δº acil-CoA no es sustrato de la enoil-CoA hidratasa y por ello es necesaria una nueva enzima: la enoil-CoA isomerasa que
convierte el enlace cis en trans. Si hay más de un doble enlace para reducir el doble enlace hace falta la otra nzima.

> β-oxidación en peroxisomas.

Difiere de la mitocondrial en la deshidrogenación inicial. En plantas los peroxisomas son el lugar principal donde ocurre la β-oxidación
mitocondrial. En animales sirve para acortar los AG de cadena muy larga (>22C) para facilitar su posterior β-oxidación mitocondrial.
Acil-CoA + O2  Trans-Δº’-enoil-CoA + H2O2
Diferencias:
- El peróxido de H se convierte en H2O y O2 por lo que no hay transferencia de ATP.
- Transporte a la mitocondria para la respiración y el ciclo de Krebs debido a que son orgánulos diferentes.

> α-oxidación de AG.

Es la oxidación de AG ramificados y ocurre en peroxisomas. La oxidación inicial se produce en un C α. La alteración de esta ruta produce la
enfermedad de Retsum.

> ω-oxidación de AG.

Ocurre en el RER de células animales. Comienza en el Cω. Tiene importancia cuando la β-oxidación está afectada.

> Cuerpos cetónicos.

No son AG y se fabrican en el hígado. Se producen a partir del Acetil-CoA de la degradación de AG.
Son tres: acetona, acetoacetato y D-β-hidroxibutirato.
Los dos últimos sirven como moléculas de combustible en tejidos extrahepáticos a través de la oxidación a acetil-CoA y entrada en el ciclo
de Krebs.
La sobreproducción de cuerpos cetónicos en la diabetes incontrolada o en la reducción drástica de calorías puede provocar acidosis o cetosis.
Cetogénesis. (síntesis)
Ocurre en las mitocondrias hepáticas. El hígado los fabrica pero no los puede consumir.
Cuando se produce una acumulación de acetil-CoA (inanición o diabetes) la tiolasa cataliza la condensación de dos moléculas de acetil-CoA
a acetoacetil-CoA, precursor de los tres cuerpos cetónicos por deshidrogenación. El compuesto de 6átomos de C β-hidroxi-β-metilglutaril-
CoA (HMG-CoA) es también un intermediario de la biosíntesis de esteroles, pero la enzima que forma HMG-CoA es citosólica.
Cetolisis. (degradación)

¿Por qué se forman los cuerpos cetónicos?

[Oxaa] debido a la ausencia de glucosa + gluconeogénesis (estamos empleando el Oxaa para fabricar glucosa) + [Acetil-CoA]
debido a [AG] debido a lípidos = desborde del ciclo de krebs (porque no hay Oxaa suficiente)  CETOGÉNESIS

> Ayuno & diabetes.

La cetosis aumenta en el ayuno: [KBsangre]
Cetosis diabética: gran producción de KB porque no se puede usar la glucosa  pHsangre  lesiona tejidos  coma diabético

[1] Es un alcohol zwitterónico porque tiene un átomo con carga + y otro con carga – (COO-).
[2] Sin enlaces dobles o triples.

Tema 16. Síntesis de ácidos grasos y derivados. Regulación del metabolismo de ácidos grasos.

Tema 16: Síntesis de ácidos grasos y derivados.

Regulación del metabolismo de ácidos grasos.

> Comparación entre síntesis y degradación de AG.

SÍNTESIS DEGRADACIÓN
Citosol Mitocondrias
Intermediarios unidos a ACP (Acyl Carrier Protein) Intermediarios unidos a CoA
Enzimas unidos formando el complejo Enzimas sueltos
> Biosíntesis de AG.
 ¿Cuáles son las fuentes de Acetil-CoA y NADPH para la biosíntesis de AG?
Fuentes de NADPH en una célula: RPF, enzima málico de la lanzadera, fase luminosa de la fotosíntesis.
Fuentes de Acetil-CoA en una célula: degradación de azúcares, degradación AG, …
> Transporte del acetil-CoA al citosol: la lanzadera citrato.
El acetil-CoA sale “camuflado” en forma de citrato y en el citosol sufre la acción de la ATP citrato liasa.

> Síntesis de AG: formación del maloil-CoA.

Reacción de no-equilibrio: principal punto de control de la ruta de biosíntesis de AG.
La reacción que cataliza esta enzima tiene lugar en dos etapas:
- Actividad biotina carboxilasa.
- Actividad transcarboxilasa.
Para que esté activa debe estar polimerizada.
> Complejo AGsintasa.
En todos los organismos las cadenas carbonadas largas de los AG se forman mediante una secuencia repetida de reacciones con cuatro
etapas, catalizadas por la ácido grado sintasa. Es diferente dependiendo del organismo:
FAS I (vertebrados y hongos): consta de 1 cadena polipeptídica funcional.
FAS II (plantas y bacterias): consta de 2 cadenas polipetídicas funcionales.
La AGsintasa (FAS) tipo 1:
KS: β-cetoacil-ACP sintasa; MAT: malonil/acetil-CoA-ACP transferasa; DH: β-hidroxiacil-ACP
deshidratasa; ER: enoil-ACP reductasa; KR: β-cetoacil-ACP reductasa; TE:
tioesterasa; ACP: Acyl Carrier Protein (¡no enzima!)
Los intermediarios en la síntesis de AG están unidos a una proteína transportadora de grupos acilos. Tiene el CoA también.
> Biosíntesis de AG.
1 y 2 Formación de acetil-ACP y malonil-ACP. Lo cataliza la enzima MAT que forma parte del complejo de la AG sintasa.
ELONGACIÓN
3 Condensación. Catalizada por KS. Se forma acetoacetilo-ACP.
4 Reducción. El agente reductor es el NADPH. Catalizada por KR.
5 Deshidratación. Catalizada por DH.
6 Reducción.

> Balance de síntesis de palmitato.

Acetil-CoA + 7Malonil-CoA + 14NADPH + 14H+  Palmitato + 14NADP+ + 7CO2 + 8CoA~SH + 6H2O
7Acetil-CoA + 7CO2 + 7ATP  7Malonil-CoA + 7ADP + 7Pi
Final:
8Acetil-CoA + 7ATP + 14NADPH + 14H+  1Palmitato (16C) + 14NADP+ + 8CoA~SH + 6H2O + 7ADP + 7Pi

> Triclosán: potente agente antibacteriano

Inhibe la enoil-ACP reductasa y por tanto interfiere en el metabolismo lipídico. Uso con moderación porque se seleccionarían las bacterias
resistentes.
> Regulación alostérica/hormonal/conversión molecular covalente (CMC) de la síntesis de AG: la acetil-CoA carboxilasa.
Hormonal: glucagón & adrenalina & insulina.
Conversión molecular covalente (CMC): fosforilación / defosforilación
Alostérico: citrato & malonil-CoA & palmitato-CoA
El principal punto de regulación es la acetil-CoA carboxilasa que cataliza la formación de malonil-CoA. La regulación se hace a tres niveles:
alostérico, conversión molecular covalente (CMC) y hormonal.
[Acetil-CoA] & [ATP]mitocondrial

Transporte del citrato al citosol (acetil-CoA)

El citrato citosólico activa la acetil-CoA carboxilasa y promueve el acetil-CoA para la síntesis de AG
El acetil-CoA es un feedback porque inhibe la ruta. Si hay mucho citrato en el citosol (lanzadera citrato) es indicador de que hay mucho
acetil-CoA por eso el citrato activa la ruta. La insulina es una hormona anabolizante que por lo general favorece la biosíntesis mientras que
glucagón&adrenalina la inhiben.
La acetil-CoA carboxilasas existe en dos formas diferentes: fosforilada o inactiva / desfosforilada o activa. La forma más activa es la enzima
polimerizada (visible al ME).
La fosforilación la hace una kinasa dependiente de AMP[1], la AMPK, que es activada por glucagón y adrenalina.
La desfosforilación la hace una proteínfosfatasa (proteínfosfatasa 2A) que es activada por la insulina.
Poca energía  AMP promovemos procesos catabólicos
Mucha energía  AMP  promovemos procesos anabólicos
El citrato facilita la polimerización. El [palmatoil-CoA] inhibe la síntesis de AG. La coordinación de la síntesis y degradación de AG evitando
que los AG entren en la mitocondria tiene lugar mediante el malonil-CoA que inhibe a la CAT (carnitine acetil transferasa) y a la β-oxidación.
La CAT impide la entrada del acetil-CoA en la mitocondria, por eso inhibe la β-oxidación. Por eso si se lleva a cabo la biosíntesis de AG, habrá
una concentración de malonil-CoA suficiente para inhibir la β-oxidación.

> Síntesis de AG: elongación e insaturación.

Mediante enzimas situadas en la mitocondria y en la membrana del REL se cataliza la elongación (donante de C es el malonil-CoA) e
insaturación de AG: elongasas y desaturasas.
Nuestra especie no puede elongar más de 9C pero el linoleato y otro si. AG esenciales que fabrican las plantas. A partir del linoleico
fabricamos el ácido araquidónico que es un AG poliinsaturado.
Los AG que no podemos sintetizar son los llamados esenciales y tienen que ser ingeridos por la dieta. Estos a su vez son necesarios para la
síntesis de otros. Por ejemplo el ácido araquidónico es precursor de leucotrienos, prostaglandinas, tromboxanos, prostaciclinas… Son
eicosanoides (de 20C) y hormonas locales que regulan el dolor, inflamación, flujo sanguíneo...
Aspirina e ibuprofeno inhiben la ciclooxigenasa (COX) o prostaglandinsintasa y por lo tanto la síntesis de prostaglandinas.

[1] No confundir con la PK1 que es dependiente de AMP cíclico.

Tema 17. Metabolismo de triacilglicéridos y su regulación.

Tema 17: Metabolismo de triacilglicéridos (TAG) y su regulación.

> Vía exógena de transporte de lípidos en sangre: degradación en la mucosa intestinal.
Los ácidos grasos de los TAG proporcionan una fracción importante de la energía oxidativa en los animales. Los TAG ingeridos con la dieta
se emulsionan en el intestino delgado con las sales biliares, son hidrolizados por las lipasas pancreáticas intestinales, absorbidos por las
células epiteliales del intestino, reconvertidos en TAG y a continuación incorporados a los quilomicrones por combinación con
apolipoproteínas específicas (“resíntesis”). Los quilomicrones suministran TAG a los tejidos, donde la lipoproteína lipasa libera los ácidos
grasos para que entren en las células.
AG se degradan en el intestino  se absorben  se resintetizan  TAG + otros lípidos +prots  quilomicrones  linfa  sangre  tejidos

> Degradación TAG en tejido adiposo.

Los TAG almacenados en el tejido adiposo se movilizan por acción de una triacilglicerol lipasa sensible a hormonas dando lugar a glicerol y
AG.
El glicerol hepático puede seguir dos vías principales:
- Integrarse en la glucólisis y formar piruvato (glucólisis)
- Integrarse en la RPF y formar glucosa.
- También se puede utilizar para resintetizar TAG.
Los AG liberados se unen a la albúmina sérica y son transportados a través de la sangre al corazón, músculo esquelético y otros tejidos que
utilizan los AG como combustible, es decir, se oxidan en otros tejidos que no es el hígado. Una vez en el interior de las células, los AG se
activan en la membrana mitocondrial externa por conversión a tioésteres acil graso-CoA. Los acil graso-CoA que se han de oxidar entran en
la mitocondria en tres pasos por la vía de la lanzadera de carnitina.
> PKA & TAGlipasa & Perilipina.
La movilización de los TAG se inicia por la acción del glucagón y la adrenalina. La proteín kinasa A fosforila a triacilglicerol lipasa o lipasa
sensible a hormonas activándola. El TAG se transforma en diacilglicerol que pasa a la sangre.
La perilipina es una proteína fundamental en la degradación de TAG. En el adipocito los granos de TAG están rodeados de perilipina, evitando
que la lipasa los degrade pero cuando llega la señal hormonal la proteínkinasa A también fosforila la perilipina permitiendo el acceso de la
lipasa a las gotas de grasa.
> Biosíntesis de TAG y lípidos de membrana.
Para sintetizar los TAG y los PL (fosfolípidos) se parte de un precursor común: el fosfatidato. Este se sintetiza a partir del glicerol3P que se
esterifica con un AG activado (en el carbono 1) dando lugar al lisofosfatidato que se esterifica en el carbono 2 con otro AG activado formando
un diacilglicerol llamado fosfatidato. La enzima que cataliza las esterificaciones es la glicerolfosfato aciltransferasa.
Glicerol3P + AGactivado (en C1)  lisofosfatidato + AGactivado (en C2)  fosfatidato (diacilglicérido)
> Gliceroneogénesis.

Glyceroneogenesis is de novo synthesis of glyceride-glycerol from precursors other than glycerol or glucose. Génesis de glycerol 3P a partir
de piruvato.
> Síntesis de TAG.
El fosfatidato está formado por dos ésteres de AG por lo que para formar TAG hay que retirar el grupo fosfato y esterificarse una vez más.
El fosfato es retirado por la ácido fosfatídico fosfatasa y después una aciltransferasa añade otro AG.
En mamíferos, durante la inanición, un total del 75% de los TAG se degradan y se vuelven a sintetizar, es el llamado ciclo del triacilglicerol
en el que interviene el tejido adiposo, el hepático y el sanguíneo. Es para que el hígado ahorre.
En el tejido adiposo puede tener lugar una gliceroneogénesis o gluconeogénesis parcial desde piruvato a glicerol3P, necesario para la síntesis
de TAG.

> Síntesis de fosfolípidos.

Un fosfolípido es una molécula formada por glicerol, un AG y un grupo cabeza (etanolamina, colina, serina…).
Tienen como precursor el fosfatidato. La molécula precursora de todos los fosfolípidos (cardiolipina, fosfatidil glicerol, fosfatidilserina…) es
el CDP-diacilglicerol que se forma a partir del fosfatidato cuando reacciona con CTP.
> Síntesis de TAG: ingesta.
Al comer azúcar se produce una descarga de insulina (hormona anabolizante) que activa la conversión de azúcar en grasa.

Tema 18. Metabolismo de lípidos complejos. Esfingolípidos, terpenos y esteroides.

Tema 18: Metabolismo de lípidos complejos.

Esfingolípidos, terpenos y esteroides.

> Clasificación.

> Glicerollípidos y esfingolípidos.

> Síntesis de esfingolípidos.

Se sintetizan a partir de palmitoil-CoA y serina que forman la unidad básica o ceramida. A partir de la ceramida se forman los gangliósidos,
cerebrósidos, globósidos…
Existen muchas enfermedades ligadas a defectos en la degradación de esfingolípidos, como la enfermedad de Tay-Sachs que supone una
incapacidad para degradar gangliósidos debido a un defecto en N-acetil.hexosaminidasa por lo que los lisosomas de las neuronas se inchan.

Tema 19. Metabolismo del colesterol.

Tema 19: Metabolismo del colesterol.

 > Estructura.

Fuentes de colesterol:
Vía exógena: absorción intestinal del colesterol y AG de la dieta.
Vía endógena: síntesis a partir de su precursor el acetato en su forma activada (acetil-CoA).
El colesterol es un esteroide.

> Funciones.
Además de aportar dureza a las membranas celulares, da lugar a las hormonas estereoideas, sales biliares y vitamina D. Por lo tanto, desde
el punto de vista bioquímico no es una grasa.
- Componente membranas celulares
- Precursor de: hormonas esteroideas, sales biliares, vitamina D.

> Bioquímica popular.

El colesterol no es una grasa, es un esteroide.
Hacer ejercicio no reduce el colesterol porque no es una molécula combustible. Incrementa las HDL que retiran el colesterol de la sangre y
en el hígado es convertido en sales biliares que se eliminan del cuerpo.
No hay tipos de colesterol (bueno&malo) sino que se refiere a la lipoproteína en la que está el colesterol.

> Síntesis de colesterol.

En 3 etapas:
Resumen de la biosíntesis del colesterol:
Acetato  Intermediariso isoprenoides (Mevalonato  Isopreno activado)  Escualeno  Colesterol

1. Síntesis del isopentenilpirofosfato (unidad de isopreno activado) a partir de Acetil-CoA. Citosol.

Se condensan 2Acetil-CoA para formar acetoacetil-CoA gracias a la enzima tiolasa. El acetoacetil-CoA se condensa con Acetil-CoA y formar
HMG-CoA mediante la HMG-CoA sintasa.
El HMG-CoA puede seguir dos caminos:
Formación de cuerpos cetónicos por la HMG-CoA liasa.
Formación de mevalonato por la HMG-CoA reductasa usando NADPH. Esta reacción es el principal punto de control de la síntesis de
colesterol. Muchos tratamientos para reducir el colesterol inciden en esta enzima.
 El mevalonato se convierte en fosfomevalonato al cual se le añade otro grupo fosfato obteniendo pirofosfomevalonato que se convierte en
iPPP (isopentil pirofosfato) que es precursor de sustancias muy importantes en los seres vivos como el caucho, la cadena fitol de la clorofila,
ubiquinona, vitaminas A, E y K, carotenoides, hormona juvenil de los insectos…
En la síntesis de isopentenilpirofosfato se consumen 3ATP y se libera 1CO2. Esta molécula se isomeriza y da isopentilpirfosfato.

2. Condensación de 6moléculas de isopentilpirofosfato para formar el escualeno. RE.

Se forma una molécula de 30 carbonos que se llama escualeno. La enzima es la escualeno sintasa.

3. El esculaeno se cicla y se convierte en colesterol. RE.

Son muchas reacciones.
> Éster de colesterol.
Muchas veces el colesterol se esterifica con un AG dando lugar a ésteres de colesterol que son las moléculas más hidrofóbicas que existen.

> Regulación de la síntesis de colesterol.

La regulación de la biosíntesis del colesterol equilibra la síntesis con la ingestión. El glucagón promueve la fosforilación (inactivación) de la
HMG-CoA reductasa; la insulina promueve la desfosforilación (activación). X representa metabolitos sin identificar del colesterol que
estimulan la proteólisis de la HMG-CoA reductasa.

La regulación se realiza a nivel de la HMG-CoA reductasa:

1) A nivel de la transcripción del gen de la HMG-CoA reductasa: el factor SREBP es el que controla su transcripción.
El SREBP (sterol regulatory element binding protein) tiene 3 dominios (uno transmembrana en el RE, un de unión con el DNA que activa la
transcripción y un dominio regulado unido a la proteína SCAP (SREBP cleavage activating protein).
Cuando bajan los niveles de colesterol intracelulares, SCAP y SREBP migran en vesículas al aparato de Golgi, allí actúan sobre ellos las
proteasas Su activación libera el dominio de unión al DNA que va al núcleo donde se une al SRE y activa la transcripción del gen de la HMG-
CoA reductasa.
El SREBP está en el RE para que no se sintetice continuamente colesterol.
 El viaje SREBP:
esteroles: secuestro del TrFα; SREBP-SCAP-INSIG en RE.
esteroles: SREBP-SCAP migra al AG y SREBP migra al núcleo
2) A nivel de la traducción.
La velocidad de traducción se inhibe por metabolitos derivados del mevalonato y por colesterol de la dieta. Si tenemos colesterol de la dieta
no necesitamos sintetizarlo.
3) A nivel de la degradación.
La elevación de los niveles de colesterol provoca que la HMG-CoA reductasa sea más susceptible a la proteólisis.
4)A nivel de la actividad enzimática: alostérica, conversión molecular covalente (fosfo/defosforilación), hormonal, inhibición competitiva.
La insulina (hormona anabolizante) activa la síntesis de colesterol activando la desfosforilación, es decir, la HMG-CoA reductasa fosfatasas.
Mientras que el glucagón activa la HMG-CoA reductasa kinasa. Estas enzimas también están reguladas por la AMPK (kinasa dependiente de
AMP) que a su vez está regulada por homonas.
El colesterol intracelular:
Estimula la degradación del HMG-CoA reductasa
Se almacena en forma de éster de colesterol.
Inhibe la captación de colesterol externo, es decir, la endocitosis mediada por receptor. 

> Colesterol: transporte en sangre.

El colesterol se transporta en el plasma predominante como ésteres del colesterol asociados a las lipoproteínas.
El colesterol de la dieta se transporta desde el intestino delgado al hígado dentro de los quilomicrones.
El colesterol sintetizado por el hígado, así como también el colesterol de la dieta que se encuentra en exceso en el hígado, se transportan
en el suero dentro de las LDLs. El hígado sintetiza VLDLs y éstas se convierten a LDLs por acción de la lipoproteína lipasa asociada con las
células endoteliales.
El colesterol que se encuentra en membranas de las células puede ser extraído por las HDLs por la enzima LCAT asociada al HDL. El colesterol
adquirido desde los tejidos periféricos por la HDLs puede entonces transferirse a las VLDLs y a las LDLs por acción de la proteína de
transferencia de esteres de colesterol (apo-D) que está asociada con las HDLs.

El transporte reverso del colesterol permite que el colesterol periférico sea devuelto al hígado por las HDLs.
En última instancia, el colesterol se excreta en la bilis como colesterol libre o como sales de biliares después de la conversión a ácidos biliares
en el hígado.

> Autorregulación del metabolismo del colesterol.

La captación de colesterol tiene lugar mediante endocitosis mediada por receptor. Las LDL llegan a su receptor, se internalizan, forman un
endosoma y se fusiona con un lisosoma. El receptor se recicla en la membrana. El contenido de las lipoproteínas se degrada a aa y los lípidos
y AG a colesterol.
Cuando en la célula tenemos un exceso de colesterol pueden tener lugar 4 procesos:
Inhibición de la HMG-CoA reductasa (inhibición de la síntesis endógena del colesterol).
Inhibición de la transcripción del gen que codifica para el receptor de las LDL, es decir, que capta menos colesterol y hay más probabilidad
de que haya taponamientos.
Estimulación del almacén de colesterol convirtiéndose éste en ésteres de colesterol mediante ACAT (“gotículas de colesterol”).

> Riesgos del colesterol en sangre.

¿Por qué las HDL llevan el colesterol “bueno”?
Las HDL captan el colesterol de los quilomicrones y las VLDL residuales, lo esterifican y lo retornan al hígado.
Las HDL llevan colesterol a tejidos esteroidogénicos (cápsulas suprarrenales)
Las HDL pueden captar colesterol de los tejidos y retornarlo al hígado para su eliminación.

> HDL y el transporte inverso de colesterol.

Proceso por el cual el exceso de colesterol en los tejidos periféricos es retornado al hígado para su conversión y excreción. Implica a las HDL.
> Hipercolesterolemia familiar.
Enfermedad genética caracterizada por niveles de LDL-C en sangre que provoca xantomas y enfermedades cardiacas. Está mutado el gen
que codifica para el receptor de las LDL. Tratamiento:
- homocigotos: transplante hepático
- heterocigotos y otros enfermos conniveles de colesterol:
- dieta colesterol
- inhibir la reabsorción de sales biliares
- síntesis “de novo” de C
Las estatinas son inhibidores competitivos de la HMG-CoA reductasa (es una forma de controlar el colesterol del interior).
> Síntesis derivados del colesterol.
Tema 20. Metabolismo de aa y proteínas.

Tema 20: Metabolismo de aminoácidos y proteínas.

Digestión de proteínas y transporte de aa. Recambio y degradación intracelular de prots.

> Panorámica del catabolismo de aminoácidos.

Los aa tienen dos orígenes: dieta & proteínas intracelulares que se degradan.
En el catabolismo hay dos elementos de los aa a considerar:
El destino del esqueleto carbonado, que se convertirá en un cetoácido, entrando en el ciclo de Krebs y oxidándose para producir ATP o en
oxalacetato para formar glucosa.
El destino del grupo amino, que puede dar lugar a compuestos nitrogenados (biosíntesis aa, nucleótidos o aminas biológicas) o excretarse
mediante su conversión en el ciclo de la urea.
 > Digestión de proteínas.
La digestión de las prots comienza en el estómago donde las células de la mucosa gástrica segregan gastrina que estimula la producción de
HCl y pepsinógeno.
Debido al pH ácido del estómago, el pepsinógeno se convierte en pepsina y las prots se desnaturalizan (autodigestión). La pepsina rompe
las prots en péptidos más pequeños, es decir, lleva a cabo una primera hidrólisis de las prots.
Esto pasa al intestino delgado donde la secretina estimula la producción de bicarbonato que neutraliza la acidez, es decir, en el intestino
delgado el pH es básico (alcalino) para la correcta actuación de la colecistoquina (hormona) que estimula las células del páncreas a producir
zimógenos como tripsinógeno, quimotripsinógeno, procarboxipepsidasas A y B y proelastasas.
Los zimógenos son los precursores inactivos de las enzimas digestivas e impiden la destrucción de las células intestinales por autodigestión.
Las carboxipeptidasas cortan por el extremo C terminal; el resto de los zimógenos por dentro de la prot. En la membrana de la célula del
epitelio intestinal están las amilopeptidasas que cortan por el grupo amino terminal.
Así los aa resultantes pasan a la sangre por lo que son distribuidos a los tejidos y captados por las células.

> Degradación intracelular de proteínas.

En las células ocurre un recambio (turnover) proteico continuo. Unas prots son muy estables y otras muy inestables. El recambio es necesario
por 3 razones:
Para eliminar las prots reguladoras pues son encargadas de un estímulo.
En prots defectuosas, por traducción o plegamiento.
Prots dañadas por agentes oxidantes.
Las prots tienen una señal dada por determinados aa del amino terminal la cual determina la vida media de una prot.
La ubiquitina (Ub) es una prot pequeña que marca las prots destinadas a degradarse. Está presente en todas las células eucariotas y está
muy conservada en la evolución. Se une a la prot que quiere marcar, a un resto de lisina a través de un enlace isopeptídico (grupo amino
que participa es del carbono épsilon).
Enlace isopeptídico: se unen la Gly del extremo C-T de la Ub y el grupo del E-amino de Lys de la prot que va a ser degradada.
> Ubiquitinación.
Participan 3 enzimas: E1, E2 y Enzima ligasa Ub-prot.

1. Adenilación (se libera PPi). Catalizada por el enzima activador de la Ub y que también cataliza el siguiente paso.
2. Transferencia de un grupo SH de una Cys de E1.
3. Transferencia a un grupo SH de enzima conjungador de Ub. La Ub se transfiere de E1 a E2.
4. Transferencia de la Ub a una Lys de la proteína diana. Enzima ligasa Ub-prot. Unión de la Ub a la prot.
Una prot diana puede estar pluriubiquitinada.

El proteasoma es un complejo multiproteico con actividad proteolítica, se llama 26S y

tiene dos partes:
Proteasoma 20S, la unidad catalítica con forma cilíndrica.
Proteasoma 19S, la unidad reguladora que reconoce las prots ubiquitinadas controlando su acceso a la unidad 20S.
Las proteínas ubiquitinadas o multiubiquitinadas se introducen en el proteasoma, dentro del cual la actividad catalítica rompe la prot en
péptidos. La ubiquitina liberada puede reutilizarse y los péptidos rompen en aa.
La ubiquitina no se destruye a su paso por el proteasoma, se reutiliza.

Procesos regulados por la degradación de proteínas:

Transcripción de genes
Progresión (avance) del ciclo celular
Formación de orgánulos
Ritmos circadianos (floración, despertarse…) o ciclos biológicos
Respuesta inflamatoria
Supresión de tumores
Metabolismo del colesterol

Procesamiento de antígenos

Tema 21. Metabolismo de aa

Tema 21: Metabolismo de aminoácidos.

Rutas generales de degradación y biosíntesis. La transdesaminación.

> Catabolismo de aa: destino del grupo aa y del esqueleto carbonado.

> La transaminación.
Un aa se transforma en un cetoácido y un cetoácido en un aa. Las reacciones de transaminación son fundamentales en el metabolismo de
aa.
Son cercanas al equilibrio. Hay dos transaminasas muy importantes:
þ GOT o aspartato aminotransferasa, que cataliza:
þ GPT o alanina aminotransferasa, que cataliza:
No debe haber transaminasas en sangre; si las hay es indicador de lesión hepática porque el tejido muere y las libera.
Es un mecanismo del tipo bimolecular ping pong porque en la primera reacción se transfiere el grupo amino al coenzima y el aa se convierte
en un cetoácido y el coenzima en PLP (piridoxal fosfato). El amino es transferido al cetoácido para formar otro aa.

> Desaminación oxidativa.

Es la pérdida del grupo amino. La más importante es catalizada por la glutamato deshidrogenasa (GDH). El glutamato se desamina
reaccionando con NAD+ o NADP+ formando NADH+H+ o NADPH+H+ y liberando NH4+ y cetoglutarato. El ión entra en el ciclo de la urea.
Es muy importante porque en el hígado esta reacción está acoplada a la transaminación. La combinación de la transaminación y
desaminación nos permite obtener el N para expulasarlo. Se denomina transdesaminación.

Otros sistemas de desaminación menos importantes:

- Sistemas catalizados por la L y D-aa oxidasas.
- Serina deshidratasa.
- Treonina deshidratasa.
> Degradación de aa.
Todos los esqueletos carbonados se convierten en uno de los 7 metabolitos siguientes:
Piruvato
 Acetil-CoA
Acetoacetato
α-cetoglutarato
Succinil-CoA
Fumarato
Oxalacetato
Sólo Leu y Lys son exclusivamente cetogénicos.
Trp, Phe, Tyr, Thr y Ile son cetogénicos y glucogénicos, es decir, se pueden convertir en cuerpos cetónicos o en glucosa ya que un mismo
metabolito se puede convertir en diferentes intermediarios.

> Transtornos genéticos del catabolismo de aa.

A Garrod (1902) descubrió que la alcaptonuria es una enfermedad hereditaria que se debe a la ausencia de una enzima. Fue el primero en
establecer la correlación entre enfermedad hereditaria y defecto enzimático.

Tema 22. Metabolismo del amonio. Ciclo de la urea.

Tema 22: Metabolismo del amonio. El ciclo de la Urea.

> Clasificación de la excreción de animales.
Amonotélicos
Ureotélicos
Uricotélicos

> Eliminación del nitrógeno procedente de los aa.

En mamíferos la eliminación del grupo amino ocurre principalmente en el hígado. Combinación de la transaminación con la desaminación
oxidativa: la transdesaminación.

El grupo amino del aa acaba libre para integrarse en el ciclo de la Urea.

SDH (serina deshidratasa): Piruvato + NH4+
TDH (treonina deshidratasa): αcetobutirato + NH4+

> Transporte de NH4+ al hígado.

Gln: El NH4+ se forma en muchos tejidos pero es tóxico por lo que se transporta en sangre fabricando glutamina gracias a la glutamina
sintetasa. La glutamina sale a la sangre y va al hígado donde sufre la acción de la glutaminasa que la convierte en ácido glutámico y NH4+,
que va al ciclo de la Urea. El glutamato se desamina originando otro NH4+.
Otros tejidos pueden degradar aa pero no eliminar el NH4+ que se genera.

Ala: En el músculo el transporte se hace mediante la alanina en situaciones de ayuno prolongado. La enzima es la alanina transferasa. La
alanina va al hígado donde tiene lugar la reacción contraria formándose también piruvato que está destinado a la gluconeogénesis. La
glucosa resultante vuelve al músculo donde se transforma en piruvato y es utilizado para la formación de más alanina. Este es el ciclo alanina-
glucosa.
La alanina actúa como transportador de amoníaco y del esqueleto carbonado del piruvato desde el músculo esquelético al hígado. El
amoníaco se excreta y el piruvato se utiliza para producir glucosa, que vuelve al músculo.

> Ciclo de la Urea.

 Ocurre en las mitocondrias y citosol de las células hepáticas (hígado). Fue descubierto por Krebs. La urea es una molécula muy pequeña
enriquecida en Nitrógeno. No es tóxica y es muy soluble por lo que se puede eliminar en la orina.
Este ciclo está compartimentalizado: Se inicia en la mitocondria y otra parte es en el citoplasma.
1) Carbamil P sintetasa 1.
2) Ornitina transcarbamilasa
3) Arginina succinato sintetasa
4) Argininsuccinasa
5) Arginasa
Las fuentes de nitrógeno para el ciclo son: alanina y glutamina procedente del músculo.

> Balance del ciclo de la Urea.

NH3 + HCO3- + H2O + aspartato + 3ATP  urea + fumarato + 2ADP + 2Pi + AMP + 2PPi

> Regulación del ciclo de la Urea.

§ velocidad de síntesis: traducción & genes
§ Activación de carbamoilP sintetasa por N-acetilglutamato: Si hay aa & transaminaciones  [glutamato]  N-acetilglutamato reacciona con
glutamato  activación cabamoilP sintetasa
Altos niveles de glutamato son indicativos de que hay muchos aa.
Este ciclo tiene que aumentar su velocidad cuando estamos en una situación de ingesta elevada de prots o ayuno prolongado (degradación
de prot muscular), lo que incrementa la concentración de NH3. Aumenta así la velocidad de síntesis de los enzimas del Ciclo de la Urea que
es de regulación lenta.
Existe otro sistema más inmediato y de carácter alostérico: la activación de carbamoilfosfato sintetasa (primera enzima del Ciclo de la Urea).
Esta activación se realiza mediante la síntesis del N-acetil-glutamato, activador alostérico de la carbamoilfosfato sintetasa. Se forma a partir
de glutamato y Acetil-CoA. Los niveles de glutamato se incrementan en el catabolismoi de aa por lo que se activa la carbamoilfosfato
sintetasa.

> Conexión del ciclo de la Urea y el ciclo de Krebs: la conexión aspartato-arginosuccinato.

El ciclo de la urea es en el citosol y en la mitocondria mientras que el de krebs es en las mitocondrias. En el ciclo de la Urea se forma arginina
y fumarato. El fumarato vuelve al ciclo de Krebs para reciclarlo y formar aspartato

> Conexión del ciclo de la Urea y la gluconeogénesis.

El fumarato citosólico a través de isozimas (fumarasa y malato DH) puede dar oxalacetato que es un precursor gluconeogénico para formar
glucosa. Por lo tanto convertimos el esqueleto carbonado del aa en glucosa.

> Defectos hereditarios del ciclo de la Urea.

Cuando hay defectos genéticos en las enzimas del ciclo de la Urea se acumula amonio en las células que es muy tóxico. Esto conlleva una
hiperamonemia en sangre y posibles lesiones cerebrales irreversibles.
Un posible tratamiento es una dieta carente de prots pero no sería beneficioso porque los aa esenciales son fundamentales para la
supervivencia de los organismos.
Como la deficiencia más común es en carbamoilP sintetasa y OTS los enfermos se tratan con benzoato y fenilacetato que bajan los niveles
de NH3.

> Rutas degradativas de aa: destino del esqueleto carbonado.

El esqueleto carbonado puede oxidarse a CO2 y H2O, formar glucosa, Acetil-CoA, cuerpos cetónicos… Los aa van a confluir al Ciclo de Krebs.
Algunos generan acetacetato, a partir del cual forman acetil-CoA, que entra en el ciclo de Krebs para degradarse a CO2. Otros pueden formar
directamente acetil-CoA, piruvato…

Según que aa generan uno u otro intermediario por lo que hablamos de familias catabólicas. Existen muchas enfermedades ligadas al
catabolismo de aa y mediante su estudio se identificaron los errores congénicos del metabolismo.

Tema 23. Fijación de nitrógeno e incorporación en compuestos orgánicos.

Tema 23: Fijación de nitrógeno e incorporación en compuestos orgánicos.

> Nitrógeno, amoníaco y aa.

Prácticamente todos los compuestos biológicos contienen N reducido.
Las bacterias reducen el N2 que se encuentra en la naturaleza y así pueden incorporarlo a las estructuras. La fijación de nitrógeno es llevada
a cabo por bacterias simbióticas con leguminosas que poseen el complejo de la nitrogenasa:
N2  NH3  Glutamato

> Reacciones de N.

Fijación del N: N2  NH3

Nitrificación: NH3  NO2  NO3

Desnitrificación: NH3  NO2  NO3
 Asimilación: NH3  biomoléculas
Descomposición: NH3  biomoléculas

> Estabilidad del N2.

El triple enlace del N2 es muy estable por lo que reducirlo es complicado. Es una reacción termodinámicamente muy favorable pero tiene
que vencer una energía de activación muy elevada que se puede disminuir gracias al aporte de ATP.

La síntesis de Haver es el proceso industrial de fabricación de amoníaco.

> Complejo nitrogenasa: N2 + 3H2  2NH3

La reacción de la nitrogenasa es:
N2 + 10H+ + 8e- + 16ATP  2NH4+ + 16 ADP + 16Pi + H2
El complejo de la nitrogenasa está compuesto por dos proteínas:
1) La reductasa o dinitrogenasa reductasa. Es un homodímero con un centro redox del tipo 4Fe-4S que puede ser oxidado o reducido y dos
lugares de unión al ATP/ADP.
2) La nitrogenasa o dinitrogensasa. Es un tetrámero que tiene centros redox del tipo Fe-Mo.
Los electrones entran en la reductasa, pasan a la nitrogenasa donde reducen el N2 a NH3 con consumo de ATP. La unión del ATP y su hidrólisis
provocan cambios en el enzima que permiten la transferencia de electrones de la reductasa a la nitrogenasa y al nitrógeno.
Los electrones proceden del piruvato, el cual proviene de la degradación de azúcares. Los cede de uno en uno hasta un total de 8 a la
ferredoxina que a su vez se los cede a la reductasa. La reductasa capta 16ATP y pasa los electrones a la nitrogenasa.
Las bacterias pueden estar libres o en simbiosis con leguminosas. La bacteria se beneficia obteniendo carbohidratos de la planta y
protegiendo el complejo de la dinitrogenasa. Para evitar la inactivación del complejo las plantas tienen una hemoglobina especial que capta
el oxígeno. La planta obtiene NH3 de la bacteria para la biosíntesis de moléculas.
La hidrólisis del ATP es necesaria para reducir la energía de activación haciendo posible la reacción en condiciones normales de P y Tª. Pero
la reacción biológica genera siempre, además, 2 NH3, 1 mol de H2.
N2 + 8 H+ + 8 e- + 16 ATP + 16 H2O  2 NH3 + 16 ADP + 16 Pi + H2

> Reacción de fijación realizada por la nitrogenasa.

La unión del ATP y su hidrólisis provocan cambios en la conformación de la reductasa que hacen posible la transferencia de e- a la
dinitrogenasa. 2 ATP se unen a la reductasa y se hidrolizan a la vez que 1 e- pasa de la reductasa a dinitrogenasa.

> Nódulos fijadores de N2.

Es la leghemoglobina
La relación de simbiosis entre bacterias fijadoras de N2 y plantas leguminosas resuelve las necesidades energéticas y la habilidad del complejo
de la nitrogenasa al oxígeno.
Las plantas leguminosas proveen de reservas de glúcidos e intermediarios del Ciclo de Krebs a las bacterias y las protegen del oxígeno
mediante la leghemoglobina.

> Incorporación del ión amonio (NH4+) en las biomoléculas.

El NH4+ se incorpora en las biomoléculas que contienen N, primero en los aa Glu y Gln, después en el resto de compuestos nitrogenados. Las
reacciones son tres:

1. Reacción de la glutamato deshidrogenasa (GDH)

2. Reacción de la glutamina sintetasa (GS)

3. Reacción de la glutamato sintasa

 GS & GDH están en todos los organismos y la glutamato sintasa sólo en bacterias y plantas. La glutamina es un precursor metabólico de
muchas sustancias como el carbamoilP, la alanina, la glicina, la histidina, el triptófano, la urea…
> Regulación de la GS: la glutamina como donante de grupos NH2

Cada inhibidor (productos finales del metabolismo de la Gln) inactiva radicalmente el GE.
1. Alostérico por retroinhibición
2. Conversión Molecular Covalente mediante adenilación (no por fosforilación/desfosforilación). Adición de un grupo adenilo o 1AMP a la
enzima adeniltransferasa (AT)
La AT cataliza por un lado la adenilación a partir de un ATP e inactive a la GS pero también cataliza la reacción contraria. Además es una
aminotransferasa.
Las proteínas PII (PA o PD) regulan la actividad de la AT. Están a su vez reguladas por la uridiltransferasa que adiciona un UDP. Cuando se
forma PA y se une al NRII se hidroliza el P y desaparece la activación de la transcripción.
Una clara diferencia entre la CMC por adenilación y la de fosfo/desfosfo es que en ésta inactiva y activa la misma enzima y otra lo hacen
otras dos.
3. Expresión génica: transcripción & traducción
Se hace a nivel de la expresión del gen que codifica para la GS a través de un intensificador de la transcripción que active la transcripción
del gen de la GlnS, es decir, la transcripción es activada también por la proteina anterior (PA y PD).

> Biosíntesis aa.

Las plantas y microorganismos son capaces de sintetizar los 20 aa que forman las prots mientras que los mamíferos sólo fabrican 10/20aa y
los restantes son los aa esenciales.
þ El esqueleto carbonado de los aa procede de intermediarios de la glucólisis, ciclo de Krebs y RPF.
þ La parte nitrogenada procede de glutamato o glutamina.

Los precursores metabólicos de los aa son ribosa5P y eritrosa4P, metabolitos de la RPF. El fosfoglicerato, PEP y el piruvato son metabolitos
de la glucólisis. El oxalacetato y α-cetoglutarato son metabolitos del ciclo de Krebs.

> Esquema general y principales tipos de reacciones.

En la biosíntesis de aa hay una serie de reacciones comunes:
1) Transaminación y otros reordenamientos catalizados por enzimas que emplean el pirodoxal fosfato (PLP).
2) Transferencia de grupos monocarbonados catalizados por enzimas que emplean tetrahidrofolato o SAM (S-adenosilmetionina = donante
universal de grupos metilos). SAM tb es precursor del etileno (hormona responsable de la maduración de la fruta.
3) Transferencia de grupos amino procedentes del nitrógeno del grupo amida de la glutamina.

> 6 familias de biosíntesis de aa.

> Regulación de la biosíntesis de aa: inhibición feedback.

Las rutas de biosíntesis de aa están sujetas a inhibición alostérica por el producto final, es decir, algunos de los productos de las rutas pueden
ser activadores del enzima y a su vez éste puede estar inhibido por otro producto. Esto es debido a la multiplicidad enzimática o a que la
primera reacción de la ruta está catalizada por dos o más isoenzimas. El enzima regulador habitualmente es el primero.
> Regulación de la biosíntesis de aa: multiplicidad enzimática.
La multiplicidad enzimática impide que un producto final obstaculice pasos clave en una ruta metabólica cuando se necesitan otros
productos de la misma vía. El caso del aspartato.
> Biosíntesis de biomoléculas derivadas de aa.
De los aa se pueden sintetizar:

Además de otras moléculas como el glutatión, el NO, la melanina, las histaminas, la creatina, antibióticos, esfingosina…
A partir de Tyr y Phe también se forman sustancias como taninos, alcaloides (morfina) y los sabores de las esencias (cianatos) de canela,
nuez moscada, vainilla… El triptófano es el precursor de las auxinas (hormonas de crecimiento vegetal).

> Síntesis de aminas biógenas.

a) Dopamina, noradrenalina y adrenalina.
Son productos de la descarboxilación, oxidación y otras de aa.
La dopamina está relacionada con la enfermedad de Parkinson y su sobreproducción con la esquizofrenia.
b) GABA, serotonina e histamina.
El glutamato es el precursor del GABA y su deficiencia está relacionada con los ataques epilépticos.

> Metabolismo del grupo hemo: biosíntesis.

La síntesis del grupo hemo que ocurre en la mitocondria comienza a partir del succinil-CoA y de la glicina. Estas moléculas forman el δ-
aminovulinato que sufrirá una serie de reacciones hasta llegar al grupo hemo. Para saber de dónde vienen los átomos que lo forman se
utiliza el marcaje isotópico (radioactivo con N y C).

Transtornos congénicos da lugar a un grupo de enfermedades llamadas porfirinas.

> Degradación del grupo hemo.
El grupo hemo se degrada a los pigmentos biliares gracias a la enzima hemooxigenasa, primero a la biliverdina que se convierte en bilirrubina
que se une a la seroalbúmina porque es muy insoluble (como los AG) para ir por la sangre hasta el hígado. En el hígado la bilirrubina se
transforma en bilirrubina diglucorónida que es secretado con la bilis.
En un hematoma los glóbulos rojos se destruyen y la Hb empieza a degradarse:
- negro (liberación de Hb)
- verde (síntesis de biliverdina)
 - amarillo (bilirrubina)
Un mal funcionamiento hepático o un bloqueo en la secreción biliar provocan que la bilirrubina del hígado llegue a la sangre, lo que produce
un color amarillo en la piel que se denomina icteria.
> Biosíntesis de óxido nítrico (NO).
El NO es un gas mensajero que participa en la transducción de señales activandoa la guanilato ciclasa que fabrica cGMP. Se forma NO a
partir de la arginina por la NO sintasa.
NO  Guanilato ciclasa (el NO la activa)  síntesis de cGMP  relajación músculo cardiaco

Las funciones del NO son:

- Neurotransmisor
- Vasodilatador
- Coagulante sanguíneo
Tiene el mismo efecto que la nitroglicerina para aliviar la angina de pecho.
La viagra (nombre comercial del sildenafil) es un fármaco que inhibe la 5fosfodiesterasa que convierte el cGMP en GMP, es decir, es una
enzima que elimina el cGMP o cAMP para que estos segundos mensajeros dejen de actuar. Esto eleva la concentración de cGMP e impide
la relajación muscular.

Tema 24. Metabolismo de nucleótidos.

Tema 24: Metabolismo de nucleótidos.

Síntesis y degradación de ácidos nucleicos.

> Funciones.
Los nucleótidos tienen una amplia variedad de funciones en todas las células:
- Precursores de DNA & RNA
- Intermediarios biosintéticos
- Componenetes de los cofactores NAD, FAD, CoA y SAM
- Transportadores de energía (ATP)
- Segundo mensajero (cAMP, cGMP)
> Estructura.

> Panorámica del metabolismo de nucleótidos.

Hay dos rutas metabólicas que conducen a la formación de los nucleótidos:
þ Rutas de novo a partir de precursores metabólicos simples activados. Empieza a partir de sus precursores metabólicos: aa, ribosa 5P, CO2 y NH3
þ Salvaje pathways o rutas de recuperación en las que se recuperan las bases para sintetizar los nucleótidos.
Algunas enzimas de este metabolismo son las dianas de los tratamientos de quimioterapia (cáncer).
Tanto las vías de síntesis de novo como de recuperación de purina y de pirimidina conducen a la producción de nucleósido-5'-P a través de
la utilización de un azúcar intermediario activado y de una clase de enzimas llamadas fosforibosiltransferasas. El azúcar activado que se
utiliza es el 5-fosforibosil-1-pirofosfato, PRPP. El PRPP es generado por la acción de la PRPP sintetasa y requiere de energía en forma de ATP.
 Ribosa5P + ATP  PRPP + AMP
> Síntesis de novo de pirimidinas.
La síntesis de las Pirimidinas es menos compleja que la de las purinas puesto que la estructura es más simple. El anillo se forma a partir de
glutamina, CO2 o HCO3- y del aspartato. La primera reacción es la formación del carbamoilP mediante la carbamoilfosfato sintetasa II en el
citosol. La glutamina es la que cede el N.
Gln + HCO3- + 2ATP  CarbamoilP + Glu + 2ADP + Pi

El carbamoilP reacciona con el aspartato mediante la enzima aspartato transcarbamoilasa o ATCasa formando N-carbamoil-aspartato que
se convierte, por deshidratación, en dihidroorotato (DHO) por la dihidrooratasa que a su vez se tranforma en orotato por la DHO DH.
El azúcar del nucleótido proviene de la ribosa5P procedente de la RPF y reacciona con el ATP formando 5fosforribosilpirofosfato o PRPP
mediante la PRPP sintetasa. El PRPP reacciona con el orotato y da lugar al OMP o orotidilato que se descarboxila y da lugar al UMP gracias
a la OMP descarboxilasa.
Para formar UTP se utilizan la nucleósido mono y difosfato kinasa (ver Interconversión de nucleótidos). Son reacciones próximas al equilibrio:

A partir del UTP se forma el CTP por la citidilato sintetasa:

Glutamina + ATP + H2O + UTP  Glutamato + ADP + Pi + CTP Enzima: CTPsintetasa
Regulación feedback de la síntesis de nucleótidos de pirimidina:
Hay dos enzimas clave:
La ACTasa es inhibida por el CTP y activada por el ATP-purina. Esto es así porque la célula necesita balancear los dos tipos de nucleótidos, es
decir, PRPP “le dice” a la enzima que active la ruta de formación de nucleótidos. En ausencia de CTP funciona a pleno rendimiento.
En animales el principal punto de control es la carbamoilP sintetasa II (CPS II) que se activa por ATP y PRPP y se inhibe por UDP u UTP.

> Síntesis de novo de purinas.

Los precursores metabólicos son aspartato (N), CO2 (C), glicina o Gly (C&N), tetrahidrofolato (C) glutamina o Gln (N). La primera reacción es
la síntesis de PRPP a partir del cual se forma PARA. El IMP es el precursor de los nucleótidos de purina (AMP y GMP).
 La síntesis de AMP comienza con el IMP que se convierte en adenilosuccinato a partir de aspartato y GTP. Éste forma fumarato y AMP gracias
a la adenilosuccinato liasa.
La síntesis de GMP se forma mediante la oxidación del IMP a xantilato o XMP seguida de la incorporación de un grupo amino. El NAD + es el
aceptor de hidrógeno durante la oxidación del IMP.
Esta ruta se regula en 4 puntos:
- PRPP sintetasa. Regulación por feedback en la que son inhibidores el AMP y el GMP.
- Glutamina PRPP aminotransferasa
- Adenilosuccinato sintetasa, inhibida por GMP
- IMP deshidrogenasa, inhibida por GMP

> Interconversión de nucleótidos mono, di y triP.

> Síntesis de desoxirribonucleótidos.

La enzima que reduce un ribonucleótido a un desoxirribonucleótido es la ribonucleótido reductasa o RNP. Los sustratos son las ribosas diP:
ADP, CDP, GDP & UDP.
 La reacción que cataliza es la conversión de OH en un H. La enzima tiene dos grupos SH en el centro activo que son los que reducen a la
ribosa. Cuando se oxidan forman un puente disulfuro y para que la enzima siga funcionando debe volver a reducirse mediante el NADPH de
forma indirecta.
La tiorredoxina y la glutarredoxina son los agentes reductores primarios de RNP; el reductor final es el NADPH.
La enzima RNP tiene dos dímeros (R1 y R2), un regulador y un catalítico. En el catalítico tiene los grupos SH. Además tiene una tirosina con
1e- desemparejado, por lo que es un radical muy reactivo. El radical se genera por un grupo Fe-O-Fe.
Gracias a la tiorredoxina o a la glutarredoxina se transfieren e- desde el NADPH hacia grupos sulfhidrilo de los centros activos de esta enzima.
Un radical libre tirosilo generado por un centro de la reductasa que contiene hierro inicia una reacción radical sobre el azúcar que da lugar
a la sustitución del OH del C2’ por un H.
Estos compuestos junto con el fluorouracilo (inhibidor de la timidilato sintasa) se utilizan como fármacos anticancerígenos.
En la parte reguladora hay dos zonas diferentes: una donde se unen el ATP y dATP (reguladores alostéricos; activador e inhibidor
respectivamente) y otra que determina la especificidad de la enzima. Son dos lugares de regulación.
Cuando se une ATP o dATP al centro de especificidad se reduce CDP y UDP, respectivamente.
Cuando se une dTTP o dGTP se estimula la reduccióndel GDP y del ADP, respectivamente.
El dATP inhibe a la ribonucleótido reductasa por retroinhibición. Además si hay mucho ATP por la adenilato kinasa hay mucho sustrato para
fabricar, por ello sólo inhibe el dATP.
Unos nucleótidos activan la formación de otros porque así la célula se asegura de que haya un balance equitativo de los 4 nucleótidos.
Los efectores alostéricos no sólo regulan la actividad del enzima (ATP activador y dATP inhibidor) sino también su especificidad por el
sustrato.
Centros reguladores de cada subunidad:
-Actividad de la enzima
-Especificidad del sustrato
Origen del dTMP (timidilato). El TMP se forma por metilación de dUMP. Hay dos caminos para fabricarlo:

En esta reacción el dador tanto del grupo metileno como del ión hidruro es el metilentetrahidrofolato que se convierte en dihidrofolato. El
tetrahidrofolato se regenera mediante la reducción del dihidrofolato por el NADPH. La dihidrofolato reductasa se inhibe por análogos del
folato.
La hidrólisis del dUTP parece un gasto innecesario, ¿por qué las células no van de dUTP a dTTP directamente? La célula no convierte el dUTP
en dTTP directamente para evitar que haya elevados niveles de dUTP y así evitar que se incorpore el uracilo al DNA ya que la DNApolimerasa no
distingue entre dTTP y dUTP.
El dihidrofolato se reduce con NADPH por la dihidrofolato reductasa (DHFR). TS y DHFR son muy importantes porque son dianas en
quimioterapia.
Inhibición suicida. Cuando una molécula reacciona con la enzima forma un complejo covalente que inactiva la enzima permanentemente.

> Rutas de recuperación de purinas.

Recuperan las bases para resintetizar los nucleótidos. Están implicadas las enzimas HGPRT (hipoxantina-guanina fosforribosiltransferasa) y
la APRT (adenina fosforribosiltransferasa).

 Adenina + PRPP  AMP + PPi Enzima: APRT

 Hipoxantina + PRPP  IMP + PPi Enzima: HGPRT
 Guanina + PRPP  GMP + PPi Enzima: HGPRT
HGPRT recupera hipoxantina y guanina, formando IMP y GMP, respectivamente. La APRT recupera adenina para forma ATP.
La deficiencia de HGPRT causa el síndrome de Lesh-Nyham.

> Catabolismo de purinas.

Las purinas más importantes son: AMP, IMP, XMP y GMP. En el catabolismo el AMP se puede coger dos caminos: convertirse en IMP por la
AMP desaminasa o convertirse en adenosina y ésta en inosina por la adenosina desaminasa. Los grupos amino son eliminados por el ciclo
de la urea.
- GMP  Guanosina  Guanina  Xantina
- Inosina  Hipoxantina  Xantina
La xantina se convierte en ácido úrico por la xantina oxidasa.
- La ribosa1P se convierte en ribosa5P por la fosfomutasa. La ribosa 5P se convierte en PRPP que se utiliza en el metabolismo de aa y NT.
Reptiles, primates, aves & insectos: excretan ácido úrico
Otros mamíferos: convierten el ácido úrico en alantoina.
Teleósteos: convierten la alantoina en ácido alantoico
Peces carilaginosos & anfibios: convierte el ácido alantoico en urea
Invertebrados marinos: convierte la urea en amoníaco
Ciclo de nucleótidos de purina (CNP).

Las actividades de los 3 enzimas implicados en el CNP son más elevadas que en otros tejidos.
La deficiencia en ADA (adenosina desaminasa) provoca el síndrome de la inmunodeficiencia combinada grave (SCID) que afecta a las células
T. Fue la primera enfermedad tratada con la terapia génica. Produce un incremento de los anillos de dATP que inhibe a la RR. Esto inhibe la
síntesis de DNA. Aun no se sabe por qué esta deficiencia afecta a las células T.
Ácido úrico & gota. La gota es una enfermedad caracterizada por elevados niveles de ácido úrico en los fluidos corporales, es decir, altos
niveles de urato en sangre. Las articulaciones acumulan cristales de urato sódico que provocan inflamación. El tratamiento para bajar los
niveles de ácido úrico es incidir sobre la xantina oxidasa mediante un inhibidor suicida (alopurinol).

> Catabolismo de pirimidinas.

Se forma ribosa1P que puede seguir el camino del PRPP o entrar en las rutas catabólicas.
La base nitrogenada se convierte en intermediario del metabolismo como metilmalonil-CoA (de la degradación de valina para dar succinil-
CoA).