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INFORME DE BIOQUÍMICA

OVIDIO RAFAEL MARTINEZ ABAD

TUTOR

PRESENTADO POR

DENIS MARGOTH ESPEJO DE HOYOS

GABRIEL CASTRO VEGA

YESSICA PAOLA MEJÍA ROCHA

BLANCA ELENA AGUAS

TECNOLOGÍA EN REGENCIA DE FARMACIA

ESCUELA DE LA CIECNCIA Y LA SALUD ECISA

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA UNAD

COROZAL - SUCRE
Práctica No. 2. Identificación de Lípidos

Objetivo general.

Identificar propiedades de los lípidos.

Propósito

Relacionar los conceptos de los lípidos a partir de procedimientos de laboratorio que


describen el comportamiento químico de los mismos.

Descripción de la práctica
En esta práctica se realizó la emulsificación, saponificación e índice de yodo de lípidos.

Materiales

 Espátulas o cucharas de tamaño pequeño.


 Pipetas graduadas de 5
 Pipetas Pasteur.
 Tubos de ensayo.
 Gradilla

Reactivos

 Agua destilada
 Al(OH)2
 NaOH
 Etanol
 Solución de NaCl a saturación
 Aceite vegetal de cocina
 Aceite de oliva
 Manteca de cerdo
Procedimiento

Parte I. Emulsificación.

a) Se tomaron 3 tubos de ensayo, se agregó 5 ml de agua destilada, luego agregamos 5


gotas de aceite de cocina en uno de los tubos, 5 gotas de aceite de oliva en el otro y 5
gotas de cerdo en el tercer tubo de ensayo.
b) Agitamos fuertemente observando y registrando el tiempo de la emulsión de cada
tubo, obteniendo como resultado 20 segundos el contenido del aceite de cerdo, este
tardó un poco más; mientras que el contenido del aceite vegetal de cocina y el de oliva
fue de 15 segundos.

Parte II. Saponificación.


La saponificación es una reacción química entre un ácido graso (o un lípido saponificable,
portador de residuos de ácidos grasos) y una base o álcali, en la que se obtiene como principal
producto la sal de dicho ácido y de dicha base. (Facultad de Ingeniería, 2010).

a) Se tomaron 3 tubos de ensayo, se les agregó 5 ml de agua destilada, 10 gotas de aceite


vegetal a un tubo, 10 gotas de aceite de oliva en el otro tubo y 10 gotas de aceite de
cerdo en el otro tubo; agitándose fuertemente al mismo tiempo los 3 tubos.

b) Se procedió a agregar 3 ml de NaOH hidróxido de sodio a cada tubo y se puso a hervir


a fuego directo 4 veces cada uno de los tubos, por dos minutos. (retirándolos y
volviéndolos a colocar).
Se observa una ebullición cada vez más rápida en el aceite de cerdo es mayor, el aceite de
vegetal y el oliva tienden a salpicar o explotar.

c) Después se le agregó 3 ml de Al(OH)2 hidróxido de aluminio. Se puso a hervir a


fuego directo 4 veces por dos minutos nuevamente cada tubo y se observó que la
ebullición se hizo más rápida y potente.

d) Se observó la reacción de precipitado.


e) Al precipitado se le agregó 3 ml de agua y se agitó. Se puede observar mejor el
precipitado y el contenido de los lípidos formando una cadena blanca espumosa en el
aceite de cerdo, con el aceite de oliva se forma la cadena en la parte superior y el
aceite vegetal se nota de un solo color, como si se hubiese compenetrado con el agua
y un poco espesa.

Parte III. Índice de Yodo.

a) Se tomaron 3 tubos de ensayo y se colocó 2 ml de alcohol en cada uno de ellos y 1


ml de una muestra de lípido diferente en cada tubo uno, (aceite de cocina, aceite de
oliva y aceite de cerdo) respectivamente.
b) Se colocaron en baño María a ebullición por un minuto y se dejó enfriar,
observándose la evaporización del alcohol.

c) Se procedió a agregar 10 gotas de lugol a cada tubo y se agitó perfectamente que


quedara bien incorporado y se obtuvo como resultado un color café oscuro diferente
en el contenido de cada tubo, notando que la mezcla es soluble. El tubo con el aceite
de cerdo es el más oscuro (centro) y a los extremos el aceite de cocina y el de oliva
se muestra un color mas claro.
Práctica No. 3. Extracción y Caracterización de ADN.

Propósito

Relacionar los conceptos de los ácidos nucleicos a partir de procedimientos de laboratorio


que describen el comportamiento químico de los mismos.

Objetivo general: Extraer el ácido nucleico ADN a partir de células vegetales.

Descripción de la práctica

Esta práctica realizará la extracción del ácido desoxirribonucleico de células vegetales de


piña y banano utilizando un método de extracción químico.

Materiales

 Vasos de precipitado de 250 y 100 mL.


 Probetas de 250, 100 y 50 mL.
 Mortero.
 Espátulas o cucharas de tamaño pequeño.
 Pipetas graduadas de 5, 10 mL.
 Pipetas pasteur.
 Tubos de ensayo.
 Embudos
 Papel de filtro
 bisturí

Reactivos

 Agua destilada.
 Cloruro de sodio.
 Alcohol Isopropílico frío (-20)
 Jabón líquido para lavar platos
 Zumo de piña fresco

Procedimiento

a) En un vaso de precipitado se preparó una solución de Lisis, se adiciono agua destilada


50ml y 1ml jabón líquido y 2 gramos de sal + un gramo de bicarbonato se mezcló y se
revolvió suavemente evitando la formación de burbujas.

b) Con un bisturí se pelo y se cortó el banano en pequeños trozos, lo metimos en una bolsa
para triturarlo completamente y en un vaso precipitado se coloca el banano triturado,
agregándole 100 ml de agua destilada y se mezcla tratando de incorporarlo.

c) Al obtener el banano triturado, Colamos la solución obtenida del banano hasta obtener
aproximadamente 5mL de filtrado.
d) Tomamos la solución de piña sola con lisis se saca 5ml y de la solución de banano sola
con lisis se saca 5ml igualmente.
Se procedió a adicionarle 5 ml de alcohol isopropílico a la solución de piña con banano y a
la de piña sola se le agrega igual cantidad de alcohol, Se observan cadenas blancas a las
soluciones, se observa mejor donde está el banano solo.

e) Luego agregamos 2 gotas de azul disuelto en alcohol isopropilico y se le agregaron 3


ml a cada solución dejamos reposar la muestra por 5minutos y verificamos la formación
de la cadena blanca o azules de metileno resaltando a un más el ADN.
Preguntas

1) ¿Cuál es la función de los componentes de la solución de Lisis?

R/ La función del jabón líquido y la NaCl es romper la membrana plasmática y se puedan


liberar los ácidos nucleicos y las proteínas. Sirve para extraer el ADN o proteínas de las
células para su análisis.

2) ¿Para qué se usa el zumo de piña, cual es el compuesto clave y su función durante
el proceso de extracción de ADN?

R/ El zumo de piña se usa para liberar el ADN de las proteínas. El compuesto clave que
contiene el zumo de piña es la enzima papaína, cuya función es degradar las proteínas para
que el ADN sea liberado y extraído.

3) Explique las diferencias de solubilidad del ADN en medio salino y alcohólico.

R/ en el medio salino el ADN se solubiliza permitiendo que se resuspenda, mientras que el


alcohol permite que el ADN se precipite y verlo a simple vista.
Practica N°. 4. Extracción de la caseína, determinación del punto isoeléctrico y
precipitación salina de proteínas.

Objetivo general

Analizar el efecto del pH y la fuerza iónica sobre proteínas con solubilidad acuosa.

Propósito

Relacionar las propiedades estructurales y químicas de los aminoácidos y proteínas, a partir


de procedimientos de laboratorio que describen su comportamiento bioquímico.

Materiales

• Diez vasos precipitados de 25 ml

• Dos vasos de precipitados de 50ml

• Un vaso de precipitado de 250ml

• Probeta de 50ml

• Matraz aforado de 50 ml

• Pipeta graduada de 5,0 ml

• Pipeta graduada de 1,0 ml

• Pipeta graduada de 10,0 ml

• Embudo de vidrio mediano

• Papel de filtro

• Termómetro

Reactivos

• Leche 200mL
• Agua destilada

• Acetato sódico 0,1 N

• Ácido acético 0,01 N

• Ácido acético 0,1 N

• Ácido acético 1,0 N

• NaOH 1N

• Éter etílico

• Etanol al 70%

Procedimiento

Parte I. Extracción de la caseína

En 2 beaker se deposita la misma cantidad de leche y se pone a hervir a temperatura de 80°,


tomar 30ml de ácido acético (vinagre blanco) y 30ml de ácido acético puro, Con el vinagre
rápidamente se corta la leche, e hizo reacción; con la otra mezcla demoró más la reacción.

Balón fondo plano con desprendimiento lateral aquí filtramos la solución (embudo) (leche
+ vinagre), después se hace una bomba de vacío para que siga filtrando el precipitado lo
calentamos

Parte II. Preparación de la solución de caseína

La leche más vinagre salió mayor cantidad de caseína que la que se hizo con ácido acetil
salicílico, o sea salió menos cantidad.

Parte III. Determinación del punto isoeléctrico de la caseína.

Agregar 20 ácido acético, se mezcla con el precipitado y se agita, se deja en reposo la


caseína. 20ml de agua destilada y 5ml de hidróxido de sodio, se agita hasta lograr una
solución de la caseína.

Parte IV. Precipitación salina de Proteína

1gr de carbonato de calcio más suero volvió a salir la caseína.

Se le agregó 5ml de ácido a la caseína en un balón aforado de 50 ml y luego se le agrega


agua destilada hasta llegar a 50ml y agitar bien.
Precipitación salina de proteínas tomar 1.5ml de sulfato de sodio saturada en dos tubos de
ensayo, agregar 1.5ml de la solución del filtrado anterior.

Se agregó alcohol etílico a la solución de la práctica anterior, luego se filtra para sacar la
lactosa.

Preguntas:

1) ¿Qué sucedería si se representa la transmitancia vs pH en lugar de absorbancia?

R/. El punto isoeléctrico de la caseína respecto a la absorbancia corresponde a su valor


máximo con un pH alrededor de 4.92, a este mismo pH se encuentra el valor mínimo
de transmitancia, por lo que coincidirá con el punto isoeléctrico.

2) ¿Cuál es el punto isoeléctrico de la caseína?

R/. Se determina que el punto isoeléctrico de la caseína es de 4.9 aproximadamente

3) ¿Por qué las proteínas tienen solubilidad mínima en el pH?

R/. Cuando el pH en la proteína es igual a su punto isoeléctrico, ésta tendrá una carga
neta de cero por lo que no existirán fuerzas de repulsión que impidan formar
precipitados. El cambio de pH altera las cargas de las proteínas eliminando las
interacciones electrostáticas que permiten que las estructuras terciarias estén
estabilizadas y provoca su precipitación.

4) Explique cuál es el fundamento de la precipitación salina y porque aparece un


precipitado en el filtrado obtenido durante la extracción de la caseína.

R/. Es un fenómeno físico-químico basado en las interacciones electrolito, en el cual a


altas concentraciones salinas algunos solutos como proteínas o polímeros precipitan
debido al aumento de las interacciones hidrofobias.
EVIDENCIAS:
Practica No. 5. Cuantificación de proteínas.

Objetivo general.

Conocer métodos de cuantificación de proteínas y aplicar los conceptos de curva de


calibración.

Propósito

Relacionar las propiedades estructurales y químicas de los aminoácidos y proteínas, a partir


de procedimientos de laboratorio que describen su comportamiento bioquímico.

Descripción de la práctica

En esta práctica se va a evaluar la concentración de proteínas en una muestra mediante la


cuantificación por métodos espectrofotométricos.

Equipos

• Espectrofotómetro

• Incubadora

• Agitador

Materiales

• Matraz aforado de 50mL

• Pipetas graduadas de 1,0 ml o micro pipetas

• Tubos de ensayo

• Gradilla

• Termómetro

Reactivos

• Reactivo de Bradford

• Solución de Albúmina sérica Bovina (10mg/mL)


• Caseína y sobrenadante (obtenidos en la práctica anterior)

• Leche

• NaCl al 1%

• NaOH 1N

Procedimiento.

En un vaso de precipitado de 100ml, colocamos 1.0 gr de Caseína previamente pesado, luego

añadimos 30 ml de solución de cloruro de sodio al 1% (NaCl), luego procedimos a agregar

gota a gota una disolución concentrada de hidróxido de sodio NaOH hasta completar la

disolución de la proteína C12H22O11 (lactosa).

Realizado este procedimiento llevamos la caseína a evaporación, luego de haber evaporado

total mente la casina observamos la proteína como se puede apreciar en la siguiente imagen

en la siguiente imagen.
Pregunta:

1) Explique la ley de Beer-Lamber


También se conoce como la ley de Beer, la ley de Lambert-Beer o la ley de Beer lambert-
bouguer relaciona la atenuación de la luz y las propiedades del material a través del cual viaja
la luz. La ley se aplica comúnmente a análisis químicos mediciones y se utiliza en la
comprensión de la atenuación de la luz a las propiedades del material a través del cual viaja
la luz. La ley se aplica comúnmente a análisis químicos mediciones y se utiliza en la
comprensión de la atenuación en la óptica física por fotones, neutrones o gases enrarecidos.
Práctica No. 7. Efectos de la temperatura y el pH sobre la actividad enzimática

Objetivo general.
Relacionar los conceptos de la cinética enzimática para determinar la inhibición por factores
físicos y químicos, a partir de procedimientos de laboratorio que describen el
comportamiento bioquímico de las enzimas.
Propósito
Relacionar los conceptos de la cinética e inhibición enzimática, a partir de procedimientos
de laboratorio que describen el comportamiento bioquímico de las enzimas.
Equipos
• Baño de María
• Plancha de Calentamiento

Materiales

• Vasos de precipitados de 100, 200 mL.


• Tubos de ensayo.
• Pipeta graduada de 5, 10 mL.
• Gradilla.
• Agitadores de vidrio
• Cinta indicadora de pH

Procedimiento

REACTIVOS Y MATERIALES:

REACTIVOS MATERIALES

Amilasa salival Tripie

Solución de lugol Baño María

Reactivo de benedict Termómetro

Gradilla de asbesto

Mechero Bunsen

4 tubos de ensayo

Pipeta
Parte I. Efecto del pH sobre la actividad amilasa salival.

1. Prepare una solución de amilasa salival diluida, para esto tome 1mL de saliva y
adicione 9mL de agua destilada, agite cuidadosamente hasta formar una solución
homogénea.

2. Tome tres tubos de ensayo y adicione:

 Tubo 1: 2mL de HCl 0,1N + 2mL de solución de almidón al 2%


 Tubo 2: 2mL de NaOH 0,1N + 2mL de solución de almidón al 2%
 Tubo 3: 2mLde agua destilada + 2mL de solución de almidón al 2%
3. Adicione 2mL de solución de amilasa salival diluida a cada tubo de ensayo.

4. Agite bien y mida rápidamente el pH de cada tubo para esto utilice cinta indicadora
de pH, compare el color obtenido con el de la escala.
5. Coloque los tres tubos en baño de maría a 37°C durante 15 minutos.

6. Transcurridos los 15 minutos, por cada una de las tres condiciones evaluadas (HCL
0,1N, NaOH 0,1N y Agua destilada) tome dos tubos de ensayo y transfiera 1mL de la
solución.
7. En un tubo, realice el ensayo de yodo, por adición de 2 gotas de Lugol y en el otro
adicione 2mL de reactivo de Benedict y lleve a baño maría a ebullición

CALCULOS Y RESULTADOS: A continuación se muestran los resultados del


muestreo de las enzimas de amilasa salival:

TUBO 1 2 3 4

PH 7 1 11 5
Según la escala de PH, vemos que el tubo 1 tiene PH neutro, el tubo 2, un PH muy acido, el
tubo 3 en cambio, un PH alcalino, mientras que el tubo 4, un PH más moderado hacia el
neutro, como podemos observar en la evidencia fotográfica del procedimiento del
componente practico.

Como conclusión de esta primera práctica, podemos decir que la reacción existente entre la
amilasa salival y el almidón es: que la enzima hidroliza al almidón, con la misma práctica
además, pudimos determinar que existen reactivos llamados indicadores capaces de
demostrarnos la actividad enzimática a partir de las variaciones del color que mostraban los
tubos después de cada reacción. La enzima Amilasa salival tiene la capacidad para degradar
el Almidón en azúcares más simples y con carácter reductor como la Glucosa, Maltosa, etc.

Referencias
autor, S. (2010). Facultad de Ingeniería, Universidad de San Carlos de Guatemala.

Facultad de Ingeniería, U. d. (2010). scribd. Obtenido de https://es.scribd.com/