Profesor: PhD.

Gerardo Andrés Caicedo Pineda

Práctica No. 10. Determinación de proteínas

Materiales y equipos
Unidad Cantidad Nombre de Material o Reactivo Cantidad Nombre de Equipo
mL 1 Albúmina serina bovina 10 mg/mL 1 Espectrofotómetro
mL 250 Agua destilada 1 Micropipeta 200 uL-20 uL
mL 10 Na2CO3 al 2% + NaOH 0.1 M 1 Micropipeta 1000 uL-200 uL
mL 0.5 CuSO4.5H2O al 1% 1 Plancha de calentamiento
mL 0.5 Tartrato sódico potásico al 2%
mL 30 Reactivo de Folin-Ciocalteau al 25%
mL 20 Reactivo de Bradford (RB)
n.a. 1 Pipeta de 10 mL
n.a. 1 Beaker 500 mL
n.a. 4 Balón aforado 25 mL
n.a. 20 Tubos de ensayo (y gradilla)

Materiales que deben llevar los estudiantes: muestra de alguna proteína de

interés.
Aspectos para considerar en el informe
¿Cuál es el objetivo de la práctica?
¿En qué se basan los procesos experimentales?
¿Qué antecedentes hay de las fases experimentales?
¿Qué resultados se espera(n) encontrar en la práctica?
Procedimiento
Nota: Las curvas de calibración se hacen entre todos los estudiantes de cada
sesión.
Método de Lowry

• En un balón aforado de 25 mL se toman 0.5 mL de la solución de albúmina

serina bovina y se completa con agua destilada. Se agita hasta garantizar
homogeneidad en la mezcla. Se marca como BSA 0.2.
• Se colocan en una gradilla 5 tubos de ensayo limpios y secos. Se numeran del
1 al 5.
• A cada uno de los tubos, se adicionan las cantidades de BSA 0.2 y agua en
las siguientes proporciones: 0:1, 1:4, 2:3, 3:2, 4:1 y 1:0. El volumen total es 1
mL. Se agitan bien los tubos de ensayo.
• A cada uno de los tubos se añade 0.9 mL de la solución de carbonato de sodio
y NaOH y se vuelven a agitar los tubos de ensayo.
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• Todos los tubos se introducen a un baño maría a 50 °C por 15 minutos.

• Se enfrían los tubos de ensayo, introduciéndolos en un baño de agua fría por
3 minutos.
• Se agrega 0.05 mL tanto de la solución de sulfato de cobre, como la de tartrato
sódico potásico.
• Se agitan los tubos y se ponen a baño maría a 37 °C por 5 minutos.
• Se añaden 3 mL del reactivo de Folin-Ciocalteau.
• Se agitan los tubos y se calientan a 50 °C durante 10 minutos.
• Se enfrían los tubos y se proceden a medir en el espectrofotómetro a 650 nm.
El tubo 1 se utiliza como blanco y se empieza desde la solución menos
concentrada, para que no haya necesidad de enjuagar la celda.
• Cada punto se debe repetir por duplicado.
Método de Bradford

• En un balón aforado de 50 mL, se adicionan 5 mL de la solución BSA 0.2 y

se completa con agua. Se marca como BSA 0.02.
• Se colocan en una gradilla 5 tubos de ensayo limpios y secos. Se numeran del
1 al 5.
• A cada uno de los tubos, se adicionan las cantidades de BSA 0.02 y agua en
las siguientes proporciones: 0:1, 1:4, 2:3, 3:2, 4:1 y 1:0. El volumen total es 5
mL. Se agitan bien los tubos de ensayo.
• A cada tubo, se agrega 1 mL de solución de Bradford. Se agita suavemente y
se espera 15 minutos, hasta cambio de color.
• Se mide la absorbancia a 595 nm, utilizando el tubo 1 como blanco, siguiendo
los mismos pasos que se utilizaron en el método de Lowry.
• Cada punto se hace por duplicado.
Análisis muestra problema
Nota: Este si se hace por grupo.

• Tome la muestra problema y diluya en una proporción de 10 mg/mL (10

µL/mL, si es líquida).
• En un balón aforado de 25 mL se toman 0.5 mL de la solución preparada y se
completa con agua destilada. Se agita hasta garantizar homogeneidad en la
mezcla. Se marca como D1.
• Se toma 1 mL de D1 y se diluye, adicionando 9 mL de agua. Se marca como
D2.
• Para D1, utilizar el método de Lowry.
• Para D2, utilizar el método de Bradford.

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Descripción de resultados
Se sugiere mostrar los siguientes datos:
Figuras: Curvas de calibración.
Tabla: Concentración real de la muestra problema (% p/p, si es sólida o % p/V,
si es líquida) calculada a partir de los métodos de Lowry y Bradford (no olvide
multiplicar por los respectivos factores de dilución).

Nota: Todos los resultados se tienen que analizar y discutir.

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